淀粉样物质染色液(Bennhold刚果红法)
甲醇刚果红染色
甲醇刚果红染色
主要用途：
主要用于淀粉样物质染色
检验原理：
淀粉样物质对刚果红有选择性的亲和力，因此容易着色。
刚果红是一种分子为长线状况的偶氮染料，它以胺基和淀粉样物质的羟基结合，平行的附着在淀粉样物质的纤维上而显红色。
主要成份：
甲醇刚果红染液
碱性酒精分化液
Mayer苏木素
样本要求：
组织片充分固定和脱蜡。
检验方法：
1.石蜡切片常规脱蜡至水
2.用甲醇刚果红染液染10-20分钟，
3.直接用碱性酒精化液分化数秒
4.水洗5分钟
5.mayer苏木素染细胞核2分钟，水洗5分钟。
6.常规脱水透明，中性树胶封固。
检验结果：
淀粉样物质、红细胞、弹力纤染染红色，细胞核呈蓝色，背景淡黄粉色。
注意事项：
1.淀粉与弹力纤维都着染刚果红颜色，二者在形态上有所不同，应注意区别。
2.用碱性酒精分化时要掌握恰当，若分化不足，胶原纤维也可着色，分化过度时淀粉样
蛋白也可脱色。
3.淀粉样物质未染色的蜡片，再存放一年后，将逐渐减弱与归于刚果红结合的能力。
刚果红染色法
3、刚果红染色法分离纤维素分解菌
这一步所需要的仪器有：无菌培养皿、涂布器、1mL移液管，装有9mL无菌水的20mL大试管，温箱等。
培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制。
在500mL三角瓶中装入200mL培养基，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
倒平板操作：将灭菌后的固体培养基熔化，按无菌操作的要求，在无菌的培养皿中倒入15～20mL培养基，凝固后待用。
制备菌悬液：按照本专题课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数至106。
涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL，滴加在平板培养基上，用涂布器将菌液涂布均匀，在30℃倒置培养，至菌落长出。
每个稀释度下需涂布3个平板，并注意设置对照。
刚果红染色法：
常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。
方法一在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg／mI。
的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。
的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl 溶液，此时，产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。
方法二配制质量浓度为10 mg／mI。
的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。
培养基加入1 mI。
的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。
等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。
刚果红染色法的原理
刚果红染色法的原理
刚果红染色法是一种常用的生化实验方法，其原理是将刚果红染色剂
加入到样品中，利用其结合纤维蛋白原及淀粉酶等分泌物的特性，使得样
品中特定结构的蛋白质及其他分子发生结合及聚合作用，最终表现为颜色
的变化。
刚果红染色方法主要针对的是淀粉样品。
淀粉分子在加入刚果红后，
可与其形成无定形结合复合物，这些复合物可能由β-折叠蛋白构建而成，因此染色后的样品通常会呈现出青蓝色至紫色的特殊颜色。
另外，刚果红
还能够与一些蛋白质如淀粉酶等结合，从而形成聚合物。
此种结合可以被
一些特异性抗体所检测，并得出进一步的研究结论。
总而言之，刚果红染色法是利用分子结合的原理和分子特异性的相互
作用，观察分子在染色剂作用下的变化，从而确定样品中蛋白质或淀粉等
特定分子的存在，具有比较敏感和特异的检测效果。
刚果红染色法1
刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。
方法一在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg／mI。
的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。
的NaCI溶液，15 min 后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。
方法二配制质量浓度为10 mg／mI。
的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。
培养基加入1 mI。
的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。
等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。
两种刚果红染色法的比较刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史，课本中给出了两种方法。
方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。
方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。
但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。
方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。
维素酶（CMC）活性检验方法1 原理纤维素酶在一定的温度和pH条件下，水解羧甲基纤维素钠释放出还原性糖（以葡萄糖计）。
在碱性、煮沸条件下，能与3，5二硝基水杨酸起显色反应，其颜色的深浅与还原糖的含量成正比。
在550nm下测定其吸光度，可以计算出还原糖的量，从而得出纤维素酶的活力。
2 活性单位1g固体酶粉（1 ml液体酶）在50℃±0.5℃ PH5.0条件下，每分钟水解底物产生1μg葡萄糖所需酶液的量定义为一个CMC酶活性单位。
