DNA提取实验报告

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DNA提取与测序实验报告

DNA提取与测序实验报告

DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。

2、熟悉 DNA 测序的操作流程和数据分析。

二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的形式存在。

提取 DNA 的基本原理是利用化学试剂和物理方法,破坏细胞膜和核膜,使蛋白质变性,从而将 DNA 从细胞中释放出来,然后通过离心等方法将 DNA 与其他杂质分离。

DNA 测序原理DNA 测序是指测定 DNA 分子中核苷酸的排列顺序。

目前常用的测序方法是 Sanger 双脱氧链终止法。

在测序反应中,DNA 聚合酶在模板的引导下,将脱氧核苷酸(dNTP)逐个加到引物的3’OH 末端,合成新的 DNA 链。

当加入双脱氧核苷酸(ddNTP)时,由于其3’位置没有羟基,不能继续延伸,导致 DNA 链合成终止。

通过在不同的反应管中分别加入不同的 ddNTP,产生一系列长度不同的 DNA 片段。

这些片段经过电泳分离和检测,根据片段的长度和末端碱基,就可以确定 DNA 的序列。

三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织(如肝脏、肌肉等)或植物组织(如叶片、幼嫩茎尖等)。

2、蛋白酶 K、RNase A、TrisHCl、EDTA、NaCl、SDS、酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇、70%乙醇等。

实验设备1、高速冷冻离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、电泳仪5、凝胶成像系统6、 DNA 测序仪四、实验步骤DNA 提取1、样品处理取适量的新鲜动物或植物组织,放入液氮中迅速冷冻,然后用研钵研磨成粉末。

将粉末转移至离心管中,加入适量的裂解缓冲液(含蛋白酶 K),在 55℃水浴中孵育 1-3 小时,直至组织完全裂解。

2、去除蛋白质和 RNA加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),轻轻颠倒离心管混合均匀,然后在高速冷冻离心机中以 12000 rpm 离心 10 分钟。

吸取上清液至新的离心管中,加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1),再次颠倒混合均匀,以 12000 rpm 离心 10 分钟。

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化实验报告:DNA 提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从不同生物样本中提取和纯化 DNA 的方法,并对提取的 DNA 进行质量检测和分析。

通过本实验,深入了解DNA 的性质和特点,为后续的分子生物学实验,如 PCR 扩增、基因测序等提供高质量的 DNA 模板。

二、实验原理DNA 是生物体遗传信息的携带者,存在于细胞核和细胞器中。

提取 DNA 的基本原理是利用细胞裂解液破坏细胞膜和核膜,使 DNA 释放出来,然后通过一系列的物理和化学方法将 DNA 与其他细胞成分(如蛋白质、RNA 等)分离,并进行纯化。

在本实验中,我们采用了酚氯仿抽提法和乙醇沉淀法相结合的方法。

酚氯仿可以有效地去除蛋白质,而乙醇沉淀则可以使 DNA 从溶液中析出。

三、实验材料与试剂(一)实验材料1、新鲜的动物肝脏组织2、植物叶片(二)实验试剂1、细胞裂解液(含 TrisHCl、EDTA、SDS 等)2、蛋白酶 K3、酚氯仿(1:1)混合液4、无水乙醇5、 70%乙醇6、 NaCl 溶液7、 TE 缓冲液(含 TrisHCl、EDTA)(三)实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、紫外分光光度计5、电泳仪及电泳槽四、实验步骤(一)动物肝脏组织 DNA 的提取1、取约 05g 新鲜的动物肝脏组织,用剪刀剪碎,放入预冷的匀浆器中,加入 5ml 细胞裂解液,匀浆至组织完全破碎。

2、将匀浆液转移至离心管中,加入100μl 蛋白酶 K(20mg/ml),轻轻混匀,置于 55℃水浴锅中保温 1-2 小时,期间不时轻轻摇动。

3、加入等体积的酚氯仿混合液,颠倒混匀,12000rpm 离心 10 分钟。

4、小心吸取上层水相,转移至新的离心管中,加入 2 倍体积的无水乙醇,轻轻混匀,可见白色的 DNA 沉淀出现。

5、 12000rpm 离心 5 分钟,弃上清液,保留沉淀。

6、加入 1ml 70%乙醇,轻轻洗涤沉淀,12000rpm 离心 5 分钟,弃上清液。

dna提取及测定实验报告

dna提取及测定实验报告

dna提取及测定实验报告DNA 提取及测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取 DNA 的方法,并对提取的 DNA 进行浓度和纯度的测定,以了解样本中 DNA 的质量和数量。

二、实验原理DNA 是遗传信息的携带者,存在于细胞核和线粒体等细胞器中。

在提取 DNA 的过程中,需要破碎细胞,使 DNA 释放出来,然后通过一系列的化学和物理方法去除蛋白质、RNA 等杂质,从而获得纯净的DNA 。

DNA 在 260nm 处有特征性的吸收峰,其吸收值与 DNA 的浓度成正比。

同时,通过测定 260nm 和 280nm 处的吸光度比值(A260/A280),可以评估 DNA 的纯度。

纯 DNA 的 A260/A280 比值约为 18。

三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜的动物肝脏组织裂解液(包含 TrisHCl、EDTA、NaCl 等)蛋白酶 K无水乙醇氯仿:异戊醇(24:1)RNA 酶TE 缓冲液(TrisHCl、EDTA)2、实验仪器高速冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计微量移液器离心管玻璃棒四、实验步骤1、样本处理称取约 05g 新鲜的动物肝脏组织,用剪刀剪碎后放入匀浆器中,加入适量的裂解液,充分匀浆。

2、消化蛋白质将匀浆液转移至离心管中,加入蛋白酶 K 至终浓度为100μg/ml,在 55℃水浴锅中孵育 1-2 小时,期间不时轻轻搅拌,以充分消化蛋白质。

3、去除蛋白质和 RNA加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻颠倒离心管充分混匀,然后在 4℃下以 12000rpm 离心 15 分钟。

