微生物基本试验原理及操作(高教知识)
微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
微生物实验报告
一、实验目的1. 学习微生物分离纯化的基本方法。
2. 掌握微生物形态观察和菌落特征鉴定技术。
3. 培养微生物实验操作技能，提高对微生物学基本知识的理解。
二、实验原理微生物分离与鉴定是微生物学实验中的基本操作。
通过分离纯化，可以获得单一菌株，便于进行后续研究。
微生物鉴定则是根据微生物的形态特征、生理生化特性等，确定其种类。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、无菌水、无菌试管、接种环、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 样品采集与处理（1）采集土壤样品，放入无菌试管中。
（2）用无菌水将土壤样品稀释10倍，制成土壤悬液。
2. 分离纯化（1）将土壤悬液取适量，涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（2）将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（3）观察菌落生长情况，挑取单个菌落，进行纯化培养。
3. 形态观察与菌落特征鉴定（1）将纯化后的菌株涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，37℃培养24小时。
（2）观察菌落形态、颜色、大小、边缘等特征。
（3）将菌落置于显微镜下观察菌体形态。
4. 生理生化特性鉴定（1）根据菌落特征，选取疑似菌种进行生理生化试验。
（2）进行糖发酵试验、氧化酶试验、甲基红试验等。
（3）根据试验结果，确定菌种。
五、实验结果与分析1. 分离纯化经过多次挑取，成功分离出多个单菌落。
2. 形态观察与菌落特征鉴定观察发现，分离出的菌株菌落呈圆形，表面光滑，边缘整齐，颜色为白色。
3. 生理生化特性鉴定经过糖发酵试验、氧化酶试验、甲基红试验等，确定分离出的菌株为乳酸菌。
六、实验总结本次实验成功分离纯化了土壤样品中的乳酸菌，并通过形态观察、菌落特征鉴定和生理生化特性鉴定，确定了其种类。
在实验过程中，掌握了微生物分离纯化的基本方法，提高了微生物实验操作技能，加深了对微生物学基本知识的理解。
七、注意事项1. 实验操作过程中，严格遵守无菌操作规程，避免污染。
微生物学实验讲义
微生物学实验讲义（2008级基地班）任课教师：熊芳教授教化时数：15学时实验周数：4周生物学实验教授教化中间微生物实验目次（15学时）微生物实验差不多常识介绍实验一：培养基的配制与灭菌（4学时）实验二：泥土自生固氮菌的分别纯化（5学时）实验三：显微镜的应用和简单染色（3学时）实验四：革兰氏染色和荚膜染色（3学时）第一次实验：微生物学实验差不多常识一、实验目标1.熟悉实验室规矩和安稳守则，精确应对实验中显现的不测变乱；2.熟悉微生物学实验室常用仪器和有关试剂的全然常识；3.操纵实验申报的精确书写。
二、实验内容1.实验室规矩；2.实验室安稳守则；3.实验室中不测变乱处理；4.常用器皿及器具；5.显微镜及有关常识；6.实验预习、实验记录和实验申报。
实验一培养基的配制和高压蒸汽灭菌设备培养基的全然流程如下：原料称量→消融→调剂pH值→过滤澄清→分装→塞硅胶塞和包扎→灭菌培养基的配制原则一、养分成分1. 依照不合微生物的养分须要配制不合的培养基，如自养型微生物的培养基完全能够（或应当）由简单的无机物质构成。
异养微生物的培养基至少须要含有一种有机物质。
碳源物质的功能：构成细胞物质；为机体供给全部心理活动所须要的能量（异养微生物）。
氮源(nitrogen source) 凡是供给微生物养分所需的氮元素的养分源，称为氮源。
氮源物质的重要感化是合成细胞物质中含氮物质，少数自养细菌能应用铵盐、硝酸盐作为机体进展的氮源与能源，某些厌氧细菌在厌氧与糖类物质缺乏的前提下，也能够应用氨基酸作为能源物质。
能源指能为微生物的生命活动供给最初能量来源的养分物或辐射能。
2. 留意各类养分物质的浓度与配比养分物的浓度：在一样情形下，浓度合适的养分物质才对微生物表示出优胜感化，浓度大年夜时对微生物进展起克制造用，浓度小时不克不及知足微生物进展的须要。
各养分物质之间的浓度比：培养基中各养分物质之间的浓度比直截了当阻碍微生物的进展与滋长和（或）代谢产品的形成与积聚，专门是碳氮比（C／N）（碳氮比一样指培养基中元素碳与元素氮的比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白两种成分含量之比）的阻碍更为明显。
微生物学实验讲义
实验一玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌一、目的要求1、熟悉微生物实验所需的各种常用器皿名称和规格；2、掌握对各种器皿清洗方法；3、掌握玻璃器皿的干热灭菌操作过程；4、了解手提式高压蒸汽灭菌锅的结构、使用方法和操作要点。
二、基本原理为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净。