3 仪器与设备3.1 分光光度计（应符合GB9721的有关规定）3.2 恒温水浴锅3.3 电热鼓风干燥箱3.4 分析天平（感量0.1mg）3.5 电冰箱3.6 酸度计（精度±0.01pH）3.7 定时钟或秒表4 试剂和溶液（若未特别说明均为分析纯：所用水为蒸馏水或去离子水）4.1 醋酸－醋酸钠缓冲液（PH=5.0）甲液：量去冰醋酸6ml，用水定容至1000ml，配成0.1M醋酸溶液。
肾脏病理染色你知多少？
肾脏病理染色你知多少？
来源：中洪博元熊技术
淀粉样变是特殊蛋白质在细胞外形成具β样折叠结构、不可溶的纤维丝沉积在特定脏器而引起器官功能损害的疾病，常累及多个器官，临床表现多样，起病隐袭，误诊率较高，预后较差。
肾脏是淀粉样变这种全身性疾病最常受累的器官之一，肾活检组织的病理学检查是诊断淀粉样变性最可靠的手段之一，阳性率可达85%以上，刚果红染色更成为诊断该病的金标准。
1.酸化甲醇刚果红染色法
（1）石蜡切片脱蜡入水；
（2）5%高猛酸钾与0.3%硫酸等比例混合滴片3 min，水洗；
（3）1%草酸漂白数秒，水洗；
（4）1%甲醇刚果红染色15 min；
（5）氢氧化钾酒精分化数秒，流水洗2 min×3次；
（6）苏木素浅染；
（7）脱水、透明、封固。
2.酸化 Bennhold's 刚果红染色法
（1~3）方法同酸化甲醇刚果红染色法；
（4）1%刚果红室温30 min，水洗；
（5）饱和碳酸锂15 s；
（6）80%乙醇分化，水洗15 min；
（7）苏木素复染；
（8）脱水、透明、封固。
3.酸化 Alkaland's 刚果红染色法
（1~3）方法同酸化甲醇刚果红染色法；
（4）苏木素 5min，分化，水洗；
（5）0.01%氢氧化钠 20 min；
（6）0.5%碱性刚果红（0.5 g 刚果红 0.2 g氯化钠 80%酒精100 ml使用前加1 ml 1%氢氧化钠）20 min；
（7）无水乙醇3缸每缸洗5次；
（8）脱水、透明、封固。
淀粉样变性
流行病学
遗传性大脑出血性淀粉样变性的发病年龄在20～40岁。
总体来说，各种类型的淀粉样变性以男性发病为多见，不过， Alzheimer病以女性多见。
美国麻省总医院作4000例尸检，有21例诊断为淀粉样变性。 Johns Hopkins医院连续尸检2000例，有79例诊断为淀粉样变性， 其中46例与慢性炎症性疾病有关，28例为原发性者，余5例继 发于多发性骨髓瘤。在麻风病院、结核病院等专科医院的尸检 报告中，淀粉样变性的发病率高达50%。在一组400例地中海热 患者的资料中，40%被诊断为淀粉样变性。
淀粉样变性
大头医生
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英文名称
amyloidosis
别名
amyloid degeneration；淀粉样变；淀粉样变性病；amyloid thesaurismosis；bacony degeneration；cellulose degeneration； chitinous degeneration；gammaloidosis；glassy swelling；hyaloid degeneration；lardaceous degeneration；waxy degeneration；淀 粉贮积病；淀粉样变病；系统性淀粉样变性
并发症
1.合并肾性尿崩症、高血钾症、肾功能衰竭。
2.临床上常合并充血性心力衰竭，并呈进行性、顽固性发作。 淀粉样变性所致心力衰竭难以处理，个别患者对洋地黄极度敏 感，以至于发生严重乃至致死性的心律失常。如若累及传导系 统，则可致传导阻滞、房颤、房扑和室性心律失常等。这常是 原发性淀粉样变性的晚期表现，预后极差。 3.合并门脉高压和食管静脉破裂出血及自发性肝脏破裂。此 外，胆囊和胰腺也可有淀粉样物沉积。
概述
【疾病名】淀粉样变性【英文名】AMYLOIDOSIS【缩写】
【疾病名】淀粉样变性【英文名】amyloidosis【缩写】【别名】amyloid degeneration；淀粉样变；淀粉样变性病；amyloid thesaurismosis；bacony degeneration；cellulose degeneration；chitinous degeneration；gammaloidosis；glassy swelling；hyaloid degeneration；lardaceous degeneration；waxy degeneration；淀粉贮积病；淀粉样变病；系统性淀粉样变性【ICD号】E85.9【概述】淀粉样变性(amyloidosis，AL)是由多种原因造成的淀粉样物(amyloid)在体内各脏器细胞间的沉积，致使受累脏器功能逐渐衰竭的一种临床综合征。
包括一组疾病，消化道是最易被侵袭的脏器之一。
淀粉样物首先由德国学者Sehleiden于1838年发现，1854年著名病理学家Virchow将之作碘试验或碘-硫酸试验，发现其像淀粉呈紫蓝色而命名为淀粉样物。
1842年Rotansky首先描述患者的肝脏、脾脏都有淀粉样物的沉积，并指出可发生于结核、梅毒和佝偻病(维生素D缺乏病)等疾病。
Budd认为，所谓淀粉样物实际上是一种蛋白样物质，而Friedreich也认为这是一种蛋白质。
1856年，Wilks报道了第1例原发性淀粉样变性。
1867年Weber报道第1例与多发性骨髓瘤有关的淀粉样变性。
1922年Bennhold介绍用刚果红染色作为诊断性检查，随后就以此作为诊断本病的组织学染色。
【流行病学】一般来说，淀粉样变性起病较晚，其发病率随年龄而增高，有报道称原发性淀粉样变性的平均发病年龄为61岁(32～90岁)，仅2%者＜40岁，在老年性淀粉样变性患者中，70岁以上老人其心脏和主动脉中淀粉样物沉积分别为37%和50%，而80岁以上者则都有主动脉淀粉样物沉积。
刚果红
用这办法判断酶活力大小的，实际上刚果红是结合到培养基的多糖底物，但分解纤维素的细菌能产纤维素酶，能分解这个多糖底物成为寡糖，这样刚果红便不能结合上往了，氯化钠呢即可使结合不牢的刚果红洗往，这样便留下大大小小的透明圈，大的透明圈当然分解纤维素的能便强啦。
刚果红染色法的原理刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。
当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红——纤维素的复合物便没法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色响应，另一种是在倒平板时便加入刚果红。
