划痕实验步骤
油漆的划痕实验标准
油漆的划痕实验标准概述油漆表面的划痕是一种常见的损伤形式，对于油漆涂层的质量和耐久性有着重要影响。
为了评估和比较不同油漆材料的耐划痕性能，进行划痕实验是必要的。
本文将介绍油漆划痕实验的标准方法和评估指标。
1.实验设备与试样准备1.1实验设备：划痕测试仪、划痕钻头、负载传感器、显微镜等。
1.2试样准备：根据实验需要，选择具有代表性的油漆涂层样品，并确保其充分干燥和固化。
2.实验步骤2.1设定实验参数：根据实验要求，设定合适的划痕压力、速度和路径。
2.2划痕操作：使用划痕测试仪配备的划痕钻头，在油漆表面进行规定的划痕操作，保持稳定而均匀的压力和速度。
2.3记录划痕参数：记录划痕的深度、长度和形态等参数，以便后续评估和比较分析。
2.4观察与测量：使用显微镜等工具观察和测量划痕区域的细节特征，如裂纹、剥离等情况。
3.评估指标根据划痕实验的结果，可以从以下几个方面进行评估和比较：3.1划痕深度和长度通过测量划痕的深度和长度，评估油漆涂层的抗划痕性能。
一般来说，划痕越浅且长度越短，说明油漆涂层越耐划痕。
3.2划痕形态和损伤程度观察和记录划痕区域的形态特征，如裂纹、剥离等，评估油漆涂层的损伤程度。
形态越小、局部化，说明油漆涂层的耐划痕性能越好。
3.3耐划痕等级根据实验结果，将不同油漆涂层的耐划痕性能划分为不同的等级，以便对其进行评估和比较。
可以根据实际需要制定相应的评分标准。
4.结果分析与应用根据实验结果和评估指标，对不同油漆涂层的耐划痕性能进行分析和比较。
结合其他性能要求，选择适合的油漆材料，或优化油漆配方，提高油漆涂层的耐划痕性能。
5.注意事项在进行油漆划痕实验时，需要注意以下事项：-实验操作要规范、稳定，保持一致性。
-确保试样表面的清洁度和均匀性，以避免其他因素对划痕实验结果的影响。
-需要针对不同类型的油漆涂层制定相应的实验参数和评估指标。
结论油漆的划痕实验是评估油漆涂层耐划痕性能的重要手段。
通过合理的实验设备和试样准备，按照标准的实验步骤进行划痕操作，结合评估指标对实验结果进行分析，可以为选择和改进油漆材料提供科学依据。
细胞划痕实验操作步骤
细胞划痕实验操作步骤
细胞划痕实验（scratch assay）是一种简单、有效的方法，用于研究细胞迁移能力，常用于评估细胞愈合、癌细胞侵袭能力等。
下面是一个基本的细胞划痕实验操作步骤：
1. 细胞播种
在适宜的培养皿中（如6孔板）播种细胞，通常需达到90%以上的培养皿底面覆盖度，以形成一个单层细胞层。
这一步骤确保细胞能均匀分布在培养皿底部。
2. 形成划痕
在细胞长至接近合并（通常是培养24小时后）时，使用一个标准的200μl吸头尖、刻度尺或专用的划痕工具，在细胞层上轻轻划出一条直线，形成一个“划痕”。
要尽量保持划痕的宽度和长度一致，以方便后续的比较分析。
3. 清洗细胞
使用磷酸盐缓冲液（PBS）轻轻清洗培养皿1-2次，以去除漂浮的和受损的细胞。
4. 添加新的培养基
向培养皿中添加含有或不含有测试药物的新鲜培养基。
这一步是为了研究特定因子对细胞迁移能力的影响。
5. 拍摄初始照片
在划痕后立即使用倒置显微镜拍摄划痕的照片，作为实验的起始点。
6. 培养和定时拍照
将细胞置于37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。
在特定时间点（如6、12、24小时）取出，使用相同的显微镜设置拍摄划痕的照片，记录细胞迁移和划痕愈合的过程。
7. 数据分析
使用图像分析软件（如ImageJ）分析划痕愈合前后的面积或宽度变化。
通过比较划痕愈合的面积百分比或划痕宽度的变化，评估细胞迁移能力。
细胞划痕实验的结果可以通过计算划痕愈合的百分比来定量分析细胞迁移速度，为研究细胞迁移机制提供了一种简单有效的方法。
细胞划痕实验技巧
细胞划痕实验技巧细胞划痕实验技巧包括准备实验材料、划痕的过程、实验数据和结果的采集与分析。
