分子生物学实验教案详细教案PPT课件
分子生物学实验技术ppt课件
质粒转化大肠杆菌的过程
感受态
非定向克隆 +
或
定向克隆
克隆的片段只能按
+ 特定方向连接基因组DNA的构建基因组DNA的类型
质粒(﹤10kb)噬菌体质经双向电泳之后,用蛋白质水解酶裂解成肽段,可 用于质谱分析。通过电离源将蛋白质分子转化为气相离子, 然后用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比 值(M/Z值)的蛋白离子分离开,经过离子检测器收集分离 的离子,确定离子的M/Z值,分析鉴定未知蛋白质。
两种离子发生方法: 基质辅助激光解吸附/离子化(MALDI)、电喷雾离子化 (ESI)
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是将编码目的蛋白的基 因与编码噬菌体表面蛋白的基因融合后, 以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面的一 种技术。
将不同蛋白的cDNA插入噬菌体载体进 行表达,得到表达不同蛋白的一定规模的 噬菌体展示库 。
将“诱饵”蛋白固定化,基于“诱饵”蛋白与 “猎物”蛋白之间的相互作用,可将展示库 中与固定化的“诱饵”蛋白有相互作用的“猎 物”蛋白分离纯化出来,再对“猎物”蛋白进 行质谱鉴定。
四、蛋白组学研究
蛋白质分离 蛋白质分析 蛋白质相互作用的研究方法: 酵母双杂交技术,噬菌体展示技术,表
面等离子共振技术,荧光共振能量转移 技术,蛋白质微阵列芯片技术,免疫共 沉淀技术,pull-down技术
蛋白质分离
最常用的蛋白质分离技术是20世纪70年代发明的双 向电泳(2-DE),是根据蛋白质的等电点不同在pH 梯度介质中进行第一次分离,即等点聚焦(IEF),然 后根据蛋白质分子量的不同进行第二次分离,即 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
重叠延伸PCR原理
重叠延伸PCR技术由于使用了具有互补末端的引物, 使PCR 产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过 重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。可 简单迅速的将两个DNA片段连在一起,用于嵌合基因的构 建
分子生物学实验 ppt课件
ppt课件
1
实验流程一
ppt课件
2
实验安排
准备材料:重组工程菌目标蛋白的表达 第1次 菌体超声破壁、离心、包涵体复性、装 离子交换柱 第2次 测酶活、定蛋白、 离子交换层析 第3次 亲和柱层析,并对收集样 品进行测活、定蛋白等 第4次 对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析 第5次 Western blotting, 绘出分离纯化表 ppt 绘制包涵体复性曲线 课件
ppt课件 23
B瓶 1N NaCl 100ml
A瓶 0N NaCl 100ml
ppt课件
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操作要点
1)在梯度洗脱仪中的洗脱瓶A(混合器)和洗脱瓶B(贮存器)
内各装入100毫升缓冲液Ⅰ和缓冲液Ⅱ(注意加溶液的方法),
注意液面应处于同一水平面,同时应排除连接管内的气泡 2) 开动梯度洗脱仪中的电磁搅拌器开关,调节搅拌速度,以 混合器内缓冲液旋转而无明显旋涡为宜 3) 将洗脱瓶A、洗脱瓶B与层析柱上端连接管道打开,同时将
O
对硝基苯酚磷酸酯 p-NPP
O O
-
-
Na+ Na+
碱性磷酸酶
O
- P
OH 对硝基苯酚
p-NP
NO2
NO2
以对硝基酚磷酸二钠为底物,根据水解磷酯键所产生的对 硝基酚量测定酶活力。在37℃、pH10.0条件下,每分钟转 化产生1μ mol/L对硝基酚的酶量为1个酶单位
ppt课件 6
每10秒记一个数(0、10、20、……120) 将时间及其对应的A405导入EXCEL文档中, 做时间t—A405曲线,得到斜率,
ppt课件 20
层析操作一般过程
装柱、平衡、上样、洗涤、洗脱、合并样品 上样前后样品活性测定---当天测定 上样前后蛋白浓度测定---最后一天测定
关于分子生物学实验课件
CLEC 4M基因序列
实验原理
• 原理:用裂解液和蛋白酶K裂解口腔黏膜细胞,释放DNA, 用浓盐法沉淀蛋白质,离心去除蛋白质,再用异丙醇沉淀 DNA。
• 裂解液配方: • 10mM Tris-HCl,10mM KCl, 10mM MgCl2, 2mM EDTA,
0.4M NaCl, 1%SDS.