吸取上清液至新的离心管中,加入 2 倍体积的无水乙醇,轻轻颠倒离心管,可见白色的 DNA 沉淀出现。

4、洗涤 DNA将沉淀用 70%的乙醇洗涤 2 次,每次在 4℃下以 12000rpm 离心 5 分钟,去除上清液。

5、溶解 DNA待乙醇挥发干净后,加入适量的 TE 缓冲液溶解 DNA ,置于 4℃冰箱保存备用。

dna提取实验报告

dna提取实验报告

dna提取实验报告DNA提取实验报告。

实验目的,通过本实验,掌握DNA提取的基本原理和操作技能,了解DNA 提取在生物学研究中的重要性。

实验材料与方法:1. 实验材料,酚-氯仿(25:24)、异丙醇、乙醇、盐酸、乙酸、蛋白酶K、磷酸盐缓冲液、蒸馏水等。

2. 实验仪器,离心机、振荡器、恒温水浴、显微镜等。

3. 实验步骤:a. 细胞破碎,取适量细胞悬液,加入盐酸和蛋白酶K,振荡破碎。

b. DNA沉淀,加入酚-氯仿混合液,离心分离上清液和沉淀层。

c. DNA沉淀洗涤,加入异丙醇,离心沉淀,去除上清液。

d. DNA溶解,加入磷酸盐缓冲液,用蒸馏水稀释,得到DNA提取液。

实验结果与分析:1. 实验现象,在DNA提取过程中,观察到细胞破碎后的混浊液经过酚-氯仿提取后,上清液呈现清澈的状态,沉淀层为白色颗粒状物质。

2. 实验分析,DNA提取液中含有DNA,经过酚-氯仿提取和异丙醇沉淀,成功获得了DNA提取物。

实验结论:通过本次实验,成功提取到了DNA,并初步了解了DNA提取的原理和操作步骤。

DNA提取是生物学研究中的重要基础工作,对于后续的分子生物学实验具有重要意义。

实验注意事项:1. 实验过程中应注意操作规范,避免污染和损失。

2. 实验中使用的试剂和仪器应符合实验要求,避免影响实验结果。

3. 实验后应及时清洗实验台和仪器,保持实验环境整洁。

总结:DNA提取实验是生物学实验中的基础操作,掌握好DNA提取的原理和技能对于后续实验具有重要意义。

通过本次实验,我对DNA提取有了更深入的了解,也提高了实验操作的技能。

希望通过不断实验和学习,能够更好地运用DNA提取技术,为生物学研究做出更大的贡献。

(以上内容为虚构内容,仅供参考)。

DNA提取与测序实验报告

DNA提取与测序实验报告

DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。

2、熟悉 DNA 测序的基本流程和操作要点。

3、学会对 DNA 提取和测序结果进行分析和评估。

二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的状态存在。

提取 DNA 的基本思路是通过裂解细胞,使细胞膜和核膜破裂,释放出 DNA,然后去除蛋白质、RNA 等杂质,得到纯净的 DNA。

常用的裂解方法包括物理方法(如研磨、超声破碎)、化学方法(如使用去污剂)和酶解法(如使用蛋白酶K)。

去除杂质的方法则包括使用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等。

DNA 测序原理目前常用的 DNA 测序技术是 Sanger 测序法。

其基本原理是在DNA 合成过程中,通过掺入特定的双脱氧核苷酸(ddNTP)来终止DNA 链的延伸。

由于 ddNTP 缺少3’OH 基团,一旦掺入到 DNA 链中,链的延伸就会终止。

通过在多个反应中分别加入不同的 ddNTP,可以得到一系列不同长度的 DNA 片段。

这些片段经过电泳分离,根据条带的位置可以读取 DNA 的碱基序列。

三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织(如肝脏、肌肉)或植物组织(如叶片)。

2、细胞培养物(如细菌、酵母)。

实验试剂1、细胞裂解液(包含去污剂、蛋白酶 K 等)。

2、酚/氯仿/异戊醇混合液(25:24:1)。

3、无水乙醇、70%乙醇。

4、 TE 缓冲液(10 mM TrisHCl,1 mM EDTA,pH 80)。

5、 DNA 测序试剂盒(包含引物、dNTP、ddNTP、DNA 聚合酶等)。

实验设备1、离心机。

2、移液器。

3、恒温水浴锅。

4、电泳仪。

5、凝胶成像系统。

6、 DNA 测序仪。

四、实验步骤DNA 提取步骤1、样本处理对于动物组织,将其剪碎后加入适量的裂解液,在匀浆器中匀浆。

对于植物组织,先在液氮中研磨成粉末,然后加入裂解液。

对于细胞培养物,离心收集细胞,加入裂解液重悬。

dna提取实验报告分析

dna提取实验报告分析

dna提取实验报告分析DNA 提取实验报告分析一、引言DNA 提取是分子生物学研究中的一项基础且关键的技术。

通过从细胞中分离和纯化 DNA,可以为后续的基因分析、疾病诊断、遗传研究等提供重要的材料。

本次实验旨在探讨一种常用的 DNA 提取方法,并对实验结果进行详细的分析。

二、实验材料与方法(一)实验材料1、新鲜的植物叶片(如菠菜叶)或动物组织(如鸡血)。

2、提取试剂盒(包含裂解液、蛋白酶 K、缓冲液、乙醇等)。

3、离心机、移液器、微量离心管、水浴锅等实验设备。

(二)实验方法1、样本处理植物叶片:称取一定量的新鲜叶片,洗净、剪碎后放入研钵中,加入液氮充分研磨成粉末。

将粉末转移至离心管中。

动物组织:取适量的鸡血,加入抗凝剂,离心去除血浆,收集血细胞。

2、细胞裂解向离心管中加入裂解液和蛋白酶 K,充分混匀,在 55℃水浴中孵育一段时间,使细胞充分裂解,蛋白质变性。

3、 DNA 沉淀加入适量的缓冲液,混匀后加入预冷的无水乙醇,轻轻颠倒离心管,可见白色的 DNA 絮状物沉淀出现。

4、 DNA 洗涤将离心管离心,倒掉上清液,保留沉淀。

加入适量的 70%乙醇洗涤沉淀,再次离心去除乙醇。

5、 DNA 溶解室温干燥沉淀后,加入适量的 TE 缓冲液或去离子水溶解 DNA,置于-20℃保存备用。

三、实验结果与分析(一)DNA 浓度和纯度的测定使用紫外分光光度计测定提取的 DNA 在 260nm 和 280nm 处的吸光度值(A260 和 A280)。

通常,A260/A280 的比值在 18 20 之间表示DNA 纯度较高。

若比值小于 18,可能存在蛋白质污染;若比值大于20,则可能存在 RNA 污染。

实验中得到的A260/A280 比值为185,表明提取的DNA 纯度较好,基本没有蛋白质和 RNA 的污染。

同时,根据 A260 值,结合公式计算出 DNA 的浓度为_____ng/μL。

(二)琼脂糖凝胶电泳分析将提取的 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳,在凝胶成像系统中观察电泳结果。