一、准备实验材料在进行细胞划痕实验前，我们需要准备一些实验材料：1. 细胞：可以使用肝细胞、骨骼肌细胞、培养细胞等。
2. 平皿：实验时使用平光滑的塑料或玻璃平皿，可以不使用铁皿，以防止污染。
3. 活化剂：应使用适当浓度的活化剂，如去离子水，无菌HEPES缓冲液，乳清等。
4. 钝刀：钝刀有助于保证实验的安全性，同时加强划痕效果。
5. 荧光显微镜：常用荧光显微镜可以方便的检测划痕的效果。
二、细胞划痕的过程1. 将培养皿放置在显微镜底下，使细胞进行缓慢均匀悬浮；2. 用钝刀在培养皿中央选取一个定位点，沿着这个定位点进行划痕；3. 划完痕后，添加活化剂，使细胞在划痕的区域悬浮；4. 通过荧光显微镜监测细胞的运动情况，计算划痕部位细胞的运动速度；5. 用称秤检测划痕部位外细胞的真实重量，以排除细胞悬浮运动的影响；6. 在 2-3 小时的观察周期之后，记录划痕部位细胞的外观特征，如拉伸、剪切、运动等；7. 用显微镜观察划痕部位细胞的结构特征，记录最终数据，如单位面积拉伸长度、排列程度、旋转数等。
三、实验数据与结果采集与分析1. 实验数据采集：实验结果通常采用图片或图表格式展示，采集数据细致全面，并尽可能具体；2. 实验数据分析：使用统计学分析、潜在函数拟合等方法对实验数据进行分析；3. 结果报告：从实验数据分析中抽取结论，结合实验评定，编写结果报告，确定实验的最终结果。
以上是细胞划痕实验技巧的概述，如果想要更加精准的进行实验，还需要根据划痕所需要的细胞种类、划痕细胞的活动情况、细胞结构特征等，进行具体的实验技巧指导。
细胞划痕实验
细胞划痕实验
细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移实验方法，通过创造人工“划痕”来观察细
胞在愈合过程中的迁移和增殖情况，从而研究细胞间的相互作用、信号传导和细胞迁移的机制。
实验原理
在细胞划痕实验中，首先在细胞培养皿中种植一层细胞，在细胞形成单层后，
用刮刀等工具在细胞层中划一条“刀痕”，即人工划伤细胞层。
然后观察细胞在划痕
区的迁移和增殖情况，通过比较划痕前后细胞的变化，可以研究细胞迁移、增殖和愈合过程中的生物学机制。
实验步骤
1.预处理细胞：培养所需的细胞株，并保证细胞活性和纯度。
2.细胞接种：将细胞接种在培养皿中，培养至细胞形成单层。
3.划痕操作：使用刮刀等工具在细胞层中划一条“刀痕”，注意操作要轻
柔并且一致。
4.图像记录：立即在划痕前后拍摄图像，并在不同时间点继续记录细胞
迁移和增殖的情况。
5.数据分析：根据不同时间点的图像，量化分析细胞迁移距离和细胞密
度等指标。
结果解读
通过细胞划痕实验，可以观察到划痕区域细胞的迁移、增殖及愈合情况。
通常，划痕后细胞会向划痕区域迁移，填补伤口，形成新的细胞层。
通过比较不同处理组的细胞迁移速度、距离和形态等指标，可以揭示细胞因子、信号通路等对细胞迁移的调控机制。
应用领域
细胞划痕实验在癌症转移、组织再生、损伤修复等研究领域具有广泛的应用。
在癌症转移研究中，可以通过划痕实验检测抗转移药物的疗效；在组织工程和再生医学中，可以评估生物材料对细胞迁移和愈合的影响。
细胞划痕实验是一种简单有效的细胞迁移实验方法，虽然存在一些局限性和技
术挑战，但在研究细胞迁移和增殖等问题上仍具有重要的应用意义。
细胞划实验报告
一、实验目的1. 观察细胞在体外培养条件下的生长和增殖情况。
2. 通过划痕实验，评估细胞的迁移能力和活力。
二、实验原理细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移能力检测方法。
在细胞培养过程中，将细胞培养皿中的一部分细胞刮除，然后观察细胞在伤口愈合过程中的迁移速度和程度，以此评估细胞的迁移能力和活力。