保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎。
试管和三角瓶要做棉塞。
这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去做，会导致实验的失败。
因此应看作是微生物实验的基本操作。
灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物的营养体，包括芽胞和孢子。
灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。
本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。
通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。
细胞内的蛋白质凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强；湿热的蒸汽有潜热存在，从而增加灭菌效力。
三、实验器材1、吸管，试管，三角瓶，试管刷，棉花，报纸、包扎绳、去污粉等；2、手提式高压蒸汽灭菌锅。
四、实验步骤1、玻璃器皿的洗涤清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，因此，玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。
1）不能用有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用酸性溶液（2%的盐酸溶液）浸泡数小时，再用自来水冲洗干净。
2）用过的器皿应立即洗涤。
3）强酸，强碱，琼脂等能腐蚀，阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须到在废物缸内。
一般的器皿都可用去污粉，肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
沾有煤膏，焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用有机溶剂(苯，二甲苯，汽油，丙酮，松节油等)揩去。
医学微生物学实验课件
医学微生物学实验课件xx年xx月xx日contents •实验准备•细菌的分离与培养•细菌的鉴定•病毒的分离与鉴定•医学寄生虫实验•医学微生物学实验总结目录01实验准备1 2 3通过本次实验，学生将学习到微生物学实验的基本技能，包括实验操作、显微观察、分离培养等。
掌握微生物学实验基本技能通过实验过程中的生理生化反应，学生将了解微生物的生理生化特性，初步掌握微生物分类鉴定的基本方法。
了解微生物的生理生化特性通过本次实验，学生将了解微生物在医学中的应用，包括致病微生物的检测、防治和免疫等方面的应用。
认识微生物在医学中的应用微生物学实验基本原理微生物学实验的基本原理包括显微镜技术、无菌技术、分离培养技术、生理生化反应等。
这些技术的基本原理是进行微生物学实验的基础。
微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应是微生物学实验中的重要内容。
通过观察和测定微生物的生理生化反应，可以初步鉴定微生物的种类和特性。
微生物在医学中的应用微生物在医学中有着广泛的应用，例如致病微生物的检测、防治和免疫等。
通过本次实验，学生将了解这些应用的基本原理和方法。
实验前的准备包括实验器材和试剂的准备、实验室环境的消毒等。
分离培养将样品接种在适宜的培养基上，分离培养出特定的微生物。
样品采集和预处理根据实验目的和要求采集样品，并对样品进行预处理，以备后续实验使用。
生理生化反应将分离培养出的微生物接种在适宜的生理生化反应管中，观察和记录微生物的生理生化反应结果。
显微观察将样品制成涂片或压片，在显微镜下观察微生物的形态和结构。
数据分析和总结对实验数据进行整理和分析，得出结论，并撰写实验报告。
实验步骤02细菌的分离与培养选择适合细菌生长的培养基，通常包含碳源、氮源、无机盐、水等。
培养基成分按照规定的步骤，将所需成分按比例混合、溶化、调PH值、过滤、分装等步骤制备成培养基。
制备流程确保培养基的质量和无菌，需要进行灭菌处理和细菌学检测。
质量控制培养基制备根据不同的分离要求，可采用划线分离法、稀释分离法、组织研磨法等。
微生物的实验
微生物的实验实验一油镜的使用方法与革兰氏染色实验目的:掌握油镜的使用方法与革兰氏染色的方法实验原理: 革兰染色法⑴革兰阳性菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入；革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，脂质含量多，乙醇易透入。
⑵革兰阳性菌等电点（pI 2~3）比革兰阴性菌（pI 4~5）低，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，故与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。