关于分子生物学实验
基因多态性
多态性是指在一个生物群体中,同时和经常存 在两种或多种不连续的变异型或基因型(genotype) 或等位基因(allele),亦称遗传多态性(genetic polymorphism)或基因多态性。
DNA片段长度多态性 基因多态性 DNA重复序列多态性
单核苷酸多态性
DNA片段长度多态性(FLP):
即由于单个碱基的缺失、重复和插入所引起限制性 内切酶位点的变化,而导致DNA片段长度的变化,又称限 制性片段长度多态性。
DNA重复序列的多态性(RSP) :
主要表现于重复序列拷贝数的变异 ,如小卫星DNA 和微卫星DNA。
单核苷酸多态性(SNP) :
即散在的单个碱基的不同,基因组中单核苷酸的缺 失,插入与重复序列不属於SNP,但更多的是单个碱基的置 换。
2×PCR mix ddH2O 引物1,引物2
2×PCR mix 引物1,引物2 DNA样品 ddH2O
10μl 各0.4μl
3μl 6.2μl
PCR反应体系, 总共20 μl
在PCR管盖置程序
变性 30循环
延伸
95℃ 5min 95℃ 20s 59℃ 30s 72℃ 45s 72℃ 5min
CLEC 是C type lectin(C型凝集素)家族基因
CLEC4M基因是19号染色体上C型凝集素家族中的一 员,它被证明是多种传染性疾病病毒的受体,如HIV-1, SARS-Cov, HCV等。该基因的第4外显子的VNTR (Variable Number of Tandem Repeats,VNTR )在全球人类群体中存
分子生物学课件ppt
转基因技术
转基因技术是将外源基因导入生物体,实现基因的过 表达或补充。转基因技术的关键在于选择合适的载体 和导入方法。
THANKS
感谢观看
基因编辑技术的应用
基因编辑技术在许多领域都有广泛的应用,如罕见病治疗、癌症免疫治疗、农业育种等。 通过基因编辑技术,可以实现对特定基因的敲除、敲入或修饰,以达到治疗或改良的目的 。
基因编辑技术的伦理问题
虽然基因编辑技术具有巨大的潜力,但也引发了伦理和法律等方面的争议。在应用基因编 辑技术时,需要充分考虑伦理和法律问题,确保技术的合理应用和规范发展。
发展趋势
基因组学、蛋白质组学、代谢组学等 多组学研究,跨学科交叉融合,生物 信息学和计算生物学的发展等。
02
分生物学基本概念
基因与DNA
基因
基因是生物体内携带遗传信息的最小 单位,负责编码蛋白质或RNA分子 。
DNA
DNA是生物体的主要遗传物质,由四 种不同的脱氧核苷酸组成,通过特定 的序列排列储存遗传信息。
高通量测序
高通量测序是指一次可以对大量DNA或RNA分子进行序列测定的技术。高通量测序技术极大地提高了 基因组学和转录组学研究的效率,为生物医学研究提供了强大的工具。
04
分子生物学应用
生物医药研究
01
02
03
药物设计与开发
利用分子生物学技术,研 究药物与靶点的相互作用 ,提高药物的疗效和降低 副作用。
分子生物学前沿研究
表观遗传学研究
01
表观遗传学研究
表观遗传学是研究基因表达的调控机制,通过研究DNA甲基化、组蛋
白修饰等机制,揭示基因表达的调控规律,以及环境因素对基因表达的
影响。
02
分子生物学实验课PPT曾令江XXX1116
五、分子生物学实验课—课程准备
1、清洗培养皿、三角瓶等,包装灭菌。清洗研钵并烘干备用。(5班)
2、分装10ul(白色)、200ul(黄色)、1000ul(蓝色)枪 头并高压灭菌( 2班)
3、分装200ul、10mlEP管并高压灭菌。(2班)
4、配置100mlCTAB抽提液:配方见黑板。(5班)
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
四、分子生物学实验课—课程考核
1、本课程为考查科目。总成绩为100分,由考勤、 实验过程表现(个人)、小组平时成绩(各实验环节 结果)、实验报告四部分组成,分别占总成绩的20﹪、 20﹪、 20﹪、 40﹪。
2、实验报告的写作按照毕业论文的格式,包括:标 题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结 果与分析、实验总结(体会)等,每个实验小组提交一 份实验报告。
分子生物学实验课PPT-曾令江-XXXX1116