三、实验材料1. 细胞：小鼠成纤维细胞2. 培养基：DMEM培养基3. 胎牛血清：10%4. 细胞培养皿：6孔板5. 划痕工具：无菌划针6. 吸水纸：无菌吸水纸7. 显微镜：倒置显微镜8. 图像采集系统：数码相机四、实验步骤1. 将小鼠成纤维细胞接种于6孔板中，每孔加入2ml培养基，置于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时，使细胞生长至约80%汇合度。
2. 使用无菌划针在每孔细胞表面划一条直线，尽量保证划痕深度一致。
3. 用吸水纸轻轻吸去划痕附近的细胞培养基，确保划痕清晰可见。
4. 向每孔加入2ml含10%胎牛血清的DMEM培养基，使细胞重新铺展。
5. 将细胞培养皿置于37℃、5%CO2培养箱中继续培养。
6. 在不同时间点（如0小时、12小时、24小时、48小时）观察细胞划痕愈合情况，并拍照记录。
7. 使用图像采集系统采集划痕愈合图像，并进行分析。
五、实验结果1. 在划痕实验的不同时间点，观察细胞划痕愈合情况，发现细胞在12小时、24小时、48小时后划痕逐渐愈合，细胞数量逐渐增多。
2. 通过图像采集系统分析，计算划痕宽度，绘制划痕愈合曲线。
六、实验讨论1. 细胞划痕实验结果表明，小鼠成纤维细胞在体外培养条件下具有较好的迁移能力和活力。
2. 细胞划痕愈合速度与细胞类型、培养条件等因素有关。
在本实验中，细胞在48小时后基本愈合，说明细胞具有较高的迁移能力。
3. 划痕实验是一种简单、有效的细胞迁移能力检测方法，可用于评估细胞在体外培养条件下的生物学特性。
七、实验结论细胞划痕实验成功观察到小鼠成纤维细胞的迁移能力和活力，为后续研究细胞生物学特性提供了实验依据。
简述细胞划痕实验步骤。
简述细胞划痕实验步骤。
细胞划痕实验是一种用于观察细胞形态、结构和功能的实验方法,常用于研究细胞的生长、分裂、代谢和信号转导等生理和病理过程。
下面是细胞划痕实验的基本步骤:
1. 准备材料:准备细胞培养物(如细胞样本、细胞培养液等)、划痕笔、显微镜、光学显微镜观察设备、盖玻片等。
2. 将细胞培养物制成涂片:将细胞培养物涂覆在盖玻片上,用刮刀或吸盘将细胞培养物涂得太厚,以免观察时产生失真。
3. 用划痕笔轻轻地在盖玻片表面划痕:将划痕笔的笔尖在盖玻片表面轻轻划痕,形成一条痕。
4. 用显微镜观察细胞划痕:将划痕部位放在显微镜视野下,观察细胞划痕的形态、颜色和形态结构等特征。
5. 分离细胞:使用分离器等设备,将划痕部位周围的细胞分离出来,用于后续的实验。
6. 细胞培养:将分离出来的细胞应用于后续培养和观察。
细胞划痕实验的步骤虽然简单,但其中涉及到的细胞形态、结构和功能等特征的变化,可以对细胞生理和病理过程的研究提供重要的线索和依据。
此外,细胞划痕实验还可以应用于其他许多领域,如药物研发、疾病诊断和治疗等。
划格试验操作规程
划格试验操作规程划格试验操作规程一、实验目的划格试验是为了检验材料表面的划痕抗性能力以及材料的硬度，通过划格试验可以评估材料的耐磨性及耐划伤性能。
二、实验器材1. 划格试验仪：包括滑动台、划痕仪和负荷施加装置。
2. 材料试样：通常为金属材料或者涂层材料。
三、实验步骤1. 准备工作a. 清洁试样表面，将表面污垢、油渍等清除干净。
b. 检查试验仪器的运行状态和标定情况，确保仪器正常工作。
c. 根据试样的大小和形状，选择合适的划痕仪和负荷施加装置。
2. 实验操作a. 将试样固定在滑动台上，并调整试样的位置，使其与划痕仪的尖端紧密接触。
b. 调整负荷施加装置的负荷，保持负荷恒定。
c. 开始划格试验，将划痕仪沿着试样表面进行划动，一次划动完后停下来。
d. 观察试样表面产生的划痕，记录划痕的长度和形状。
e. 根据需要，可以调整负荷和划痕仪的划动次数，并记录相应的数据。
3. 数据处理a. 根据划格试验的目的和要求，对试样的划痕进行定量评估，并计算相应的划痕硬度指标。
b. 根据试验结果，进行数据分析和比较，得出相应的结论。
四、注意事项1. 在进行划格试验前，要对试样进行充分的清洁，以避免外来物质对试验结果的影响。