⑶革兰阳性菌菌体含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色；革兰阴性菌含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色。
实验步骤: 1.涂片取洁净载玻片1张，用接种环取1～2环生理盐水放于载玻片上，用灭菌的接种环在固体培养基上挑取少许细菌与盐水混合，涂布成直径１cm左右的菌膜（可视挑取菌落的多少涂片范围相应变化）。
若采用液体培养物，可直接取1～2环菌液涂布。
接种环须经火焰灭菌方可放回原处，以免造成污染。
2.干燥涂片最好在室温中自然干燥，或将标本接种面向上，置酒精灯火焰高处慢慢烘干，切勿在火焰上烤。
3.固定干燥后的标本面向上迅速通过火焰3次，这样既可杀菌，又能将细菌固定在玻片上，以免玻片上细菌在染色过程中被水冲洗掉。
2.染色(1)初染：滴加结晶紫染液2～3滴于涂布细菌处，覆盖菌膜，1min后以细水漫过轻洗，将积水甩干。
(2)媒染：滴加卢戈碘液同上，1min后水洗，并将标本片上的积水甩净。
(3)脱色：加95%乙醇数滴于标本片上，轻轻摇晃数秒，斜持玻片使乙醇流掉，再滴加乙醇直至无紫色脱下为止（约30s，灵活掌握时间），细水冲洗，甩干。
(4)复染：滴加石炭酸复红染液，30s～1min后水洗，用吸水纸吸去积水。
3. 镜检用油镜观察，并判断细菌的染色性。
记录实验结果。
4.实验后处理擦干油镜镜头，整理、清洁显微镜，把显微镜放回原处，把标本片放入消毒缸中。
注意事项: 1.标本片涂的太薄或太厚，菌体分散布不均匀，都可影响染色结果。
微生物基本试验原理及操作85页PPT
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
高中微生物的培养和使用实验过程
高中微生物的培养和使用实验过程微生物的实验室培养一、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
1、种类·培养基按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
2、、化学成分包括：水、无机盐、碳源、氮源（有些可加生长因子、维生素）等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）、蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件。
3、配置原则（1）目的明确：（2）营养物质要协调，注意各营养物质的浓度和比例（3）PH要适宜，各种微生物适宜生长的PH值范围不同。
二、无菌技术：消毒和灭菌1、消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。
消毒方法：常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。
2、灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
《微生物学》实验操作大全,考研必备
目录实验一培养基的配制实验二消毒与灭菌实验三显微镜油浸系物镜的使用实验四细菌形态的观察实验五细菌的革兰氏染色实验六放线菌的形态观察实验七酵母菌的形态观察实验八霉菌的形态观察实验九细菌数量的测定(设计性实验)实验十微生物的接种方法实验一培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配置培养基的一般方法和步骤内容：1、牛肉膏蛋白胨的配制2、高氏1号培养基的配制3、马丁氏培养基的配制二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/l NaOH、1mol/l HCl、KNO3、NaCl 、K2HPO4*3H2O、MgSO4*7H2O、 FeSO4*7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.61、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯，牛肉膏极易吸潮，故称量时要迅速。
2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失水分。
3、调pH 检测培养基的pH，若偏酸，可滴加1mol/l NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用1mol/l HCl进行调节。
PH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不可调过头，以免调回影响培养基内各离子的浓度4、过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可以省略。
华中大微生物学实验讲解
华中大微生物学实验讲解实验一微生物制片及形态观察一、细菌简单染色法及形态观察（一）基本原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌丝体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料带负电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。
