免疫组化定量分析-永诺生物-3

在count/size窗口中点select color,就调出了这个segmentation工具.

点Histogram Based,还要选HIS.

在弹出的警告上点“是”。

H：0-30，S：0-255，I：0-230

设置好的选色条件也要保存的。

测量光密度时，要测量灰度图片

彩色图象上象点的强度是由红蓝绿三色混合而成，如果直接在彩色图上测量光密度，会有一个系统误差。所以正规的测量需要把图象中选取的区域外部分涂白，然后转换图象为灰度图片，再测量光密度。

选择Transparent on White，只显示选择到的区域。再点create preview image复制出一张。

将复制的图片转换成灰度图片。

对此图片再作一次选色，这次只需选择一个强度了。I：0-230

还要保存一次灰度选色设置。

3.2.2.4 好啦，点count进行测量。

看看测量统计数据。

可以把数据存入excel表格里。

3.2.2.5别急，还没完事呢。

以上测量的是选择区域内的累积光密度值IOD，但同时测量的面积却未必是正确的面积。

测量数据表里的area是图片上选择的染色区域的面积，这不一定就是我们需要的面积。

我们最终要得到的数据应该是一个平均光密度值，是IOD/area。IOD就是前面测量的IOD SUM.但面积是什么则需要认真选择的。

在需要测量整张照片染色的时候，面积就是照片面积。

如果切片只拍摄了一部分，空白处的面积则需扣除。

很多情况下，是要测量某一组织区域内的光密度。

可以使用irregular AOI工具来选择测量区域。

选择一个区域后，点New AOI再选择下一个区域。最后按下图点就行了。

点了convert to object后马上就能看到测量数据。注意这里只有area值有意义。

3.2.3免疫组化照片测量结果的统计分析

一张免疫组化照片一般能得到一个IOD或density值。 一张组织切片一般应选择几个视野，拍摄数张照片。

这样就有了几个IOD或density值。

一个实验对象要作数个组织切片。

一组实验数据应包括数个实验切片。这个实验组就有了上百张照片，它们的IOD或density值就构成了这个实验组的测量数据。可以用来进行统计分析。计算平均值与标准差，并与其他实验组进行t-检验等统计处理。

可见在进行免疫组化照片的数字化分析时，一般是要拍摄很多张照片的。