2. 在操作仪器时，要注意安全，避免操作失误或者试样脱落导致人身伤害。
3. 对于不同类型的材料，应根据其特性选择适当的试验参数，以保证试验结果的可靠性和可比性。
4. 实验中要注意记录每一次试验的参数、操作过程和观察结果，以便后续的数据分析和结论得出。
五、实验结果的解读根据划格试验的结果，可以对材料的表面硬度和耐磨性能进行评估。
划痕的长度和形状可以反映材料的硬度，较长和较深的划痕表示材料较软，较短和较浅的划痕表示材料较硬。
根据划痕的形态特征，还可以对材料的耐磨性能进行评估，如划痕的宽度、深度和形状等。
六、实验的应用范围划格试验可以用于金属材料、涂层材料以及其他硬质材料的表面硬度和耐磨性能的评估。
在材料的研发、产品质量检验以及工艺改进等方面具有重要的应用价值。
划痕及Transwell实验方法20130905
划痕实验：1.细胞接种到六孔板中，每孔接约5×105 个细胞（SMMC7721，不同细胞具体接种数量掌握为24 h能铺满板），放入37℃ 5%CO2培养箱培养，20～24 h观察是否铺满板。
待铺满后开始划痕实验。
2.用灭过菌的200uL黄色枪头在每个孔中间划一条痕（枪头垂直划线，每次力度均一，划线要直，一次性划到底，可用板盖当尺子），PBS洗2遍，去除划下的细胞，显微镜拍照（放大倍数为100倍）。
3.换含不同药物的无血清培养液继续培养（空白组用PBS代替药物，每组设3个平行）。
4.24h或48h后拍照（放大倍数为100倍）固定点测量划痕距离是否改变。
5.用Photoshop中的直方图测量间距大小，表示不同组细胞发生迁移的距离。
将对照组迁移距离大小设为100%，实验组迁移比例为：（对照组迁移距离-实验组迁移距离）/对照组迁移距离*100%。
6.数据分析后作图。
如图例：Transwell实验：1、收取处于对数生长期的细胞。
终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1-2遍，再用无血清培养基重悬，彻底去除血清干扰，调整细胞密度1~5×105个。
2、Transwell小室（孔径大小有不同规格，一般肿瘤细胞选8 μm；迁移实验用普通Transwell小室，侵袭实验用含有基质胶的Transwell小室）里加入制备好的细胞悬液（1×105个），小室内液体总体积为200 μL。
3、24孔板中加入500 μL含10% 胎牛血清的完全培养基。
将Transwell小室放入24孔板中。
特别注意：下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，因此在种板和培养过程中要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
4、将带有小室的24孔板置于37℃ 5% CO2培养箱中培养，18-48 h后（时间依不同实验不同细胞而定）取出，非贴壁细胞直接计数下层细胞数，贴壁细胞拍照计数小室底部膜上细胞（步骤如下）。
细胞划痕实验原理
细胞划痕实验原理细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移和迁移相关蛋白功能研究方法。
该实验通过在细胞培养皿中制作人工划痕，观察细胞在划痕处的迁移和填充情况，从而分析细胞迁移的速度、方向性及相关蛋白的功能。
本文将介绍细胞划痕实验的原理及相关操作步骤。
细胞划痕实验的原理主要基于细胞的迁移能力。
当细胞培养达到一定密度后，可以用细胞刮刀在细胞单层上划出一条人工划痕。
随着时间的推移，细胞会自行迁移填充这一划痕，从而观察细胞的迁移速度和方向。
在实验过程中，可以添加不同浓度的药物或转染特定基因，观察对细胞迁移的影响，从而研究相关蛋白的功能。
进行细胞划痕实验的操作步骤如下：1. 细胞培养，将需要进行实验的细胞培养至一定密度，通常使用无菌技术在细胞培养皿中培养细胞。