办法一在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg／mI。
的CR溶液，10～15 min后，倒往CR 溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。
的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。
办法二配制质量浓度为10 mg／mI。
的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。
培养基加入1 mI。
的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。
等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。
两种刚果红染色法的比较刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史，课本中给出了两种办法。
办法一是传统的办法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色响应基本上是纤维素分解菌的作用。
办法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中全部含有淀粉类物质，能使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性响应。
但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，由于培养基中纤维素占主要地位，因此能与纤维素酶产生的透明圈相区分。
办法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的本事，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。
这个没有方程式，首先这只是个简单的酶促反应，纤维素可以被纤维素酶分解为纤维二糖，再分解为葡萄糖，而纤维素可以和刚果红染液形成红色复合物。
生物实验染色剂
生物实验染色剂华越洋生物过碘酸溶液(0.5%) 100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色过碘酸溶液(1%) 100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色Schiff试剂50ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
Schiff试剂100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
糖原PAS染色液4×50ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液4×100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液(细胞专用) 4×20ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质,特别适用于细胞、极其薄的切片。
细胞的糖原染色中华越洋生物公司推荐采用该染色液，是经典糖原染色法,高碘酸和schiff 试剂应低温保存。
淀粉样物质染色液(Bennhold刚果红法)使用步骤及注意事项
淀粉样物质染色液(Bennhold刚果红法)使用步骤及注意事项货号：G1530
规格：5×50ml
保存：室温，避光，12个月。
操作说明：（仅供参考）
1、常规固定，脱水包埋。
2、切片厚度4μm，常规脱蜡复水。
3、入Bennhold苏木素浸染。
4、酸性乙醇分化，立即入水终止分化，水洗2次后镜下控制至恰当程度。
5、自来水冲洗。
6、入Scott蓝化液返蓝。
7、自来水冲洗。
8、入刚果红染色液浸染。
9、Bennhold分化液迅速分化。
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。
2、碱性乙醇分化液应密闭保存，一旦开启，尽快用完。
3、分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性乙醇分化液的新旧而定，另外分化
后自来水冲洗时间应该足够。
4、碱性乙醇分化液分化步骤很重要，应及时入水终止分化，防止分化过度。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果探讨
㊀㊀［摘要］㊀目的㊀探讨神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果，摸索实验操作的最佳条件㊂方法㊀选择２０２２年８月于首都医科大学宣武医院神经内科收治的１例淀粉样周围神经病患者，取腓肠神经的活检组织标本㊂制作６μｍ和８μｍ厚度的冰冻切片，Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红染液染色时间分别设置为５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ，在普通光㊁偏振光及荧光下观察冰冻切片刚果红染色结果㊂结果㊀当染色时间为１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ时，两种厚度切片均可观察到特异物质沉积，且随着切片厚度增加，颜色强度增加㊂６μｍ切片在染色５ｍｉｎ时效果不佳；８μｍ切片在染色１５ｍｉｎ时效果最好，光镜及荧光显微镜下观察到的染色结果更利于观察者进行诊断㊂结论㊀神经冰冻切片厚度为８μｍ㊁染色时间１５ｍｉｎ是合适的刚果红染色条件，在淀粉样周围神经病病理诊断中有较好的应用价值㊂㊀㊀［关键词］㊀刚果红染色；㊀神经冰冻切片；㊀淀粉样周围神经病；㊀病理诊断㊀㊀［中图分类号］㊀Ｒ４４６ ８㊀［文献标识码］㊀Ａ㊀［文章编号］㊀１６７４－３８０６（２０２３）０７－０６９０－０４㊀㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－３８０６．２０２３．０７．