甲钴胺片清洁验证分析方法研究

甲钴胺片清洁验证分析方法研究

目的建立甲钴胺片清洁验证分析方法及取样方法。方法采用高效液相法，以Hypersil ODS2-C18（5 μm，4.6×150 mm）为色谱柱，以0.05 mol/L乙酸铵溶液-乙腈（83∶17）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为266 nm，进样量为20 L，柱温30 ℃。结果甲钴胺对照品溶液在检测浓度0.03～1.60 μg/mL 范围内线性关系良好（r=0.999），且回收率符合要求（回收率为99%）。结论该方法简便、准确、重复性好，灵敏度高，可用于甲钴胺片清洁验证药品残留量的检测。

标签：甲钴胺片;清洁验证;方法学

Research on Validated Analytical Method of Mecobalamin Tablets Cleaning

XU Peng-he1，ZHANG Ting2，YU Yong-hua3，HUA Jie1，LEI Jin-jing1

1.Hangzhou Conba Pharmaceutical Co.，Ltd，Hangzhou，Zhejiang Province，310052 China;

2.Hangzhou New Allen Biotechnology Co. Ltd，Hangzhou，Zhejiang Province，310052 China;

3.Hangzhou new Novartis Pharmaceutical Co.，Ltd. Hangzhou，Zhejiang Province，310052 China

[Abstract] Objective To establish a validated analytical method of mecobalamin tablets cleaning and sampling method. Methods The high performance liquid chromatography was adopted with Hypersil ODS2-C18（5 μm，4.6×150 mm）column，with 0.05 mol/L ammonium acetate solution- acetonitrile（83∶17）as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The absorbance was monitored at 266 nm. The injection volume was 20 μl and the column temperature was 30 ℃. Results The liner correlation of mecobalamin contrast solution was good from the 0.03 μg/mL to 1.60 μg/mL detection concentration R=0.999，and the recycle rate met the requirement （the recycle rate was 99%）. Conclusion The method is simple and accurate with good repeatability and high sensitivity，which can be used in the detection of mecobalamin tablets in the cleaning validation of drug residue.

[Key words] Mecobalamin tablets; Cleaning validation; Methodology

甲钴胺是一种内源性的辅酶B12，临床用于治疗周围神经病。本品最早有卫材研发上市，国内上市剂型常见有片剂、胶囊和注射液，其中以片剂市场占有率最高。杭州康恩贝制药有限公司生产的甲钴胺片规格为0.5 mg。目前尚未有文献表明相关的清洁验证方法报道，工艺生产的清洁验证其含量及浓度均较低，而甲钴胺见光易分解，因此在检测过程中易引起多种偏差。中国药典2015版及现有文献中甲钴胺均采用高效液相色谱法进行含量测定，但色谱条件如流动相及检测波长[1]等均存在多样化。该文采用高效液相色谱法对甲钴胺片进行生产清洁验证分析方法开发及验证，并对样品进行分析测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Waters，e2695/2498）;电子分析天平（Mettler-Toledo，XS105Dualrange）;pH计（Mettler-Toledo，DELTA320），除湿机（杭州弘泰电器有限公司）。

1.2 试药

乙腈（TEDIA，批号16030553，HPLC级）;乙酸铵（国药集团化学试剂有限公司，批号20151207，分析纯）;磷酸（上海凌峰化学试剂有限公司，批号20141218，分析纯）;纯化水（Milli-Q integral 10）。甲钴胺（20160115，浙江省食品药品检定研究院标化）。棉签（稳健医疗集团有限公司）;水系滤头（Φ2.5 cm，0.45 μm，上海昊清科技有限公司）。

2 方法及结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Hypersil ODS2-C18 （5 μm，4.6×150 mm），流动相为0.05 mol/L 乙酸铵溶液-乙腈（83∶17）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为266 nm，进样量为20 L，柱温30 ℃[2]。2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液制备取甲钴胺对照品28～200 mL量瓶中，精密称定，加水振摇使溶解并至刻度;精密量取1 mL，置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得甲钴胺对照品储备液（浓度约2.8 μg/mL）。精密量取5～20 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度约0.7 μg/mL）。

2.2.2 供试品溶液制备取两个用水湿润的棉签，轻轻压住，在100 cm2的不锈钢设备表面按图1擦拭，擦拭结束后旋转90°，按图2擦拭，再取一个用水润湿的取样棉签按相同方法擦拭1次。

图1 擦拭方向（横向）图2 擦拭方向（纵向）

将擦拭后的2个棉签置烧杯中，精密量取10 mL水，超声10 min;棉球挤干后取出，以0.45 μm水系滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 系统适用性取对照品溶液照上述色谱条件连续进样5针，以峰面积计，应符合标准要求：五针峰面积RSD≤2.0%，理论板数>200 0，分离度R>1.5。结果：五针峰面积RSD为0.7%，理论踏板数均>2000，分离度均>1.5。