（二）实验材料1．菌种：大肠杆菌、酵母菌的斜面培养物。
2．染色剂：吕氏碱性美蓝、草酸铵结晶紫等。
3．仪器或其它用具：显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶，擦镜纸等。
（三）实验步骤1. 涂片：取一块载玻片，滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接环以无菌操作的方法，从菌种斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀，并涂成薄膜。
涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
2. 干燥：室温自然干燥或烘干。
3. 固定：涂面朝上，通过火焰2～3次。
此操作过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上；同时还可以杀死菌体；增加菌体与染料的结合力。
热固定温度不宜过高（以玻片背面不烫手为宜），否则会改变甚至破坏细胞形态。
4. 染色：将玻片平放于玻片搁架上，滴加1~2滴染液于涂片上。
草酸铵结晶紫染色约1 min；若用吕氏碱性美蓝、或石炭酸复红染色1～2 min。
5. 水洗：倒去染液，用自来水冲洗，直至涂片上流下的水无色为止。
水洗时，不要直接用水冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端经涂面流向另一端，水流不宜过急过大，以免涂片薄膜脱落。
6. 干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干，也可烘干。
7. 镜检：涂片干后镜检。
涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。
基础生物学实验(微生物学部分)_ 微生物基本实验操作技术篇_ 无菌操作技术_
基础生物学实验微生物学部分1 倒平板技术宦海霞原理倒平板就是火焰旁，将三角瓶中已融化的琼脂培养基倒入无菌培养皿中，然后置水平位置待凝，凝固后即成无菌培养基平板（简称平板），完成此操作的过程称为倒平板。
实验目的及原理*010203培养基其他：酒精灯，打火机，标签纸，记号笔等。
无菌培养皿若干套实验材料1右手持瓶，保持瓶口处于酒精灯火焰旁的无菌操作区域内并面向火焰。
迅速倒出瓶内融化的培养基液至无菌培养皿内。
一般倒入量为12~15ml 。
融化培养基，可用微波炉融化，也可用沸水浴融化或压力锅融化等左手取培养皿，用食指和拇指开启培养皿成一缝，恰好能让三角瓶口伸入。
倒无菌平板⏹持皿法倒无菌平板 ⏹叠皿法清洁桌面，正式倒平板前须清理与清洁台面，以减少台面尘埃，降低平板污染的概率。
盖上培养皿盖，置水平位置冷凝42方法和步骤567注意事项用于倒平板的培养基一定要彻底融化，否则会再所倒的平板培养基表面出现未融化的琼脂块。
倒平板时的培养基温度不能过高（50~60℃为宜），否则会在皿盖内侧或凝固的平板表面形成许多冷凝水，不利于单菌落的形成。
在无菌操作倒平板过程中，切忌用手抓、握三角瓶的瓶口处，以防灼热的瓶口烫伤手指，同时，手指上的微生物也会污染瓶口，进而严重污染培养基。
谢谢您的观看基础生物学实验微生物学部分2 平板划线技术张曈实验原理实验原理1 平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。
一般是将混杂在一起的不同种微生物戒同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。
通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。
在实验中，我们将平板分成A、B、C、D 4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。
因此，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。
《微生物实验》课件2
03
04
数据整理
将实验过程中收集的数据进行 分类整理，确保数据的准确性
和完整性。
数据可视化
利用图表、图像等形式将数据 呈现出来，便于观察和分析。
数据对比
将实验数据与理论值或预期值 进行对比，找出差异和规律。
数据检验
运用统计学方法对数据进行检 验，以确定数据的可靠性和有
效性。
结果解读
结果解读原则
根据实验目的和要求，结合理论知识，对实 验结果进行深入分析和解读。
结果验证
通过重复实验或对比实验，验证实验结果的 可靠性和稳定性。
结果分析
分析实验结果与理论值或预期值的差异，探 究可能的原因和影响因素。
结果应用
将实验结果应用于实际问题中，为解决实际 问题提供科学依据和指导。
实验结论
结论总结
对实验过程和结果进行总结，提炼出关键信 息和重点内容。
结论分析
对实验结论进行深入分析和探讨，探究其科 学性和实用性。
结论应用
将实验结论应用于实际生产和科学研究中， 发挥其指导作用和应用价值。
结论展望