１０ＡｎｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｎｐａｔｈｏ⁃ｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ㊀ＤＵＯＪｉａｎ⁃ｙｉｎｇ，ＣＨＥＮｈａｉ，ＸＵＭｉｎ，ｅｔａｌ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＸｕａｎｗｕＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ㊀㊀［Ａｂｓｔｒａｃｔ］㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｎｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＯｎｅｐａｔｉｅｎｔｗｉｔｈａｍｙｌｏｉｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙｗｈｏｗａｓａｄｍｉｔｔｅｄｔｏｔｈｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙｏｆＸｕａｎｗｕＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎＡｕｇｕｓｔ２０２２ｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｔｏｔａｋｅｂｉｏｐｓｙｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｆｓｕｒａｌｎｅｒｖｅ．Ｔｈｅｆｒｏｚｅｎｓｌｉｃｅｓｗｉｔｈｔｈｉｃｋｎｅｓｓｅｓｏｆ６μｍａｎｄ８μｍｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅｄｙｅｉｎｇｔｉｍｅｏｆＨｉｇｈｍａｎＣｏｎｇｏｒｅｄｄｙｅｗａｓｓｅｔｔｏ５ｍｉｎｕｔｅｓ，１０ｍｉｎｕｔｅｓ，１５ｍｉｎｕｔｅｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｉｎｔｈｅｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｏｒｄｉｎａｒｙｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｂｉｒｅｆｒｉｎｇｅｎｔｐｏｌａｒｉｚｅｄｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓ⁃ｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｗｈｅｎｔｈｅｄｙｅｉｎｇｔｉｍｅｗａｓ１０ｍｉｎｕｔｅｓ，１５ｍｉｎｕｔｅｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔｈｅｄｅｐ⁃ｏｓｉｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｃｏｕｌｄｂｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｓｌｉｃｅｓｏｆｂｏｔｈｔｈｉｃｋｎｅｓｓｅｓ，ａｎｄｔｈｅｃｏｌｏｒｉｎｔｅｎｓｉｔｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｓｌｉｃｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓ．Ｗｈｅｎｔｈｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｔｈｅｓｅｃｔｉｏｎｗａｓ６μｍ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒ５ｍｉｎｕｔｅｓｗａｓｕｎｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｗｈｅｎｔｈｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｔｈｅｓｅｃｔｉｏｎｗａｓ８μｍ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒ１５ｍｉｎｕｔｅｓｗａｓｔｈｅｂｅｓｔ．Ｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗｅｒｅｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｔｈｅｏｂｓｅｒｖｅｒᶄｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｔｈｅｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｗｉｔｈａｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆ８μｍａｎｄｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｔｉｍｅｆｏｒ１５ｍｉｎｕｔｅｓａｒｅｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇ，ａｎｄｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｈａｓｇｏｏｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｖａｌｕｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆａｍｙｌｏｉｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．