提取和分析DNA实验报告

提取和分析DNA实验报告

提取和分析DNA实验报告DNA提取是生物学实验中的重要步骤,有助于从各种生物组织中分离出DNA并进行后续分析。

本实验旨在提取DNA样本,并通过凝胶电泳等方法对提取得到的DNA进行分析,以验证提取的DNA质量和纯度。

1. 实验材料与仪器实验所需材料包括DNA提取试剂盒、离心管、显微管、琼脂糖凝胶、电泳槽等。

实验仪器包括显微镜、电泳仪等。

2. 实验步骤(1)样本处理:将待检测样本加入DNA提取试剂盒中,根据试剂盒说明书进行细胞破碎、蛋白酶处理等步骤,将DNA溶解于缓冲液中。

(2)DNA沉淀与收集:通过离心加速DNA沉淀的过程,最终在离心管底部形成DNA沉淀。

(3)洗涤与溶解:分离DNA沉淀后,进行多次洗涤,并最终将DNA溶解于适量缓冲液中。

(4)凝胶电泳分析:在琼脂糖凝胶中进行凝胶电泳,通过电场作用使DNA在凝胶中移动,根据DNA条带特征分析样本DNA的大小和纯度。

3. 实验结果与分析通过凝胶电泳结果可以清晰地观察到不同大小的DNA条带,根据标准DNA分子量Marker的位置,可以估算待测DNA片段的大小。

如果实验操作正确,提取得到的DNA应具有良好的纯度和完整性,且无附加杂质。

若实验存在操作失误或污染等问题,则可能导致DNA提取不完整或DNA受损,影响到后续结果的准确性。

4. 实验总结与展望DNA提取与分析是生物学研究中不可或缺的重要环节,有效的DNA提取和分析技术能够为后续实验提供可靠的数据基础。

在今后的实验中,我们将进一步完善实验操作技巧,提高DNA提取的效率和准确性,以应对更复杂的研究需求。

通过本次实验,我们成功实现DNA的提取与分析,验证了实验设计的有效性,并积累了丰富的操作经验,为今后的生物学研究工作奠定了基础。

DNA提取实验的重要性在于为科研和临床诊断提供了坚实的理论支持和实验数据,为生命科学领域的发展和进步发挥着重要作用。

DNA提取与分析实验的成功展示了科学实验的严谨性和方法的重要性,同时也提醒我们在实验操作中应保持谨慎与耐心,以获得准确可靠的实验结果。

dna的粗提取实验报告

dna的粗提取实验报告

dna的粗提取实验报告DNA的粗提取实验报告引言DNA(脱氧核糖核酸)是生物体中负责遗传信息传递的分子,它的提取是进行分子生物学实验的基础步骤之一。

本实验旨在通过简单的方法提取DNA,并观察提取效果。

材料与方法材料:- 植物组织(如洋葱、豆芽等)- 高渗盐溶液(含有盐分的溶液,如食盐溶液)- 咖啡过滤纸- 酒精(酒精浓度为70%)- 水方法:1. 将植物组织切碎,使细胞破裂,释放DNA。

2. 将切碎的植物组织放入一个容器中,加入高渗盐溶液,搅拌均匀。

3. 将搅拌后的溶液过滤,使细胞碎片和其他杂质被滤掉,得到澄清的液体。

4. 将澄清的液体倒入一个试管中,加入等量的酒精,并缓慢倾斜试管,使酒精与液体缓慢混合。

5. 观察酒精与液体的交界面,可以看到白色的DNA沉淀。

6. 使用酒精漂浮在DNA沉淀上方的方法,将DNA转移到另一个容器中。

7. 加入适量的水,溶解DNA。

结果与讨论通过上述方法,我们成功地从植物组织中提取到了DNA。

观察到的白色沉淀物就是DNA,其形状呈线状或颗粒状。

实验过程中,我们注意到以下几个现象:1. 细胞破裂:切碎植物组织的过程中,细胞膜被破坏,使DNA从细胞内释放出来。

这一步骤的重要性在于提供了DNA的来源。

2. 高渗盐溶液:高渗盐溶液的作用是破坏细胞膜和核膜,使DNA从细胞内释放出来。

高渗盐溶液中含有盐分,可以改变细胞内外的渗透压,进而破坏细胞膜和核膜。

3. 过滤:通过过滤,我们可以去除细胞碎片和其他杂质,得到澄清的液体。

这一步骤的目的是减少后续操作中DNA沉淀的杂质。

4. 酒精沉淀:加入酒精后,DNA会从溶液中沉淀出来。

酒精与溶液的混合过程中,DNA会聚集在交界面上形成白色沉淀物。

这是因为DNA在酒精中不溶,而且比较重,所以会沉淀下来。

5. DNA的溶解:将DNA从酒精中转移到水中后,加入适量的水,使DNA溶解。

DNA在水中溶解后,呈现出透明的溶液。

本实验采用的是粗提取方法,所得到的DNA并不纯净。

人类基因组dna的提取实验报告

人类基因组dna的提取实验报告

人类基因组dna的提取实验报告
人类基因组DNA的提取实验报告
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础性技术之一。

本次实验旨在从人类细胞中提取DNA,并通过多种方法进行检测和分析。

以下是实验的详细过程和结果。

实验材料与方法:
1.材料:人类细胞样本、细胞裂解液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、等渗盐溶液、乙醇、TE缓冲液、琼脂糖、DNA标准品。

2.方法:
(1)取100μl人类细胞样本,加入细胞裂解液中进行细胞破裂。

(2)加入蛋白酶K使细胞膜和蛋白质降解。

(3)加入异丙醇使DNA沉淀,离心去除上层液体。

(4)加入氯仿和等渗盐溶液,离心分离DNA纯化。

(5)加入乙醇沉淀DNA。

(6)加入TE缓冲液重溶DNA。

(7)用琼脂糖凝胶电泳法分离DNA并检测。

实验结果:
经过琼脂糖凝胶电泳分离,成功提取了人类细胞的DNA样本。

在电泳结果中,能够明显地看到DNA条带的形成,表明DNA的提取和纯化过程都比较成功。

为了进一步检测DNA的纯度和浓度,我们使用了多种方法,如吸光度测定、荧光染料检测等。

实验结果表明,提取出的DNA纯度较高,浓度也较为理想。

结论:
通过本次实验,我们成功地提取了人类细胞的DNA,并对其进行了检测和分析。

这为我们后续的研究提供了重要的基础。

同时,实验还说明了DNA提取技术的重要性和应用广泛性,不仅在分子生物学和遗传学领域有着广泛的应用,也在医学和生物工程等领域具有重要的价值。

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化实验报告:DNA 提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取并纯化 DNA,以获取高纯度、高质量的 DNA 用于后续的分子生物学实验,如 PCR 扩增、基因测序等。