2020/11/10
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
内容提要
1
分子生物学实验----课程介绍
2
分子生物学实验----课程内容
3
分子生物学实验----课程要求
4
分子生物学实验----课程考核
5
分子生物学实验----课程准备
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
二、分子生物学实验—课程内容
实验一、DNA的提取及检测 实验二、PCR扩增目的基因及检测 实验三、目的基因片段的回收、连接 实验四、大肠杆菌DH5感受态细胞的制备 实验五、连接产物的转化、筛选及PCR检测 实验六、质粒DNA的抽提、酶切(生工专业选作) 实验七、RNA的抽提与检测(生科专业选作)
分子生物学课件(共51张PPT)
蛋白质局部主链的空间结构, 包括α-螺旋、β-折叠等。
三级结构
整条肽链中全部氨基酸残基的 相对空间位置Байду номын сангаас即整条肽链每 一原子的相对空间位置。
四级结构
由两条或两条以上的多肽链组 成的一类结构,每一条多肽链
都有完整的三级结构。
蛋白质的功能与分类
结构蛋白:作为细胞的结构,如膜蛋白,染色体蛋白等 。 酶:催化生物体内的化学反应。
分子生物学是生物学的重要分支
01
分子生物学以生物大分子为研究对象,揭示生命现象的分子基
础,是生物学的重要分支之一。
分子生物学推动生物学的发展
02
分子生物学的发展推动了生物学的研究从细胞水平向分子水平
深入,为生物学的发展提供了新的理论和技术支持。
分子生物学与其他学科的交叉融合
03
分子生物学与遗传学、生物化学、微生物学、免疫学等学科存
。
表观遗传学调控
通过改变染色质结构和DNA 甲基化等方式来调控基因表达
。
05
蛋白质的结构与功能
蛋白质的分子组成
氨基酸
蛋白质的基本组成单元,共有20 种标准氨基酸。
肽键
连接氨基酸之间的主要化学键。
辅基与辅酶
某些蛋白质还包含辅基或辅酶, 以辅助其功能的发挥。
蛋白质的结构层次
一级结构
指蛋白质中氨基酸的排列顺序 。
重组DNA分子的构建和 筛选
PCR技术及其应用
01
02
PCR技术的基本原理和步骤
引物的设计和选择
03
04
PCR反应体系和条件优化
PCR技术在DNA扩增、突变 分析、基因分型等领域的应用
基因克隆与基因工程
2024《分子生物学全套》ppt课件
ppt课件contents •分子生物学概述•基因与基因组结构•DNA复制与修复机制•转录与翻译过程调控•蛋白质组学与代谢组学研究方法•现代分子生物学技术应用•生物信息学在分子生物学中应用•分子生物学前沿领域及未来发展趋势目录分子生物学概述分子生物学定义与特点分子生物学定义分子生物学特点以分子为研究对象,阐明生命现象的本质;与多学科交叉融合,推动生命科学的发展;实验技术手段不断更新,提高研究效率和准确性。
分子生物学发展历程早期发展阶段现代分子生物学阶段分子生物学研究内容及方法研究内容研究方法基因与基因组结构基因概念及功能基因功能基因定义基因通过编码蛋白质或参与生物体的各种生理和生化过程,从而控制生物的性状和表现。
基因分类基因组组成与结构特点基因组定义基因组是指一个生物体内所有基因的总和。
基因组组成基因组包括编码区和非编码区,其中编码区包含结构基因和调控基因,非编码区则包含一些重要的调控元件和重复序列。
基因组结构特点不同生物的基因组具有不同的结构特点,如原核生物基因组较小且连续,真核生物基因组较大且存在大量的重复序列和间隔区。
转录后水平调控转录后水平调控主要涉及mRNA 的加工、剪接、运输和降解等过程,通过这些过程可以影响mRNA 的稳定性和翻译效率。
基因表达概念基因表达是指基因转录成mRNA ,再翻译成蛋白质的过程。
基因表达调控机制生物体通过多种机制对基因表达进行调控,包括转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控和表观遗传调控等。
转录水平调控转录水平调控是最主要的基因表达调控机制,包括启动子、增强子、沉默子等顺式作用元件和反式作用因子的相互作用。
基因表达调控机制DNA复制与修复机制DNA复制过程及影响因素DNA复制过程影响因素DNA损伤类型及修复方式损伤类型包括碱基错配、单链断裂、双链断裂、碱基修饰等,这些损伤可能导致遗传信息的改变或丢失。