㊀㊀［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］㊀Ｃｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇ；㊀Ｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓ；㊀Ａｍｙｌｏｉｄｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ；㊀Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ㊀㊀淀粉样物质是由蛋白质变性所致，亦可称为淀粉样变㊂淀粉变性病是由于不同结构的异常蛋白在机体内不同组织和器官沉积所致［１⁃４］㊂淀粉样物质可沉淀在血管周围，累及周围神经，导致淀粉样变性周围神经病［５⁃７］㊂刚果红染色是对淀粉样物质沉积最经典且有效的病理染色方法［８⁃１１］㊂实验室常用石蜡切片进行刚果红染色［９］，不同试剂盒㊁染色流程㊁染色条件均会影响染色结果［１２⁃１４］㊂即使是使用同一试剂盒，对于不同组织的染色条件也有所差别［１５⁃１６］㊂笔者在临床实践中发现，应用刚果红染色试剂盒对石蜡及冰冻标本进行染色（染色时间５ｍｉｎ），冰冻肌肉标本可得到良好的染色结果，但冰冻神经标本往往观察不到理想的结果㊂鉴此，笔者通过对染色时间及切片厚度进行了反复测试，以期获得神经冰冻切片刚果红染色的最佳条件，为淀粉样周围神经病的快速病理诊断提供准确证据㊂１㊀材料与方法１ １㊀标本来源㊀选择２０２２年８月于首都医科大学宣武医院神经内科收治的１例淀粉样周围神经病患者，取得腓肠神经的活检组织标本，迅速进行液氮冷冻处理，以ＯＣＴ（ｏｐｔｉｍａｌｃｕｔｔｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃｏｍｐｏｕｎｄ）包埋剂包埋，固定于软木片上，－８０ħ冰箱长期保存备检㊂排除标准：（１）活检标本未发现异常物质沉积；（２）活检石蜡标本切片刚果红染色偏振光下未见苹果绿色㊂本研究获医院医学伦理委员会批准㊂１ ２㊀刚果红染色方法１ ２ １㊀染色试剂㊀淀粉样物质染色液（Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红法，雷根生物，ＤＧ００２２），包括Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红染色液（Ａ液）㊁碱性乙醇分化液（Ｂ液）㊁Ｌｅａｇｅｎｅ苏木素染色液（Ｃ液）㊂１ ２ ２㊀标本制备㊀将神经组织标本进行冰冻切片（横切或纵切），切片后采用丙酮固定１５ｍｉｎ㊂１ ２ ３㊀实验分组㊀本研究主要观察刚果红染色时间及切片厚度对染色结果的影响㊂染色时间设置５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ四个亚组；切片厚度设置６μｍ㊁８μｍ两个亚组，共８组，每组横切和纵切各３张切片㊂１ ２ ４㊀染色过程㊀将固定后的冰冻切片以自来水冲洗１ｍｉｎ，根据分组放入Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红染色液（Ａ液）分别浸染５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ㊂随后将切片放入碱性乙醇分化液（Ｂ液）分化５ｓ，予自来水冲洗１ｍｉｎ终止分化㊂将切片放入Ｌｅａｇｅｎｅ苏木素染色液（Ｃ液），染核１ｍｉｎ，自来水冲洗５ｍｉｎ，放入蒸馏水分化２ｍｉｎ㊂逐级常规乙醇脱水，以二甲苯进行透明化处理，中性树胶封片㊂１ ２ ５㊀染色结果观察㊀使用ＬｅｉｃａＤＭ２５００光学显微镜对染色结果进行观察㊂以神经组织切片中出现砖红色无定型物质（一般为团块状），并且该物质在偏振光下呈现苹果绿色双折光，则判定为刚果红染色阳性㊂在普通光学显微镜下，淀粉样蛋白砖红色按照着色强度分为弱（略显砖红色）和强（显鲜艳砖红色）两个等级㊂在荧光显微镜下（激发光波长５４０ ５６５ｎｍ，发射光波长６０５ ６６０ｎｍ），淀粉样蛋白呈大红色荧光，按照荧光强弱分为弱（略显红色荧光）和强（显现十分鲜艳红色荧光）两个等级㊂１ ３㊀组织化学染色方法１ ３ １㊀标本制备㊀将神经组织标本进行冰冻切片，纵切或横切，厚度为６μｍ㊁８μｍ各３张切片㊂１ ３ ２㊀苏木精⁃伊红染色（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ⁃ｅｏｓｉｎ，ＨＥ）㊀切片晾干后进行ＨＥ染色：切片置入Ｈａｒｒｉｓ苏木精液２ｍｉｎ，自来水冲洗１０ｍｉｎ后置入１％伊红１ｍｉｎ；自来水快速冲洗１ｍｉｎ，逐级常规乙醇脱水，以二甲苯进行透明化处理，中性树胶封片㊂２㊀结果２ １㊀ＨＥ染色及刚果红染色结果㊀ＨＥ染色切片可观察到有淀粉样物质沉积物，呈不定形的粉红色团块状物质，偏振光下该物质团呈苹果绿色㊂石蜡切片㊁冰冻切片经ＨＥ染色和刚果红染色后在光镜下均能观察到粉红色物质沉积及砖红色物质㊂但冰冻切片整体对比度更强，特别是经刚果红染色时，冰冻切片能更好地将淀粉样物质沉积从背景颜色中区分出来㊂偏振光下石蜡切片及冰冻切片均能观察到苹果绿色㊂见图１㊂㊀ⓐ ⓓ为石蜡切片观察所见：ⓐ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ１００）；ⓑ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ２００）；ⓒ神经内膜见砖红色团块状物质，着色强（刚果红染色，ˑ１００）；ⓓ偏光镜下观察见苹果绿样沉积（刚果红染色，ˑ２００）㊂ⓔ ⓗ为冰冻切片观察所见：ⓔ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ１００）；ⓕ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ２００）；ⓖ神经内膜见砖红色团块状物质，着色强（刚果红染色，ˑ１００）；ⓗ偏光镜下观察见苹果绿样沉积（刚果红染色，ˑ２００）图１㊀石蜡切片和冰冻切片（纵切）光镜下观察所见２ ２㊀不同刚果红染色条件下光镜观察结果比较㊀染色时间为５ｍｉｎ时，６μｍ厚的冰冻切片在光镜下观察到微弱的砖红色物质，在偏振光下基本不能观察到绿色荧光物质，而８μｍ厚的冰冻切片也仅能观察到微弱的苹果绿色荧光物质㊂当染色时间为５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ和２０ｍｉｎ时，８μｍ厚的冰冻切片在光镜下观察到明显的砖红色物质，较６μｍ冰冻切片更为显著㊂而当染色时间为１０ｍｉｎ时，６μｍ冰冻切片在偏振光下仍难以观察到苹果绿色荧光物质㊂当染色时间为１５ｍｉｎ时，８μｍ厚的冰冻切片在光镜下观察到较明显的砖红色物质，而在此条件下，偏振光下能观察到的苹果绿色荧光最为显著㊂见图２㊂㊀ⓐ ⓗ为６μｍ冰冻切片镜下观察所见：ⓐ染色５ｍｉｎ，神经内膜下砖红色十分微弱，着色弱；ⓑ染色１０ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色弱；ⓒ染色１５ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色强；ⓓ染色２０ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色强；ⓔ染色５ｍｉｎ，偏振光下未见苹果绿色物质；ⓕ染色１０ｍｉｎ，偏振光下苹果绿色物质十分微弱；ⓖ染色１５ｍｉｎ，偏振光下可见明显苹果绿色；ⓗ染色２０ｍｉｎ，偏振光下可见苹果绿色物质㊂ⓘ为８μｍ冰冻切片镜下观察所见：ⓘ染色５ｍｉｎ，神经内膜下可见砖红色物质沉积，着色强；ⓙ染色１０ｍｉｎ，神经内膜下可见砖红色物质沉积，着色强；染色１５ｍｉｎ，神经内膜下可见砖红色物质沉积，着色强；染色２０ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色强；染色５ｍｉｎ，偏振光下可见微弱苹果绿色；染色１０ｍｉｎ，偏振光下可见微弱苹果绿色；染色１５ｍｉｎ，偏振光下可见明显苹果绿色物质；染色２０ｍｉｎ，偏振光下可见微弱苹果绿色物质图２㊀不同刚果红染色条件下光镜观察所见（ˑ２００）２ ３㊀８μｍ切片在不同刚果红染色时间条件下荧光显微镜观察结果㊀当染色时间为５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ时，荧光显微镜下均能观察到明显的橙红色荧光，其中以染色时间为１５ｍｉｎ时荧光亮度最强㊂石蜡切片在荧光显微镜下呈现红色荧光，亮度弱㊂见图３㊂㊀ⓐ ⓓ为８μｍ冰冻切片观察所见：染色时间为５ｍｉｎ（ⓐ）㊁１０ｍｉｎ（ⓑ）㊁１５ｍｉｎ（ⓒ）㊁２０ｍｉｎ（ⓓ）时，荧光显微镜下观察到橙红色荧光，亮度强（刚果红染色，ˑ２００）㊂ⓔⓕ为石蜡切片观察所见：染色时间为１０ｍｉｎ，石蜡切片在荧光显微镜下呈红色荧光，亮度弱［刚果红染色，ˑ１００（ⓔ），ˑ２００（ⓕ）］图３㊀８μｍ切片不同刚果红染色时间条件下荧光显微镜观察所见３㊀讨论３ １㊀刚果红染色于１９２２年由Ｂｅｎｎｈｏｌｄ发明［１３］，可用于活体内淀粉样物质的鉴定并应用到组织切片中，后经Ｈｉｇｈｍａｎ㊁Ｆｒｅｕｄｅｎｔｈａｌ等学者进行改良㊂目前，本实验室应用的Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红法，其染色液主要由刚果红染色液和苏木素染色液组成，染色操作简单易行，染色液性能稳定，染色效果良好，较其他刚果红染色方法有明显优势㊂３ ２㊀常规石蜡切片是制片技术中较为常用的方法，但操作步骤繁琐，所需时间较长，从取材凝固到制成标本需要消耗数日时间，而冰冻切片仅需耗时约７ｈ即可完成［１３］㊂本研究应用丙酮固定１５ｍｉｎ，可在１ｈ内得到刚果红染色及常规的ＨＥ染色结果㊂另外，本研究通过对神经石蜡切片和冰冻切片的刚果红染色在普通光㊁偏振光及荧光下的结果比较发现，冰冻切片染色结果对比度更高，更容易辨认，且荧光下染色物质亮度更强，有利于观察者对刚果红染色结果进行判定㊂因此，冰冻切片不但节省了从送检到诊断的时间，而且还提高了刚果红染色阳性判定的灵敏度，对神经系统疾病的临床诊断大有裨益㊂３ ３㊀有研究证实，切片厚度对淀粉样蛋白的刚果红染色结果有影响，随着切片厚度变薄，染色强度变弱，当薄切片ɤ３μｍ时容易出现假阴性［１７］㊂本次研究中为了防止冰冻切片制备时出现卷片㊁碎片等现象，选用６μｍ（冰冻切片免疫组化染色常用切片厚度）及８μｍ（冰冻切片组织化学染色常用切片厚度）作为染色切片厚度，观察在这两个厚度条件下刚果红染色时间对染色结果的影响㊂另外，由于神经组织较小，容易出现脱片现象㊂经笔者前期反复试验，可用丙酮固定１５ｍｉｎ替代４％甲醛㊁无水乙醇㊁Ｂｏｕｉｎ液固定［１８］㊂染色过程中复染细胞核的步骤为了避免过长时间冲水引起脱片，可选择苏木素复染１ｍｉｎ，相应的冲洗时间可由１０ｍｉｎ缩短到５ｍｉｎ㊂３ ４㊀淀粉样纤维能被刚果红染料染色，且该物质在偏振光下能呈现出特征性的苹果绿双折光，这是含有β⁃褶片结构蛋白质的特异表现，是诊断淀粉样变性病的重要依据［１，１９］㊂在本研究中，切片厚度相同时，刚果红染色着色强弱随着染色时间增加而增强；染色时间相同时，染色颜色随着切片厚度增加而增强㊂同样的厚度下，染色２０ｍｉｎ的特异性物质沉积砖红色过深，接近于紫红色，在偏振光及荧光下并没有呈现出更好的染色效果；在染色１５ｍｉｎ时，６μｍ及８μｍ切片染色在普通光㊁偏振光㊁荧光下的效果均较好㊂３ ５㊀在本研究中，当染色时间为５ｍｉｎ时，６μｍ切片刚果红染色所见砖红色十分微弱，偏振光下基本观察不到苹果绿色物质，说明切片厚度不足时偏振光观察效果不佳［２０］㊂而８μｍ切片在染色５ｍｉｎ时能观察到苹果绿双折光，说明８μｍ是较理想的切片厚度㊂当染色２０ｍｉｎ时，８μｍ切片砖红色过深，且在偏振光下也没有观察到更显著的苹果绿双折光㊂两种厚度切片在染色１５ｍｉｎ时均可观察到较强的苹果绿双折光，这可能与淀粉样物质在组织中的含量或是刚果红染料与淀粉样纤维的结合原理有关㊂３ ６㊀在荧光显微镜下观察刚果红染色能显著提高诊断的灵敏度［１，２０⁃２２］㊂本研究中，８μｍ厚度切片在染色５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ时均能观察到十分明亮的红色荧光，且在染色时间为１５ｍｉｎ时所见荧光最为显著，呈橙红色荧光，显著提高了阳性染色的辨别力与诊断灵敏度㊂同时，本研究发现冰冻切片较石蜡切片在荧光下显色效果更优㊂综上所述，８μｍ冰冻切片刚果红染色在Ａ液中染色１５ｍｉｎ时效果最好，光镜下呈鲜艳砖红色，偏振光下苹果绿也较明显，荧光显微镜下橙红色荧光也最强㊂该方法不但简化了实验过程，缩短了实验时间，还提高了染色灵敏度，有助于淀粉样周围神经病的诊断㊂参考文献［１］中国系统性淀粉样变性协作组；国家肾脏疾病临床医学研究中心．系统性轻链型淀粉样变性诊断和治疗指南［Ｊ］．中华医学杂志，２０１６，９６（４４）：３５４０－３５４８．［２］雷㊀霖，邸㊀丽，朵建英，等．以肌肉损害为首发表现的淀粉样神经肌病一例［Ｊ］．中华神经科杂志，２０１７，５０（４）：３０４－３０５．［３］黄永塔，叶秋容，刘㊀霞，等．呼吸系统原发性淀粉样变９例临床病理分析［Ｊ］．中国临床新医学，２０２０，１３（６）：５６５－５６９．［４］杨㊀敏，庞建欣，李邻峰，等．皮肤淀粉样变中淀粉样蛋白４种染色法的比较［Ｊ］．中国皮肤性病学杂志，２０１０，２４（２）：１８０－１８２．［５］ＣｏｈｅｎＡＳ，ＣｏｎｎｏｒｓＬＨ．Ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆａｍｙ⁃ｌｏｉｄｏｓｉｓ［Ｊ］．ＪＰａｔｈｏｌ，１９８７，１５１（１）：１－１０．