二、实验原理DNA 存在于细胞核内,与蛋白质等成分结合形成染色质。

在提取过程中,需要通过裂解细胞,使 DNA 释放出来,然后去除蛋白质、RNA 等杂质,从而获得纯净的 DNA。

常用的提取方法包括酚氯仿抽提法、盐析法、硅胶膜吸附法等。

本次实验采用的是试剂盒提取法,其原理是基于硅胶膜对 DNA 的特异性吸附,在特定的缓冲液条件下,DNA 能够结合到硅胶膜上,而蛋白质、多糖等杂质则被去除。

经过洗涤去除杂质后,用洗脱液将 DNA 从硅胶膜上洗脱下来,从而得到纯化的 DNA。

三、实验材料与设备1、实验材料新鲜的动物组织(如肝脏、肌肉)植物叶片细菌培养液DNA 提取试剂盒无水乙醇异丙醇氯仿蛋白酶 KRNA 酶 A2、实验设备离心机移液器恒温振荡器电泳仪紫外分光光度计四、实验步骤1、样本处理动物组织:称取适量的动物组织,剪碎后加入裂解液和蛋白酶 K,在 55℃恒温振荡器中孵育,直至组织完全裂解。

植物叶片:取新鲜的植物叶片,用液氮研磨成粉末,加入提取缓冲液和蛋白酶 K,在 65℃水浴中孵育。

细菌培养液:离心收集细菌沉淀,加入裂解液和溶菌酶,重悬后在37℃孵育。

2、 DNA 提取将处理后的样本加入到吸附柱中,离心使液体通过吸附柱,DNA 被吸附到硅胶膜上。

加入洗涤液,离心洗涤吸附柱,去除杂质。

加入洗脱液,离心洗脱 DNA,收集洗脱液。

3、 DNA 纯化向洗脱液中加入等体积的异丙醇,混匀后离心沉淀 DNA。

用 70%的乙醇洗涤 DNA 沉淀,离心去除乙醇。

干燥 DNA 沉淀,用适量的 TE 缓冲液溶解 DNA。

4、 DNA 质量检测取少量 DNA 溶液,用紫外分光光度计测定其在 260nm 和 280nm 处的吸光度,计算 A260/A280 的比值,以评估 DNA 的纯度。

dna提取实验报告

dna提取实验报告

dna提取实验报告导言:DNA(脱氧核糖核酸)是人类和其他生物体遗传信息的重要载体。

通过DNA提取实验可以从细胞中分离出DNA,从而进一步研究其结构和功能。

本实验旨在探究DNA提取的原理、步骤和应用,并通过亲自进行实验,加深对DNA提取的理解。

一、DNA提取原理DNA提取的原理基于细胞膜的破裂、细胞核的裂解以及DNA 与其他细胞组分的分离。

这一过程主要包括细胞溶解、DNA纯化和DNA溶解等步骤。

细胞溶解:通过加入试剂体系(如洗涤缓冲液和洗涤液)破坏细胞膜,使细胞内的DNA暴露于溶液中。

DNA纯化:利用盐离子和洗涤液等的特性,将DNA与其他细胞组分分离。

DNA会在高盐浓度下溶于溶液中,而其他细胞组分则难以溶解。

DNA溶解:通过加入合适的缓冲液,使DNA能够在溶液中稳定存在。

二、实验过程1. 实验材料准备本实验所需材料包括:细胞样本、洗涤缓冲液、细胞裂解缓冲液、洗涤液、溶解缓冲液等。

2. 细胞裂解挑选合适的细胞样本(如洋葱或口腔黏膜)并切碎,将细胞样本放入细胞裂解缓冲液中,用细研针搅拌裂解。

3. 细胞裂解液处理加入洗涤缓冲液,并轻轻翻转试管使细胞溶液均匀混合,之后离心离心管以分离上清液和沉淀。

4. DNA纯化将清液转移到新的离心管中,并加入洗涤液。

轻轻翻转试管混合,离心离心管以分离清液和沉淀。

5. DNA溶解将沉淀加入溶解缓冲液中,轻轻翻转试管使其溶解。

三、实验结果与分析通过实验,我们可以观察到DNA溶液呈现出粘稠的透明液体,且能够延展成长丝状。

这表明我们成功从细胞中提取出了DNA。

DNA提取在生物学领域有着广泛的应用。

首先,DNA提取是遗传学研究的基础。

通过DNA提取,可以对生物个体的基因组进行分析,从而了解遗传信息,研究基因突变和遗传疾病等。

其次,DNA提取也常用于法医学和人类学中的个体鉴定。

通过对DNA进行分析,可以确保正确地辨认出身份,并用于破案和家族追溯等方面。

结论:通过本次实验,我们了解了DNA提取的原理和步骤,并成功从细胞中提取出了DNA。

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从给定的生物样本中提取并纯化 DNA,以获取高纯度、高质量的 DNA 样品,为后续的分子生物学实验,如 PCR 扩增、基因测序等提供可靠的材料。

二、实验原理DNA 存在于细胞核内,与蛋白质等物质结合形成染色质。

在提取过程中,需要通过细胞裂解、去除蛋白质和其他杂质等步骤来分离DNA。

细胞裂解可以使用物理方法(如研磨、超声破碎)或化学方法(如使用裂解液)。

去除蛋白质常用的方法有蛋白酶 K 消化和酚/氯仿抽提。

DNA 在一定浓度的盐溶液中可溶解,而在乙醇中会沉淀,利用这一特性可对其进行纯化。

三、实验材料与试剂(一)实验材料新鲜的动物组织(如肝脏、肌肉)或植物叶片。

(二)实验试剂1、细胞裂解液:包含 TrisHCl、EDTA、SDS 等成分,用于破坏细胞膜和核膜,释放 DNA。

2、蛋白酶 K:能分解与 DNA 结合的蛋白质。

3、酚/氯仿/异戊醇混合液:用于去除蛋白质。

4、无水乙醇、70%乙醇:用于沉淀和洗涤 DNA。

5、 NaCl 溶液:提供适当的离子强度。

6、 TE 缓冲液(TrisEDTA 缓冲液):用于保存 DNA。

(三)实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、涡旋振荡器5、冰箱6、紫外分光光度计四、实验步骤(一)样本处理1、动物组织:将新鲜的动物组织剪碎,放入匀浆器中,加入适量的裂解液,匀浆至组织完全破碎。

2、植物叶片:取适量新鲜叶片,液氮研磨成粉末,加入裂解液。

(二)细胞裂解1、将处理好的样本转移至离心管中,在 55℃水浴中孵育 1 2 小时,期间每隔一段时间轻轻涡旋振荡,以促进细胞裂解。

(三)去除蛋白质1、加入蛋白酶 K,使其终浓度达到一定值,在 55℃继续孵育 1 2小时。

2、冷却至室温后,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液,充分混匀,然后在离心机中以一定的转速离心一定时间。

3、吸取上清液至新的离心管中,重复酚/氯仿抽提步骤 1 2 次,直至中间层无白色蛋白质沉淀。

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告:DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一,能够从样本中纯化出DNA,用于后续的分析和实验。

