大鼠血浆中抗精神分裂症候选新药S_省略_体异构体的LC_MS_MS法测定_周一萌
苦木注射液对阿奇霉素在肺炎模型大鼠体内组织分布的影响
高。 苦木注 射 液 （ＫＭ）是 由 苦 木 干 燥 枝 或 茎 制 成
的，为 橙 黄 色 的 澄 明 液 体，具 有 清 热、解 毒、消 炎 功 效，常用于感冒、上呼吸道感染、急性扁桃体炎、细菌 性痢疾等的治疗［１０－１１］。目前临床上 ＫＭ 与化学抗 生素联用还存在空白。本实验以肺炎克雷伯菌构建 模型，建立一种灵敏、高效、快速的 ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分 析方法测定大鼠血浆和组织中 ＡＺＭ的浓度，考察苦 木注射液对阿奇霉素在大鼠体内组织分布的影响， 为临床苦木注射液与阿奇霉素联用提供科学依据。
苦木注射 液 （江 西 青 峰 药 业 有 限 公 司 ），批 号： ２０１６０７２３０３；注射用阿奇霉素（山东罗欣药业集团有 限公 司 ），批 号：５１８０１３１５２；阿 奇 霉 素 对 照 品 （中 国 食品药品检定研究院），批号：１３０５９３－２０１３０３；阿霉 素（北京偶合科技有限公司）；肺炎克雷伯标准菌株 ［ＣＭＣＣ（Ｂ）４６１１７；中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院 ］；甲 醇、乙腈均为色谱纯；其余试剂均为市售分析纯；实 验用水为娃哈哈纯净水。
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图 １ ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ测定大鼠肝中 ＡＺＭ 浓度的典型色谱图 Ｆｉｇ．１ ＴｙｐｉｃａｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆＬＣＭＳ／ＭＳｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡＺＭ
液相色谱-串联质谱(LCMSMS)方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量
液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量王健吉林大学药物代谢研究中心（130021）E-mail: wjpsw@摘 要：本文建立了液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量。
色谱柱：Zorbax Extend-C18柱，5µm粒径，150×4.6 mm I.D.，美国Agilent公司；流动相：甲醇-水-甲酸（80:20:1，v/v/v）；流速：0.8 mL/min。
本方法具有良好的灵敏度、准确度、精确度以及专属性，完全适用于临床应用及药物代谢研究。
关键词：佐米曲普坦；LC/MS/MS1. 引言佐米曲普坦（Zolmitriptan）为选择性5-HT1B/1D受体激动剂，通过对颅部血管扩张和三叉神经系统感觉神经的5-HT1B/1D受体的激动作用，促进颅部血管收缩，抑制炎症后神经肽的释放，临床用于治疗偏头痛[1,2]。
本试验建立了测定人血浆中佐米曲普坦含量的液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）分析方法用于临床应用及药物代谢研究。
2. 试验2.1仪器与药品API 4000型三重四极杆串联质谱仪，配有离子喷雾离子化源以及Analyst 1.3.2 数据处理软件，美国Applied Biosystem公司；Agilent 1100 高效液相色谱系统，包括二元输液泵，自动进样器，切换阀，美国Agilent公司。
佐米曲普坦标准品（纯度>99％）：英国AstraZeneca公司提供；苯海拉明对照品（纯度>99％）：中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，空白人血浆由吉林大学第一医院提供。
2.2血浆样品的分析方法血浆样品的预处理精密取血浆样品0.5 mL置具塞试管中，加入内标溶液（2 ng/mL- 1 -苯海拉明甲醇溶液）100 µL，加入100 µL甲醇-水（50:50，v/v）混合溶液，加入1 mol/L Na2CO3溶液100 µL，混匀；加入3mL正已烷-二氯甲烷-异丙醇（300:150:15，v/v），涡流混合1 min，往复振荡10 min（240次/分），离心5 min（3500 rpm），取上层有机相于另一试管中，40°C 空气流下吹干，残留物加入100 µL流动相溶解，涡流混合，取20 µL进行LC/MS/MS分析。
基于GC-MS代谢组学分析MK-801诱导精神分裂症大鼠血浆代谢特征
基于GC-MS 代谢组学分析MK-801诱导精神分裂症大鼠血浆代谢特征黄云霞 黄雪霞 文静［摘 要］ 目的 基于代谢组学方法探索MK-801诱导精神分裂症大鼠的特征性生物标志物及代谢途径，为精神分裂症病理提供新见解。
方法 于2020年8月选用20只4周龄雄性SD 大鼠，随机数字表法将大鼠分为对照组（腹腔注射生理盐水）和试验组（腹腔注射MK-801），每组各10只，2周后，依次进行旷场实验、高架十字迷宫实验和Y 迷宫实验评价大鼠自主活动、焦虑样行为和学习记忆能力。
采用气相色谱-质谱联用技术分析大鼠血浆代谢物，采用偏最小二乘判别分析（PLS-DA ）和KEGG 通路富集分析筛选MK-801诱导精神分裂症大鼠血浆差异代谢物和显著变化的代谢通路。
结果 与对照组相比，慢性MK-801给药导致大鼠在旷场行为学测试中运动路程显著降低、在高架十字迷宫行为测试进入开臂的次数和在开臂持续的时间显著降低和在新物体识别实验中测试期探索新物体时间显著降低（P <0.05），成功模拟精神分裂样症状。
根据代谢组学分析在对照组与试验组之间的差异代谢物为苏氨酸、丝氨酸、肌氨酸、丙氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、柠檬酸、酪氨酸、D-核糖、核糖醇、色氨酸，且与对照组相比，其相对浓度均呈下降趋势；这些差异代谢物主要富集在两条代谢通路，即氨酰-tRNA （aminoacyl-tRNA ）生物合成及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成代谢通路。
结论 MK-801慢性给药诱导的精神分裂症发生可能与MK-801给药诱导血浆代谢紊乱，显著变化的代谢物和代谢途径与密切相关。
［关键词］MK-801；气相色谱-质谱联用；代谢组学；血浆；精神分裂症doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2023.11.005精神分裂症是一种严重而复杂的精神障碍，全球发病率约为1%［1］，主要表现为阴性症状、阳性症状及认知缺陷等［2-5］。
精神分裂症多发于青春期且发病机制十分复杂，目前尚未完全阐明其发病机制。
一项在中国精神分裂症受试者中评估氯氮平片的生物等效性研究
◇临床药理学◇摘要目的：建立人血浆中氯氮平含量测定的UPLC-MS/MS 分析方法评价国产和原研氯氮平片在中国精神分裂症患者体内的生物等效性和安全性。
方法：：采用两制剂、两周期、两序列交叉设计，24例受试者多剂量口服两种氯氮平片（每12h 口服100mg ），用UPLC-MS/MS 方法测定其血药浓度，计算主要药动学参数，评价两种氯氮平片的生物等效性。
结果：人血浆中氯氮平含量测定分析方法的线性范围为5～2000ng/mL ，批内、批间精密度［RSD （%）］均小于5%。
受试制剂与参比制剂的主要药动学参数：T max,ss 分别为1.01～5.02h 和1.00～5.00h ；C max,ss 分别为（665.0±279.3）、（679.5±240.3）ng/mL ；AUC 0-τ分别为（5408.1±2918.2）、（5389.5±2223.6）ng ∙h ∙mL -1；受试制剂和参比制剂药动学参数C max,ss 、AUC 0-τ几何均值比的90%置信区间分别落在86.15%～106.25%和87.69%～104.51%。
结论：建立的分析方法灵敏、快速、准确，两种氯氮平片在受试者体内生物等效。
关键词氯氮平；超高效液相色谱质谱联用法；药动学；稳态；生物等效性中图分类号：R969.1；R971+.4文献标志码：A文章编号：1009-2501(2023)10-1121-10doi ：10.12092/j.issn.1009-2501.2023.10.005精神分裂症是一种严重的神经精神疾病，影响全球近1%的人群［1］。
抗精神病药物是目前主要的治疗方法，该类药物常分为第一代抗精神病药（又称典型抗精神病药物）和第二代抗精神病药物（又称非典型抗精神病药）［2-3］。
氯氮平自1958年被发现［4-5］，为第二代抗精神病药物的代表。
上市50余年饱受监管机构关注且一度撤市失宠，现仍是治疗抵抗或有自杀倾向精神分裂症患者最有效的药物［6-8］。
高效液相色谱法测定血浆中利培酮及9-羟利培酮
高效液相色谱法测定血浆中利培酮及9-羟利培酮杨泽云;李红【摘要】目的观察反相高效液相色谱技术测定利培酮及其代谢物9-羟利培酮血浆浓度在临床药物监测中的效果.方法本法选用Inertsil ODS-3柱为固定相,甲醇:乙腈:水(5∶35∶60,v/v/v)为流动相,曲唑酮为内标,紫外检测波长280nm.1.0ml待测血浆加内标后,加0.5ml 2mol/LNaOH碱化后,加重蒸乙醚4ml提取,乙醚层加1mol/LHCL0.2ml酸化后弃去上层乙醚,氮气吹干,流动相重组后进样分析.结果利培酮及9-羟利培酮最低检测浓度分别为1.56和2.81ng/ml,绝对回收率在80.35%～99.27%之间,日内RSD1.3%～6.7%,日间RSD2.1%～10.9%.结论本法操作简便,灵敏度高,重复性好,适合临床检测.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2010(045)007【总页数】3页(P702-704)【关键词】利培酮 9-羟利培酮;高效液相色谱法【作者】杨泽云;李红【作者单位】332000,九江,江西省九江市第五人民医院;332000,九江,江西省九江市第五人民医院【正文语种】中文【中图分类】R969.1为进一步研究利培酮及主要代谢物浓度与临床疗效的关系，我们采用HPLC方法测定利培酮及其代谢物9-羟利培酮血浆浓度，用于临床药物监测。
1 材料与方法1.1 对照品与试剂利培酮、9-羟利培酮及曲唑酮均购自美国Sigma公司；甲醇、乙腈为色谱纯，购自上海陆都化学试剂厂；冰乙酸、正丁胺为分析纯，购自上海化学试剂有限公司；乙醚为分析纯，购自上海马陆制药厂。
空白血浆为健康人捐献。
1.2 仪器美国Spectras System公司高效液相色谱系统，包括P100-310型单元恒容泵，UV1000-111型单波长紫外检测器，Anstar色谱工作站，7725型手动进样器。
1.3 实验方法被测物及内标的标准储备液：用十万分之一天平准确称取利培酮、9-羟利培酮和曲唑酮对照品各5mg于5个小烧杯中，先用少量甲醇溶解，转入5ml 容量瓶中，再用适量甲醇洗涤烧杯3次一并转入容量瓶中，滴加甲醇至刻度，得到浓度为1.00mg/ml的利培酮、9-羟利培酮和曲唑酮的标准浓度储备液。
隐丹参酮单剂量和多剂量给药在大鼠体内药代动力学研究
隐丹参酮单剂量和多剂量给药在大鼠体内药代动力学研究曾金;王猛猛;沈淑娇;张志荣;蒋健;裘福荣【摘要】目的评价单剂量和多剂量灌胃隐丹参酮(Cryptotanshinone,CTS)的药动学特征.方法将20只SD雄性大鼠随机分为单剂量组(隐丹参酮10 mg/kg,1d)、多剂量组(隐丹参酮10 mg/kg,每天1次,连续10 d)给予灌胃后,用LC-MS/MS法测定血浆中隐丹参酮的浓度.血药浓度数据用DAS 2.0药代动力学软件处理,按两室模型拟合并求算药代动力学参数.结果隐丹参酮单剂量给药后,Cmax为(12.16±14.11)ng/mL,Tmax为(2.88±2.56)h,T1/2为(3.70±3.50)h,MRT为(6.69±0.54)h,AUC0-24为(58.40±25.73)ng·h/mL;多剂量给药后,Cav为(1.95±0.61)ng/mL,Tmax为(3.20±2.08)h,T1/2为(7.12±5.06)h,AUCss为(46.74±14.51)ng·h/mL,DF为2.42±0.28.单剂量和多剂量的AUC0-24、Tmax、T1/2差异无统计学意义.结论隐丹参酮长期给药后无蓄积风险.【期刊名称】《湖南中医药大学学报》【年(卷),期】2015(035)004【总页数】5页(P1-5)【关键词】隐丹参酮;单剂量和多剂量;药代动力学;LC-MS/MS【作者】曾金;王猛猛;沈淑娇;张志荣;蒋健;裘福荣【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R969.1目前临床上许多药物长期使用会产生蓄积或耐药现象，有特殊用途的药物如抗肿瘤药、抗病毒药等出现蓄积现象提高药物在体内的血药浓度，加大临床药物运用的危险性；耐药将会降低患者体内的药物浓度，使药物的治疗作用降低甚至消失。
《中国临床药学杂志》投稿攻略-发表论文
中国临床药学杂志一、发表说明本团队专注于论文写作与发表服务，擅长案例分析、编程仿真、图表绘制、理论分析等，论文写作、发表300起，具体价格信息联系：本团队并非任何杂志编辑中心，本中心是专业代发论文的机构，与各个杂志社具有长期良好的合作关系，也就是我们通过我们的特殊渠道将论文送给杂志社我们特定的内部人处理论文，保证较高的上稿率，以解决投稿人投稿后焦急的等待与石沉大海的结局。
通过我们可以较为容易达到发表的目地，当然，论文的质量也是重要的基础。
二、期刊简介如下本刊创刊于1992年。
八年来坚持以促进临床药学学术交流和信息传递为办刊宗旨，受到了国内外一致好评。
主要报道我国临床药学及相关领域的新成果、新技术、新方法，药物不良反应，药物相互作用，药物动力学，血药浓度监测以及有关医院药学学科的研究成果与实践。
本刊的读者为医院药师、医师、临床药学研究人员和其他医药研究人员。
