细胞培养基培训资料--比较全面,可以有个初步了解
《细胞培养培训》课件
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。
中国药科大学新药筛选中心细胞培养基础知识培训材料
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细胞培养基本介绍• 血清 Nhomakorabea 培养基 • 其他产品
体外培养细胞的分型
• 贴壁细胞：细胞贴附在 支持物表面生长，只 有依赖贴附才能生长 的细胞叫做贴附型细 胞 • 悬浮细胞：培养时不 贴附于底物而成悬浮 状态生长，主要来自 血，脾或骨髓
• 如想去除这些絮状沉淀物，可将血清分装 到无菌离心管中，以400g离心，上清液即 可直接加入到培养液内 • 不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物， 因为这可能阻塞滤膜
血清选择？
a. 尽量使用同批次的血清；如果需要更 换血清批次，则需事先验证3代以上，因此 建议客户单次购买大量血清； b.原代细胞或ES细胞，提供澳洲或新西 兰的FBS不同批次进行试用，选择使用效果 好的批次；
体外培养细胞
• 原代培养：直接从体内取出的细胞进行第 一次培养，其优点是组织细胞刚脱离机体， 生物性状尚未发生较大变化，在一定程度 上能够反应体内的状态；缺点是细胞生长 较为缓慢，生长条件要求高 • 传代培养：将细胞从一个培养瓶按照一定 比例转移到另外的培养瓶即为传代培养， 其目的是将高密度的细胞进行稀释扩大培 养，以避免营养枯竭，影响细胞生长
如何避免血清出现严重沉淀？
血清有轻微絮状物，但产品比较澄清或略显浑浊 是正常现象，但下属操作会致使血清出现严重沉 淀，应尽量避免 a.储存不当：反复冻融；长期储存在2-8℃；在 室温下放置时间过长 b.不正确地解冻操作，融化时没有混匀。 c.热灭活血清 d.37℃培养血清 e.γ射线辐照
血清常见问题
常见问题处理
1. 如果细胞培养基偶然被冻，应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。 如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃 这些培养基。 2. 当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使 用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条 件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。 3.大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白 的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。 4. 在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶 在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不 稳定。 5. 产品说明在超过指定的贮存期的一段时间内，产品仍然在可接受的范 围内，但是由于在超过指定的效期后，产品的性能和稳定性没有检测， 我们不推荐使用过了效期的产品。
培训学习资料-细胞培养_2022年学习材料
培养基-●-培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培-养基和合成培养基。-·天然培养基：天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）-优点：营养成分丰富，培养效果好-缺点：-来源受限 -成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。-易发生支原体污染