修复方式包括直接修复、切除修复、重组修复和跨损伤修复等,这些修复方式能够识别和修复DNA损伤,维护基因组的稳定性。
《分子生物学》课件
基因编辑实验室
展示现代基因编辑实验室的设 备和技术。
基因治疗
探讨基因编辑技术在治疗遗传 病和癌症中的潜力。
生物信息学与计算生物学
大数据分析
使用生物信息学和计算生物学的工具来分析 海量生物数据。
蛋白质结构预测
通过模拟和计算来预测和研究蛋白质的结构 和功能。
3 基因修复与修复机
制
探讨基因损伤修复和细 胞保护机制在环境暴露 中的作用。
生物多样性与保护
生物多样性
解释生物多样性的重要性和全球生物多样性状 况。
保护生物多样性
讨论保护生物多样性的 分子标记物
液体活检
通过PCR和测序技术检测基因突变和遗传病。
《分子生物学》PPT课件
《分子生物学》PPT课件大纲: 1. 介绍分子生物学概念 2. DNA和RNA结构与功能 3. 蛋白质的合成与结构 4. DNA复制和细胞分裂 5. 基因表达与转录 6. RNA加工修饰 7. 蛋白质翻译和折叠 8. 基因调控及表观遗传学
基因编辑与CRISPR技术
CRISPR Cas9
介绍分子标记物在疾病诊断和治疗中的应用, 如肿瘤标志物。
探讨液体活检在肿瘤诊断和监测中的潜力。
分子生物学的社会影响
1 伦理和法律问题
讨论基因编辑和遗传修 复等技术引发的伦理和 法律问题。
2 公众教育和意识
强调公众了解分子生物 学的重要性和科学素养 的培养。
3 医疗与健康
探讨分子生物学在医疗 和健康领域的革命性发 展。
基因组学研究
利用计算方法研究基因组结构、功能和进化。
网络生物学
通过构建和分析生物网络来揭示生物体内的 复杂关系。
分子生物学全套课件(2024)
2024/1/26
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蛋白质在细胞中的作用
蛋白质可以作为酶催化生物体内 的化学反应,维持生命活动的正 常进行。
蛋白质可以作为载体运输物质, 如血红蛋白运输氧气和二氧化碳 。
蛋白质可以作为抗体参与免疫反 应,保护机体免受病原体的侵害 。
蛋白质是细胞结构和功能的基础 ,参与细胞的各种生命活动,如 催化、运输、免疫、调节等。
2024/1/26
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基因表达调控的分子机制
DNA结合蛋白的作用
识别并结合特定DNA序列,影响基因转录。
染色质结构与基因表达
染色质结构的变化可影响基因的可及性和转 录活性。
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信号转导与基因表达调控
细胞外信号通过信号转导途径影响基因表达 。
转录后调控机制
包括mRNA剪接、转运、定位和降解等过程 对基因表达的调控。
比较基因组学分析
通过比较不同物种或不同个体之间的基因组差异,揭示物种进化、基 因功能等生物学问题。
生物信息学在基因组学中的应用
利用生物信息学方法对基因组数据进行挖掘和分析,发现新的基因、 突变位点以及与疾病相关的遗传变异等。
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THANK YOU
感谢观看
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DNA的复制与修复
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02
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DNA复制的过程
起始、延伸和终止三个阶 段,涉及多种蛋白质和酶 的参与。
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DNA复制的特点
半保留复制、半不连续复 制等。
DNA修复的机制
直接修复、切除修复、重 组修复和SOS修复等,用 于纠正复制过程中产生的 错误。
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DNA的转录与表达