2. 划痕，用细胞刮刀在细胞单层上划出一条直线状的划痕，注意划痕的深度和宽度需要一致，避免伤害细胞。
3. 清洗，用无血清培养基或PBS洗涤细胞，去除游离的细胞和细胞碎片。
4. 实验组设置，根据实验需要，可以添加不同浓度的药物或转染特定基因。
5. 观察和记录，在划痕的时间点拍照或观察细胞的迁移情况，记录细胞迁移的速度和方向。
细胞划痕实验的结果分析通常包括细胞迁移距离、填充率和迁移速度。
通过对实验结果的分析，可以评估细胞迁移的能力，并研究相关蛋白在细胞迁移中的作用。
此外，细胞划痕实验还可以结合免疫荧光染色等技术，观察细胞骨架蛋白、黏附蛋白等在细胞迁移过程中的动态变化，进一步揭示相关蛋白的功能机制。
总之，细胞划痕实验是一种简单而有效的细胞迁移实验方法，可以用于研究细胞迁移的速度、方向性及相关蛋白的功能。
通过合理设计实验方案和精准的结果分析，可以为细胞迁移及相关疾病的研究提供重要的实验数据和依据。
细胞迁移划痕实验1
细胞迁移实验技术—划痕实验一、基本原理细胞划痕(修复)法就是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上, 用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间(例如72ｈ),取出细胞培养板,观察周边细胞就是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组与实验组,实验组就是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
二、操作步骤1、先用ｍaｒkeｒ笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0、5～１cm一道,横穿过孔。
每孔至少穿过5条线。
２.在孔中加入约5×10５个细胞,具体数量因细胞种类不同而不同,接种原则为过夜后融合率达到100%。
3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。
4.PＢS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
5.放入37℃5％CO2培养箱,培养。
可按0,6,１2,24h时间点取样,拍照(具体时间依实验需要而定)。
6、统计方法:使用Iｍage Ｊ软件打开图片后,随机划取6至８条水平线,计算细胞间距离的均值。
三、注意事项:１、在用PBS 缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。
2、一般做划痕实验,都就是无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略。
3.按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。
细胞划痕实验技巧
细胞划痕实验技巧细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移和细胞间相互作用的研究方法。
通过划破细胞单层，观察和记录细胞的迁移和相互作用，可以更好地理解细胞的行为和功能。
本文将介绍细胞划痕实验的技巧和注意事项，帮助研究人员进行准确、可靠的实验。
一、实验前的准备工作1. 培养细胞：选取与研究目标相符的细胞系，进行细胞的培养和扩增。
确保细胞处于良好状态，生长健康。
2. 制备培养皿：使用适当的培养皿，如96孔板、6孔板等。
在实验前，用70%乙醇擦拭培养皿表面，以确保无细菌污染。
3. 划痕工具准备：选择合适的划痕工具，如细胞刮刀、细胞划痕器等。
确保划痕工具干净、锋利，以获得清晰的细胞划痕。
二、细胞划痕实验步骤1. 培养细胞：将要研究的细胞均匀地培养在培养皿中，使其达到一定的密度和一致性。
2. 划痕：使用划痕工具在培养皿内划破细胞单层。