本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法,并对提取结果进行分析和评估。

二、实验步骤1. 样本准备:选择合适的样本进行DNA提取,如植物组织、动物组织或微生物培养物。

样本应储存于-80℃的冰箱中,以防止DNA降解。

2. 细胞破碎:将样本取出,加入细胞破碎缓冲液,使用均质机或研钵等方法将细胞破碎,使细胞膜被破坏,释放DNA。

3. 蛋白酶处理:加入蛋白酶,将样本中的蛋白质降解,以去除蛋白质的干扰。

4. 酚/氯仿提取:加入等体积的酚/氯仿混合液,混匀后离心,使混合液分为上下两层,上层为DNA上清液。

5. DNA沉淀:将DNA上清液转移至新离心管中,加入等体积的冷异丙醇,轻轻颠倒混匀,待DNA逐渐沉淀出来。

6. 洗涤:使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物,以去除异丙醇和其他杂质。

7. 重溶:将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶,使其溶解。

8. 定量和纯化:使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度,并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。

三、结果分析通过以上步骤,我们成功提取了DNA,并进行了初步的纯化。

下面是对实验结果进行分析和评估:1. DNA提取效果评估:- 可见分光光度计测定DNA浓度:根据光度计读数,我们可以计算出DNA的浓度。

通常,越高的读数代表着更高的DNA浓度。

- 凝胶电泳:通过凝胶电泳,我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。

理想情况下,DNA应该呈现出清晰的条带,并且没有明显的降解现象。

2. 实验结果评价:- DNA浓度:根据光度计读数,我们可以评估DNA提取的效果。

如果浓度较高,说明提取效果较好;如果浓度较低,说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。

- DNA完整性:通过观察凝胶电泳结果,我们可以评估提取的DNA是否完整。

dna提取实验报告

dna提取实验报告

dna提取实验报告DNA提取实验报告。

实验目的,通过本实验,掌握DNA提取的基本原理和方法,了解DNA在生物学研究中的重要性。

实验材料和仪器,鸡蛋白、盐酸、乙醇、玻璃棒、试管、离心机、恒温水浴。

实验步骤:1. 取一只鸡蛋,打破蛋壳,将鸡蛋白倒入试管中。

2. 加入少量盐酸,轻轻摇匀,使鸡蛋白变得透明。

3. 将试管放入恒温水浴中,加热至60摄氏度,恒温10分钟。

4. 取出试管,用玻璃棒搅拌均匀,使蛋白凝固。

5. 加入同体积的乙醇,轻轻摇匀,观察到白色絮状物沉淀于试管底部。

6. 将试管放入离心机,离心5分钟,离心后可见白色DNA沉淀于试管底部。

实验结果与分析:通过以上实验步骤,成功从鸡蛋中提取出了DNA。

实验中,盐酸的作用是使蛋白质变得透明,加热则是使蛋白质凝固,乙醇的加入则有利于DNA的沉淀。

离心机的使用则能够使DNA更好地沉淀于试管底部。

通过本实验,我们不仅了解了DNA提取的基本原理和方法,也对DNA在生物学研究中的重要性有了更深刻的认识。

实验总结:DNA提取实验是生物学实验中的基础实验,通过本实验的操作,我们深入理解了DNA提取的原理和方法,也对DNA在生物学研究中的应用有了更直观的认识。

在今后的学习和科研中,我们将进一步深入研究DNA的结构和功能,探索更多关于DNA的奥秘。

实验注意事项:1. 实验中应注意个人安全,避免盐酸和乙醇的直接接触。

2. 恒温水浴的温度应控制在60摄氏度,避免过高温度损坏DNA。

3. 实验操作时应轻柔,避免对DNA的损伤。

通过本次实验,我们对DNA提取有了更深入的了解,也为今后的生物学研究打下了坚实的基础。

DNA作为生命的密码,其重要性不言而喻,希望通过我们的努力,能够揭开更多关于DNA的奥秘,为人类的生命科学研究做出更大的贡献。

动物组织提取实验报告(3篇)

动物组织提取实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。

2. 熟悉实验操作流程,包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。

3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA,并掌握相关试剂和仪器的使用。

二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。

提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,同时保持DNA分子的完整性。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA,其原理如下:1. 使用SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K处理组织,破坏细胞膜,使蛋白质变性并溶解。

2. 加入酚和氯仿/异戊醇,通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性,使蛋白质和DNA分离。

3. 通过离心,将蛋白质和杂质与DNA分离。

4. 用乙醇沉淀DNA,得到纯净的DNA。

三、实验材料1. 实验动物:小鼠或鸡2. 试剂:SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织(如肝脏、肌肉等),用液氮迅速冷冻。

- 将冷冻的组织移入研钵中,加入适量的裂解缓冲液(含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等),用研钵研磨至匀浆状。

- 将匀浆移入离心管中,加入等体积的酚和氯仿/异戊醇,充分混匀。

- 4℃下静置30分钟,待蛋白质变性沉淀。

2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟,弃去上清液。

- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液,充分混匀。

- 再次以12,000 rpm离心10分钟,弃去上清液。

3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇,混匀后静置2-3分钟。

- 将沉淀移入新的离心管中,以12,000 rpm离心5分钟。

- 弃去上清液,用75%乙醇洗涤沉淀1次。

- 将沉淀干燥,加入适量的TE缓冲液溶解。

4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤,去除杂质。

- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。

dna提取 实验报告

dna提取 实验报告

dna提取实验报告DNA提取实验报告引言:DNA提取是生物学和分子生物学中的一项基础实验技术,通过提取和纯化DNA 分子,可以进一步进行DNA测序、PCR扩增、基因克隆等分子生物学实验。

本实验旨在探究DNA提取的原理和方法,并通过实际操作来提取和纯化DNA分子。

材料与方法:1. 实验材料:鸡蛋、酒精、洗涤剂、盐、蛋白酶K、蒸馏水等。

2. 实验步骤:a. 将鸡蛋壳剥离,取出蛋黄与蛋白。

b. 将蛋黄放入容器中,加入适量的洗涤剂和蒸馏水,充分混合。

c. 加入盐和蛋白酶K,轻轻搅拌,使其充分溶解。

d. 将溶液倒入离心管中,离心10分钟,使得DNA沉淀到离心管底部。

e. 倒掉上层液体,加入冰冷的酒精,轻轻晃动离心管,观察DNA沉淀的形成。

结果与讨论:通过以上实验步骤,我们成功地提取到了DNA分子。

在实验过程中,洗涤剂和蛋白酶K的作用是破坏细胞膜和细胞核膜,使DNA释放出来。

盐的加入可以中和DNA周围的带电离子,使其沉淀。

冰冷的酒精则提供了一个适合DNA沉淀的环境。

DNA提取是分子生物学实验中的关键步骤,其成功与否直接影响后续实验的结果。

在实际操作中,需要注意以下几点:1. 实验材料的质量和纯度对结果有重要影响,因此需要选择优质的鸡蛋和纯净的试剂。

2. 操作过程中要严格遵守无菌操作,避免外源性DNA的污染。

3. 需要注意实验仪器的消毒和清洁,以防止实验结果的干扰。

4. 实验过程中要轻柔操作,避免DNA的断裂或损伤。

DNA提取的成功与否还与样本的类型有关。

在本实验中,我们选择了鸡蛋作为样本,因为鸡蛋中含有大量的DNA分子。

而在实际应用中,可以从不同的生物样本中提取DNA,如血液、植物叶片等。

不同样本的DNA提取方法可能会有所差异,需要根据具体样本的特点进行相应的优化。

DNA提取技术的不断发展和改进,为分子生物学和生物技术的研究提供了强有力的支持。

通过提取和纯化DNA分子,我们可以进一步进行基因测序、基因克隆、遗传病诊断等研究工作。

dna的粗提取与鉴定实验报告

dna的粗提取与鉴定实验报告

dna的粗提取与鉴定实验报告DNA 的粗提取与鉴定实验报告一、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。

2、学习并掌握 DNA 鉴定的基本技术。

二、实验原理1、 DNA 在氯化钠溶液中的溶解度随氯化钠浓度的变化而改变。

在014mol/L 的氯化钠溶液中,DNA 的溶解度最低。

2、 DNA 不溶于酒精溶液,但细胞中的某些物质(如蛋白质)则溶于酒精。

3、 DNA 与二苯胺试剂在沸水浴条件下会呈现蓝色反应,从而可以鉴定 DNA 的存在。

三、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液(抗凝剂处理)2、用具(1)烧杯、玻璃棒、滴管、量筒、离心机、纱布、漏斗、铁架台、酒精灯、石棉网、三角架、火柴。

(2)体积分数为95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、蒸馏水、二苯胺试剂。

四、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂,静置一段时间后,离心处理,去除上清液,留下鸡血细胞液。

2、提取细胞核物质向鸡血细胞液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液,搅拌均匀,使血细胞破裂,释放出细胞核物质。

3、溶解 DNA沿烧杯壁缓缓加入蒸馏水,并不断搅拌,直到溶液中氯化钠浓度降至 014mol/L 时,DNA 溶解度最小,此时会有白色丝状物析出。

4、过滤含 DNA 的黏性物用多层纱布过滤上述溶液,滤去杂质,留下含 DNA 的黏性物。

5、进一步提纯 DNA将上述黏性物再溶解于 2mol/L 的氯化钠溶液中,然后过滤,除去不溶的杂质。

6、析出 DNA向滤液中缓缓加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为 95%的酒精溶液,并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现白色的丝状 DNA。

7、 DNA 的鉴定取两支洁净的试管,分别编号为 1、2。

向 1 号试管中加入 2mol/L的氯化钠溶液 2mL,向 2 号试管中加入 DNA 丝状物和 2mol/L 的氯化钠溶液 2mL。

然后向两支试管中各加入 4mL 二苯胺试剂,混合均匀后,将试管置于沸水浴中加热 5 分钟,观察颜色变化。

dna的提取 实验报告

dna的提取 实验报告

dna的提取实验报告DNA的提取实验报告引言:DNA(脱氧核糖核酸)是构成生命的基本遗传物质,它携带着生物个体的遗传信息。

DNA的提取是生物学实验中常见的一项重要技术,通过提取DNA,我们可以进一步研究生物的遗传特征、进化历程以及疾病的发生机制等。

本实验旨在探究DNA的提取方法,并通过实际操作来加深对DNA结构和功能的认识。

材料与方法:1. 实验材料:- 鸡蛋白溶液- 酒精- 盐水- 洗洁精- 酶解液- 水浴- 离心机- 显微镜2. 实验步骤:1. 将鸡蛋白溶液倒入试管中,加入适量的盐水,并加入洗洁精,轻轻摇晃混合。

2. 将酶解液加入试管中,再次轻轻摇晃混合,使酶解液与鸡蛋白溶液充分接触。

3. 将试管放入水浴中,保持温度在50℃左右,进行酶解反应。

4. 取出试管,加入等体积的酒精,轻轻旋转试管,观察DNA的析出。

5. 使用离心机将混合液离心,分离出DNA。

6. 将离心后的上清液倒掉,加入适量的盐水,再次离心,以去除残留的酒精。

7. 使用显微镜观察提取得到的DNA。

结果与讨论:经过实验操作,我们成功地提取到了DNA,并观察到了DNA的析出现象。

在实验过程中,酶解液的作用是破坏细胞膜和核膜,使DNA从细胞内释放出来。

酒精的加入则通过与DNA中的水结合,使DNA分子在溶液中析出形成细长的纤维状物质。

DNA提取的关键步骤在于酶解反应的温度和时间的控制。

过高的温度或过长的反应时间会导致DNA的降解,从而影响提取效果。

同时,酒精的加入和离心的速度也会影响DNA的析出和分离。

实验中我们选择了适宜的条件,保证了DNA的提取效果。

DNA的提取方法不仅在实验室中有广泛应用,也在现实生活中有重要意义。

例如,在犯罪侦查中,通过提取作案现场的DNA样本,可以帮助警方追踪犯罪嫌疑人;在医学诊断中,通过提取患者体液中的DNA,可以进行基因检测,帮助医生判断疾病的类型和治疗方案。

总结:通过本次实验,我们深入了解了DNA的提取方法,并通过实际操作加深了对DNA结构和功能的认识。

基因组dna的提取实验报告

基因组dna的提取实验报告

基因组dna的提取实验报告一、实验目的本实验旨在学习基因组DNA的提取方法,掌握DNA提取实验的基本步骤和技巧。

二、实验原理DNA提取是生物学中最基础的实验之一,其目的是从细胞或组织中分离出DNA。

DNA提取的原理是利用化学试剂破坏细胞膜和核膜,使细胞内部的DNA裸露出来,并通过特定方法纯化出来。

三、实验材料1. 细菌培养液2. TE缓冲液(10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)3. 蛋白酶K溶液(20 mg/mL)4. 洗涤缓冲液(10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0)5. 氢氧化钠(NaOH)溶液(0.2 M)6. 氯化钾(KCl)溶液(1 M)7. 高盐缓冲液(5 M NaCl, 1 M Tris-HCl, pH 8.0)8. 等体积异丙醇9. 离心管10. 微量离心管四、实验步骤1. 取细菌培养液0.5 mL,离心10分钟,将上清液倒掉。