对实验结论进行展望和预测，提出进一步研 究的方向和思路。
05
微生物实验注意事 项与安全防护
实验安全注意事项
实验前应充分了解实验原理、操 作步骤及注意事项，确保实验过
程的安全性。
实验过程中要严格遵守操作规程 ，避免交叉污染和意外事故的发
无菌操作技术
灭菌
通过加热、紫外线、化 学药剂等方法杀死物体 表面或内部的微生物。
过滤除菌
利用过滤膜去除液体或 气体中的微生物。
隔离技术
在无菌室内进行实验操 作，避免微生物污染。
清洁与消毒
定期清洁实验器具和环 境，使用消毒剂杀死微
微生物的生理生化反应实验原理及步骤
实验六微生物的生理生化反应实验目的：1．证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
2．了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。
掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
3．了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。
实验原理：微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。
这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实：淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变为深红色，说明胞外存在着脂肪酶。
微生物可以利用各种蛋白质和氨基酸作为氮源外，当缺乏糖类物质时，亦可用它们作为碳源和能源。
明胶是由胶原蛋白经水解产生的蛋白质，在25℃以下可维持凝胶状态，以固体形式存在。
而在25℃以上明胶就会液化。
有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4℃仍能保持液化状态。
还有些微生物能水解牛奶中的蛋白质酪素，酪素的水解可用石蕊牛奶来检测。
石蕊培养基由脱脂牛奶和石蕊组成，是昏浊的蓝色。
酪素水解成氨基酸和肽后，培养基就会变得透明。
石蕊牛奶也常被用来检测乳糖发酵，因为在酸存在下，石蕊会转变为粉红色，而过量的酸可引起牛奶的固化(凝乳形成)。
氨基酸的分解会引起碱性反应，使石蕊变为紫色。
此外，某些细菌能还原石蕊，使试管底部变为白色。
尿素是由大多数哺乳动物消化蛋白质后被分泌在尿中的废物。
尿素酶能分解尿素释放出氨，这是一个分辨细菌很有用的诊断实验。
(整理)微生物实验操作
油镜的使用和维护目的：掌握油镜的使用与维护，熟悉油镜的使用原理。
材料：显微镜，拭镜纸，液体石蜡油，二甲苯原理：油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射入镜筒的光线极少，视野暗，物象不清晰。
如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物象。
步骤：显微镜油镜的使用和维护1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。
识别油镜头：标有100×、OIL、HI等字样。
2. 打开电源，用低倍镜对光，打开光圈，调节聚光镜的位置，使视野光线充足。
3. 标本上加镜油一滴，转动粗螺旋，使油镜头缓缓下降，用眼从侧面观察，直到油镜头浸入油中接近玻片为止。
4. 从目镜观察，同时徐徐转动粗螺旋提升，见模糊物象后再用细螺旋调节，直到见到清晰物象为止。
5. 观察完毕，粗螺旋提高镜头，取下标本片，油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。
如油已干，可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭，并立即用另一擦镜纸擦去二甲苯，因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。
6.将镜头转呈“八”字，调低聚光器，对号送入柜子内存放。
革兰染色目的：掌握革兰染色的原理及操作。
材料：干净玻片，接种环，葡萄球菌和大肠杆菌18-24h 培养后的混合菌液，酒精灯，一套革兰染液原理：主要为细胞壁结构的差异。
G+三维肽聚糖结构的交联度大，通透性低，脂质少或无，酒精作用使孔径缩小；而G-肽聚糖为二维疏松结构，薄，外膜含大量脂质，易被酒精溶解，使细胞壁通透性增高，结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。
步骤：1. 细菌标本的制作（1）涂片：无菌操作。
取一接种环混合细菌悬液，涂布成直径约1cm的涂片，涂片应薄而均匀。
（2）干燥：涂片最好在室温中自然干燥。
必要时可将标本面向上，放在酒精灯上方微火处干燥。
（3）固定：标本面向上，在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次，放置待冷后染色。
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14
结果
代谢类型 发酵型 氧化型 产碱型
加蜡封口管 开放管