可以沿着直线或弧线方向进行划痕，划痕的宽度和长度可以根据研究需求进行调整。
3. 清洗细胞碎片：用无菌PBS缓冲液轻轻地冲洗细胞碎片，以清除划痕产生的碎片和细胞残留物。
注意不要过度冲洗，以免对细胞划痕结果产生影响。
4. 加入培养基：加入含有适当浓度的培养基，以维持细胞的生长和迁移。
可以根据研究目的添加不同的药物或因子，观察其对细胞迁移的影响。
5. 观察和记录：使用相差显微镜或倒置显微镜观察细胞的迁移情况，并及时记录观察结果。
可以使用计算机软件对细胞迁移距离、速度等进行定量分析。
三、实验注意事项1. 细胞密度控制：细胞密度过低会导致划痕不明显，过高则会影响细胞迁移。
需要根据具体细胞系的特点和实验目的，合理控制细胞密度。
2. 划痕工具选择：不同的细胞系和划痕方式可能需要不同的划痕工具。
在选择划痕工具时，要根据实验需要和细胞类型进行合理选择，以获得清晰的划痕结果。
3. 细胞迁移时间控制：细胞迁移的时间因细胞类型和实验目的而异。
可以根据研究的需要，在不同时间点观察和记录细胞迁移情况，以获取更完整的数据。
划痕实验
划痕实验（单层上皮侧向运动）
1、首先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着划，均匀划横线，大约每隔0.5-1cm，至少
5条
2、每孔加入5 x 105个细胞（过夜铺满90%）
3、第二天用枪头比直尺，垂直于横线。
（200ul枪头）
4、PBS洗3次，除去划痕下的细胞，加入无血清培养基
1)观察时间小于1天，不加入血清
2)48h，可用1-4%血清
5、放入培养箱，0,6,12,24h取样拍照
注意：
一般以对照组细胞迁移到整个划痕面的一般或者以上，终止观察
Image J 来测量划痕区域的象数定量比较迁移速度
一般只用于上皮，纤维样的细胞系（迁移能力强；细胞有极性，方便测量；耐无serum （肿瘤半天的死亡率为50%）。
细胞划痕实验原理
细胞划痕实验原理
细胞划痕实验是一种常用的试验方法，用于研究细胞迁移和侵袭能力。
该实验基于细胞的自身运动性，通过划破培养皿底部的细胞单层，形成一个人工缺口，观察细胞在缺口处的迁移能力。
实验步骤如下：
1. 培养细胞：将要进行实验的细胞在培养皿中培养至适当的数量和状态。
2. 制造划线：在培养皿底部使用细胞釉垫，或者使用刮背刀等工具轻轻在细胞单层上划出一条直线。
可以使用刻度尺或者标尺等仪器辅助。
3. 观察细胞迁移：在划线后，细胞会通过无线化的方式对划线区域进行迁移。
可以使用显微镜观察细胞在划线区域的迁移速度和方向。
4. 分析结果：根据观察结果，可以对细胞的迁移能力进行定量或定性的分析。
可以使用图像处理软件等工具对细胞迁移的面积、距离和速度等参数进行测量和统计。
细胞划痕实验的原理基于细胞的运动性和迁移能力。
通过在细胞单层上创造一个人工的缺口，观察细胞在缺口处的迁移情况，可以研究细胞迁移的机制和调控因素。
这个实验被广泛用于癌症转移、组织修复和生物材料评价等领域的研究。
划痕实验实验流程
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间质细胞划痕实验报告
一、实验目的1. 观察间质细胞在体外培养条件下的生长状态；2. 评估间质细胞的迁移能力；3. 探讨不同因素对间质细胞迁移能力的影响。
二、实验材料1. 人胚胎间质细胞；2. DMEM培养基；3. 胎牛血清；4. 0.25%胰蛋白酶；5. 划痕工具；6. 显微镜；7. 计时器；8. 数据统计分析软件。
三、实验方法1. 细胞培养：将人胚胎间质细胞接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养，待细胞贴壁生长至80%左右，进行划痕实验。
2. 划痕实验：使用划痕工具在细胞表面划一条直线，用吸头吸去划痕周围的细胞，用PBS清洗细胞表面，加入新鲜培养基，继续培养。
3. 观察与记录：每隔一定时间（如24小时、48小时等）观察划痕愈合情况，并记录划痕宽度。
4. 实验分组：将细胞分为对照组、实验组1、实验组2等，分别加入不同浓度的药物或进行不同处理，观察划痕愈合情况。
5. 数据分析：使用统计学软件对实验数据进行统计分析，比较不同组间划痕愈合情况的差异。
四、实验结果1. 细胞生长状态：在体外培养条件下，间质细胞能够正常生长，细胞形态规则，呈梭形。
2. 划痕愈合情况：对照组细胞在24小时内开始愈合，48小时时划痕基本愈合；实验组1、实验组2细胞在相应时间内愈合速度较对照组慢。
3. 数据分析：经统计学分析，实验组1、实验组2细胞划痕愈合时间与对照组存在显著差异（P<0.05）。
五、讨论1. 间质细胞在体外培养条件下能够正常生长，表明该细胞具有较好的增殖能力。
2. 划痕实验结果显示，间质细胞具有较好的迁移能力，但不同因素会影响其迁移速度。
3. 实验组1、实验组2细胞划痕愈合速度较对照组慢，可能与药物或处理因素抑制了间质细胞的迁移能力有关。
4. 本实验为探讨间质细胞迁移能力及影响因素提供了实验依据，为临床应用提供了参考。
六、结论1. 间质细胞在体外培养条件下能够正常生长，具有较好的增殖能力和迁移能力。
2. 不同因素会影响间质细胞的迁移能力，实验结果为临床应用提供了参考。
皮肤划痕试验
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根据真皮内可产生抗原抗体特异性反应原理，采用皮肤划痕方 法来测定机体对某种致敏原是否过敏药物性皮炎及食物过敏等。
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2.方法 （1）选择受试的部位及局部清洁消毒与斑试同。 （2）常规消毒皮肤后，用消毒针尖在皮肤上划长约1cm 的条 痕，划痕深度以不出血为度，然后将试验物滴于其上。如同时 用多种致敏原做试验，划痕间应有4～5cm 的距离。试验时应 有阴性对照。
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谢谢大家！
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4.临床意义 阳性反应表示病人对受试物过敏，应排除假阳性反应。
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5.注意事项 （1）受试物必须无菌及无刺激性。但受试材料必须具有足以引 起阳性反应的致敏原，且不能改变其性质。 （2）有皮肤划痕症者不宜做此试验。 （3）对高敏者可有危险性，不能做此试验。 （4）对有过敏体质者，做试验时应密切观察局部及全身性反应。 如有全身反应，应及时处理。因此，注射室应备好抢救药品。
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3.结果判断 通常20min观察结果，用消毒棉球轻轻拭去试验物，反应标准如下。 -（阴性）：无红斑或风团，与对照相同。 ±（可疑）：水肿性红斑或风团，直径＜0.5cm。 +（弱阳性）：风团有红晕，直径等于0.5cm。 ++（中阳性）：风团有明显红晕，直径0.5～1cm，无伪足。 +++（强阳性）：风团有明显红晕及伪足，直径＞1cm。
细胞划痕实验步骤
细胞划痕实验步骤
(一) 材料准备
1、蚀刻室：可以对光镜或电子束操作的一种检查室，里面包含一个蚀
刻台，装有一个放大器和一个电子束切割机，用于观察生物样品，并
适合细胞划痕实验。
2、涂料：解决恒温过程中样品复杂形状的漂移问题，使其可以被准确
地操作并拍摄，以保持组织内部结构的完整性。
3、冷冻底物：将细胞对准均匀地放入冷冻底物中，是细胞固定的首选。
4、胶体：用来把冷冻的组织放置在原子力显微镜（AFM）的探针和支
架之间，使得该探针可以精确地得到有用的信息。
(二) 实验步骤