医学分子生物学PPT课件
基因组特点
基因组具有高度的复杂性 和多样性,同时不同生物 之间的基因组存在显著的 差异。
基因表达调控机制
基因表达概念
基因表达是指基因转录成mRNA并翻 译成蛋白质的过程。
表观遗传学调控
表观遗传学调控是指通过DNA甲基化、 组蛋白修饰等方式对基因表达进行调 控,但不改变DNA序列本身。
基因表达调控
生物体通过多种机制对基因表达进行 精确调控,包括转录水平调控、转录 后水平调控和翻译水平调控等。
05
蛋白质组学研究方法及应 用
蛋白质组学概念及研究内容
蛋白质组学定义
研究生物体或特定细胞类型中所有蛋 白质的科学,包括蛋白质表达、结构、 功能和相互作用等方面。
蛋白质组学研究内容
包括蛋白质表达谱、蛋白质翻译后修饰、 蛋白质相互作用网络等。
蛋白质分离纯化技术
双向凝胶电泳
利用蛋白质的等电点和分子量差 异进行分离,具有高分辨率和高
数据库资源搜索策略
数据库类型
包括核酸序列数据库、蛋白质序列 数据库、结构数据库、基因组数据 库等。
搜索策略
根据研究目的和数据类型,选择合 适的数据库和搜索工具,制定有效 的搜索策略,以获取准确、全面的 数据资源。
序列比对和注释方法
序列比对
通过比较两个或多个生物分子序列的相似性和差异性,来推断它们的结构、功 能和进化关系。常用的序列比对方法包括全局比对和局部比对。
程。
microRNA
通过与mRNA结合,抑 制翻译过程或促进 mRNA降解。
表观遗传调控
通过DNA甲基化、组蛋 白修饰等方式,调控基
因表达。
异常情况对生理功能影响
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转录和翻译异常 导致蛋白质合成异常,影响细胞功能和代谢。
分子生物学(全套课件396P)pptx
DNA修复机制包括直接修复、 切除修复、重组修复和SOS修 复等,用于维护DNA分子的完 整性和稳定性。
PART 03
RNA结构与功能
REPORTING
RNA种类及特点
mRNA(信使RNA)
携带遗传信息,指导蛋白质合成。
rRNA(核糖体RNA)
与蛋白质结合形成核糖体,是蛋白质合成的 场所。
tRNA(转运RNA)
分子生物学(全套课件 396P)pptx
REPORTING
• 分子生物学绪论 • DNA结构与功能 • RNA结构与功能 • 蛋白质合成与功能 • 基因表达调控机制 • DNA损伤修复与重组技术
目录
PART 01
分子生物学绪论
REPORTING
分子生物学定义与发展
分子生物学的定义
在分子水平上研究生物大分子的结 构和功能,究生物大分子的结构和功能方面有很多交 叉,但分子生物学更侧重于在分子水平上揭示生命现象的本质。
与细胞生物学的关系
分子生物学与细胞生物学在研究细胞的结构和功能方面密切相关,但 分子生物学更侧重于研究细胞内的分子机制和信号传导。
与医学的关系
分子生物学在医学领域有着广泛的应用,如基因诊断、基因治疗和药 物研发等,为医学的发展提供了重要的理论和技术支持。
THANKS
感谢观看
REPORTING
识别并携带氨基酸,参与蛋白质合成。
其他非编码RNA
如microRNA、siRNA等,参与基因表达调 控。
RNA转录后加工与修饰
01
02
03
04
5'端加帽
在mRNA的5'端加上甲基鸟嘌 呤帽子结构,保护mRNA不被
降解。
3'端加尾
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⑤灭菌所需时间到后,切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表 的压力降至“0”时,打开排气阀,旋松螺栓。打开盖子,取出灭菌 物品。
压力一定要降到“0”时,才能打开排气阀,开盖取物。否则就会因 锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出瓶 口,造成棉塞沾染培养基而发生污染,甚至灼伤使用者。
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【思考题】
1.高压蒸气灭菌之前,为什么要将锅内冷空气 排尽?灭菌完毕后,为什么待压力降低到 “0”时才能打开排气阀,开盖取物?
2.移液操作应注意哪些事项?