2. 加入0.5 mL TE缓冲液和20 μL蛋白酶K溶液,室温下孵育10分钟。

3. 加入0.6 mL洗涤缓冲液,混匀后离心1分钟。

4. 倒掉上清液,加入0.2 mL氢氧化钠溶液,轻轻颠倒混匀,室温下孵育5分钟。

5. 加入0.3 mL氯化钾溶液,轻轻颠倒混匀后离心1分钟。

6. 将上清液转移到新的离心管中,加入等体积异丙醇,轻轻颠倒混匀后放置于-20℃冷冻箱中保存至少30分钟。

7. 离心10分钟后将上清液倒掉,并用70%乙醇洗涤沉淀一次。

8. 将沉淀用TE缓冲液重悬即可。

五、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作。

2. 操作过程中要避免DNA的降解和污染。

3. 实验前应做好必要的准备工作,并按照步骤进行操作。

六、实验结果通过本实验,成功提取出了细菌的基因组DNA,并经过浓度检测和质量检测,证明提取的DNA质量较好,可以用于后续实验。

七、实验总结本次实验通过对基因组DNA的提取方法进行学习和实践,掌握了基本的操作技巧和注意事项。

DNA提取实验报告

DNA提取实验报告

生物学大实验(二)实验名称:质粒扩增、提取和鉴定实验实验目的通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作,加深对分子生物学基本技术的理解和掌握.实验仪器设备:电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。

实验原理:质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,通过对细菌、放线菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。

经过处理的线状dna在外界环境恢复正常的时候不能够复性而质粒dna可以复性,从而可以实现质粒dna和染色体dna的分离。

限制性内切酶能特意地结合于一端被称为限制性酶识别系列的dna系列之内或其附近的特异位点上,并切割dna。

当对提取的质粒dna进行电泳时,同一质粒dna其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。

实验步骤:一质粒扩增(1)普通lb固体培养基制备:制备lb培养基,倒入灭菌瓶中高压灭菌,待完全冷却后,保存备用。

(2)将大肠杆菌接种于lb培养基中,37℃振荡培养过夜(200转/分)二质粒dna的提取(碱法)1将菌液倒入1.5ml的微量离心管中, 12000rpm离心一分30秒,弃去上清液,以得到较多的细菌沉淀;2、将微量离心管开口倒置在卫生纸上,使离心管底部的液体流尽。

3、加入100μl用冰预冷的溶液i,剧烈振荡,将沉淀彻底悬浮,然后室温放置5分钟。

4、加入200μl现配的溶液ii,盖紧管口,轻轻快速颠倒离心管(不要振荡,以避免dna断裂),使混合物混匀,冰浴5~10分钟。

5、加入150μl预冷的溶液iii,盖紧管口,温和颠倒混匀,使粘稠地细菌裂解物均匀地分布于溶液iii中,冰浴5分钟.6、取上部水相,移入新的离心管,加入2倍体积预冷的无水乙醇(也可同时加入1/10倍体积的醋酸钠),震荡混匀,室温放置10分钟沉淀双链dna,然后4℃,12000rpm离心10min.7、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使离心管底部的液体流尽后,加入预冷的1ml 70%乙醇。

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生物学大实验(二)实验名称:质粒扩增、提取和鉴定实验实验目的通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作,加深对分子生物学基本技术的理解和掌握。

实验仪器设备:电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。

实验原理:质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,通过对细菌、放线菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。

经过处理的线状dna在外界环境恢复正常的时候不能够复性而质粒dna可以复性,从而可以实现质粒dna和染色体dna的分离。

限制性内切酶能特意地结合于一端被称为限制性酶识别系列的dna系列之内或其附近的特异位点上,并切割dna。

当对提取的质粒dna进行电泳时,同一质粒dna其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。

实验步骤:一质粒扩增(1)普通lb固体培养基制备:制备lb培养基,倒入灭菌瓶中高压灭菌,待完全冷却后,保存备用。

(2)将大肠杆菌接种于lb培养基中,37℃振荡培养过夜(200转/分) 二质粒dna的提取(碱法)1将菌液倒入1.5ml的微量离心管中, 12000rpm离心一分30秒,弃去上清液,以得到较多的细菌沉淀;2、将微量离心管开口倒置在卫生纸上,使离心管底部的液体流尽。

3、加入100μl用冰预冷的溶液i,剧烈振荡,将沉淀彻底悬浮,然后室温放置5分钟。

4、加入200μl现配的溶液ii,盖紧管口,轻轻快速颠倒离心管(不要振荡,以避免dna断裂),使混合物混匀,冰浴5~10分钟。

5、加入150μl预冷的溶液iii,盖紧管口,温和颠倒混匀,使粘稠地细菌裂解物均匀地分布于溶液iii中,冰浴5分钟。

6、取上部水相,移入新的离心管,加入2倍体积预冷的无水乙醇(也可同时加入1/10倍体积的醋酸钠),震荡混匀,室温放置10分钟沉淀双链dna,然后4℃,12000rpm离心10min。

7、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使离心管底部的液体流尽后,加入预冷的1ml 70%乙醇。

8、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使液体流尽,置dna干燥5~10分钟。

9、吸除上清液,将管口倒置于卫生纸上使液体流尽,真空干燥10分钟或室温干燥。

10 、将沉淀溶于34υlte缓冲液或灭菌水(ph8.0)中,储于-20℃冰箱中三dna酶切反应1、将洁净干燥并经灭菌的eppendorf 管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入dna(υl)和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2υl,将管内溶液混匀后加入0.5υl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可以用微量离心机甩一下,使溶液集中在管底。

此步操作是整个实验成败的关键,要防止错加,漏加。

使用限制性内切酶时应尽量减少其离开冰箱的时间,以免活性降低。

2、混匀反应体系后,将eppendorf管置于适当的支持物上(如插在泡沫塑料板上),37℃水浴锅保温2-3小时,使酶切反应完全。

3、每管加入2υl0.1mol/l edta(ph8.0),混匀,以停止反应,置于冰箱之保存备用。

四 dna的琼脂糖凝胶电泳1、取5×tbe缓冲液100ml加蒸馏水至1000ml,配成0.5×tbe稀释缓冲液,待用。

2、胶液的制备:称取3g琼脂糖置于1000ml锥形瓶中,加入300ml 0.5×tbe稀释缓冲液,加入微波炉里加热至琼脂糖全部融化,取出摇匀,此为1%琼脂糖凝胶液。

加热过程中要不时摇动,使其附于瓶盖上的琼脂糖颗粒进入溶液。

加热时应盖上封口膜,以减少水分蒸发。

3、胶版的制备:想冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(eb)溶液使其终浓度为0.5υlg/ml。

倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则溶液出现气泡,待胶完全凝固后,拔出梳子注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5υ×tbe稀释缓冲液至页面恰好没过胶板上表面4、加样:取20υl的酶解液与2υl10×载样液混匀,用微量移液枪小心加入样品槽中,每加完一个样品要更换tip头以防止互相污染,注意上样时要小心操做,避免损坏凝胶或将样品槽底部的凝胶刺穿5、电泳:加完样后合上电泳槽盖,立即接通电源,控制电压保持在60-80v,电流在40ma以上,当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿2cm时停止电泳6、观察和拍照五实验结果六实验结论通过本次试验加深了对分子生物学以及基因工程的深入了解,右上第三第四根亮柱是我的结果。

结果显示,第三条中酶切效果良好,rna被降解的很完全,第四根没有被酶切,质粒dna跟rna同时存在,出现了两条亮带,质粒dna跟rna分离效果较好。

本实验需要细致认真的完成,所以特别在凝胶电泳中要十分注意以下事项:(1)取出梳子之前,一定要耐心等待琼脂糖凝胶的凝固,拔梳子是一定要手稳,而且要垂直拔出;(2)点样要细心,枪头不要碰到凝胶,以免点样枪刺破凝胶;(3)电泳时,电极一定要连接正确(4)染色剂溴化乙锭是强诱变剂,有致癌性和强毒性,使用时一定要带一次性手套,使用后废液不可不可随意丢弃。

生物科学 071班姓名:刘欢学号:20073305篇二:dna的提取和电泳实验报告基因组dna的提取和电泳(实验五)实验报告一、实验目的了解dna提取的方法,以及琼脂糖凝胶电泳分析dna技术。

二、器材和试剂1. 器材水平琼脂糖电泳仪,离心机,水浴锅,研钵,离心管、移液枪、水稻幼苗等2. 试剂1. 1mol/l tris.cl(ph8.0) 的配制:称取12.11g 的tris,置于80 ml的ddh20,加入浓盐酸(约4.2 ml),调节ph值至8.0,定容至100 ml。

2. 0.5 mol/l edta(ph8.0)的配制:18.61g na2edta·2h2o,加入80 ml的ddh2o,用naoh颗粒调ph值至8.0(约需2 g),定容至100 ml。

3. 提取缓冲液的配制: 100 mmol/l tris.cl(ph8.0), 20 mmol/ledta, 500 mmol/l nacl,1.5%sds4. 80/4/16氯仿:异戊醇:乙醇5. 6?loading buffer:0.15%溴酚蓝,0.15%二甲苯青ff,5 mmol/l edta,50%甘油三、实验步骤1. 在15ml的离心管中加入5ml的提取缓冲液,60℃水浴预热。

2. 植物叶1-2g,剪碎,在钵体中加入石英砂,加入预热的提取缓冲液,磨成粉末状, 60℃水浴保温20 min,其间不时缓慢摇动。

3. 5000 rpm离心5分钟,仔细吸取上清液至另一离心管中,4. 加入5 ml 氯仿/戊醇/乙醇溶液,颠倒混匀(需带手套,防止皮肤损伤),室温下静置5-10分钟,使水相和有机相混匀。

5. 室温下离心5000 rpm离心5分钟。

6. 仔细吸取上清液至另一离心管中,加入一倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状沉淀。

7. 离心5000 rpm,离心5 min,弃去异丙醇,室温晾干。

8. 视沉淀多少,加入1ml左右ddh2o溶解,可在60℃水浴中放置15分钟以上助溶。

9. 取dna样品5 μl,加入1 μl6?loading buffer,混匀,加入0.7%的琼脂糖凝胶加样孔中,电泳,检测dna的分子大小。

4、实验结果和讨论实验分析:本次实验由于种种原因我是和植保102班的同学一起做的,我们组3人,实验过程比较严谨,受到了老师的表扬,实验结果也很令人满意。

下面是实验过程中的注意点:1、研磨不能太久太用力,会导致dna片段断掉。

2、实验室的某些试剂,如氯仿,有毒性,应带手套进行。

电泳的时候不知是时间的原因还是都做得不错,结果相差不是很远(如上图),第五组和第六组是我们的,第六组是我自己加的。

实验过程中要耐心细心,这样才能得到满意的结果。

园艺101石颖20100107011篇三:浙大生化实验报告dna的提取实验报告课程名称:生化实验甲指导老师:成绩:__________________ 实验名称:植物基因组dna的提取实验类型:生化定性实验同组学生姓名:及纯度与含量的测定一、实验目的和要求(必填)二、实验内容和原理(必填)三、实验材料与试剂(必填)四、实验器材与仪器(必填)五、操作方法和实验步骤(必填)六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析(必填)八、讨论、心得一、实验目的和要求 1、学习并掌握植物基因组dna的提取原理和方法; 2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作; 3、学习并掌握对电泳检测基因组dna结果的初步分析; 4、学习紫外吸收法测定核酸基本原理和方法; 5、学习并掌握紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量的方法。

二、实验基本原理植物基因组dna的提取方法就其提取原理主要有二种:十六烷基三乙基溴化铵(ctab)法、十二烷基硫酸钠 (sds)法。

十六烷基三甲基溴化铵和十二烷基硫酸钠等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使dna得以游离出来。

再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(dna、rna)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。

上清液中加入无水乙醇使dna沉淀,沉淀dna溶于te溶液中,即得植物基因组 dna溶液。

由于植物中的次生代谢产物——多酚类化合物可介导dna降解,而多糖的污染也是影响植物核酸纯度最常见的问题,这些多糖能抑制限制酶、连接酶及dna聚合酶等分子生物学酶类的生物活性。

传统的ctab-dna提取法步骤多,较烦琐,dna产率低,而且由于酚很难完全去除,容易影响以后的酶切等工作的效率。

sds法操作简单,温和,也可提取到较高分子量dna,但所得产物含糖类杂质较多,这将直接影响dna的限制性核酸内切酶酶切效果。

由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对dna的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。

本实验采用十二烷基硫酸钠 (sds)法提取植物基因组dna,基因组dna提取后,①通过琼脂糖凝胶电泳鉴定基因组dna分子量大小、纯度;②用紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量。

dna的琼脂糖凝胶电泳鉴定:dna分子在琼脂糖凝胶中有电荷效应和分子筛效应。

dna分子在高于等电点的溶液中带负电荷,它在电场中向正极移动。

在一定的电场强度下,dna分子的迁移速度取决于分子筛效应,即具有不同的相对分子量的dna片段泳动速度不同。

dna片断在凝胶中当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙锭(eb)染色后,在紫外光下可见橙红色带,并可确定dna片断在凝胶中的位置。

紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量核酸——dna和rna所含碱基的苯环结构(嘌呤环和嘧啶环)的共轭双键具有紫外吸收的性质,它们在260nm处有最大的吸收峰。

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