［６］ＢｒｅａｋｅｆｉｅｌｄＸＯ，ＣａｍｂｉＦ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＮｅｕｒｏｓｃｉ，１９８７，１０：５３５－５９４．［７］ＳｉｐｅＪＤ．Ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ，１９９２，６１：９４７－９７５．［８］谌贻璞．肾内科学［Ｍ］．２版．北京：人民卫生出版社，２０１５：１３１－１３５．［９］陈㊀楠．如何诊断淀粉样变肾病［Ｊ］．中华临床医师杂志（电子版），２００８，２（４）：４０２－４０５．［１０］刘志红，黄湘华．重视系统性淀粉样变性的诊断和治疗［Ｊ］．肾脏病与透析肾移植杂志，２０１２，２１（４）：３０１－３０３．［１１］李玉莲，袁宏伟，徐晓艳．刚果红染色在临床病理诊断中的应用价值［Ｊ］．山西医科大学学报，２０１４，４５（７）：６６１－６６２，６７０．［１２］董鸿瑞，王艳艳，杨㊀敏，等．不同刚果红染色及观察方法对肾脏淀粉样变病诊断的研究［Ｊ］．中国中西医结合肾病杂志，２０１６，１７（１１）：９５６－９５８，１０３５．［１３］涂贵兰．两种刚果红染色方法的比较［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１５，３１（１１）：１３０９－１３１０．［１４］马国荣，胡艳萍，高㊀丽，等．三种刚果红染色的体会［Ｊ］．诊断病理学杂志，２０２０，２７（８）：６０２－６０３，６０５．［１５］涂贵兰，安㊀智．在不同组织中淀粉样物质５种染色法的比较［Ｊ］．临床与病理杂志，２０１５，３５（５）：７４０－７４５．［１６］徐㊀帆．活检组织淀粉样变性染色时不同分化时间对结果的影响及质量控制的意义［Ｊ］．检验医学与临床，２０１９，１６（１３）：１９０４－１９０６．［１７］肖广正．冰冻切片㊁快速石蜡切片在中枢神经系统肿瘤的诊断价值［Ｊ］．泰山医学院学报，２０１７，３８（８）：９３１－９３２．［１８］弓玉祥，陈平圣，倪海锋，等．冰冻切片刚果红染色方法在肾活检病理诊断中的应用［Ｊ］．中国组织化学与细胞化学杂志，２０２２，３１（３）：２８９－２９３．［１９］邹万忠．肾活检病例学［Ｍ］．３版．北京：北京大学医学出版社，２０１４：１８９－１９７．［２０］ＢａｎｃｒｏｆｔＪＤ，ＧａｍｂｌｅＭ．组织学技术的理论与实践［Ｍ］．周小鸽，刘㊀勇，译．６版．北京：北京大学医学出版社，２０１０：２２３－２４０．［２１］钱㊀军，赵秀芬，吴㊀琳，等．刚果红染色的两种观察方法在肾淀粉样变性病诊断的应用［Ｊ］．江苏医药，２０１９，４５（８）：８５９－８６１．［２２］ＭａｒｃｕｓＡ，ＳａｄｉｍｉｎＥ，ＲｉｃｈａｒｄｓｏｎＭ，ｅｔａｌ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓ⁃ｃｏｐｙｉｓｓｕｐｅｒｉｏｒｔｏｐｏｌａｒｉｚｅｄｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇａｍｙｌｏｉｄｄｅｐｏｓｉｔｓｉｎＣｏｎｇｏｒｅｄ⁃ｓｔａｉｎｅｄｔｒｅｐｈｉｎｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｂｉｏｐｓｙｓｐｅｃｉｍｅｎｓ［Ｊ］．ＡｍＪＣｌｉｎＰａｔｈｏｌ，２０１２，１３８（４）：５９０－５９３．［收稿日期㊀２０２３－０２－２２］［本文编辑㊀余㊀军㊀韦㊀颖］本文引用格式朵建英，陈㊀海，徐㊀敏，等．神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果探讨［Ｊ］．中国临床新医学，２０２３，１６（７）：６９０－６９３．。
刚果红染色简介
刚果红染色简介
目录
•1拼音
•2英文名
•3刚果红染色的别名
•4正常值
•5化验结果意义
•6化验取材
•7化验方法
•8化验类别一
•9化验类别二
•10参考资料
1拼音
gāng guǒ hóng rǎn sè
2英文名
Congo red stain
3刚果红染色的别名
刚果红试验；CgRT
4正常值
1h：＜40%
5化验结果意义
消失数＞60%：肾淀粉样变性。
消失数40～60%：肾小管脂肪变性。
肘静脉处注射1.5%刚果红灭菌溶液(0.25ml/kg体重)，注射后4min及1h静脉各采血1次，各3ml，置于抗凝试管内送检。
6化验取材
血液
7化验方法
色素测定
8化验类别一
血液生化检查
9化验类别二
色素测定
10参考资料
《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》
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[说明]微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、刚果红染色法
![[说明]微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、刚果红染色法](https://img.taocdn.com/s3/m/20f9ca63f56527d3240c844769eae009581ba27d.png)
微晶纤维素微晶纤维素是一种纯化的、部分解聚的纤维素，白色、无臭、无味，有多孔微粒组成的结晶粉末。
微晶纤维素广泛应用于制药、化妆品、食品等行业，不同的微粒大小和含水量有不同的特征和应用范围。
制药工业：常用用作吸附剂、助悬剂、稀释剂、崩解剂。
微晶纤维素广泛应用于药物制剂，主要在口服片剂和胶囊中用作稀释剂和粘合剂，不仅可用于湿法制粒也可用于干法直接压片。
还有一定的润滑和崩解作用，在片剂制备中非常有用。
食品工业：在食品工业上可作重要的功能性食品基料—膳食纤维素，是一种理想的保健食品添加剂。
（1）保持乳化和泡沫的稳定性（2）保持高温的稳定性（3）提高液体的稳定性（4）营养补充剂和增稠剂（5）其他用途：化妆品：作为拼料，用于多种化妆品、皮肤治疗与护理用品，及清洁洗涤剂的制造。
制法：微晶纤维素可用稀无机酸溶液将α-纤维素控制水解制得，α-纤维素可从含纤维素植物的纤维浆制得。
水解后的纤维素经过滤、提纯、水浆喷雾干燥形成干的。
粒径分布广泛的多孔颗粒。
安全性：本品广泛用在口服制剂和食品中，是相对无毒和无刺激性的物质。
口服不吸收，几乎无潜在毒性。
大量使用可引起轻度腹泻，作为药物制剂辅料无困难。
滥用含纤维素的制剂，如吸入或注射给药，都会导致纤维素肉芽肿。
稳定性：本品为有吸湿性，稳定的物质。
大批量贮存应在阴凉干燥的密闭容器内。