产酸
产酸
不变色
产酸
不变色
不变色
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15
糖醇发酵试验
原理：各种细菌因含有发酵不同 糖、醇类的酶，所以分解糖、醇 类的能力各不相同。分解糖、醇 类后产生的代谢产物可因菌种不 同而异，有的产酸、产气，有的 仅产酸，故用于鉴别细菌。
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29
胆汁七叶苷试验
原理：在10-14%胆汁存 在下，测定细菌水解葡 萄糖苷七叶苷为七叶亭 和葡萄糖的能力。
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30
胆汁七叶苷培养基成分
蛋白胨 5g
牛肉浸膏 3g
牛胆汁（胆汁）40g
七叶苷 1g
柠檬酸铁 0.5g
琼脂
15g
蒸馏水 1000ml
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31
结果：培养基变为黑色或 深褐色为阳性。有生长物 时，并不表示七叶苷裂解， 仅表示胆汁浓度不能抑制D 群链球菌外的细菌生长。
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10
碳水化合物的代谢试验
氧化-发酵试验（OF试验）
糖醇发酵试验
B—半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
甲基红试验
VP试验
胆汁七叶苷试验
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11
氧化-发酵试验（OF试验）
原理：细菌在分解葡萄糖的过
程中，必须有分子氧参加的称
为氧化型；在无氧条件下降解
葡萄糖的称为发酵型；不分解
葡萄糖的细菌称为产碱型。利
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16
糖、醇类试验培养基成分
蛋白胨水或肉膏汤 100ml 所需的糖、醇或苷类 0.5或1g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 0.1ml
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17
结果
接种的细菌，若能耐分解培 养基中的糖类产酸时，则使 培养基中的指示剂呈酸性反 应。若产气可使半固体培养 基内或液体培养基中的倒管 内出现气泡。若不分解则无 变化。
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22
葡萄糖蛋白胨水培养基成分
多价蛋白胨 7g
葡萄糖
5g
磷酸氢二钾 5g
蒸馏水
1000ml
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23
方法：被检菌接种于上 述培养基内，于35℃培 养48小时，于2ml培养液 内加甲基红指示剂2滴， 立即观察结果。
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24
结果：红色为阳性；桔 红色为弱阳性；黄色为 阴性。
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25
微生物基本试验原理及操作
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1
微生物基本试验
碳源和氮源利用试验 碳水化合物的代谢试验 各种酶类试验 氨基酸和蛋白质代谢试验
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2
碳源和氮源利用试验
柠檬酸盐试验 葡萄糖酸盐试验
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3
柠檬酸盐试验
原理：有些细菌能利用柠檬酸盐 作为唯一碳源，分解柠檬酸钠生 成碳酸钠，使培养基呈碱性。能 利用柠檬酸盐作唯一碳源的细菌， 也能利用铵盐作为唯一氮源，铵 盐被分解为氨而产生碱性。
VP试验
原理：有些细菌在葡萄糖的代谢过
程中生成丙酮酸，丙酮酸进一步脱
羧后可产生乙酰甲基甲醇。乙酰甲
基甲醇在碱性溶液中被空气的氧氧
化为二乙酰（丁二酮），进而与培
养基内蛋白胨中的精氨酸所含的胍
基发生反应，生成红色化合物，即
VP反应阳性。培养基中的胍基太少
时，加入少量含胍基的化合物，如
肌酸或肌酸酐等，可加速此反应。
用此试验可以区别细菌的代谢
类型。
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12
Hugh-Leifson二氏培养基（O-
F培养基）成分
蛋白胨 2g
磷酸氢2钾0.3克
氯化钠 5g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香酚蓝溶液 12ml
琼脂
2.5g
蒸馏水 1000ml
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13