合成培养基-合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数-量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培-养 ，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等。-合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化-合物 无机盐和其它一些辅助物质-优点：标准化生产，组分和含量相对固定。-成本低-缺点：缺少某些成分，不能完全满足 外细胞生-长需要。
超净台-■超净工作台的工作-原理是利用鼓风机-驱动空气遁过高效-滤器除去空气中的-尘埃颗粒，使空气-得到净 。净化空-气徐徐通过工作台-面，使工作台内构-成无菌环境。
滤器-500ml41000mf4-2000ml
如液1-营养液-不锈钠滤器-·022強米微孔德膜-充空气
CO2培养箱-■CO2培养箱设定的条件为37℃，5%CO,-■使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题-①用 旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖-微松，以保证通气。-②保持培养箱内空气干净。定期消毒-u90℃，14h。-■③ 内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中-以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。
细胞培养基本技术细胞培养PPT
细胞培养的基本概念-●传代：-细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到-新的培养器皿中。-原代培养-取 体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在-传代之前称为原代培养。
●-细胞培养：使用单个细胞悬液-●组织培养：使用组织块O.51立方毫米或-薄片（厚0.2毫米）-器官培养： 用器官原基或器官的一部分或整-个器宫
实验室细胞培养基本知识专题培训课件可编辑全文
PBS的制备
• 烧杯中加入1L灭菌超纯水； • 放在磁力搅拌器上，设定转速200r/min； • 打开PBS干粉（1L装）加入烧杯中； • 搅拌至完全溶解； • PH计检测PH为7.4，变化＜0.1； • 分装至灭菌的储液瓶中，盖子只轻旋一圈，放入灭菌锅中
湿热灭菌； • 自然冷却后盖紧，4℃或室温保存。
无菌操作技术
无菌操作技术
• 目的：在干净的培养物和含有微生物的外环境之间建立一 个屏障，防止微生物的污染，细菌、支原体、酵母菌、真 菌孢子等。
• 要求：与培养物直接接触的所有材料必须无菌（物品无 菌），培养物和它的非灭菌环境之间不能有直接接触（环 境无菌）。
• 要素：无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养 基以及无菌操作。
• 试剂瓶和培养瓶的操作：在洁净台内可以使试剂瓶口敞开 直立，但不能让手或其他物品在开口的容器或无菌吸管的
小结
• 保持一个干净有调理的工作空间，并仅在需要的时候才在 其中工作。
• 尽可能的预先准备好再开始操作，使培养物在培养箱外停 留最短的时间，而且要做到各种操作快速、简便和顺利。
• 保持能看到操作面上的每样东西，时时警惕无菌面和非无 菌面的偶然接触。
• 移液：使用无菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液体；每支 吸管只能使用一次，以免交叉污染。使用时方可打开无菌吸管的包装。 吸管应始终位于工作区域内。
• 一般移液操作用移液管和电动移液器，微量移液操作（1ml及以下） 用移液器，一次为多个器皿分装液体用注射器，只有灭菌的部分（移 液管、枪头、 注射器）可以伸进无菌容器内（储液瓶、细胞培养瓶），
果）、经济、规模和机械化；
细胞培养的应用
• 细胞培养是细胞和分子生物学中最重要的一项技术，可为细胞正常生 理和生化 (例如：代谢研究、衰老研究)、药物和毒性化合物对细胞的 作用以及致突变和致癌研究提供上佳的模型系统。细胞培养还可用于 药物筛选和开发以及生物化合物 (例如：疫苗、治疗性蛋白) 的大规模 生产。
细胞培养基础知识
计数板上面，使之微微移向一侧，露出计数板台面少许； [2] 用移液枪在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，加样时不要溢出盖玻片也不能溢