1、把实验材料放入蚀刻室中，选择合适的放大器，开始调节参数，并
进行细胞划痕实验。
2、用选定的电子束，将细胞分解成许多细小的部分，用来测量细胞的
形状、尺寸和构型。
3、在细胞的准备完毕后，用特定的涂料将细胞表面涂覆一层，使用冷
冻底物将细胞固定到底物上。
4、将固定的细胞制成胶体，用原子力显微镜（AFM）的探针和支架将
胶体固定在探针之间。
5、使用固定的细胞探针，细胞划痕实验开始，不断改变探针的力，获
取细胞划痕实验中有用的数据。
6、实验完毕，停止AFM和细胞探针的工作，收集测量到的所有数据，并对实验结果进行分析、梳理。
划痕实验
划痕实验
1.先用marker笔在孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔一定距离一道，横穿过孔。
每孔至少穿过3条线
2.细胞被干预后（药物处理，转染，电转，感染）适当时间点（考虑上述处理因素起作用的时间），作活细胞计数（台盼蓝染色），把适量细胞接种至12孔板中，掌握为过夜必须长满（100%）；
3.如果是药物处理，要考虑是否继续加药处理，如果是转染，电转，感染，一般考虑不再进行第二次处理；
4.待细胞长满后，用枪头比着直尺（高压灭菌的钢尺），尽量垂至于背后的横线划痕，每隔一定距离划1道，共划3道，枪头要垂直，不能倾斜。
5.用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。
6.37度5%CO2培养24小时，培养。
按0，6，12，24，48小时取样，拍照。
每个样品取9个视野量尺寸，并统计数据。
注意事项：
1. 一般做划痕实验，都是在无血清或者低血清状态下培养的，否则
细胞增殖就不能忽略；
2. 按照孔板背后的划线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，这就可以了解决前后观察的位置不固定问题。
3. 何时把处理后的细胞接种至12孔板？决定于处理因素起作用的时间；
4. 为何划线时细胞必须长满？细胞可能先其他地方迁移，不向划线处迁移；
5. 细胞接种至12孔板是否继续进行细胞干预？决定于处理因素起作用的时间；。
测迁移率--划痕法
2.3 划痕法检测细胞迁移
(1)选择第3-5代生长良好的VSMCs，胰蛋白酶制备细胞悬液，调整细胞密度为1.0x105／ml，均匀接种于6孔板中。
在铺板前，在板的背面用记号笔划5-6道平行的横线。
(2)待细胞贴壁生长至70-80％汇合时，吸弃原含10％血清的培养液，换用含0.3％血清的DMEM培养液继续培养24h，使VSMCs同步化，处于G0／G1期。
(3)用无菌的200μl枪头管尖(约0.7 mm)在各培养板细胞生长单层相同位置划垂直或平行直线，与以上的横线要垂直，造成几条“伤口"。
PBS清洗2次，去除被枪头管尖破坏而脱落的细胞并照相(每个时间点都在相同的位置)。
(4)进行吡哆胺及替米沙坦对VSMCs迁移实验时，分为对照组、AngⅡ组、P组、T组及TP组，分别于P 组中加入1mmol/L吡哆胺，T组中加入10-7mol/L替米沙坦及TP组中加入1mmol/L吡哆胺和10-7mol/L替米沙坦，2小时后，于AngⅡ组、P组、T组及TP组中分别加入10-7mol/L AngⅡ。
(5)于24h时观察各组细胞迁移情况，计算100倍显微镜下4个独立视野中超过划线的细胞数，实验重复3次，重复照相，并计算平均值。
吡哆胺及替米沙坦对VSMCs 迁移的影响
划痕法检测VSMCs 迁移细胞数，见图4。
图 4 倒置相差显微镜下(X100)，0h 即刚划痕时未见细胞超越边缘线，24h 时各组
均可见数量不等的细胞超越边缘线，向空白区生长。
AngⅡ组迁移细胞数即细胞迁移水平较对照组显著升高（P﹤0.01），P 组、T 组及TP
组较AngⅡ组显著下降（P﹤0.01），且TP组较P 组及T 组显著下降（P﹤0.01），见图5。