方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 二 支 Hugh-Leifson 培 养 基 的 试 管 中 ，
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7
方 法 ： 接 种 大 量 待 检 菌 于 培养基内，35，24-48小时， 0.5ml培养基加班氏试剂3滴
左右，加热煮沸后观察结 果。
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8
葡萄糖酸盐蛋白胨肉汤成分
蛋白胨 0.15g 酵母浸膏 0.1g 磷酸二氢钾 0.1g 葡萄糖酸钾（或钠）4g 蒸馏水 100ml
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9
结果：出现黄色到橙 红色沉淀为阳性，无 颜色变化为阴性。
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18
B—半乳糖苷酶试验（ONPG 试验）
原理：有的细菌可产生B-半乳糖 苷酶，此酶可分解邻-硝基酚-BD- 半 乳 糖 苷 （ ONPG）。ONPG 为无色，经B-半乳糖苷酶水解后， 可产生黄色的邻硝基酚，即使浓 度很低也能检出。
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19
结果
呈 现 黄 色 为 阳 性 反 应 。 迅 速 及迟缓分解乳糖的细菌ONPG 试验为阳性，本试验可作为 迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴 定方法。
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32
各种酶类试验
过氧化氢酶（触酶）试验
氧化酶试验
血浆凝固酶试验
硝酸盐还原试验
胆汁溶解试验
环腺苷酸（cAMP）试验
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33
过氧化氢酶（触酶）试验
原理：有些细菌具有过 氧化氢酶，能将过氧化 氢酶分解为水。
试剂：3%过氧化氢溶液。
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34
方法：①玻片法：用牙签挑取 18～24小时培养的菌苔，置于 洁净的玻片上，滴加3%过氧化 氢溶液1～2滴。②试管法：取 不含血液的18～24小时培养物 一接种环于试管内，加入1ml 3%过氧化氢溶液。3%过氧化氢 溶液应置于棕色瓶内冷藏。
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20
甲基红试验
原理：某些细菌在糖代谢过程中，
分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 可进一步被分解为甲酸、乙酸、 乳酸等，而使培养基的pH下降至 4.5以下，加入甲基红指示剂出现 红色（阳性）。
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21
甲基红试验
原理：有些细菌分解葡萄糖产酸 量少，或产生的酸进一步转化为 其它物质（如醇、酮、醛、气体 和水），则培养基的酸碱度仍在 6.2以上，故加入甲基红指示剂呈 黄色（阴性）。
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26
试剂：甲液：6%a-萘酚乙醇溶液
乙液：40%氢氧化钾溶液
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27
方法：将被检菌接种葡萄糖 蛋白胨水培养基后，于35培 养48小时，于2ml培养基内 加入甲液1ml和乙液0.4ml， 振摇后观察结果。
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28
结果：于数分钟内呈红
色为阳性；如无红色出 现，而且于35℃中4小时
后仍如故者即为阴性。 本试验较为敏感。
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4
西蒙氏柠檬酸盐培养基成分
MgSO4-7H2O 0.2g
NH4H2PO4 1g
K2HPO4
1g
柠檬酸钠
5g
氯化钠
5g
琼脂
20g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml
蒸馏水
1000ml
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5
结果：阳性者表面上 长有菌落，培养基 变为蓝色。
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6
葡萄糖酸盐试验
原 理 ： 检 查 细 菌 是 否 具 有 氧化葡萄糖作为唯一碳源， 并具有还原2-酮基葡萄糖酸 盐与班氏试剂混合加热生 成黄红色酮类的能力。