入两侧的玻璃槽内，如果产生上述情况需对计数板冲洗和拭干后重新加样，加样量也 不要过少或带气泡； [3] 在显微镜下，用 10×物镜观察，可见细胞均匀分散计数板各处。计算四角大方格内 的细胞数，压中线者只计算左线和上线者，右线和下线不计算在内(即仅计算压两个 边的细胞)，成团细胞按单个细胞计算。按照下面公式计算细胞密度： (细胞悬液的细胞数)/ml＝(四个大格子细胞数/4) ×稀释倍数×104 【注意事项】 [1] 消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单细胞悬液。否则会影响细胞计数结果。 [2] 取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时，尤其要注意这一点。否则， 前后计数结果会有很大的误差。 [3] 镜下计数时，遇见 2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如细胞团 10%以 上，说明消化不充分；或细胞数少于 2 个/mm2 或多于 50 个/mm2 时，说明稀释不当， 需重新制备细胞悬液、计数。 5 培养细胞的运输 装运细胞的方法有两种，一种为冷冻储存运输，即利用特殊容器内盛液氮或干冰冻存， 保存效果较好，但较麻烦，且不宜长时间运输，多需空运。另一种简单的方法为充液法，步 骤如下： [1] 选择生长状态良好的细胞，可直接根据路程时间来选择接种细胞数量，一般以长满
【概述】
细胞计数法是细胞培养研究中的一项基本技术，它是了解培养细胞生长状态，测定培养 基、血清、药物等物质生物学作用的重要手段。常用的细胞技术有血球计数板计数法和电子 细胞计数仪计数法。 【用品】
血球计数板、吸管、胰酶、培养液、显微镜
【步骤】
[1] 准备计数板：用无水乙醇或 95%乙醇清洁计数板和盖玻片，待干燥后，把盖玻片覆在
实验室细胞培养基本知识
引言：实验室细胞培养是一种重要的生命科学研究技术，通过体外培养细胞，可以模拟人体内的生理和病理状态，加深对细胞生物学和疾病机制的理解。
本文将介绍实验室细胞培养的基本知识，包括培养基的组成、细胞培养的种类、培养条件的调节等方面。
概述：实验室细胞培养是指在人工设备中，提供合适的环境条件，以维持细胞的生长和增殖。
细胞在培养基中不仅可以扩增，还可以进行各种实验室研究，如细胞凋亡、基因表达、药物筛选等。
下面将分五个大点详细介绍实验室细胞培养的基本知识。
一、培养基的组成：1.细胞培养基是由培养基基础组分和辅助组分构成的。
基础组分包括无机盐溶液、有机物、能量源、氨基酸等，辅助组分包括生长因子、激素、抗生素等。
2.常用的培养基有DMEM、MEM、RPMI1640等，其组成根据细胞类型和研究目的可有所差异。
3.细胞培养基的pH值、温度和储存条件对细胞生长至关重要，应根据细胞类型调整。
4.无菌技术在培养基制备过程中非常重要，避免细菌和真菌污染对细胞的影响。
二、细胞培养的种类：1.原代细胞培养是从组织中分离得到的初代细胞，细胞数和传代次数有限。
2.细胞株是从原代细胞培养中筛选得到的具有增殖潜能的细胞系列。
3.基于细胞的特定表型、遗传改造或药物处理的细胞系，可用于特定研究领域，如癌症研究、药物筛选等。
4.三维细胞培养技术可以模拟人体组织的三维结构和功能，提供更接近体内的环境。
三、培养条件的调节：1.细胞密度是影响细胞生长和增殖的重要因素，应根据细胞类型和实验需求进行优化。
2.培养温度应符合细胞体内温度，通常在37摄氏度下进行。
3.CO2浓度和通气情况对细胞生长至关重要，应根据细胞类型和培养基特性调节。
4.培养时间和细胞传代次数应根据培养基的要求和实验目的进行控制。
四、细胞检测与鉴定：1.细胞的染色方法是常用的细胞检测方法之一，包括细胞核染色、细胞分子染色等。
2.细胞增殖和凋亡的检测方法有CFSE染色、MTT法、流式细胞术等。
细胞培养基本知识分享
细胞培养基本知识分享选择合适的细胞系· 种属非人类和非灵长类动物细胞系通常生物安全性限制较少，但是需要根据要开展的实验来最终决定是否要使用种属特异性培养物。
· 功能特性实验的目的是什么？例如肝脏和肾脏来源的细胞系可能更适合做毒性测试，大脑、脊髓组织来源的细胞多用于神经系统相关研究。
· 有限细胞系还是连续细胞系虽然选择有限细胞系会使您在表达正常功能时有更多的选择，但是连续细胞系往往更容易扩增和维持。
· 正常还是转化细胞转化细胞系通常生长速度较快，接种效率较高，且可连续培养，培养基中需要的血清较少，但是由于遗传转化，其表型已经发生了永久性变化。
· 生长条件和特性对细胞生长速度、饱和密度、克隆形成率以及悬浮生长能力有何要求？例如：要大量表达重组蛋白，可能应选择生长迅速且能悬浮生长的细胞系。
· 其他标准如果使用的是有限细胞系，细胞储备充足吗？细胞系的性质明确吗？需要自己进行验证吗？如果使用的是正常细胞系，有等效的正常细胞系可以作为对照吗？细胞系稳定吗？如果不稳定，那么这种细胞容易扩增以便为实验提供充足的冻存储备吗？获取细胞系可以通过原代细胞建立自己的培养系，或者也可选择从商业供应商或者非盈利性供应单位(即细胞库) 处购买已经建立的细胞系。
声誉良好的供应单位可提供优质的细胞系，而且会认真地对细胞系进行检测，以确保其完好性，并且未被污染。
我们不建议从其他实验室借用细胞，因为这会带来很高的污染风险。
无论来源如何，使用细胞之前都应确保所有新到细胞系已经过支原体污染检测。
培养环境细胞培养的一大优势在于能够控制细胞生长的物理化学环境(即：温度、pH 值、渗透压、O2 和 CO2 浓度)和生理环境(即：激素和营养素浓度)。
除温度外，培养环境均由生长培养基控制。
虽然细胞培养的生理环境不如其物理化学环境明确，但是通过对血清成分更好地了解、确定细胞增殖所需的生长因子以及更好地了解培养过程中的细胞微环境(即：细胞间相互作用、气体扩散、细胞-基质相互作用)，现在可以采用无血清培养基进行一些细胞系的培养。
第1章细胞培养的基本知识-10页word资料
第一篇细胞工程的基本技术——细胞培养技术第1章细胞培养的基本知识第一节基本概念和名词细胞培养(cell culture)技术即是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术，是广泛应用于医学研究领域的重要技术。
它起源于1885年，德国人Roux用温生理盐水在体外培养鸡胚髓板，并使之存活了数月之久，第一次获得组织块人工培养成功。
1906年，Beebe和Ewing用盖玻片悬滴培养法，以动物血清做培养基，培养狗淋巴细胞存活了72小时，并曾见到细胞生长现象。
1907年，Harrison用淋巴液做悬滴培养，使来自两栖类胚胎神经组织的神经细胞存活了若干天，还观察到神经管细胞分化成了神经元，而且向培养液中伸出了轴突，与脑、脊神经细胞在体内分化的情况很类似。
以后Carrel进行了改进，并十分注意培养中的无菌操作技术。
他用血浆包埋组织块外加胎汁的培养法，通过采用更新培养基和分离组织的传代措施，完善了经典的悬滴培养法。
1923年，他又设计了用骨化瓶培养法，以扩大组织的生存空间。
50年代，组织培养技术有了更快的发展，从改进培养操作技术、培养器皿和培养基方面进行了改进。
各种培养瓶、培养基孕育而生。
1957年Dulbecco实验室采用胰蛋白酶消化处理，使成块的组织分散成单个细胞，进行悬液培养，从而开创了细胞培养技术。
用单层细胞培养法可以建立很多细胞系(cell line)，通过单细胞分离培养法又可建立克隆细胞株(clone或cell strain)。
细胞系(cell line)系原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。
细胞株(cell strain)系通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定性质或标志的细胞群。
细胞株的这种特定性或标志必须在整个培养期间始终存在。
克隆(clone)系指由同一个祖先细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。
医学研究中泛指的体外培养包括细胞培养、组织培养和器官培养。
细胞培养技术复习资料(全)
名词解释：细胞组织培养：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。
二倍体细胞株：具有二倍体染色体数的细胞株。
细胞组织培养选材：根据实验目的、观察指标确定所选组织器官。
培养选材一般来自胚胎组织的培养物；比成体组织更易生存和生长。