微晶纤维素是一种纯净的纤维素解聚产物。
由天然纤维素制备，是无臭无味的结晶粉末。
产品在医药工业上可用作药物赋形剂和药片崩解剂；在食品工业上可作重要的功能性食品基料—膳食纤维素，是一种理想的保健食品添加剂；在涂料工业上利用它的触变性和增稠性可作为水基涂料的增稠剂和乳化剂；在化妆品上它集填料、增稠和乳化作用于一身，对油性物质有很好的乳化能力；在湿法制造人造革生产中作为增粘和填料使用，使人造革表面平滑、厚度均匀。
由此可见，微晶纤维素的用途十分广泛，国内对该产品的需求将不断增加。
超细食用纤维素，即微晶纤维素，简称MCC，是天然纤维素在酸性介质中水解使分子量降低到一定的范围成为尺寸约10μm左右的颗粒状粉末产品。
刚果红染色法鉴别纤维素分解菌的原理
刚果红染色法鉴别纤维素分解菌的原理下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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冰冻切片刚果红染色方法在肾活检病理诊断中的应用
冰冻切片刚果红染色方法在肾活检病理诊断中的应用
弓玉祥;陈平圣;倪海锋;伍敏;杨旻宇
【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》
【年(卷),期】2022(31)3
【摘要】目的建立肾活检组织冰冻切片刚果红染色方法,并探讨其在病理诊断中的应用价值。
方法选取肾活检诊断为淀粉样变性肾病的肾组织109例,制作冰冻切片,分别置于4%甲醛溶液、无水乙醇、Bouin液固定后,行刚果红和氧化刚果红染色,光镜观察并拍照,再与相应的石蜡切片染色结果相比较。
结果不论是石蜡切片还是冰冻切片,刚果红染色均能显示组织中沉积的淀粉样物。
石蜡切片组织结构清晰,肾小球、肾小管结构易辨认;冰冻切片组织结构松散,肾小球、肾小管结构较难辨认,但淀粉样物色彩较艳丽,耗时少。
冰冻切片经无水乙醇、Bouin液固定后,刚果红染色效果更佳。
结论冰冻切片刚果红染色可以作为病理诊断淀粉样变性肾病的备选方案,值得推广。
【总页数】5页(P289-293)
【作者】弓玉祥;陈平圣;倪海锋;伍敏;杨旻宇
【作者单位】东南大学附属中大医院肾脏病研究所;东南大学医学院病理学系
【正文语种】中文
【中图分类】R319
【相关文献】
1.肾穿刺活检石蜡切片厚度对淀粉样蛋白刚果红染色的影响
2.石蜡切片免疫荧光染色在肾活检病理诊断中的应用
3.肾活检标本冰冻切片与石蜡切片免疫荧光染色结果的比较
4.肾活检标本的冰冻切片直接免疫荧光法中冰冻切片对包埋剂的选择及应用
5.肾组织石蜡切片3种特殊染色与免疫荧光染色在肾病理活检诊断中的应用价值
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淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法)
简介：
淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官，导致的疾病称为淀粉样变。
淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。
在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝，大多随机排列。
用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。
目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold 发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。
Leagene 淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法)主要由刚果红染色液、苏木素染色液等组成。
其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力，其羟基与刚果红的氨基结合，从而使淀粉样物质染成红色。
该染色法性能稳定，是非常经典的淀粉样物质染色的方法。
组成：
自备材料：
1、10%中性福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、系列乙醇
操作步骤(仅供参考)：
1、常规固定，常采用中性福尔马林，常规脱水包埋。
2、切片厚度，常规脱蜡至水。
3、入Bennhold 苏木素，浸染。
4、酸性乙醇分化，立即入水终止分化，水洗后镜下控制至恰当程度。
编号 名称
DG0021 5×50ml Storage 试剂(A): Bennhold 苏木素染色液 50ml RT 避光 试剂(B): 酸性乙醇分化液 50ml RT 试剂(C): Scott 蓝化液 50ml RT 试剂(D): 刚果红染色液 50ml
RT 避光 使用说明书
1份
5、自来水冲洗。
6、入Scott蓝化液返蓝。
7、自来水冲洗。
8、入刚果红染色液，浸染。
9、Bennhold分化液迅速分化。
10、放入新配制的乙醇分化至红色不褪为止。
11、自来水冲洗。
12、逐级常规乙醇脱水。
二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：
淀粉样物质红色
细胞核蓝色
注: 在偏光显微镜下，淀粉样物质呈黄绿色的双折光。
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。
2、酸性乙醇分化液应密闭保存，一旦开启尽快用完。
3、刚果红染色液染色时尽量采用浸染，如果滴染，应置于湿盒防止溶液挥发。
4、Bennhold分化液分化步骤很重要，应随时注意分化程度，至无多余染料流下为止。
分化
时间较短，胶原纤维也被染成红色；分化过度，淀粉样物质也被脱色。
如果脱色过度，可以将切片清洗后重新用刚果红染色液浸染。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DG0005 糖原PAS染色液
DL0011 改良油红O染色液
IH0303 改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)
PE0103 Acr-Bis(30%,29:1)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。