论著帕瑞昔布钠预防性镇痛应用于腹腔镜妇科手术的疗效医师药师园地新生儿静脉营养液中邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯含量检测临床药学教育药学知识的横向思维在药物治疗学教学中的应用经验交流急性冠脉综合征住院患者药学监护工作流程的设计药物不良反应注射用七叶皂苷钠致不良反应1例综述Sigma-1受体对抑郁患者认知功能的影响及临床应用其他第五届定量药理学与新药评价国际会议第一轮通知论著唑来膦酸脂质体的制备及对肿瘤细胞的抑制作用短篇论著基于群体药动学的万古霉素个体化给药模式的建立和临床应用医师药师园地GP方案单用与联合氨磷汀方案在晚期恶性肿瘤化疗不良反应中的比较临床药学教育团队情景模拟教学模式在临床药学教学中的应用与评估合理用药口腔种植患者抗菌药物使用情况与合理性评价其他关于举办第二届全国药学科技知识传播创新发展研讨会的通知（第二轮）经验交流我国药学服务病例文献分析药物不良反应丙戊酸钠致恶性发热、皮疹及肝功能损害1例综述抗结核病化疗药物研究的新进展其他《中国临床药学杂志》投稿须知论著帕瑞昔布钠预防性镇痛应用于腹腔镜妇科手术的疗效医师药师园地新生儿静脉营养液中邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯含量检测临床药学教育药学知识的横向思维在药物治疗学教学中的应用经验交流急性冠脉综合征住院患者药学监护工作流程的设计药物不良反应注射用七叶皂苷钠致不良反应1例综述Sigma-1受体对抑郁患者认知功能的影响及临床应用其他第五届定量药理学与新药评价国际会议第一轮通知专家笔谈我国临床药学发展的回顾与思考论著P167肽修饰的多柔比星长循环脂质体在大鼠体内的药动学和药效学医师药师园地代谢综合征患者血脂异常的规范化治疗和药学监护经验交流临床药师参与心血管内科药物治疗实践新药之窗甲状腺髓样癌治疗新药Cabozantinib苹果酸盐其他2014年全国医药学术交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班征文通知综述CYP450氧化还原酶基因多态性的临床研究进展其他《中国临床药学杂志》投稿须知专家笔谈临床药学学科建设与相关概念的探讨论著细胞色素P4502D6＊10多态性对术后患者体内曲马多药动学特征的影响短篇论著HPLC法检测万古霉素血药浓度医师药师园地去铁胺治疗骨髓增生异常综合征铁过载的临床疗效及其对预后的影响经验交流对不典型颅内感染患者的药学监护及用药分析临床药学教学标准化患者教学模式在临床药学教学中的应用药物不良反应R-CHOP化疗致肺间质病变1例综述维生素D抗肿瘤作用的研究进展专家笔谈临床药学学科建设的内涵、范畴和发展趋势论著氟哌噻吨美利曲辛治疗氯胺酮依赖者焦虑抑郁的疗效观察医师药师园地临床药师干预对门诊晚期癌症患者疼痛治疗的影响经验交流模拟会诊方法的实施及其在考核药师临床实践能力中的作用其他关于举办第十二届全国青年药学工作者最新科研成果交流会的通知（第一轮）合理用药上海市静安区2012年1198例药品不良反应报告分析药物不良反应卡铂致过敏性支气管痉挛1例综述精神分裂症代谢组学研究进展专家笔谈探索临床药师在职培养的模式与途径论著不同剂量葛根素在大鼠血液与唾液中药物浓度的相关性短篇论著血竭体外经浅表创伤皮肤的透皮吸收实验其他关于举办第五届药学监护理论与临床实践研讨班的通知医师药师园地癌痛住院患者阿片类药物合理使用分析经验交流三级岗位药师全程监控合理用药的实践模式临床药学教育在药学生中开展医学基础教育的探讨药物不良反应替考拉宁致药物性皮炎3例综述非典型抗精神病药对肝脏的影响专家笔谈加强临床药师培训基地建设与提升临床药师培训质量其他关于举办2014年中国药学：大会暨第十四届中国药师周的通知（第二轮）论著氟吡汀在中国多民族健康受试者体内的群体药动学研究医师药师园地国产阿仑膦酸钠治疗绝经后妇女骨质疏松症的最小成本分析临床药学实践指南美国ACCP临床药师实践标准经验交流哮喘药物治疗的风险及其处理综述利奈唑胺不良反应类型及防治·专家笔谈·临床药师制建设和工作模式的探讨与实践·论著·空肠弯曲菌诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型的优化·医师药师园地·谷红注射剂联合尼麦角林治疗血管性痴呆的临床疗效·临床药学教育·美国住院药师培训项目及其对我国临床药师培训的启示·药物不良反应·拉莫三嗪致大疱表皮松解坏死型药疹1例·综述·缬草的药理作用研究进展论著小叶黑柴胡多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响短篇论著HPLC法测定骨髓炎术后引流液中万古霉素的含量其他《中国临床药学杂志》编委扩大会议在苏州召开医师药师园地大承气汤治疗粘连性肠梗阻的Meta分析经验交流药师在疾病临床路径管理中的作用合理用药我院440例抗感染药物不良反应分析药物不良反应吲哚美辛栓致低体温性昏迷1例综述HPLC法在手性药物拆分中的应用其他《中国临床药学杂志》投稿须知论著HPLC-ESI／MS法测定大鼠血浆及脑组织中H102肽的浓度医师药师园地文拉法辛缓释片治疗广泛性焦虑症后的持续性注意功能改变经验交流临床试验质量保证体系中的问题及相应对策药物不良反应头孢噻肟钠致过敏性休克1例综述精神障碍的代谢组学研究进展·论著·右美托咪啶用于脑功能区手术术中唤醒麻醉的观察·其他·我刊文后主要参考文献的著录格式·论著·奥美拉唑对氯吡格雷在大鼠体内药动学特征的影响·医师药师园地·非瓣膜性房颤患者抗凝药物临床应用情况分析·其他·文献类型和电子文献载体标志代码·医师药师园地·妊娠剧吐肠外营养支持1例及文献复习·经验交流·临床药师参与老年综合评估多学科团队为老年人提供多重用药管理的实践与体会·药物不良反应·头孢唑肟钠致药物性溶血2例论著硫酸氨基葡萄糖胶囊治疗膝骨关节炎的随机双盲多中心对照试验短篇论著RP-HPLC法测定人血浆中氯沙坦钾、厄贝沙坦和格列齐特浓度其他关于举办第四届药学监护理论与临床实践研讨班的通知医师药师园地广东珠海地区幽门螺杆菌对常用抗菌药物的体外耐药情况经验交流关于药物临床试验机构内部管理的思考综述胰高血糖素样肽-1受体激动剂的酶降解及其临床药物开发的研究进展论著多黏菌素B对内毒素诱导的RAW264．7细胞分泌一氧化氮的影响医师药师园地静注人免疫球蛋白治疗重症手足口病的疗效分析其他关于举办2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周的通知（第二轮）经验交流基于PICO设计理念的儿童临床试验依从性控制方法的建立合理用药我院2012年度药品不良反应报告分析药物不良反应利培酮所致严重粒细胞缺乏合并全身皮疹1例综述表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂治疗非小细胞肺癌的研究进展及临床应用论著缬沙坦氨氯地平片对高血压患者左室舒张功能和动脉顺应性影响的超声学评价医师药师园地微生态制剂对婴幼儿肺炎继发抗生素相关性腹泻的防治作用经验交流临床药师参与肾移植后肺部感染患者的药物治疗实践临床药学教育美国Pharm．D．教育及其对我国临床药学教育的启示其他2014年全国医药学术交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班征文通知论著胰高血糖素样肽-1对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞脂肪酸代谢的作用及机制医师药师园地艾司西酞普兰与文拉法辛治疗老年抑郁障碍的疗效比较合理用药我院2007—2009年住院患者用药医嘱单合理性的调查经验交流临床药师在肿瘤科开展药学服务的实例分析药物不良反应莫西沙星致重症多形红斑型药疹1例综述基因多态性对氯吡格雷药理作用和临床反应的影响论著天麻素经十二指肠给药后的大鼠脑药动学特征医师药师园地草木犀流浸液片减轻甲状腺术后肿胀疼痛渗出的疗效评价经验交流我院门诊处方点评模式和工作方法合理用药我院送检痰标本中大肠埃希菌的检出率及耐药性其他2012年“全国医院药学（药事管理）学术会议”征文通知药物不良反应头孢替安引起踝关节疼痛2例综述复方口服避孕药的非避孕作用药物不良反应前列地尔注射剂致过敏性休克1例论著抗肿瘤药物西美替尼在Caco-2细胞模型中的吸收转运短篇论著RP-HPLC法测定健康者尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量医师药师园地硼替佐米治疗多发性骨髓瘤的临床观察经验交流中医院开展中药临床药学工作的建议和方法合理用药苦碟子注射剂不良反应文献分析药物不良反应注射用盐酸氨溴索致小儿过敏反应2例论著肾移植患者他克莫司的血药浓度与CYP3A5＊3基因多态性的关系其他《临床药学理论与实践》新书介绍论著利福平聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的成型工艺及制剂学性质分析医师药师园地中药注射剂在我院肿瘤科住院患者中的应用分析经验交流儿童临床用药风险防范措施的探讨合理用药药物对症状和体征的影响其他关于举办第三届药学监护理论与临床实践研讨班的通知综述选择性环氧化酶-2抑制剂对肾脏的作用药物不良反应大剂量甲泼尼龙琥珀酸钠致皮疹伴瘙痒1例论著葛根黄豆苷元对沙土鼠脑缺血及再灌注损伤的神经保护作用医师药师园地粉尘螨滴剂舌下含服治疗儿童支气管哮喘伴过敏性鼻炎的临床疗效经验交流I临床药师在一例重症慢性阻塞性肺病急性加重治疗团队中的价值药物经济学3种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂治疗躯体形式障碍的最小成本分析药物不良反应布洛芬缓释胶囊致荨麻疹1例综述抑郁症失眠的药物治疗论著口服抗糖尿病药物不良反应信号及其相关因素分析医师药师园地地佐辛与曲马多对剖宫产硬膜外麻醉后寒战的效果比较临床药学教学临床药学教育新模式的探索与实践药物不良反应注射用硼替佐米致带状疱疹1例经验交流西药与中药联合应用于临床的风险分析及规避措施其他《中国执业药师》2013年征稿征订启事药物不良反应注射用泮托拉唑钠致输液反应1例综述抗肿瘤药物作用的新靶点——CHOP／GADD153凋亡通路其他2012年《中国临床药学杂志》第1—6期文题索引·论著·低分子肝素钙对不同剂量灯盏花素注射剂在大鼠体内药动学特征的影响·其他·《中国临床药学杂志》第五届编委会成立大会在上海召开·医师药师园地·HPLC法测定人脑脊液中美罗培南浓度·经验交流·孟鲁司特治疗变应性鼻炎的临床疗效·药物不良反应·静滴重组人白细胞介素-2注射剂致关节疼痛1例·综述·ABCB1基因多态性对多西他赛药动学和药效学影响的研究进展·其他·《中国临床药学杂志》投稿须知论著脂联素对氧化低密度脂蛋白损伤内皮祖细胞的影响及作用机制医师药师园地度洛西汀治疗痛性糖尿病神经病变的临床观察其他关于举办第二届全国药品质量分析论坛的通知合理用药奈达铂小剂量多次给药与大剂量单次给药的不良反应比较经验交流胰岛素产品咨询中常见问题及对策综述索拉非尼治疗晚期肝细胞肝癌：疗效和不良反应处理论著MDR1C3435T基因多态性与芬太尼术后镇痛效应的关系短篇论著六神曲生品与炒制品的消化酶活力及胃肠动力比较医师药师园地山豆根多糖硫酸化修饰及其体外抗HBV活性测定药物不良反应盐酸头孢吡肟致老年肾功能不全患者精神异常1例合理用药我院2009年药品不良反应报告分析药物不良反应地塞米松磷酸钠静脉注射诱发宽QRS波心动过速1例经验交流临床药师会诊肺栓塞患者华法林治疗无效1例及体会综述口服结肠定位给药系统的研究进展论著吡啶羧酸铬通过AMPK信号通路促进3T3-L1脂肪细胞脂肪酸转位酶CD36的转位医师药师园地盐酸丁咯地尔与丹参注射剂联合治疗突发性聋的临床疗效经验交流药师参与临床实践的案例分析其他抗肿瘤药物临床药学研讨会在乌镇举行经验交流居民对社区卫生服务中心医师满意度的调查与分析其他2011上海临床药学学术会议成功举办药物不良反应注射用脂溶性维生素（I）致幼儿过敏反应1例综述氯氮平在非精神病性障碍中的应用其他临床药学岭南论坛·2011在东莞举行论著LC-MS/MS法测定人血浆中氟伏沙明浓度及其人体生物等效性短篇论著硬膜外阻滞复合全麻对腹腔镜胃穿孔修补术患者术中应激反应的影响医师药师园地急性脑卒中后抑酸药预防性应用情况调查和循证医学评价其他关于举办2011年中国药学大会暨第1l届中国药师周的通知合理用药时间依赖性β内酰胺类抗菌药物的合理使用经验交流临床药师参与112例患者抗菌药物临床应用干预分析药物不良反应盐酸伊立替康注射剂致严重不良反应1例综述新型非典型抗精神病药：伊潘立酮·论著·脱氢野百合碱诱导犬肺动脉高压模型的剂量·其他·2012年紫禁城国际药师论坛征文通知·短篇论著·氟比洛芬酯对大鼠脑缺血再灌注损伤后血浆血栓素A2和前列环素I2水平的影响·医师药师园地·围术期应用乌司他丁对老年患者脏器功能的保护作用及机制·经验交流·临床药师参与一例肾功能衰竭患者抗感染药物调整分析·合理用药·我院89例严重的和新的药品不良反应报告分析·药物不良反应·碘普罗胺370致过敏性休克1例·综述·以酪氨酸激酶信号通路为靶点的抗肿瘤药物研究进展·其他·2011年《中国临床药学杂志》第1～6期文题索引论著丹参素对大鼠心室肌动作电位、L-型钙电流和ATP敏感性钾电流的作用医师药师园地含莫西沙星的抗痨方案治疗耐多药肺结核的疗效观察合理用药呼吸衰竭药物治疗中不合理用药的判断经验交流卡泊芬净治疗7例侵袭性真菌感染的临床分析药物不良反应多烯磷脂酰胆碱注射液致过敏反应1例综述甲型H1N1流感病毒特性及新疫苗研究进展药物不良反应胸腺肽致过敏性休克1例其他《中国临床药学杂志》投稿须知论著法舒地尔抗动脉粥样硬化作用及其机制短篇论著丹参酮ⅡA对2型糖尿病患者外周血中SDF-1／CXCR4的影响医师药师园地酪酸梭菌活菌散剂辅助治疗足月新生儿高胆红素血症经验交流临床药师在抗菌药物治疗方案设计中的作用药物不良反应热毒宁注射液致小儿口唇青紫1例新药之窗新型噻吩吡啶类抗血小板药——普拉格雷综述肾脏移植受者常用免疫抑制剂治疗药物监测进展论著LC-MS／MS法同时测定曲马多与代谢产物3-O-脱甲基曲马多的血浆浓度及其生物等效性短篇论著瑞舒伐他汀对急性心肌梗死患者血清炎症因子和脂联素水平的影响医师药师园地防风通圣颗粒联合硫普罗宁治疗非乙醇性脂肪肝临床观察合理用药人工髋关节置换术围手术期预防性使用抗菌药物的调查与分析经验交流呼吸科临床药师工作体会药物不良反应头孢曲松引起多形性红斑1例综述人参皂苷对JNK信号通路的研究进展论著莫沙比利治疗老年2型糖尿病胃轻瘫的临床疗效医师药师园地医院管理人员对临床药学工作和临床药师认知情况的调查药物经济学非小细胞肺癌3种化疗方案的最小成本分析经验交流用药理学知识指导临床用药药物不良反应利奈唑胺注射液致高乳酸血症2例其他医院改革背景下医院药学职能转变和临床药学发展研讨会在东莞举行综述非诺贝特非调脂作用的研究与应用。
HPLC法测定大鼠血浆、微粒体中非那西丁与其代谢物含量及其应用
（ １ ．Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｆ ｏ ｒ Ｈ ｉ ｇ ｈ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｆ
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 测 定大 鼠血 浆 、 微粒 体 中 非 那 西丁 与其 代谢 物 含量 及 其应 用
王新 敏 ， 彭蕴 茹 ， 景欣悦 ， 薛
（ １ ． 南京 中医药大学 江苏省方剂高技术研 究重点 实验 室 ， 江 苏 南京
Ｈ ＰＬＣ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐｈ ｅ ｎａ ｃ ｅ ｔ ｉ ｎ ａ ｎｄ ｉ ｔ ｓ ｍｅ ｔ ａｂ ｏ． １ ｉ ｔ ｅ ｉ ｎ ｒ ａ ｔ ｐｌ ａ ｓ ｍａ ａｎ ｄ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｏｍ ｅ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ａ ｐ ｐｌ ｉ ｃ ａ－ ｔ ｉ ｏ ｎ
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄｓ： ｃ ｙ ｔ ｏ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍｅ Ｐ ４５ ０；ＣＹＰ１ Ａ２；ｐｈ ｅ ｎ ａ ｃ ｅ ｔ ｉ ｎ；ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｍｉ ｎ —
１ ０ ｄ后 禁食 １ ２ ｈ 。各 组取 ６只 大 鼠， 尾静 脉注射 非那 西丁
（ ２ ０ ｍ ｇ・ ｋ ｇ ） ， ５ 、 １ ０ 、 １ ５ 、 ３ ０ 、 ４ ５ 、 ６ ０ 、 ９ ０ 、 １ ２ ０ ｍｉ ｎ于 眼底 静脉 丛 取血 ０ ． ５ ｍ ｌ ， 肝 素抗 凝 ， 离 心取 ２ ０ ０ ｌ 血浆 ， 按“ 血浆样 品
ｏ ｐ ｈ ｅ ｎ；ｐ ｒ ｏ ｂ ｅ ｄ ｍｇ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ；ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
处 理方 法” 进行 处理 。其余 大 鼠按文 献 方 法分 别制 备肝
藁本内酯通过抑制铁自噬延缓小鼠听皮层组织衰老
网络出版时间：２０２４－０３－０９１８：２７：０７ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２４０３０６．１７２５．０２０藁本内酯通过抑制铁自噬延缓小鼠听皮层组织衰老周颖东１，张梦娴１，王青玲１，康浩然２，张治成２，王庆林３，刘亚敏４，郭向东２（１．河南中医药大学第一临床医学院，河南郑州 ４５００４６；２．河南中医药大学第一附属医院耳鼻喉科，河南郑州 ４５００００；３．河南医学高等专科学校，河南郑州 ４５１１９１；４．河南中医药大学药学院，河南郑州 ４５００４６）收稿日期：２０２３－１０－１５，修回日期：２０２４－０１－２２基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１４０３４３９）；河南省科技攻关计划（Ｎｏ２２２１０２３１０６０４，２３２１０２３１０４３０）；河南省中医药科学研究专项重点课题（Ｎｏ２０－２１ＺＹ１０４５）；河南省高等学校重点科研项目（Ｎｏ２３Ａ３６００２８）作者简介：周颖东（１９９８－），硕士生，研究方向：内耳疾病，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｙｄ７８６７９４２４２＠１６３．ｃｏｍ；郭向东（１９８０－），硕士，副主任医师，硕士生导师，研究方向：内耳疾病，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｇｕｏｘｉａｎｇｄｏｎｇ０６１８＠１２６．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２３０９０４３文献标识码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２４）０３－０４５５－０７中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ２８４ １；Ｒ３２２ ８１；Ｒ３３９ ３８；Ｒ５９１ １；Ｒ７６４ ４３６摘要：目的 探究藁本内酯（ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ，ＬＩＧ）延缓听皮层组织衰老，治疗中枢性老年性聋的机制。
方法 将４０只１３月龄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠随机分为ＬＩＧ低剂量组（Ｌ ＬＩＧ）、ＬＩＧ中剂量组（Ｍ ＬＩＧ）、ＬＩＧ高剂量组（Ｈ ＬＩＧ）和衰老组（Ａｇｅ），同品系２月龄小鼠１０只作为对照组（Ｃｔｒｌ）。
超高效液相色谱-串联质谱法快速测定大鼠血清中8种神经递质
超高效液相色谱-串联质谱法快速测定大鼠血清中8种神经递质赵芳;李强;梁梅丽;闫艳;邢婕;秦雪梅;高晓霞【摘要】建立了同时测定8种神经递质(5-HT、GABA、Glu、ACH、NE、DA、5-HIAA和HVA)的超高效液相色谱-三重四极杆质谱方法(UHPLC-MS/MS),并用于大鼠血清样品的测定.大鼠血清经含0.1%甲酸-乙腈沉淀蛋白处理后,选用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱进行分离;采用电喷雾离子源(ESI),在正离子扫描下,采用多反应监测模式(MRM)对8种神经递质及内标化合物进行检测.结果表明,8种神经递质可在10 min内准确测定;定量限为1.8 ng/mL,且线性良好,相关系数均大于0.994,日内、日间精密度(n=6)≤9.2%,稳定性、加标回收率和基质效应等均符合分析要求.本方法分析时间短、准确度好、灵敏度高、专属性强、稳定性好、基质效应小,适用于血清中3类(单胺类、氨基酸类和乙酰胆碱)共8种神经递质的同时定量检测.%An ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometric ( LC-MS/MS ) method for simultaneous determination of 8 kinds of neurotransmitters (5-HT, GABA, Glu, ACH, NE, DA, 5-HIAA, HVA) in rat serum was developed.The blood samples were extracted by 0.1% formic acid in acetonitrile and separated on a Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm, 1.7 μm) using gradient elution, with the mobile phase consisting of acetonitrile and 0.1% formic acid in water.The samples were then ioniZed with positive electrospray ( ESI+) , and detected under multiple reaction monitoring ( MRM ) mode.As a result, 8 kinds of neurotransmitters were determined accurately in 10 min with a limit ofquantitation of 1.8 ng/mL and intra-day and inter-day precisions of ≤9.2% ( n=6 ).This method showed a good linearity in detection of neurotransmitters and the linear correlation coefficients were greater than 0.994.Also the stability, recovery and matrix effect were eligible for the analysis.This method showed high accuracy, sensitivity, strong specificity, good stability, small matrix effect and short time for analysis, and was suitable for the quantitative determination of monoamine, amino acids and acetylcholine neurotransmittes in rat serum.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2018(046)001【总页数】8页(P121-128)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱;神经递质;血清;含量测定【作者】赵芳;李强;梁梅丽;闫艳;邢婕;秦雪梅;高晓霞【作者单位】山西大学中医药现代研究中心,太原030006;山西大学中医药现代研究中心,太原030006;山西大学化学化工学院,太原030006;山西大学中医药现代研究中心,太原030006;山西大学化学化工学院,太原030006;山西大学中医药现代研究中心,太原030006;山西大学中医药现代研究中心,太原030006;山西大学中医药现代研究中心,太原030006;山西大学中医药现代研究中心,太原030006【正文语种】中文神经递质是在神经化学传递中充当“信使”的特定化学物质。
化栓通脉方调节自噬抗动脉粥样硬化的实验研究
2194 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October 2023,Vol.16,No.11㊃基础研究㊃基金项目:国家中医心血管病临床医学研究中心专项科研基金(CMC2022010);国家自然科学基金联合基金(U22A20372)作者单位:100029 北京中医药大学研究生院[路爱梅(硕士研究生)㊁李洪峥(博士研究生)㊁彭煜暄(硕士研究生)];中国中医科学院西苑医院心血管科[杨文文(博士研究生)㊁魏玥(硕士研究生)㊁曲华㊁付长庚],老年病科(龙霖梓);北京了未元中医药研究有限公司(吴汉涛)作者简介:路爱梅(1996-),2021级在读硕士研究生㊂研究方向:中西医结合心血管疾病研究㊂E⁃mail:570633591@ 通信作者:付长庚(1981-),博士,主任医师,博士生导师㊂研究方向:中西医结合心血管疾病研究㊂E⁃mail:fucgbs@化栓通脉方调节自噬抗动脉粥样硬化的实验研究路爱梅 李洪峥 杨文文 彭煜暄 魏玥 龙霖梓 曲华 吴汉涛 付长庚【摘要】 目的 观察化栓通脉方对ApoE 基因敲除(ApoE knockdown,ApoE -/-)小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响,并初步研究其抗AS 的作用机制㊂方法 10只8周龄C57BL /6J 小鼠设为对照组,全程普通饲料喂养;43只同品系ApoE -/-小鼠高脂饲料喂养8周制备体内AS 模型㊂造模成功后随机分为4组:模型组㊁辛伐他汀组(3mg /kg)㊁化栓通脉方低剂量组(6g /kg)㊁化栓通脉方高剂量组(12g /kg)㊂第9周各组开始相应药物灌胃,对照组和模型组采用等体积生理盐水,连续灌胃6周后分离血清和主动脉㊂使用全自动生化分析仪测定各组血清总胆固醇(total cholesterol,TC)㊁甘油三酯(triglyceride,TG)㊁低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL⁃C)㊁高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL⁃C)水平;采用ELISA 法检测各组血清白细胞介素(interleukin,IL)⁃1β㊁γ干扰素(interferon gamma,IFN⁃γ)㊁IL⁃10㊁IL⁃4水平;采用油红O 染色评价整体主动脉内膜斑块分布情况并测定相对斑块面积;采用苏木素 伊红染色评价主动脉窦斑块病理形态并量化斑块区域;采用Russell⁃Movat 染色分析小鼠主动脉窦斑块成分;采用免疫荧光染色检测小鼠主动脉窦组织溶酶体关联膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2)㊁轻链蛋白3A /B(light chain 3A /B,LC3A /B)㊁P62蛋白的表达㊂结果 化栓通脉方调节血脂效果较为突出,可明显降低AS 小鼠血清TC㊁TG㊁LDL⁃C 水平,提升HDL⁃C 水平,高㊁低剂量组都显示出显著的优势(P <0.01);相比于模型组,化栓通脉方高剂量组血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量显著降低,斑块面积㊁泡沫细胞和胶原纤维相对占比明显减小,P62蛋白表达显著减少,IL⁃10㊁IL⁃4含量显著升高,LAMP2㊁LC3A /B 表达明显增加,差异具有统计学意义(均P <0.05)㊂结论 化栓通脉方可显著调节AS 小鼠血脂和炎症因子水平,减少主动脉组织中泡沫细胞㊁胶原纤维和斑块的生成,通过促进LC3A /B㊁LAMP2的表达和P62的降解,调控细胞自噬,从而延缓AS 的发生发展㊂【关键词】 化栓通脉方; 动脉粥样硬化; 自噬; 降脂; 抗炎【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2023.11.006Experimental study of Huashuan Tongmai decoction regulating autophagy against atherosclerosis LU Aimei ,LI Hongzheng ,YANG Wenwen ,PENG Yuxuan ,WEI Yue ,LONG Linzi ,QU Hua ,WU Hantao ,FU ChanggengThe Graduate School of Beijing University of Chinese Medicine ,Beijing 100029,China Corresponding author :FU Changgeng ,E⁃mail :fucgbs@【Abstract 】 Objective To observe the effect of Huashuan Tongmai decoction on atherosclerosis环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112195 (AS)in ApoE knockout(ApoE knockdown,ApoE-/-)mice,and to study the mechanism of action againstAS.Methods 108-week⁃old C57BL/6J mice were treated as the control group and fed general diet,and43ApoE-/-mice were fed high⁃fat diet for8weeks to prepare in vivo AS model.After successful modelmaking,they were randomly divided into4groups:model group,Simvastatin group(3mg/kg),low dosegroup(6g/kg),and high dose group(12g/kg)of Huashuan Tongmai decoction.On week9,the controlgroup and the model group were received volume saline intragastric administration,the other groups weretreated with the drug intragastric administration,and serum and aorta were obtained after continuous gavagefor6weeks.The serum levels of TC,TG,LDL⁃C,and HDL⁃C in each group were determined by an automatic biochemical analyzer;the serum levels of IL⁃1β,IFN⁃γ,IL⁃10,and IL⁃4in each group were measured by ELISA;oil red O staining was used to evaluate the overall aortic endometrial plaque distribution and determine the relative plaque area;the method of Hematoxylin⁃eosin(HE)staining wasused to evaluate the aortic sinus plaque pathological morphology and quantify the plaque areas;the plaque components of the mouse aortic sinus were analyzed by Russell⁃Movat staining;the expression of LAMP2,LC3A/B,and P62in mice aortic sinus tissues were detected by immunofluorescence staining.Results The effect of Huashuan Tongmai decoction was prominent,which could significantly decreased the levels ofTC,TG,and LDL⁃C,and increased the level of HDL⁃C in AS mice serum,both the high and the low dosegroups showed significant advantages(P<0.01);compared with the model group,the high dose groupwas decreased significantly in the levels of IL⁃1βand IFN⁃γ,plaque area,the relative proportion of foamcells and collagen fibers,and the expression of P62,meanwhile,increased significantly in the levels ofIL⁃10and IL⁃4,and the expression of LAMP2and LC3A/B(P<0.05).Conclusion Huashuan Tongmai decoction can significantly regulate serum lipids and inflammatory factors in AS mice,reduce the generationof foam cells,collagen fibers and plaques in aortic tissue,and regulate cell autophagy by promoting the expression of LC3A/B and LAMP2and depressing the expression of P62,thus delaying the occurrence and development of AS.【Key words】 Huashuan Tongma decoction; atherosclerosis; autophagy; lipid⁃lowering; anti⁃inflammation 2019年全球疾病负担研究结果表明,以缺血性心脏病和卒中为主的动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)是引起全球人口死亡的首要原因,占全球总死亡人数的三分之一[1],给人类健康带来严重的危害㊂动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是ASCVD的病理基础,其成因复杂,其中脂质代谢紊乱㊁免疫和炎症贯穿AS病变始终[2⁃3]㊂自噬是在自噬相关基因的调控下,利用溶酶体自我降解后再利用,维持细胞能量稳态的过程[4],对AS的调控更具有双向作用 在AS早期内皮通过自噬调节脂质代谢㊁减轻炎症反应,从而抑制斑块的形成,晚期随着斑块的进展而变得功能失调[5]㊂因此,维持自噬的动态平衡对抑制AS的恶性发展极为重要㊂化栓通脉方是本课题组根据临床治疗AS患者总结而来的经验方,用于改善冠状动脉㊁颈动脉粥样硬化斑块,临床疗效确切㊂但其在动物体内研究中,是否具有抗AS效应及其作用机制有待进一步研究㊂有鉴于此,本实验从血清脂蛋白㊁炎症因子㊁斑块面积等方面,综合评价化栓通脉方调节ApoE 基因敲除(ApoE knockdown,ApoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块的效应,并初步探索其是否通过调控自噬而发挥抗AS作用㊂1 材料与方法1.1 实验动物及实验环境8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠10只,同品系ApoE-/-小鼠43只,体质量(22±2)g,购于斯贝福(北京)生物技术有限公司[许可证号:SCXK(京) 2019⁃0010]㊂小鼠饲养于北京了未元医药科技公司动物实验中心[许可证号:SYXK(京)2022⁃0007],温度(22±2)℃,湿度(50±10)%,明/暗周期(12/12)小时㊂动物自由进食㊁饮水㊂动物伦理审查批号:SYXK2022⁃0007㊂高脂饲料(83.5%基础饲料+15%猪油+1.5%胆固醇)和普通饲料均由北京华阜康生物科技有限公司[许可证号:SCXK(京)2019⁃0008]提供㊂实验过程中,动物灌胃致死3只,剔除各组离群2196 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.11值,各组统计数量均为7只㊂1.2 实验药物辛伐他汀片(杭州默沙东制药有限公司,规格:20mg/片,批号:U04517)㊂化栓通脉方药物组成及剂量:金银花15g㊁山楂15g㊁鸡血藤15g㊁制何首乌15g㊁生白芍7.5g㊁生甘草4g㊂中药饮片皆购于九州通医药集团股份有限公司,经北京中医药大学吴嘉瑞教授鉴定,均符合2020版‘中国药典“要求㊂辛伐他汀片用生理盐水配置成混悬液,浓度为0.3mg/mL㊂化栓通脉方各药物按组方比例,称取715g,用2000mL蒸馏水煎煮2次,然后浓缩至715mL的中药混悬液,每毫升含生药量1g,浓度为1g/mL,4℃保存,备用㊂用药剂量参考公式:高剂量给药剂量=成人(70kg)临床常用量×12(按人 小鼠体表面积折算等效剂量系数)㊂以成人(70kg)每日金银花15g㊁山楂15g㊁鸡血藤15g㊁制何首乌15g㊁生白芍7.5g㊁生甘草4g,共71.5g,生药计算高剂量组小鼠每日等效剂量为12g/kg,高㊁低剂量组给药剂量按2∶1设置,低剂量组小鼠每日给药剂量为6g/kg㊂辛伐他汀片成人给药剂量为每日20mg,换算获得辛伐他汀组小鼠每日灌胃剂量为3mg/kg㊂1.3 主要试剂与仪器白细胞介素(interleukin,IL)⁃1β㊁γ干扰素(interferon gamma,IFN⁃γ)㊁IL⁃10㊁IL⁃4ELISA试剂盒(武汉赛维尔生物科技有限公司,批号分别为EK201BHS⁃96㊁EK280/3⁃96㊁EK210/4⁃96㊁EK204HS⁃96);油红O染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号G1016);苏木素 伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号G1120);Russell改良Movat五色染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号G3701);抗⁃SQSTM1/ P62兔pAb㊁抗⁃LAMP2兔pAb㊁抗LC⁃3A/B兔pAb (武汉赛维尔生物科技有限公司,批号分别为GB11239⁃1㊁GB11330㊁GB11124)㊂台式高速冷冻离心机(大龙,型号D3024R),酶标检测仪(美国BioTeK公司,型号Epoch),全自动生化分析仪(深圳雷杜生命科技,型号分别为Chemray240㊁420㊁800),荧光显微镜(宁波舜宇仪器有限公司,型号2204926),光学显微镜(DMi1,型号Leica),组织切片机(浙江省金华市科迪仪器公司,型号KD⁃ST5500)㊂1.4 动物分组㊁给药及取材适应性喂养1周,10只C57BL/6J小鼠作为对照组,全程采用普通维持饲料喂养㊂43只ApoE⁃/⁃小鼠采用高脂饲料喂养8周后,随机抽取3只取材,主动脉窦病理切片HE染色显示:主动脉管腔狭窄,内膜明显增厚,有明显斑块形成,提示早期AS体内模型建立成功㊂造模后的ApoE-/-小鼠随机分为4组:模型组㊁辛伐他汀组(3mg/kg)㊁化栓通脉方低剂量组(6g/kg)㊁化栓通脉方高剂量组(12g/kg),每组10只,继续高脂饲料喂养,用药组同时予以相应药物灌胃,对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃以保证组间一致性,每日灌胃1次,连续6周㊂最后一次灌胃后,禁食㊁不禁水12小时㊂用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉,球后静脉(眼眶静脉丛)取血,室温静置2小时,4℃4000r/min离心10分钟,分离上层血清,-80℃下冻存㊂取血后打开小鼠胸腔及腹腔,经PBS充分灌流,整体分离自主动脉根部至髂总动脉分叉处主动脉,并剥离周围多余结缔组织和脂肪组织,投入液氮或组织固定液中保存,用于后续相关实验㊂1.5 指标检测1.5.1 酶标法测定小鼠血脂水平 每组取7只小鼠,使用全自动生化分析仪测定各组小鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)㊁甘油三酯(triglyceride,TG)㊁低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL⁃C)㊁高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL⁃C)的水平㊂1.5.2 ELISA法检测血清炎症因子水平 每组取7只小鼠,根据ELISA试剂盒说明书操作,检测小鼠血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ㊁IL⁃10㊁IL⁃4的水平㊂1.5.3 大体油红O染色测定整体主动脉相对斑块面积 每组取3只小鼠,在光学显微镜下将小鼠主动脉纵剖面固定,水洗,油红O染色后将血管平铺于黑色橡胶板,迅速拍照,利用Image J软件分析以主动脉相对斑块面积来评价主动脉斑块严重程度㊂相对斑块面积(%)=主动脉斑块面积/血管内膜总面积×100%㊂1.5.4 HE染色评价主动脉窦病理形态 每组取3只小鼠,4%多聚甲醛固定主动脉于4℃冰箱24小时,梯度脱水后石蜡包埋,并连续切片(5μm),HE 常规染色后封片拍照,于光学显微镜下检测AS小鼠主动脉窦病理形态的变化,测量并计算斑块面积占血管内膜面积百分比㊂相对斑块面积(%)=斑块环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112197面积/内膜总面积×100%㊂1.5.5 Russell⁃Movat染色评价主动脉窦斑块成分 每组取3只小鼠,主动脉石蜡切片处理,切片厚度5μm,连续切片至观察到3个主动脉瓣完全融合开始留取10张切片,切片脱蜡至水,经五色法染液进行染色,脱水封片,在光学显微镜下观察主动脉窦斑块各成分变化,染色后的细胞核和弹性纤维呈黑色,胶原纤维呈红色,泡沫细胞呈淡紫色,蛋白聚糖呈蓝色㊂测量并计算斑块内泡沫细胞及胶原纤维的占比㊂1.5.6 免疫荧光法评价主动脉窦溶酶体关联膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein2, LAMP2)㊁轻链蛋白3A/B(light chain3A/B,LC3A/ B)㊁P62蛋白的表达 每组取3只小鼠,主动脉窦石蜡切片,常规脱蜡㊁水化㊁抗原修复后,血清室温封闭30分钟,滴加一抗4℃孵育过夜,PBS浸洗3次,次日滴加荧光二抗25℃避光孵育1小时,PBS浸洗3次,滴加DAPI避光孵育5分钟复染细胞核,PBS 浸洗4次,最后用含抗荧光的淬灭剂封片㊂使用荧光显微镜观察主动脉窦的LAMP2㊁LC3A/B㊁P62蛋白荧光表达,并采集图像,利用Image J分析处理数据㊂1.6 统计学方法实验所得数据为计量资料,使用SPSS24.0统计软件进行处理㊂数据经检验均符合正态分布且方差齐,以均数±标准差(x±s)表示㊂多组间比较采用单因素方差分析,两两比较用LSD法,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2 结果2.1 化栓通脉方对小鼠血脂水平的影响相比于对照组,模型组小鼠血清中TC㊁TG㊁LDL⁃C水平明显升高,HDL⁃C水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);相比于模型组,辛伐他汀组和化栓通脉方低㊁高剂量组血清中TC㊁TG㊁LDL⁃C水平均显著降低,HDL⁃C水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)㊂见表1㊂2.2 化栓通脉方对小鼠血清炎症因子水平的影响与对照组相比,模型组血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量显著上升,差异具有统计学意义(P<0.01), IL⁃10㊁IL⁃4含量也有所升高,但无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,化栓通脉方高剂量组血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量显著降低,IL⁃10㊁IL⁃4含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);化栓通脉方低剂量组较模型组IFN⁃γ含量降低,IL⁃4含量升高,差异有统计学意义(P<0.01),IL⁃1β含量降低, IL⁃10含量升高,差异无统计学意义(P>0.05)㊂见表2㊂表1 各组AS模型小鼠血脂水平比较(x±s,mmol/L)组别鼠只TC TG LDL⁃C HDL⁃C对照组7 2.75±0.160.66±0.030.36±0.03 1.99±0.10模型组724.74±0.96b 4.17±0.34b15.28±1.50b 1.43±0.30a 辛伐他汀组717.88±2.90bc 2.21±1.07bc11.13±1.66bc 2.96±0.82bc 化栓通脉方低剂量组718.74±2.23bc 2.06±0.45bc11.82±2.23bc 2.83±0.31bc 化栓通脉方高剂量组718.21±1.37bc 1.44±0.35ac10.17±2.16bc 3.39±0.52bc 注:与对照组相比,a P<0.05,b P<0.01;与模型组相比,c P<0.01㊂表2 各组AS模型小鼠血清炎症因子比较(x±s,pg/mL)组别鼠只IL⁃1βIFN⁃γIL⁃10IL⁃4对照组70.61±0.3153.44±21.3435.66±18.26 1.30±0.31模型组7 5.97±1.65a214.70±87.64a72.92±28.44 2.89±0.85辛伐他汀组7 3.93±2.06ab129.80±95.78b90.36±28.06a7.64±5.92化栓通脉方低剂量组7 4.79±2.05a61.71±21.39b93.33±33.28a11.81±4.02ab 化栓通脉方高剂量组7 2.03±0.74b61.89±23.34b140.80±59.54ab22.24±7.69ab 注:与对照组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.01㊂2198 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112.3 化栓通脉方对小鼠整体主动脉斑块面积的影响主动脉大体油红O染色显示,对照组小鼠主动脉血管壁大体光滑㊁平整,呈半透明状,见有少量点状斑块散在分布;高脂饲料喂养14周,模型组小鼠主动脉管腔病理性扩增,管壁存在大量的红染的点片状脂质斑块,且多分布在主动脉弓及血管分叉处㊂相比对照组,模型组主动脉窦部斑块面积明显增加(P<0.01);相比模型组,化栓通脉方低㊁高剂量组小鼠主动脉窦部斑块面积均明显减少(P<0.01)㊂见图1及表3㊂2.4 化栓通脉方对小鼠主动脉窦病理形态的影响主动脉窦HE染色显示,对照组小鼠主动脉内膜光滑完整,内膜下无明显泡沫细胞和脂质沉积形成,中层平滑肌细胞排列整齐;模型组小鼠主动脉内膜增厚明显,内膜下可见大量泡沫细胞和脂质沉积,中层平滑肌细胞增殖且排列紊乱;与模型组相比,化栓通脉方高剂量干预后,小鼠主动脉窦内膜厚度㊁泡沫细胞数量及脂质沉积明显减轻(P<0.01)㊂见图2,表4㊂表3 各组小鼠AS模型小鼠斑块面积占比(大体油红O染色)(x±s)组别鼠只主动脉相对斑块面积占比(%)对照组3 1.98±0.98模型组312.55±4.05a辛伐他汀组3 2.65±0.99b化栓通脉方低剂量组3 6.46±3.31b化栓通脉方高剂量组3 2.75±0.29b注:与对照组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.01㊂注:A对照组;B模型组;C辛伐他汀组;D化栓通脉方低剂量组;E化栓通脉方高剂量组㊂图1 各组AS模型小鼠主动脉大体油红O染色结果注:A对照组;B模型组;C辛伐他汀组;D化栓通脉方低剂量组;E化栓通脉方高剂量组㊂图2 各组AS模型小鼠主动脉窦HE染色结果(×100)环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112199表4 各组小鼠AS模型小鼠斑块面积及成分占比(x±s)组别鼠只主动脉窦相对斑块占比(HE染色,%)泡沫细胞占比(Movat染色,%)胶原纤维占比(Movat染色,%)对照组3000模型组351.00±4.00a17.00±2.00a18.33±2.08a 辛伐他汀组336.80±1.76ab12.00±2.94ab9.75±3.50ab 化栓通脉方低剂量组332.40±7.96ab13.80±3.56a11.33±0.58ab 化栓通脉方高剂量组325.67±10.40ab11.00±4.00ab8.33±1.53ab 注:与对照组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.01㊂ 主动脉窦Russell⁃Movat染色结果显示,对照组内膜未见明显斑块,内皮细胞结构完整,弹力纤维弯曲连续,富有弹性,中膜血管平滑肌排列整齐,周围分布少量胶原纤维和网状纤维结构;模型组可见内膜斑块显著突向管腔,斑块内部有大量泡沫细胞和脂质堆积,斑块表面有大量炎症细胞浸润黏附,平滑肌细胞大量增生,排列紊乱,血管中膜失去连续性,弹力纤维绷直㊁失去弹性,胶原纤维㊁网状纤维排布错乱㊂化栓通脉方干预后主动脉窦Movat染色显示:斑块炎症细胞浸润黏附有所减轻,脂质堆积有所减少,胶原纤维结构稳定,覆盖包裹在脂质表面,血管中膜连续性较模型组有所改善(P<0.05),表明化栓通脉方促进斑块稳定,减少AS的发展㊂见图3,表4㊂2.5 化栓通脉方对小鼠主动脉窦自噬相关蛋白表达的影响免疫荧光结果显示,与对照组相比,模型组小鼠主动脉中LAMP2㊁LC3A/B㊁P62的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,化栓通脉方高剂量干预后,AS模型小鼠主动脉窦中LAMP2㊁LC3A/B表达升高(P<0.01),P62的表达降低(P>0.05)㊂见图4,表5㊂3 讨论在AS的中医药防治中,瘀与毒是导致易损斑块形成及破裂的主要病理因素㊂稳定斑块和血栓属于 内阻瘀血”,各种炎症因子属于 内生毒邪”,瘀为常,毒为变,由常生变,因瘀致毒,毒瘀互结,AS 易损斑块在瘀血基础上 毒邪”致病,治当以解毒化瘀[6⁃9]㊂化栓通脉方以金银花为君,解毒清热,直击病本;山楂行气散瘀化浊,鸡血藤祛瘀养血通络,制何首乌㊁白芍养血益精,敛阴止痛,共为臣药;甘草清热解毒,调和诸药㊂上述药物合用,共奏解毒化瘀㊁养血通络之效㊂注:A对照组;B模型组;C辛伐他汀组;D化栓通脉方低剂量组;E化栓通脉方高剂量组㊂图3 各组AS模型小鼠主动脉窦Movat染色结果(×100)表5 各组AS模型小鼠主动脉窦自噬蛋白表达情况比较(x±s)组别鼠只P62LC3A/B LAMP2对照组3 1.98±0.987.04±0.2938.23±8.04模型组312.55±4.05b10.60±2.7866.13±16.30a 辛伐他汀组3 2.65±0.99ac14.27±3.93b108.60±15.36bc 化栓通脉方低剂量组3 6.46±3.31b8.66±0.6573.54±8.85b 化栓通脉方高剂量组3 2.75±0.29b17.05±2.34bc109.80±8.34bc 注:与对照组相比,a P<0.05,b P<0.01;与模型组相比,c P<0.01㊂2200 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October 2023,Vol.16,No.11注:A 对照组;B 模型组;C 辛伐他汀组;D 化栓通脉方低剂量组;E 化栓通脉方高剂量组㊂图4 各组AS 模型小鼠主动脉窦免疫荧光染色结果(×100) 现代药理学研究指出,化栓通脉方通过多成分㊁多靶点㊁多途径,发挥抗AS 作用 金银花㊁山楂㊁鸡血藤㊁白芍都具有抗炎㊁抗氧化㊁抗血小板聚集的作用[10⁃12],山楂还可调节血脂代谢及改善血管内皮功能,鸡血藤可调节造血系统[13⁃14],制何首乌可补血㊁抗衰老㊁降血脂[15],白芍可通过调节免疫㊁抑制细胞凋亡㊁促进胆固醇流出等途径抗AS [16⁃17]㊂由此可知,化栓通脉方中药物成分可能通过抑制斑块内炎症反应㊁改善脂质代谢和血流动力学,从而降低斑块恶化破裂风险㊂故本研究旨在通过探讨化栓通脉方对ApoE -/-小鼠抗AS 的作用及其机制,为其临床应用提供理论依据和数据支撑㊂3.1 化栓通脉方通过降脂㊁抗炎实现抗AS 作用AS 是一种慢性炎症性血管疾病,脂质代谢紊乱与炎症因子升高会导致血管内皮功能受损,引起血管内壁脂质堆积及斑块和血栓的形成,与AS 的生成与发展密切相关[3,18],促炎和抗炎机制的平衡决定着AS 的结局,是病情转化和恶化的关键[19]㊂有鉴于此,调节血脂代谢㊁抑制炎症反应在AS 的治疗中占有重要地位㊂本研究表明,化栓通脉方可调节血清脂蛋白㊁炎症因子水平㊂研究结果指出,相比于模型组,高㊁低剂量化栓通脉方组血清中TC㊁TG㊁LDL⁃C 水平均显著下降,HDL⁃C 水平显著上升,促炎因子IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量降低,抑炎因子IL⁃10㊁IL⁃4含量升高,斑块面积㊁泡沫细胞和胶原纤维相对占比明显减小,且随化栓通脉方浓度升高而存在一定差异㊂由此表明,化栓通脉方可能通过调节血脂代谢㊁降低血清炎症因子水平,减少主动脉斑块面积,实现抗AS 作用㊂3.2 化栓通脉方抗AS 作用可能与诱导细胞自噬有关自噬是细胞自身的分解代谢机制,对AS 具有重要影响,其水平主要通过自噬标志物(自噬体和自噬溶酶体)和自噬蛋白标志物的水平进行评价[20⁃21]㊂自噬体作为自噬过程的标志性结构,是检测自噬的唯一金标准,而LC3是最可靠的自噬体标志物,其表达水平与自噬体数量呈正相关;LAMP2是溶酶体标志物,其表达水平与自噬溶酶体亦呈正相关;P62是自噬的特异性底物,其表达水平与自噬潮呈负相关㊂本研究免疫荧光结果显示,模型组较对照组具有高水平的LC3A /B㊁LAMP2共定位,表明自噬的募集是对新兴斑块的应激反应㊂化栓通脉方组较模型组LC3A /B㊁LAMP2的表达上调㊁P62的表达下调,且高剂量组比低剂量组自噬蛋白表达更为显著,表明化栓通脉方可增加自噬通量,升高自噬水平,起到抗AS 作用,并与剂量呈相关关系㊂综上所述,化栓通脉方可能通过诱导细胞自环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112201噬,调节脂质代谢㊁减弱炎症反应,从而抑制斑块形成与进展,达到防治AS的作用,具体机制通路有待进一步实验验证㊂参考文献[1] Roth G A,Mensah G A,Johnson C O,et al.Global burden ofcardiovascular diseases and risk 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丹参及其活性成分治疗血管性痴呆作用机制的研究进展
环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July 2023,Vol.16,No.71475 ㊃综述㊃基金项目:国家自然科学基金(82074527)作者单位:100700 北京中医药大学东直门医院针灸科[杨圆圆㊁倪金霞㊁袁静雪(博士研究生)㊁宋越(博士研究生)],脑病一科(赵子珺);黑龙江中医药大学附属第二医院哈南分院针灸二科(王迪);黑龙江中医药大学附属第一医院针灸二科(闫禹竹);黑龙江中医药大学佳木斯学院(汪金宇)作者简介:杨圆圆(1989-),博士,在站博士后,主治医师㊂研究方向:中医药防治脑血管疾病的研究㊂E⁃mail:yuanyuan5250@ 通信作者:倪金霞(1972-),博士,博士生导师,主任医师㊂研究方向:针灸防治脑血管疾病的研究㊂E⁃mail:nijinxia118@丹参及其活性成分治疗血管性痴呆作用机制的研究进展杨圆圆 倪金霞 王迪 闫禹竹 汪金宇 赵子珺 袁静雪 宋越【摘要】 丹参其活性成分包括丹参酮IIA㊁丹参酸B㊁丹参素㊁隐丹参酮等㊂其中丹参酮IIA 可通过抑制内质网应激抑制神经细胞凋亡,通过调节Toll 样受体4(toll⁃like receptor 4,TLR4)/髓系分化初级反应蛋白88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)依赖性信号通路,下调β位淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1(βamyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)表达,调控核因子κB 及其抑制蛋白的活性,减轻神经炎症反应,降低神经细胞炎性损伤;改善胆碱能功能对神经系统发挥保护作用;通过上调磷酸化 细胞外调节蛋白激酶(phosphorylation -extracellularregulated protein kinase,p⁃ERK)/细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)㊁蛋白激酶C 受体1(protein kinase C receptor 1,RACK1)和抑制自噬来减轻神经元损伤㊂丹参酸B 上调胰岛素样生长因子1(insulin⁃like growth factor 1,IGF⁃1)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路㊁调节信号转导及转录激活蛋白3(transcription activating protein 3,STAT3)/促血管生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路,抑制神经细胞凋亡,通过激活低密度脂蛋白受体相关蛋白6(low density lipoprotein receptor⁃associated protein 6,LRP6)/Wnt /β⁃连环蛋白(β⁃catenin)信号通路减轻神经元氧化应激损伤,还能通过抑制氧化应激反应促使突触蛋白恢复,以改善神经功能和认知功能㊂丹参素调节磷脂酰肌醇3激酶/Akt 信号通路,抑制神经元凋亡,发挥神经保护作用㊂隐丹参酮可通过抑制脑血管内皮细胞中的β淀粉样蛋白聚集发挥抗血管性痴呆的作用㊂现将近年来丹参活性成分用于血管性痴呆的研究报道进行综述总结,为丹参的临床运用及血管性痴呆的治疗提供理论依据㊂【关键词】 丹参; 丹参酮IIA; 丹参酸B; 丹参素; 隐丹参酮; 血管性痴呆; 作用机制【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2023.07.039Research progress on the mechanism of Salvia miltiorrhiza and its active components in the treatment of vascular dementiaYANG Yuanyuan ,NI Jinxia ,WANG Di ,YAN Yuzhu ,WANG Jinyu ,ZHAO Zijun ,YUAN Jingxue ,SONG YueDongzhimen Hospital of Beijing University of Chinese Medicine ,Beijing 100700,China Corresponding author :NI Jinxia ,E⁃mail :nijinxia118@【Abstract 】 The active ingredients of Salvia miltiorrhiza include tanshinone IIA,tanshinone B,tanshinol,cryptotanshinone and so on.Tanshinone IIA can inhibit neuronal apoptosis by inhibitingendoplasmic reticulum stress.Tanshinone IIA regulates the Toll⁃like receptor 4(TLR4)/myeloid1476 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.7 differentiation primary reactive protein88(MyD88)⁃dependent signaling pathway,down⁃regulates the expression ofβ⁃site amyloid precursor protein cleaving enzyme1(BACE1),and regulates the activitiesof NF⁃κB and IκB.It can reduce the neuroinflammatory response and reduce the inflammatory damage ofnerve cells.It improves cholinergic function and protects the nervous system.It alleviates neuronal injuryby up⁃regulating phospho⁃extracellular regulated protein kinase(p⁃ERK)/extracellular regulated proteinkinase(ERK),protein kinase C receptor1(RACK1)and inhibits autophagy.Salvianolic acid B up⁃regulates insulin⁃like growth factor1(IGF⁃1)/protein kinase B(Akt)signaling pathway,regulatessignal transducer and activator of transcription3(STAT3)/pro⁃angiogenic growth factor(VEGF)signaling pathway,and inhibits neuronal apoptosis.It alleviates neuronal oxidative stress injury by activating the low⁃density lipoprotein receptor⁃associated protein6(LRP6)/Wnt/β⁃catenin signaling pathway,and can also promotes the recovery of synaptic proteins by inhibiting oxidative stress response toimprove neurological function and cognitive function.Danshansu plays a neuroprotective role by regulatingPI3K/Akt signaling pathway and inhibiting neuronal apoptosis.Cryptotanshinone plays an anti⁃vasculardementia role by inhibiting the aggregation of Aβin cerebrovascular endothelial cells.This article reviewsand summarizes the research reports of active ingredients of Salvia miltiorrhiza used in VaD in recentyears,so as to provide theoretical basis for the clinical application of Salvia miltiorrhiza and the treatmentof VaD.【Key words】 Danshen; Tanshinone IIA; Danshen acid B; Danshensu; Cryptotanshinone; Vascular dementia; Mechanism of action 血管性痴呆是全球人类仅次于阿尔茨海默病的第二大常见痴呆类型,临床缺乏根治的治疗方法,寻找积极有效的抗血管性痴呆药物成为研究的热点[1]㊂丹参属于经典活血中药,‘神农本草经“将其列为上品,具有活血化瘀㊁凉血消痈㊁调经止痛的作用,临床广泛用于胸痹㊁癥瘕㊁月经不调㊁中风等症的治疗[2]㊂现代研究发现,丹参的主要活性成分包括水溶性丹酚酸类化合物(丹酚酸类化合物)及脂溶性醌类化合物(丹参酮类化合物),以及丹参素㊁隐丹参酮等成分,具有抗动脉硬化㊁抗炎㊁抗氧化应激㊁改善血液循环㊁降低组织缺血再灌注损伤等作用[3]㊂本文通过查阅近年来国内外相关文献,综述了丹参活性成分在血管性痴呆作用机制,以期为丹参的临床运用价值提供参考㊂1 丹参活性成分通过抑制神经元凋亡以保护神经功能 丹参活性成分可通过抑制内质网应激㊁上调胰岛素样生长因子⁃1(insulin⁃like growth factor⁃1,IGF⁃1)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路㊁调节磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinase, PI3K)/Akt信号通路㊁调节信号转导及转录激活蛋白3(transcription activating protein3,STAT3)/促血管生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)信号通路,抑制神经元凋亡,对神经功能发挥保护作用㊂1.1 丹参活性成分通过抑制内质网应激降低细胞凋亡内质网是蛋白质折叠和分泌的主要隔室,内质网蛋白发生未折叠或错误折叠可引起未折叠蛋白质反应(Unfolded protein reaction,UPR)的细胞应激反应,进而启动多种应激传感器蛋白,清除有毒的错误折叠蛋白质,维护正常的内质网功能,β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)能促进内质网应激标志物的表达,并增加内质网应激相关细胞凋亡途径,如C/Ebp同源蛋白(C/Ebp homologous protein,CHOP),c⁃Jun N端激酶(C⁃Jun N⁃terminal kinase, JNK)㊁半胱天冬酶⁃12等效应分子的表达[4]㊂Yang等[5]将丹参酮IIA(1~20μmol/L)Aβ1⁃42诱导的SH⁃SY5Y神经母细胞细胞损伤,结果显示,丹参酮IIA呈浓度依赖性提高细胞的活力,降低Aβ引起的细胞收缩㊁形状不规则㊁悬浮,有效降低细胞凋亡,减轻内质网应激反应,降低GRP78㊁UPR 蛋白表达,抑制CHOP和磷酸化JNK的表达,降低B 淋巴细胞瘤⁃2蛋白(B⁃cell lymphoma⁃2,Bcl⁃2)和Bcl⁃2相关X蛋白(Bcl⁃2⁃associated X,Bax)㊁4⁃苯基丁酸的表达,提高Bcl⁃2/Bax的比值,降低半胱天冬酶⁃9㊁裂解半胱天冬酶⁃3和半胱天冬酶⁃3/7的活性,其机制与丹参酮IIA抑制内质网应激引起的细胞凋亡㊂环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.714771.2 丹参活性成分通过调节PI3K/Akt信号通路降低细胞凋亡胰岛素样生长因子1(insulin⁃like growth factor 1,IGF⁃1)广泛表达于大脑皮层㊁小脑㊁下丘脑和海马等中枢神经系统的多肽物质,可通过控制神经营养反应和细胞信号传导,发挥神经保护作用,还能降低大脑中的糖原合酶激酶3和Aβ水平,改善认知障碍[6]㊂IGF⁃1和p⁃Akt的下调表达与血管性痴呆的认知缺陷有关㊂活化的Akt通过磷酸化其下游蛋白[如半胱天冬酶⁃9㊁Bcl⁃2相关死亡蛋白(Bcl⁃2 related death protein,Bad)㊁糖原合酶激酶3β(Glycogen synthase kinaseβ,GSK3β)],以促进细胞存活并抑制细胞凋亡[7]㊂Ma等[8]运用丹参酸B(20mg/kg)治疗双侧颈总动脉夹闭建立的血管性痴呆大鼠,研究发现,丹参酸B能显著降低大鼠的逃逸潜伏期,增加跨平台时间及数量,上调海马区IGF⁃1和p⁃Akt的表达,减轻神经元细胞形态学改变,减轻海马区及CAI区神经元凋亡,表明丹参酸B通过上调IGF⁃1/Akt信号途径减轻神经元凋亡有关㊂祁敏芳等[9]对双侧颈总动脉夹闭再灌注建立的血管性痴呆小鼠,运用丹参素(10㊁20㊁30mg/kg)进行预处理,结果发现,丹参素能呈剂量依赖性改善脑组织的细胞结构及功能,减轻病理性损伤,缩短小鼠逃避潜伏期,降低血清神经元特异性烯醇化酶㊁中枢神经特异蛋白的水平,上调脑组织中PI3K㊁Akt蛋白的表达,通过调节PI3K/Akt信号通路提高认知功能㊂1.3 丹参活性成分通过调节STAT3/VEGF信号通路降低细胞凋亡脑小血管疾病是种重要的脑血管疾病的类型,可引起老年认知障碍和功能丧失,与中风㊁痴呆和衰老等病理生理学改变密切相关[10]㊂VEGF存在于中枢神经系统内,不仅能刺激内皮细胞的增殖,维持神经细胞存活,还能抑制细胞凋亡[11]㊂STAT3蛋白主要存在于神经胶质细胞内,在缺血性损伤后呈高表达,能促使VEGF的表达,促进神经功能的恢复[12]㊂Wang等[13]将丹参酸B(80mg/kg)治疗脑小血管疾病大鼠的实验发现,丹参酸B能降低逃逸延长期,增加穿过前平台次数和路径长度,改善大鼠的认知缺陷,显著降低大鼠血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF⁃α)㊁白介素(interleukin,IL)⁃1β㊁IL⁃6和IL⁃18水平,显著抑制丙二醛(malondialde hyde,MDA)水平,升高谷胱甘肽㊁过氧化氢酶㊁超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平,抑制半胱天冬酶⁃3和Bax蛋白的表达,显著降低大鼠神经细胞的数量,上调p⁃STAT3㊁VEGF和VEGF⁃R2蛋白表达,表明,丹参酸B通过调节STAT3/VEGF信号通路以减轻神经细胞凋亡㊂Kong等[14]将丹参酮IIA(30mg/kg)用于四血管咬合建立的血管性痴呆大鼠的实验发现,丹参酮IIA 能显著降低逃逸潜伏期,增加靶向象限的时间和穿越平台的数量,增加CA1海马区域的Tunel阳性细胞数量,减弱了CA1海马区域中4⁃VO诱导的神经元凋亡,促进GSK3β磷酸化和抑制tau磷酸化,与间充质干细胞可发挥协同治疗作用,其机制为丹参酮IIA通过抑制神经元凋亡有关㊂2 丹参活性成分通过减轻神经炎症反应以减轻神经细胞损伤 丹参活性成分能通过下调β位淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1(βamyloid precursor protein cleaving enzyme1,BACE1)表达㊁调控核因子⁃κB(nuclear factor⁃κB,NF⁃κB)和NF⁃κB抑制蛋白(inhibitor of NF⁃κB,IκB)的活性,以减轻神经炎症反应,降低神经细胞损伤㊂2.1 丹参活性成分通过抑制调节Toll样受体4 (Toll⁃like receptor4,TLR4)/髓系分化初级反应蛋白88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)依赖性信号通路减轻神经炎症反应TLR4可在小胶质细胞㊁星形胶质细胞㊁巨噬细胞上表达,与神经炎症密切相关,TLR4与MyD88结合,能激活NF⁃κB和其他转录因子,诱导主要促炎细胞因子IL⁃1β,TNF⁃α和IL⁃6的释放,进一步加重神经组织的炎性损伤[15]㊂Jin等[16]将丹参酮IIA(1㊁5㊁10㊁20㊁40μmol/ L)预处理脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人胶质母细胞瘤U87细胞的炎性损伤,结果发现,1㊁5㊁10μmol/L丹参酮IIA能呈浓度依赖性提高了U87细胞活力,但20㊁40μmol/L的浓度反而抑制了U87细胞的活力,丹参酮IIA还能抑制胶质纤维酸性蛋白的高蛋白水平,阻止细胞内IL⁃1β㊁TNF⁃α和IL⁃6基因及蛋白的表达,阻止NF⁃κB的核易位,明显抑制了LPS诱导的细胞质中NF⁃κB p65的降低和细胞核中NF⁃κB p65的增加,抑制抑制了磷酸化⁃p38和磷酸化⁃JNK的水平,降低TLR4和下游蛋白1478 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.7MyD88和TNF受体关联因子6的表达,其机制与丹参酮IIA通过TLR4/MyD88依赖性信号通路调节NF⁃κB和丝裂原活化蛋白激酶激活以阻断神经炎症反应有关㊂2.2 丹参活性成分通过下调BACE1表达以减轻神经炎症血管性痴呆无论是由外部环境因素还是内部遗传因素引发,所有致病特征都伴随着炎症反应,早期中度炎症可以去除有害物质,对大脑有益,但随着年龄的增长,血脑屏障功能下降,进入大脑的有害异物水平增加,炎症会继续加重症状,由于有毒蛋白质的积累而形成恶性循环,随着损伤的逐渐增加,相关的信号通路被激活,进一步加重神经细胞的炎症反应,最终将导致神经元变性[17]㊂BACE1是Aβ生成途径的限速酶,参与多种神经退行性病变的发生与发展,在血管性痴呆患者的脑组织中BACE1水平明显高于正常人群[18]㊂Huang等[19]研究,采用丹参酮IIA(10mg/kg)治疗Aβ25⁃35诱导的神经炎症大鼠模型,结果发现,丹参酮IIA能显著改善大鼠的学习㊁记忆功能,作用优于间充质干细胞,还能减轻大鼠海马区神经元的病理损伤(神经元模糊不清㊁细胞边界不清㊁黑暗细胞核等),显著降低BACE1㊁淀粉样前体蛋白㊁蛋白酶体抑制剂1(proteasome inhibitor1,PS1)的mRNA的表达,降低海马体中IL⁃1㊁IL⁃4㊁IL⁃10和TNF⁃α的表达,下调BACE1㊁PS1和Aβ蛋白质的表达,其机制与丹参酮IIA下调BACE1表达以减轻神经炎症有关㊂2.3 丹参活性成分通过调控NF⁃κB和IκB的活性减轻神经损伤NF⁃κB是炎症反应的关键调节基因,在脑缺血或脑组织损伤是,可由多种信号通路激活,介导多种炎症因子的分泌,加重神经炎症损伤[20]㊂IκB能调节NF⁃κB的活性,IκB磷酸化后可与NF⁃κB的二聚体解离,NF⁃κB被释放后暴露P65亚基,发挥促炎活性[21]㊂周丽等[22]将丹参酮ⅡA(4㊁8mg/kg)用于缺血再灌注损伤大鼠的实验发现,丹参酮ⅡA能呈浓度依赖性减轻脑组织病理学改变,缩小细胞坏死区域面积,显著降低NF⁃κB和IκB的表达,表明丹参酮ⅡA可通过调控NF⁃κB和IκB的活性对脑组织发挥保护作用㊂3 丹参活性成分通过抗氧化作用发挥抗血管性痴呆作用 丹参活性成分能通过抑制氧化应激反应促使突触蛋白恢复,激活低密度脂蛋白受体相关蛋白6 (low density lipoprotein receptor⁃associated protein6, LRP6)/Wnt/β⁃catenin信号通路减轻神经元氧化应激损伤㊂3.1 丹参活性成分通过清除氧化自由基抑制氧化应激反应氧化应激损伤参与多种神经退行性病变进程,脑组织缺血及再灌注均可引起大量氧化自由基和MDA的产生,导致神经元迟发性损害㊂脑组织长期慢性缺血还能引起脑组织中谷氨酸㊁γ⁃氨基丁酸的含量显著降低,加重脑组织代谢障碍,导致认知功能损伤[23]㊂何治等[24]研究证实,将丹参酮ⅡA(2㊁4mg/ kg)用于夹闭颈总动脉建立的血管性痴呆大鼠的实验发现,丹参酮ⅡA能明显缩短逃避潜伏期,提高象限探索时间,改善认知功能和空间记忆能力,显著降低海马组织MDA的水平,提高SOD㊁谷胱甘肽过氧化物酶的产生,增加大鼠海马组织及大脑皮层中谷氨酸㊁γ⁃氨基丁酸的分泌,其机制与丹参酮ⅡA通过抗氧化作用发挥神经保护作用㊂李小楠等[25]运用丹酚酸B(20mg/kg)治疗双侧颈总动脉夹闭建立的血管性痴呆大鼠,结果发现,丹酚酸B能显著降低上台潜伏期和上台总路程,提高穿越站台次数,降低活性氧㊁乳酸脱氢酶㊁MDA的水平,改善海马区神经元形态变化,提高神经突触凹型㊁活性带长度㊁数量㊁弯曲,提高NR2A/B㊁PSD95㊁CREB等突出蛋白的表达,其机制与丹酚酸B抑制氧化应激反应促使突出蛋白恢复有关㊂3.2 丹参活性成分通过LRP6/Wnt/β⁃catenin信号通路抑制氧化应激反应Wnt/β⁃catenin信号通路是参与神经元的增殖㊁发育㊁分化㊁凋亡㊁氧化应激,该信号通路激活能显著减轻神经元氧化应激损伤,改善认知功能障碍,刺激LRP6能进一步促使Wnt/β⁃catenin信号通路激活,对神经组织发挥保护作用[26]㊂叶明灯等[27]将丹参酮B(2㊁4mg/kg)用于颈总动脉缩窄法建立的血管性痴呆小鼠的实验,结果表明,丹参酮B能提高小鼠目标象限停留时间和穿越平台次数,降低海马组织和皮层的MDA水平,提高环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.71479SOD㊁GSH⁃Px的水平,减轻海马区组织细胞皱缩㊁排列紊乱等病理改变,上调Wnt1㊁p⁃LRP6蛋白的表达,其机制与丹参酮B激活LRP6/Wnt/β⁃catenin信号通路抑制神经元氧化应激反应有关㊂4 丹参活性成分通过调节中枢胆碱能发挥抗血管性痴呆作用 神经退行性病变患者认知功能下降与中枢胆碱能神经纤维损伤目前相关,乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)和乙酸胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)共同维持胆碱能的动态平衡,增强ChAT和AChE的活性可对神经系统胆碱能发挥良好保护作用[28]㊂Kong等[14]研究结果还表明,丹参酮IIA (30mg/kg)能提高ChAT活性和ACh水平,降低AChE活性,有助于调节中枢胆碱能系统的活性㊂孔德燕[29]对血管阻断法建立的血管性痴呆大鼠模型,使用4㊁8mg/kg的丹参酮ⅡA治疗,结果显示,丹参酮ⅡA能缩短逃避潜伏期改善大鼠学习记忆功能,延长平台滞留时间改善空间记忆功能,显著减轻海马CAI区组织病理损伤,降低脑组织中一氧化氮㊁一氧化氮合酶的水平,提高AChE㊁ChAT的活性,机制与丹参酮ⅡA改善胆碱能功能对神经系统发挥保护作用有关㊂5 丹参活性成分通过阻止Aβ聚集发挥抗血管性痴呆作用 丹参活性成分能通过自噬及Aβ聚集,降低Aβ的神经毒性,发挥抗血管性痴呆的作用㊂5.1 丹参活性成分通过抑制自噬减轻神经元损伤自噬是指含有神经炎斑块和细胞内tau蛋白缠结的Aβ的积累,自噬功能障碍参与退行性神经病变的发生与发展,自噬激活可促使神经元中细胞内Aβ25⁃35蛋白聚集[30]㊂Zhu等[31]将丹参酮IIA(40㊁80mg/kg)用于Aβ25⁃35诱导的空间记忆障碍小鼠是实验发现,丹参酮IIA能减轻Aβ引起的小鼠逃逸潜伏期的记忆受损,显著增加平台交叉数量,提高海马区及DG区域的神经元数量,提高细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)蛋白的表达,上调海马体中蛋白激酶C受体1(protein kinase C receptor1,RACK1)㊁Beclin1的蛋白及基因的表达,表明,丹参酮IIA通过上调pERK/ERK㊁RACK1和抑制自噬来减轻神经元损伤,减轻空间记忆障碍㊂5.2 丹参活性成分通过抑制Aβ聚集减轻神经毒性作用Aβ1⁃42聚集可以对神经元和脑血管内皮细胞造成不可逆的细胞毒性,可引发炎症反应和氧化应激反应,进一步促使神经元损伤,促使细胞凋亡[32]㊂Ding等[33]将隐丹参酮(4㊁20㊁40mg/kg)用于Aβ1-42诱导的血管性痴呆大鼠的实验发现,隐丹参酮呈浓度依赖性抑制Aβ1-42聚集,以降低Aβ颤动,减轻Aβ疏水斑的形成,减轻Aβ结构及外观的改变,呈浓度依赖性抑制Aβ1-42淀粉样蛋白生长,抑制在bEnd.3细胞聚集并抑制TNF⁃α㊁IL⁃1β㊁IL⁃6等炎症介质的释放,降低半胱天冬酶⁃3的活性,表明,隐丹参酮可通过抑制脑血管内皮细胞中的Aβ聚集发挥抗血管性痴呆的作用㊂6 结语血管性痴呆给全人类健康造成极大影响,尽早预防及控制病情发展,对改善患者预后具有重要临床意义[34]㊂近年来中医药在血管性痴呆的防治中取得了良好的效果,丹参及其活性成分对血管性痴呆的防治效果已获得多篇报道证实,可为丹参的临床运用提供了循证支持㊂但也存在多项不足:(1)丹参的活性成分复杂,其单体防治血管性痴呆的作用机制存在一定的差异;(2)丹参活性成分的生物利用度㊁药代特征尚不明确;(3)关于丹参活性成分防治血管性痴呆的报道多为基础实验研究,对人体血管性痴呆的疗效尚未明确;(4)临床尚缺乏丹参用于血管性痴呆适应症的新药,对制药工艺也存在一定的考研;(5)丹参活性成分的药物安全性尚未可知㊂以上几点不足为今后的科研工作提供了参考㊂参考文献[1] KUANG H,ZHOU Z F,ZHU Y G,et al.Pharmacologicaltreatment of vascular dementia:a molecular mechanismperspective[J].Aging and disease,2021,12(1):308. 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新型非苯二氮艹卓类镇静催眠药扎来普隆
中闺新药与临床杂志（ＣｈｉｎＪＮｅｗＤｒｕｇｓＣｌｉａＲｅｍ），２０００年１１月，１９（６）：４９５４９８新型非苯二氯蕈类镇静催跟药扎栗警隆李年芳，顾牛范（卜海市精神卫生中心，上海２０００３０）ｅ关毽诃】礼来普隆；ＧＡＢＡ－苯并二氨革受体；催眠药和镇静药；药理学；药物动力学ｆ摘要】失眠是一秽常见鲍癌状，镇静催隈药是主要姆治疗手提。
新莺哉来普隆与苯＝氯革娄镇静催眠药不离。
它舆寄对受俸作用选择性强、起教快、不曼反应步等特点。
本文就扎采普隆的药理作用、临床应用等作一鲸述。
【中圉挣粪号】Ｒ９７１．３［文献标识秘】Ａ［文章编号】１００７—７６６９（２承Ｊ０）０６．０４９５。
０４失眠是一种常见的症状，火多数词查发现成年入中发生率在５％～４５％之间Ｈ’引。
在老年人中失眠更普遍。
正因如此，人们越来越重视其治疗问题。
镇静催眠药是治疗失眠蛙常用的药物，目前用得较多的必苯二蒸蕈豢药物，这类药物作用明显，假可能会ｇｌ起一定程度的药物婊竣及寤醉症状。
近几年，新型菲苯二氮摹类镇静催眠药得到较快发曩。
已用于幅床的新药有睦吼垣（ｚｏｌｐｉｄｅｍ）及佐匿壳隆（ｚｏｐｉｃｌｏｎｅ）。
由美国惠氐医药公司开发的孛Ｌ来普隆（ｚａｌｅｐｉｏｎ）为更新的一种镇静催眠药。
药理作用扎来普隆的化学名为Ｎ．｛３一［３－氰基吡唑（Ｉ，５一ａ）噻啶一７一ｙ１］苯１．Ｎ。
乙基己魁胺｛Ｎ。
［３－３一ｃｙａｎｏｐｙｒａｚｏｌｏｆ１，５－ａ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ一７＋啦】Ｎｃｔｈｙｔａｅｉｍａｍｉｄｅ｝。
结构式冕缀ｔ。
在中枢神经系统，存在２种苯二氮苹（Ｒｚ）受体ｉ亚整，即Ｂｚｌ，Ｂｚ２或者埘１，嗡受体。
Ｂｚ】受体主要、位于与镇静作用有关的大脑区域，Ｈ品受体主要集中于与认知、记忆、精神运动作用有关的区域１３Ｊ。
、大多数苯二氮革类药物对受体的作熙并无选择性，ｊ这榉蘸不可避免地；ｌ起耱秘神经系统不良反应。
掰。
型扮非苯二二氮革类镇静摧瞩药不具祷苯二氮蕈类药。
静的一些不丧蕊虚，这类药物造择髓作沼予丫＿氨基、丁馥一受俸复合俸（ＧＡＢｋ＂受体复台体）上的ＢＺ受鼙】扎来警盛的分手绪棒式体。
鞘内注射巴氯酚对神经病理性痛大鼠的镇痛作用及其对脊髓GABA转运体-1的影响
鞘 内注射 巴氯 酚对神 经病理性痛大 鼠的镇痛 作 用及其对脊髓 Ｇ Ｂ Ａ Ａ转运体 － 的影响 １
朱 珊珊 谭 珊珊 ， ， 曾因 明
（ ．徐 州市肿瘤 医院， １ 江苏大学 附属徐 Ｉ Ｆ ， 医院麻 醉科 ， 江苏 徐 州 ２ 徐 １ ． Ｉ医学院江 苏省麻醉 医学研 究所 ，江苏 徐 州 ＇ ２ １０ ； ２ ０ ５ ２ １０ ） ２ ０ ２
腰段 ， 免疫组织化 学 检测 脊髓 节段 Ｇ Ｔ１免 疫 阳性神 经元 Ａ一
（ ６ ； ｎ： ） 分别于 给药 前 、 给药后 ３ ｎ １ ２ ４ ８ １ ０ｍｉ、 、 、 、 、２和 ２ ４ｈ
取大 鼠脊髓腰 段 ， Ｗｅｔｒ ｌ 方法 测定 脊髓 节段 Ｇ Ｔ１ 用 ｓ ｎｂｏ ｅ ｔ Ａ一
ｄ ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ｎ １ ０ —１ ７ ． ０ ． ０ ０ ６ ｏ ：０ ３ ６ ／ ．ｓ ． ０ １ ９ ８ ２ １ １ ． ２ ｓ １
（ ｅｈｎｃｌ ｉ ｄａ ｌｈｅｈ ｌ， ｍ ｃａ ｉ ｔ ｒｗ ｒｓｏ ＭＷＴ 和热缩足反射潜伏 期 ａｗ ｈ ｔ ｄ ）
（ｈｒ ｌ ｉ ｄａ ｌ ａ ｎｙ Ｔ ） ｔｅｍａ ｗｔ ｒｗ ｔ ｃ ， ｗＬ 以及运 动 功能 。在 第 ２部 ｈ ｌｅ
酚或生理盐水 ， 分别 于给药前 、 给药后 １４ ８ｈ取 大 鼠脊髓 、 、
摘要 ： 目的
研究鞘 内注 射 Ｇ Ｂ 受体 激动 剂 巴氯酚 （ ａ ＡＡ ｂ— 建 立 坐骨神 经结 扎致 神 经
ｃｏ ｎ Ｂ ｃ 对 神 经 病 理 性 痛 大 鼠 的镇 痛 作 用 及 其 对 脊髓 ｌｆ ， ａ ） ｅ ＧＢ Ａ Ａ转运体一 １的影 响 。方 法
与Ｎ ｓ组和给药前 比较 ， 内注 射 ０ ３ Ｉ 鞘 ． ｘ ｇ巴氯 酚后 ０ ５～４ ． ｈ 大鼠脊髓节段的 Ｇ Ｔ１蛋 白含量均 明显 降低 （ ， Ａ一 Ｐ＜０ ０ ， ． １Ｐ
代谢组学的研究现状与展望_毛煜
代谢组学的研究现状与展望毛 煜,袁伯俊(第二军医大学新药评价中心,上海200433)[摘要] 代谢组学是20世纪90年代中期发展起来的对某一生物或细胞所有低相对分子质量代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科,由于其广泛的应用前景,目前已成为系统生物学的重要组成部分。
现简要介绍了代谢组学的含义、代谢组学研究的历史沿革、当前代谢组学研究中的分析技术、数据解析方法,综述了代谢组学在药物毒理学研究、疾病诊断、植物和中药等领域的应用情况,并对当前代谢组学研究中存在的问题及发展趋势进行探讨。
[关键词] 代谢组学;核磁共振质谱;质谱;模式识别;应用研究[中图分类号]Q952;R992 [文献标识码]A [文章编号]1003-3734(2007)13-1005-06Current status and prospect ofm etabono m icsMAO Yu,YUAN Bo jun(C enter of E valuation for D r ug Safet y,Second M ilitar y M edical Universit y,Shangha i200433,China)[A bstract] M etabono m ics is a ne w science and techno logy deve l o ped in m i d1990s.It refers to a ho listic analytical approach to all the l o w m o lecu larw e i g htm etabo lites in an or gan is m o r cells.Due to its pro m isi n g applicati o ns i n m any fields,m etabono m ics has been beco m i n g an i m portant co m ponent o f sys te m b i o l o gy.I n th is paper,the de fi n ition and i m p lication of m etabo l o m e and m etabolo m ics,the h istory and develop m en t o fm etabolite profiling i n to today sm etabono m ics,techn i q ues o f data acquisition and da ta analysi s i n m etabono m ics w ere briefly i n troduced.Current status for applicati o ns of m etabono m ics re search i n tox i c ology,diagnosis,p lants and Traditi o na l Ch i n ese M edic i n e w ere revie w ed.Fina ll y,the proble m s and future perspectives o fm etabo l o m ics research w ere also d iscussed.[Key w ords] m etabono m ics;NMR;M S;pattern recogn ition;app li c ation代谢组学(m etabono m ics)是应用现代分析方法对某一生物或细胞在一特定生理时期内所有低相对分子质量代谢产物同时进行定性和定量分析的一门新学科。
化合物G004在大鼠体内的绝对生物利用度研究
・699・
F ig 1 Chroma togram s of com pound G004 in ra t pla s ma 1: Glibenclam ide ( internal standard) ; 2: compound G004. A: blank p lasma; B: blank p lasma sp iked with compound G004 and Glibenclam ide; C: p lasma samp le after iv compound G004 2 m in in rats ( p lasma was diluted by blank rat p lasma for 10 tim es) ; D: p las ma samp le after ig compound G004 30 m in in rats
215 mg ・ kg
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动力学特征如何 ? 与现有的第 2、 3 代磺酰脲类药物 在药代动力学特性上有何不同还未见报道 。本文利 用 LC 2 M S联用技术 ,建立了简便 、 快速 、 高灵敏的体 内分析方法 ,初步研究了大鼠 ig和 iv化合物 G004 后的药代动力学过程并评价了其在大鼠体内的绝对 生物利用度 。 1 材料与方法 1. 1 仪器与试剂 LC 2 M S 2010 型液相色谱 - 质谱 联用系统 : 包括双高压泵 , 在线真空脱气机 , LC 2 MS solution version 2104 Sul2 H3 工作站 , CTO 2 10 Avp 柱 温箱 , SI L 10 ADvp 自动进样器 , Thermo IEC 高速离 心机 (M icrom ax RF ) , Thermo Savant SPD 1010 离心 浓缩装置 , M illi2 Q Gradient A10 超纯水器 (M illipore Inc. USA ) , Votex2 800 型漩涡混匀器 。化合物 G004 及其标准品由中国药科大学新药研究中心提供 (批 号 : 050616 ) ,内标格列苯脲由中国药品生物制品鉴 定所提供 (批号 : 135 2 9402 ) 。乙腈为色谱纯 , 德国 M erck 公司产品 。乙酸乙酯 (特级纯 ) , 江苏汉邦科 技有限公司产品 , 其余试剂均为分析纯 。 1. 2 药液的配制 静脉注射用药 : 取化合物 G004 适量 ,用少量无水乙醇超声溶解后再用生理盐水稀 - 1 释成所需浓度 , 按 3 m l ・ kg 剂量由尾静脉给药 。 灌胃给药 : 取化合物 G004 适量 ,用质量分数为 0105 的 CMC 2 Na将其配成相应浓度的混悬液 ,按 10 m l・ - 1 kg 的剂量灌胃给药 。
LC-MS测定大鼠血浆中五味子的3个木脂素成分及其药动学研究
醇 甲、 五味子 甲素 、 五昧子 乙素 的浓度 ， 对其血药浓度 一时 问
采用 Ｄ Ａ Ｓ １ ． ０软件拟合 ， 计算其药动 学参 数 。结果 大 鼠血 浆 样品 中， 五味子醇 甲 、 五 味子 甲素与 五味 子乙素 的线 性范 围分 别 为 ０ ． １ １ ４～３ ． ６ ６ ｍ ｇ・Ｌ （ ｒ＝０ ． ９ ９ ９ ４） 、 ０ ． ０ ２ ９ ９～
饮 片购 自安 徽 丰 原 铜 陵 中药 饮 片 有 限 公 司 （ 批 号
中国药理 学通报
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｂ ｕ ｌ ｌ ｅ ｔ ｉ ｎ ２ ０ １ ３ Ｓ ｅ ｐ ； ２ ９ （ ９ ） ： １ ３ １ ３～ ７
・ｌ ３ １ ３・
网络 出版 时 间 ： ２ ０ １ ３—８—１ ４ １ ８： １ １ 网络 出版 地 址 ： ｈ ｔ ｔ ｐ： ／ ／ ｗ ｗ ｗ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｎ ｅ ｔ ／ ｋ ｃ ｍｓ ／ ｄ ｅ ｔ ａ ｉ ｌ ／ ３ ４． １ ０ ８ ６ ． Ｒ． ２ ０ １ ３ ０ ８ １ ４ ． １ ８ １ １ ． ０ ３ １ ． ｈ ｔ ｍｌ
Ｓ Ｄ大 鼠６只 ， 按５ ｍ ｇ・ ｇ 。 。 剂量 ｉ ｇ给
精、 遗尿尿频、 久泻不止、 自汗 、 盗汗 、 津伤 口渴 、 短气 脉虚、 内热 消渴 、 心 悸 失 眠 等症 ¨ Ｊ 。文 献 报道 ， 五 味
子 的主要 有 效 成 分 有 木 脂 素 、 多 糖 和挥 发 油 等 Ｊ ， 且 木脂 素类 成 分与 其 抗肝 脏 损 伤 、 抗 肿 瘤 作用 明显 相 关 ’ ， 但对 五 味子 中木 脂 素类 成 分 的 药 动 学 研 究 多集 中在 五 味子 醇 甲、 五 味 子 甲素 与 五 味 子 乙素
体内药物分析实验
体内药物分析实验预览说明:预览图片所展示的格式为文档的源格式展示,下载源文件没有水印,内容可编辑和复制1.HPLC法测定大鼠血浆中的山奈酚1.1目的要求1.掌握血浆样品的前处理方法。
2.熟悉方法回收率和萃取回收率实验操作和评价。
3.熟悉大鼠眼眶采血技术；熟悉方法学研究中其他评价内容。
1.2 主要实验材料与仪器山奈酚（Kaempferol）及其对照品，黄芩素（baicalein），抗坏血酸，肝素，β-葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase）和硫酸酯酶（sulfatase），分析纯甲醇，冰醋酸、无水乙醚，色谱纯乙腈；高效液相色谱仪，氮吹装置，恒温水浴，漩涡混合器，13000r/min台式离心机，不同规格移液枪（5, 20, 50, 100, 200, 1000μL）和容量瓶（10，25mL），5~10mL 具塞离心管若干；雄性SD大鼠（180~220g）。
1.3 实验原理山奈酚吸收进入体内后，多以二相代谢物葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的形式存在。
由于山奈酚葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的对照品难以获得，故采用加入硫酸酯和葡醛酸苷水解酶处理样品，使代谢物水解后测定苷元山奈酚的浓度。
实验以黄芩素为内标，HPLC法测定血浆中山奈酚浓度，对建立的方法进行方法学评价。
1.4 实验方法1.色谱条件：C18柱（250mm×4.6mm，5μm），配保护柱，柱温40℃；乙腈-0.5%冰醋酸（35:65）为流动相，流速1mL/min；检测波长370nm；进样量20μL。
2.溶液配制：取山奈酚对照品约2.5mg，精密称定，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并定容。
精密吸取适量，分别用甲醇稀释成0.3、0.6、3、6、9、20和30μg/mL的标准系列溶液，置4℃冰箱保存。
另取黄芩素适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释至0.1mg/mL的溶液，精密吸取1.5mL置10mL量瓶中，用甲醇定容，得内标溶液，置4℃冰箱保存。
3.血浆样品处理：取大鼠血浆样品120μL，加入甲醇20μL、1%冰醋酸（含2mg/mL抗坏血酸）32μL、β-葡萄糖醛酸苷酶（20U/mL）和硫酸酯酶（6U/mL）的混合水溶液50μL，37℃水浴温育30min后，加入内标溶液50μL，然后加无水乙醚2mL，漩涡混合5min，于12000r/min离心5min；取上清液在氮气流下挥干，残留物用100μL 甲醇复溶，12000r/min离心5min，取上清液进样分析。
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号 20101212 ) 和 SIPI5652 ( 4，内标，纯度 99.64％，批号 20101106 ) 均由本院提供，结构式见图 1 ； 甲醇和乙酸乙酯 为色谱纯。 雄性 SD 大鼠 [ 300 ～ 390 g，上海西普尔 - 必凯实验动 物公司，合格证编号 SCXK( 沪 )2008-0016]。
性强，急性毒性和不良反应小，无致突变性 [1,2]。 1 分子结构中含有一手性碳原子，根据我国手 性新药的临床要求，有必要对 1 及其立体异构体的 药理毒理及体内过程进行比较研究。根据药动学研 究结果，再综合药效及不良反应方面的结果，确定 适当的候选新药，以进行临床前系统研究及临床申 报，开发抗精神分裂症Ⅰ类新药。本研究旨在建立 一种样品处理简单、灵敏度高的 LC-MS/MS 法，拆 分及测定大鼠体内的 1 立体异构体，并应用于血药 浓度研究。 1 仪器与试药
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中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2012, 43(5)
药品分析与质控
大鼠血浆中抗精神分裂症候选新药 SIPI6360 立体异构体的 LC-MS/MS 法测定
周一萌1，孙 杰2，石劲敏2，唐黎明2，林 梅2*，周 斌1*
(1. 中国医药工业研究总院上海医药工业研究院，上海 200040；2. 上海市食品药品检验所，上海 201203) 摘要 ： 建立了液相色谱 - 串联质谱法拆分并测定大鼠血浆中 SIPI6360 的立体异构体。采用 Daicel Chiralpak IA 手性柱，以 甲醇为流动相，采用 ESI 源正离子模式、多反应监测进行定量分析。结果显示，( R) -( +) -SIPI6360 与 ( S) -(-) -SIPI6360 立体异构体分离良好，在 0.5 ～ 100 ng/ml 浓度范围内线性关系良好。方法回收率为 94.0％～ 102.8％，批内和批间 RSD 小于 5.2％和 11.4％。 关键词：SIPI6360；精神分裂症；立体异构体；液相色谱-串联质谱；测定 中图分类号：R969；O657.7+2 文献标志码：A 文章编号：1001-8255(2012)05-0368-04
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中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2012, 43(5)
A： 空白血浆 +2，B ： 空白血浆 +3，C ： 大鼠灌胃 (8 mg/kg) 给予 1 1 h 后血样 2-2；3-3；4-4
图 2 LC-MS/MS 图谱 表 1 精密度与回收率试验结果 /％
LC-MS/MS 系统 ： API 4000 型质谱仪，包括 ESI 离子 源、Harvard 型微量恒速进样泵、Analyst 1.5 分析软件 ( AB SCIEX 公司 ) ； 1200 型高效液相色谱仪，包括 G1322A 型
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+
碰撞电压 46 V。 2.4 专属性试验 取空白血浆，按“2.2”项下方法 ( 内标工作 液以甲醇 10 l 代替 ) 处理后进样测定。另取添加 2(10 ng/ml) 或 3(10 ng/ml) 的血浆样品以及大鼠灌 胃 1 1 h 后的血浆样品，按“2.2”项下方法处理后 进样测定，色谱图见图 2。可见，在上述条件下， 血浆中内源性物质不干扰测定。 2.5 标准曲线 分别取 2、3 对照品贮备液适量，用甲醇稀释 成 2、3 浓度为 5、10、20、50、100、200、500 和 1 000 ng/ml 的对照品溶液。取空白血浆 100 l，加 入上述 2、3 对照品溶液各 10 l，制得含 2、3 浓度 为 0.5、1、2、5、10、20、50 和 100 ng/ml 的标准 血样。按“2.2”项下方法处理后进样测定，以样品 浓度 c 为横坐标，样品与内标峰面积之比 R 为纵坐 标，采用加权最小二乘法计算标准曲线，权重因子 R=4.13×10-2c+7.54×10-3， 为 1/c2，得回归方程。2 ： r=0.999 6 ； 3： R=6.20×10-2c-2.65×10-3，r=0.999 6。 结果表明，2 和 3 在 0.5 ～ 100 ng/ml 浓度范围内线 性关系良好。最低定量限为 0.5 ng/ml。 2.6 精密度与回收率试验 按“2.5”项下方法制备高、中、低浓度的质 控血浆样品 ( 2、3 浓度分别为 1、10 和 50 ng/ml )， 各 5 份，按“2.2”项下方法处理后进样测定，分别 测定 3 批，计算得批内 (n=5)、批间 (n=15)RSD 及 方法回收率 (n=5)，结果见表 1。
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在线脱气仪、G1312 型泵、G1367D 型自动进样器、G1330B 型自动进样器控温盘和 G1316B 型柱温箱 ( 美国 Agilent 公 司 )。 1 消旋体 ( 纯度 99.8％， 批号 20101201)、 (R)-(+)-1(2， ee 99 ％，批号 20101210 ) 和 ( S ) - ( - ) - 1 ( 3，ee 99 ％，批
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图 1 结构式
2 方法与结果 2.1 溶液配制 2、3 对照品贮备液 ： 分别精密称取 2、3 10 mg， 各置 100 ml 量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0.1 mg/ml 的 2、3 对照品贮备液。 内标溶液 ： 精密称取 4 10 mg，置 100 ml 量瓶 中，用甲醇溶解并定容，得 0.1 mg/ml 的内标贮备 液。精密吸取 1 ml， 置 500 ml 量瓶中， 用甲醇定容， 得浓度为 200 ng/ml 的内标工作液。 2.2 血样处理 精密吸取血样 100 l，置 1.5 ml 塑料离心管中。 精密加入内标工作液 10 l，涡旋混匀后加乙酸乙 酯 500 l，振荡提取 3 min，离心 (7 267×g)10 min， 精密量取上清液 400 l 置另一干净的 1.5 ml 塑料 离心管中，浓缩挥干，加甲醇 200 l 复溶，涡旋 1 min，离心 (65 403×g)10 min，取上清液进样分析。 2.3 色谱及质谱条件 色谱柱 Daicel Chiralpak IA 手性柱 ( 4.6 mm× 250 mm，5 m ) ； 保护柱 Daicel Chiralpak IA 柱 ( 4.0 mm×10 mm，5 m ) ；流 动 相 甲 醇 ；流 速 1.4 ml/min ； 柱温 40 ℃ ； 进样量 20 l。 离子源 电喷雾离子源，正离子扫描 ；检测方 式 多离子反应监测 ( MRM ) ；监测离子 [ M+H ]
2
2.7 稳定性试验 同上配制高、中、低浓度质控血浆样品，分 别于 -40 ℃冻融 3 次和室温放置 6 h 后按“2.2”项 下方法处理后测定，及处理后于 4 ℃ ( 自动进样器 样品室温度 ) 放置 24 h 再测定，考察样品稳定性。 结果显示，在上述条件下，2、3 含量的准确度为 85％～ 113％，RSD ( n =3 ) 均小于 10％，表明血样 在上述条件下基本稳定。 2.8 给药方法与样品采集 取雄性 SD 大鼠 6 只，试验前禁食 20 h，不禁
m/z 438.0→261.4(1)，m/z 424.0→261.4(4) ； 喷雾气 40 L/min，气帘气 35 L/min，碰撞气 5 L/min( 上述 气体均为高纯氮气 ) ； 离子源电压 5.5 kV ； 离子源 温度 650 ℃ ； 扫描时间 500 ms ； 解簇电压 107 V ；
组分 RSD 批内 4.5 2.1 4.0 4.7 3 4.0 5.2 批间 6.9 11.4 8.4 9.3 2.8 7.6 方法回收率 95.5±2.4 102.8±3.0 99.8±5.5 94.0±5.3 97.5±1.8 98.9±1.3
水。灌胃给予 1(0.5％羧甲纤维素钠溶液 )，剂量为 8 mg/kg。分别于给药前和给药后 0.25、 0.5、 0.75、 1、 2、4、6、8、12 和 24 h 从大鼠眼眶后静脉丛取血 0.5 ml，置肝素抗凝试管中，离心 (1 163×g)10 min， 取上层血浆，- 40 ℃保存。按“2.2”项下方法处理 后进样测定。由标准曲线分别计算大鼠灌胃 1 后 2、 3 的血药浓度，药 - 时曲线见图 3，主要药动学参 数见表 2。
ABSTRACT: A LC-MS/MS method was established for the determination of the stereoisomers of SIPI6360 in rat plasma. A Daicel Chiralpak IA chiral column was used, with methanol as the mobile phase. A tandem mass spectrometric detection was conducted using multiple reaction monitoring (MRM) under positive ionization mode with an electrospray ionization (ESI) interface. The (R)-(+)-form and (S)-(-)-form were well separated, and the calibration curves were linear in the concentration range of 0.5 - 100 ng/ml. The method recoveries were 94.0％ - 102.8％, with intra- and interbatch RSDs below 5.2％ and 11.4％. Key Words: SIPI6360; schizophrenosis; stereoisomer; LC-MS/MS; determination