这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎组织干细胞，它们具有更高的自我更新和多能分化能力。
原代培养：一般指从组织中分离在体外生长至传代之前的细胞培养。
这种培养通常是异质性，生长缓慢，但比较能代表原组织的类型并表达原组织特性。
缺点是在培养过程中会失去许多原组织的细胞。
传代细胞：原代细胞生长物或细胞系生长到一定阶段，分散成单个细胞，按一定比例接种于新的培养容器内称之传代。
传代细胞称之细胞系，可分为两类：有限细胞系和连续细胞系。
传代形成的具有各自生物特性或标志的细胞系称之为细胞株。
世代：指细胞经过一次分裂后完成后至下次分裂的过程。
细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。
细胞纯化：是指从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。
通过细胞分离和纯化得到细胞株或系。
传代：也称为再培养，把一瓶培养细胞全部或分成几份再培养的过程。
组织工程：组织工程是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
Density inhibition:密度抑制，由于细胞密度过大，培养液营养耗尽、代谢产物过多和生存空间消失所引起细胞增殖的抑制现象。
消化液：在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二钠（EDTA），其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶原酶。
在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中分离（散）出单个的细胞；在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长表面并离散成单个细胞。
《细胞培养培训》课件
为了获得更多的细胞，可以在传代后进行扩增培 养，使细胞数量增加。
实验结束后的处理
清洗与整理
实验结束后，对实验室进行清洗和整理，确保实验室的清洁和整 洁。
数据整理与分析
对实验数据进行整理和分析，得出结论并撰写实验报告。
废弃物处理
按照实验室规定对废弃物进行处理，确保实验室的安全和环保。
05
细胞培养的注意事项与安 全防护
洁度和无菌条件等。
细胞接种与培养
细胞计数与稀释
根据实验需求，对细胞进行计数 并稀释到适当的密度。
接种细胞
将稀释后的细胞接种到细胞培养皿 或培养瓶中，确保细胞贴壁良好。
培养条件
将接种后的细胞放置在适宜的温度 、湿度、CO2浓度和培养基中，并 定期进行观察和记录。
细胞观察与检测
形态观察
定期观察细胞的形态变化，包括 生长状态、贴壁情况、分裂情况
总结词
通过分裂和增殖来维持的细胞培养。
详细描述
传代细胞培养是通过细胞的分裂和增殖来维持的，这些细胞在培养过程中会逐渐 适应环境并失去其原始特性。传代细胞培养广泛应用于实验室研究，用于生产疫 苗、抗体和药物筛选等。
干细胞培养
总结词
用于培养干细胞的细胞培养技术。
详细描述
干细胞培养是指用于培养干细胞的细胞培养技术，干细胞具有自我更新和多向分化的能力，可以分化 成不同类型的细胞。干细胞培养在再生医学、药物筛选和疾病模型建立等方面具有广泛的应用前景。
VS
详细描述
癌细胞传代培养是研究癌细胞生长、增殖 、侵袭和转移等特性的重要手段，通过传 代培养可以获得大量癌细胞用于药物筛选 、基因组学和蛋白质组学等方面的研究。
案例三：癌细胞的传代培养与观察
细胞培养基本知识ppt-研究生实验技能培训讲座--细胞培
配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 所用器皿应严格消毒。 配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
血清的使用
血清质量好坏是实验成败的关键 常用血清
胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血 清、马血清等，胎牛血清是品质最高的。 优质血清的标准 透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原 体、病毒污染。 血清的灭活（消除补体活性） 56℃ ，30 分钟。 血清的消毒 过滤除菌。
1.细胞种类：人脐静脉内皮细胞； 2.培养的天数：4d；原代培养； 3.放大倍速：倒置显微镜 X20； 4.培养基种类：DMEM+15％胎牛
血清；
5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭 形，扁平形或多角形，贴壁生长。
1.细胞种类：人骨髓间充质干细胞原代； 2.培养天数：7天； 3.放大倍数：200倍，倒置显微镜； 4.培养基种类：DF12+10％FBS； 5.细胞状态与特征简述：使用percoll密度 梯度离心法分离人骨髓细胞。首次换液48h， 这是7天后的骨髓间充质干细胞扩增情况。
HepG2细胞
细胞种类：人肝肿瘤细胞； 培养的天数：传代培养2天； 细胞状态与特征简述：呈多角型、不规则 贴壁生长，成团聚集。
传代注意事项
接种数量为5×104～8×105个/ml 传代密度太低，细胞容易死亡，表现出细胞在达到 增长前有较长的滞留期。
培养液由于pH下降而呈现黄色，表明细胞已经达到 最大密度需要换液或进行传代培养。
2、上皮型细胞
名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同 来源：来源于外胚层、内胚层细胞, 如：
皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆
细胞培养基培训资料--比较全面,可以有个初步了解
企业优势
标准化的生产管理 我们对每批产品都进行严格的质量控制，做到 每批产品都有可追溯性. 采用先进的生产设备和标准化的操作程序，保 证产品的质量的稳定性，降低产品的批间差. 定期超纯水及细胞培养注射用水水质的监测 严格的在线管道清洗（CIP)及消毒程序(SIP) 标准化的配液，过滤，分装体系
专用培养基 针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、 内皮细胞、肝细胞、神经元细胞、胚胎 干细胞、CHO细胞、293细胞、各类昆 虫细胞、杂交瘤细胞、羊水细胞等的无 血清培养基
（SFM, PFM 和CDM 培养基）的区别
Serum-Free Medium （SFM）
成分更加清晰 消除因血清批次不同而带来的不确定性– 保持实验的连续性 易于纯化和下游处理 优化特殊细胞及其功能的培养条件 越来越多的无血清培养基用非动物/人来源的原料制造 有利于精确阐述细胞功能 提高生产力 更好控制生理反应 专门针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、内皮细胞、肝细胞、神经元 细胞、胚胎干细胞、CHO细胞、293细胞、各类昆虫细胞、杂交瘤细胞、 羊水细胞的无血清培养基 无需加入血清 可能包含降解的蛋白或者蛋白块 蛋白含量保持在易于纯化的最小状态 优化特殊细胞培养条件
细胞学简介
什么是细胞？ 能进行独立繁殖的有膜包围的生物体的 基本结构和功能单位。一般由质膜、细 胞质和核（或拟核）构成，是生命活动 的基本单位。
维持细胞体外生存的必要条件
严格的无菌无毒环境 体外培养的细胞缺乏对微生物和有毒物质的防 御能力 适合的营养条件 高质量的细胞培养基和血清是细胞培养成功的 基本条件 适宜的生存环境 恒定适宜的温度、pH值、气相环境（二氧化碳 的浓度）
细胞培养基的基本知识
细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s 改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。
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YOCON公司成立于2006年，经过5年时 间的发展，在微生物分离、培养、鉴定、 保存相关产品中取得了卓越的成就，近 年大力发展微生物采样等相关产品，尤 其是病毒采样液等产品受到了各界用户 的好评，在努力完善现有产品的同时， 我们又致力于新产品的开发，尤其是病 毒采样产品所衍生出的更多细胞培养相 关的产品，以满足广大客户的需要。
培养基的保存与运输
干粉：24个月，2～8℃避光保存，可在 室温情况下运输. 液体：12个月，所有的培养基都必须在 2～8℃， 避光保存，不能冷冻.
血清产品简介
血清－血清的作用
提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有 或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。（如 氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核算衍生物、 胰岛素、肾上腺皮质激素、类固醇激素、纤维细胞生 长因子、表皮细胞生长因子、血小板生长因子等） 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激 素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合， 起到解毒作用。 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 起酸碱度缓冲液作用。 提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶 失活，保护细胞不受伤害。
专用培养基 针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、 内皮细胞、肝细胞、神经元细胞、胚胎 干细胞、CHO细胞、293细胞、各类昆 虫细胞、杂交瘤细胞、羊水细胞等的无 血清培养基
（SFM, PFM 和CDM 培养基）的区别
Serum-Free Medium （SFM）
成分更加清晰 消除因血清批次不同而带来的不确定性– 保持实验的连续性 易于纯化和下游处理 优化特殊细胞及其功能的培养条件 越来越多的无血清培养基用非动物/人来源的原料制造 有利于精确阐述细胞功能 提高生产力 更好控制生理反应 专门针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、内皮细胞、肝细胞、神经元 细胞、胚胎干细胞、CHO细胞、293细胞、各类昆虫细胞、杂交瘤细胞、 羊水细胞的无血清培养基 无需加入血清 可能包含降解的蛋白或者蛋白块 蛋白含量保持在易于纯化的最小状态 优化特殊细胞培养条件
细胞培养相关设备
CO2培养箱 细菌霉菌培养箱 烘箱 水浴锅 离心机 液氮罐 倒置显微镜 酶标仪 渗透压仪 超净台 生物安全柜 过滤设备 高压灭菌设备 磁力搅拌器 酸缸 精密天平 pH计 电导率仪 细胞计数板 培养皿等相关耗材
细胞培养流程
贴壁细胞培养流程
细胞培养流程
悬浮细胞培养流程
细胞培养基组要成分
经典细胞培养基应用
Ham’s F10 (Ham’s Nutrient Mixture F10): 由Ham发明，用于人类2倍体细胞和仓鼠 细胞的培养。 Ham’s F12 (Ham’s Nutrient Mixture F12): F10 的升级版，含有更多的维生素，肌 醇，氨基酸。用于培养大鼠，兔子和鸡 胚细胞，还用于中国仓鼠卵巢细胞以及 肺细胞的培养
HBSS HBSS可用于多种细胞培养应用，如细胞 解离前的清洗，细胞或组织的运输，细 胞计数时的稀释，溶液的配制等。含钙 和镁的HBSS配方一般用作运输培养基或 试剂配制，无钙镁的HBSS用于细胞解离 前的清洗，不会降低胰酶的活性
细胞消化试剂
0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA 0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA 胰蛋白酶是一种胰腺丝氨酸蛋白酶，具有底物特异性， 解离消化作用强，被用于组织培养中贴壁细胞的传代。 但细胞培养环境中存在的二价阳离子，如钙和镁等可 以抑制解离。EDTA可螯合二价离子，从而增强胰蛋白 酶的作用。
细胞培养基相关试剂
平衡盐及缓冲液 细胞消化试剂 pH调节试剂 营养添加剂 抗生素 细胞冻存液
平衡盐及缓冲溶液
PBS PBS是生物学研究和组织培养中常用的一种缓 冲溶液。例如，细胞或组织的运输，细胞计数 时的稀释，溶液的配制，容器，包括细胞的清 洗等，但不能用于细胞及组织块的消化。 DPBS 配方中无钙镁离子，不会中和胰酶及EDTA活 性，用于贴壁和团块细胞的消化解离，细胞解 离前的清洗。
细胞学简介
什么是细胞？ 能进行独立繁殖的有膜包围的生物体的 基本结构和功能单位。一般由质膜、细 胞质和核（或拟核）构成，是生命活动 的基本单位。
维持细胞体外生存的必要条件
严格的无菌无毒环境 体外培养的细胞缺乏对微生物和有毒物质的防 御能力 适合的营养条件 高质量的细胞培养基和血清是细胞培养成功的 基本条件 适宜的生存环境 恒定适宜的温度、pH值、气相环境（二氧化碳 的浓度）
干粉培养基与液体即用型培养 基对比
细胞培养基类型（按成分）
传统培养基 要添加血清(5-10%)的培养基 高级培养基（Advanced medium） 浓缩了营养物质和其他成分的培养基,只需要 <2% 的血清(减少50-90%) 无血清培养基(无血清培养基/无蛋白培养基/ 化学定义的培养基) 使用时无须再添加血清, 主要用于生物产品生 产,干细胞研究等
经典细胞培养基应用
McCoy 5A 是McCoy等人在1959年研制，是一种专门为培 养肉瘤细胞研制的培养基，除适用于原代细胞、 组织活检细胞和淋巴细胞培养外，还适用于较 难培养的细胞，如皮肤，牙龈，睾丸，小鼠肾 脏，大网膜，肾上腺，肺，脾，大鼠胚胎和其 他组织的原代生长，以及活体组织的体外移植。
经典细胞培养基的应用
IMDM 是由 Iscove改良的Dulbecco培养基，较 DMEM增加了几种非必需氨基酸和一些 维生素，IMDM为高葡萄型培养基，可 用于杂交瘤细胞的筛选培养，也可作为 无血清培养的基础培养基
经典细胞培养基应用
DMEM/F12 是DMEM和F12按1:1比例配制而成，是神经生 物学最常用的基本培养基，也是无血清培养基 的基础液，IMDM 非常适合于迅速增殖，高密 度细胞的培养，包括Jurkat细胞，COS- 7，和 巨噬细胞。IMDM支持小鼠B淋巴细胞，来自 骨髓的造血组织，脂多糖刺激的B细胞，T淋巴 细胞，和各种杂交细胞的生长。与血清一起使 用时，它支持多种哺乳动物细胞，包括骨髓， 杂交瘤细胞和淋巴细胞的生长.
经典培养基应用
DMEM (Dulbecco’s Modification of Eagle’s Medium) 是Dulbecco改进的MEM. 氨基酸和维生素 浓度是BME的4倍.最先葡萄糖的浓度是 1g/L，称为低糖DMEM,后来增加到 4.5g/L，称为高糖DMEM，广泛用于各种 细胞培养。
企业优势
标准化的生产管理 我们对每批产品都进行严格的质量控制，做到 每批产品都有可追溯性. 采用先进的生产设备和标准化的操作程序，保 证产品的质量的稳定性，降低产品的批间差. 定期超纯水及细胞培养注射用水水质的监测 严格的在线管道清洗（CIP)及消毒程序(SIP) 标准化的配液，过滤，分装体系
经典培养基用途汇总
MEM: 仅含12种必须氨基酸，谷氨酰胺和8种维生素广 泛应用于细胞系的培养，是DMEM的前身。 BME：删除了一些必须氨基酸，增添了一些非必须氨 基酸。 DMEM:2xMEM的成分，有高糖、低糖之分，广泛用于哺 乳细胞的培养。 RPMI1640:最初针对淋巴细胞的培养而设计 M199:广泛用于病毒学，疫苗生产和组织移植培养。 Ham's F mixs：可在血清含量较少的情况下培养细胞。
血清的缺点
1、对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是 在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改 变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（成纤 维细胞）同时抑制另一类细胞生长（表皮细胞）。 2、血清含有对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁 殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精 胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死 亡。 3、动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分 不能保持一致。 4、取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实 验失败或实验结果不可靠性。 5、血清的使用使得实验和生产的标准化困难，其中的蛋白质使得某些 转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成。 大规模生产 中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产 成本的主要部分之一。
细胞培养基形式（按外观）
即用型(1X) 液体培养基: 直接用培养基浓缩液(10X or 50X ): 用前需要稀释成1 × 干粉培养基DPM (Dry Powder Media): 需要在水中溶解, 加入碳酸氢钠,调pH值, 然后过滤才 可以使用. 高级颗粒技术培养基AGT (Advanced Granulation TechnologyTM): 比DPM形式的培养基更容易溶解的颗粒状的培养基. AGT 是完全为工业产量的用户开发的, pH提前调好， 所有的成分都提前混合好,只需要加水溶解和过滤。
影响胰酶消化细胞的因素
胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、 胰酶浓度及溶液中是否含有Ca2+、Mg2+离子和 血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37℃ 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血 清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传 代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复 冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲 洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。
动物血清的种类
.胎牛血清(FBS): fetal bovine serum 直接胚胎心脏取血，胎牛还未接触外界，血清中所含 的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 .新生牛血清(NBS):new born calf serum or new bovine serum 出生小于于十四天 .小牛血清（CS) ：calf serum 出生小于一年 .捐献血清: 特殊饲养的，专门用来进行血清提取的牛 .其他血清: horse, chicken, goat, lamb（羊）, porcine（猪）, rabbit