水中大肠菌群的测定上课讲义

水中大肠菌群的测定

水中大肠菌群的测定

报告题目水中大肠菌群的测定作者姓名

班级生科1104班

指导教师

完成时间2013年6月

生物学实验教学中心

目录

引言 (2)

1 实验材料 (2)

2 实验步骤 (2)

2.1 (3)

2.2 (4)

2.3 (4)

2.4 (5)

2.5数据分析与结果处理 ...................................... 错误!未定义书签。

3 结果与分析 (5)

3.1图片.................................................................. 错误!未定义书签。

3.2........................................................................... 错误!未定义书签。总结 .. (6)

参考文献 (10)

水中大肠菌群的测定

（指导老师：）

（湖北师范学院生命科学学院生物技术1104班湖北黄石 435002）

摘要：测定青山湖水中的大肠菌群的含量。将待测水分别稀释10倍、100倍、1000倍3种梯度在三倍浓缩培养基 37℃培养24h后挑选出产酸或产气的

菌画线接种到伊红美蓝平板中37℃培养24h，将培养基中表现为阳性的菌

落做革兰氏染色镜检为阴性的菌种接种到乳糖蛋白胨培养基中37℃培养

24h,挑选大肠杆菌阳性菌。结果稀释10倍的水有3管大肠杆菌阳性菌，

稀释100倍的水有3管，稀释1000倍的有2管，即青山湖水中大肠杆菌

的含量为MPN=11000.

关键词：大肠杆菌、多管发酵法青山湖水

水中大肠菌群的测定

（指导老师：）

（湖北师范学院生命科学学院生物技术1104班湖北黄石 435002）

引言

水对我们的生命起着重要的作用，它是生命的源泉，是人类赖以生存与发展的不

可缺少的最重要的物质资源之一。人的生命一刻也离不开水，水是人生命需要最主要

的物质。水也是大肠菌群的天然环境，一般地面水比地下水含菌数量多，并易被病原

菌污染。人饮用后引发疾病。水质细菌学检验是培水与污水水质分析工作中的一项重

要指标。

水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上

有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中

大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。

1 实验材料

药品：蛋白胨，牛肉膏，乳糖，蒸馏水，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，2%伊红（曙红）水溶液，0.5%美蓝（亚甲蓝）水溶液，氢氧化钠水溶液。工业酒精、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液，番红复染液，香柏油，二甲苯。

仪器(生产厂家)：显微镜，天平，培养箱，水浴锅，平皿，德氏管，刻度吸管，

洗耳球，无菌涂布棒，量筒，灭菌锅，酒精灯，接种环，棉花，棉线，报纸。

菌种：青山湖水中大肠杆菌

2实验步骤（参照实验书）：

2.1 配制培养基及灭菌

1.乳糖蛋白胨培养基的配制（供多管发酵法的复发酵用）

2、三倍浓缩乳糖培养基

3.灭菌

●移液管的包装：将移液管的尖端，放在4-5cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约

成30°夹角，折叠包装纸包住移液管尖端，用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下的纸折叠打结。多支包装，待灭菌。

●培养皿的包装：培养皿由一底一盖组成一套，用报纸将10套培养皿（皿底朝里，

皿盖朝外，5套、5套相对而放）包好。

●棉塞的制作：按试管口或锥形瓶口大小估计用棉量，将棉花铺成中间厚、周围逐渐

变薄的近正方形，折一个角后（成五角形）卷成卷，一手握粗端，将细端塞入试管或锥形瓶的口内，棉塞不宜过紧或过松用手提棉塞，以管、瓶不掉下为宜。棉塞四周应紧贴管壁或瓶壁不能有褶皱，以防空气微生物沿棉塞皱折侵入。棉塞的直径和长度视试管和锥形瓶的大小而定，一般约3/5塞入管内。必须做到松紧合适，紧贴管壁，拔出时不松散、不变形。

●将所有准备待灭菌物品，包扎好后置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃高压蒸汽灭菌

20min。

●将上述灭菌物品贮存于冷暗处备用。

1.2初发酵实验。

配制350ml三倍的乳糖蛋白胨培养液（每组取45ml），分装到9支试管中，每支试管内加入一个倒放的布氏小管，保证小管内无气泡。取水样并作梯度稀释，分别稀释出10倍，100倍，1000倍，在培养基中加入3中浓度的菌液10ml，每个稀释浓度各重复3个，混匀37度培养24h。

2.3平板分离。

培养后产酸，产气或仅产酸的发酵管为阳性反应，否则为阴性。配制伊红美蓝培养液1200ml（每组取200ml），然后倒12个平板，分别将9支试管中的菌用画线法接种到培养基上，。再随机从3种浓度的菌液中随机取一管进行接种。37度培养24h。将培养基中的菌种挑取少许进行革兰氏染色，再做镜检。

革兰氏染色：将带有上述典型特征的菌落（在伊红美蓝平板上大肠杆菌群的典型菌落为深紫黑色，具有金属光泽；或者为紫黑色，不带或略带金属光泽；或者为紫红色、中心较深的菌落）做革兰氏镜检：将大肠杆菌菌落涂片，干燥，固定。然后加草酸铵结晶紫一滴，染色1分钟后倾去染液，水洗至流出水为无色。用卢戈氏碘液覆盖1分钟，倾去碘液，水洗至流出水为无色。再用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，并衬以白纸背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，25S，然后立即用水冲去乙醇。将玻片上残留的水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2分钟，水洗，吸去残水，晾干。干燥后，油镜观察。以分开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色。阴性菌呈红色。

2.4 复发酵。