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【LB培养基的制备及灭菌】
【实验目的】 通过对LB培养基的配制,掌握配制培养 基的一般方法和步骤。
③加盖,并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称 的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺旋松紧一致,务使漏气。
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④ 用电加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的空气。待冷空 气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上 升。当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。 本实验用0.11MPa,121.5℃,20min灭菌。
分子生物学实验
湖北省生物学实验教学示范中心 2010年10月
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1
实 验 内 容
实验一 实验准备及培养基的制备与灭菌 实验二 质粒DNA的提取 实验三 质粒DNA的酶切和检测 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验五 DNA重组(连接反应) 实验六 植物DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测 实验七 PCR基因扩增
【实验原理】
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LB培养基
是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养 基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生 物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供 无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
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⑤将平衡好的离心管对称放入转头内。盖好转头盖子拧紧螺丝。 ⑥按下离心机盖门,如盖门未盖牢,离心机将不能启动。 ⑦按START键,开始离心。离心开始后(特别是高速离心时)应等离心
速度达到所设的速度时才能离开,一旦发现离心机有异常(如不平 衡而导致机器明显震动,或噪音很大),应立即按STOP键,必要时 直接按电源开关切断电源,停止继续离心,并找出原因。 ⑧机器如发现故障,请及时与有关人员联系。 ⑨使用结束后请清洁转头和离心机腔,不要关闭离心机盖,利于湿气蒸 发。 ⑩使用结束后必须登记,注明使用情况。
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⑥将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时,经检查若无杂 菌生长,即可待用。
5. 实验室安全与卫生 6. 分组:5人一大组,2~3人一小组,一个实验桌1套移液枪 7.准备:
每组蓝枪头和黄枪头各1盒,全班另加2包,EP管1盒或1包,30ml离心 管12个,培养皿10个,全班1000ml的LB培养基 8. 实验报告与成绩评定 平时成绩50%:考勤,实验操作,实验结果,预习报告 考核成绩50% :实验报告
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4.手提式高压蒸气灭菌锅的使用来自注意事项①首先将内层锅取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁 架相平为宜。切物忘记加水,同时加水量不可过少,以防灭菌锅 烧干而引起炸裂事故。
②放入内层锅,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免妨碍蒸 气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触, 以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
微量移液器的操作步骤: ①将微量移液器装上吸头(不同规格的移液器用不同的吸头) ②将微量移液器按钮轻轻压至第一停点;
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③垂直握持微量移液器,使吸嘴浸入液样面下几毫米,千万不要将吸嘴 直接插到液体底部; ④缓慢、平稳地松开控制按钮,吸上样液。否则液体进入吸嘴太快,导 致液体倒吸入移液器内部,或吸入体积减少; ⑤等一秒钟后将吸嘴提离液面 ⑥平稳地把按钮压到第一停点,再把按钮压至第二停点以排出剩余液体; ⑦提起微量移液器,使吸嘴在容器壁擦过;
⑧然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。
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量液操作注意事项
a. 连续可调移液器的取用体积调节要轻缓,严禁超过最大或最小量程; b. 在移液器吸头中含有液体时禁止将移液器水平放置,平时不用时置
移液器于架上; c. 吸取液体时,动作应轻缓,防止液体随气流进入移液器的上部; d. 在吸取不同的液体时,要更换吸头; e. 移液器要进行定期校准,一般由专业人员来进行。
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离心机的摆放位置
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3. 移液器的使用
移液器是生化与分子生物学实验室常用的小件精密设备,移液器 能否正确是用,直接关系到实验的准确性与重复性,同时关系到 移液器的使用寿命。
移液器由联系可调的机械装置和可替换的吸头组成,不同型号的 移液器吸头有所不同,实验室常用的移液器根据最大吸用量有 20ul, 200ul, 1ml等规格。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下 面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通 常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质 量和气温的不同而有所不同。
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2
实验一 实验准备及培养基制备与灭菌
【实验目的】
主要掌握离心机、微量移液器及高压灭菌锅的使用 机及实验操作注意事项
【实验准备内容】
1.实验准备: 器皿清洗、试剂配制、灭菌分装、取用保存 2. 离心机的使用 ①打开离心机电源开关,进入待机状态。 ②选择合适的转头 ③离心管平衡误差应在0.1克以内。 ④选择离心参数: