快速检测蜂胶制品中蜂胶乙醇提取物含量的方法研究

精 确 称 取 处 理 好 的 提 纯 蜂 胶 ２０ ｍｇ 于 １００ ｍＬ 容 量瓶中， 加入适量 ９５％乙醇放入超声波内使其完全溶 解取出冷却至室温后， 加 ９５％乙醇至刻度， 摇匀， 为 标准溶液。
精密吸取标准溶液 １ ｍＬ， ２ ｍＬ， ３ ｍＬ， ４ ｍＬ， ５ ｍＬ， 分别置于 ２５ ｍＬ 容量瓶 中 加 ９５％乙 醇 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 并按顺序编为 １～５ 号。
（ ４） 如被测样品中成分较多对检测干扰较大时， 将一定量的被测样品溶于乙醇， 加入 １００ 目以上聚酰 胺粉吸附， 于水浴挥去乙醇后用苯装柱并用苯洗脱除 去杂质； 将层析柱中多余的苯吸干， 用甲醇洗脱后定 容比色。用同样方法处理提纯蜂胶并绘出曲线计算。
（ ５） 本方法不适用于样品中其他配料含有大量酚 类、黄酮类物质的蜂胶制品。
文献标识码： Ａ
文章编号： １ ００３－ ９１ ３９ （ ２００７） ０７－ ０００３－ ０２
Ａ Ｒａ ｐｉｄ Ｍｅ ｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｄｅ ｔｅ ｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ Ｅｔｈａ ｎｏｌｉｃ Ｅｘｔｒａ ｃｔｓ Ｃｏｎｔｅ ｎｔ ｏｆ Ｐ ｒｏｐｏｌｉｓ ｉｎ Ｄｉｆｆｅ ｒｅ ｎｔ
Ｐ ｒｏｐｏｌｉｓ Ｐ ｒｏｄｕｃｔｓ
３．４６０
１ ．５７２
－ ０．５１ ６ ２００．００
４００．００
ｎｍ
６００．００
图 １ １￣ ５ 号标准溶液的吸收曲线
２００７年第 ７ 期
蜜蜂杂志 （月刊）
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＥＥ （ Ｍｏｎｔｈｌｙ）
４
３．２ 最大吸收波长的选择 以 ９５％乙醇为空白， 分别取 １～５ 号溶液用 １ ｃｍ
石英比色皿， 在 ２００～６００ ｎｍ 之间进行扫描。扫描速 度 为 中 速 ， 匣 缝 为 ２ ｎｍ， 间 隔 采 样 时 间 ０．５ ｎｍ， 以 波长为横坐标， 以 吸 收 值 为 纵 坐 标 ， 绘 出 １～５ 号 标 准溶液的吸收曲 线 ， 如 图 １ 所 示 。 由 １～５ 号 吸 收 曲 线 可 以 看 出 样 品 均 在 ２９１ ｎｍ 有 一 强 吸 收 ， 所 以 选 择 ２９１ ｎｍ 为检测波长。 ３．３ 乙醇提取物浓度与吸光度的关系确定
醇 放 入 超 声 波 内 使 其 溶 解 ， 用 ９５％乙 醇 反 复 清 洗 残
渣， 将上清 液 过 滤 后 再 移 入 １００ ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 最 后
加 ９５％乙醇至刻度， 待测。
３．４．２ 蜂胶制品
取蜂胶制品样品 （ 胶囊取内容物） 约 ５００～１ ０００ ｍｇ
（ ３） 尽可能选取与被测样品同源的提纯蜂胶作对 照， 以提高检测结果的准确性。
１ 原理
蜂胶提取物溶于乙醇后在一定的浓度范围内溶液
收稿日期： ２００７－ ０５－ １８
的颜色与溶液的浓度成正比。
２ 仪器试剂
２．１ 仪器 ２５５０ 紫外可见光分光光度计 （ 日本岛津） ， 工作
站 岛 津 ＵＶ Ｐｒｏｂｅ， １ ｃｍ 石 英 比 色 皿 ， 分 析 天 平 （ 梅 特 勒 ） ， Ａｓ３１２０ 超 声 波 （ 天 津 奥 特 恩 斯 仪 器 有 限 公 司） ， 旋转蒸发器 （ 上海申生） ， 真空干燥箱等。 ２．２ 试剂
Ｕｎｉ ｖｅｒ ｓｉ ｔ ｙ， Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１ ００２９， Ｃｈｉ ｎａ） Ａｂｓ ｔｒａｃｔ： Ａ ｒ ａｐｉ ｄ ｍｅｔ ｈｏｄ ｆ ｏｒ ｄｅｔ ｅｒ ｍｉ ｎｉ ｎｇ ｔ ｈｅ ｅｔ ｈａｎｏｌｉ ｃ ｅｘｔ ｒ ａｃｔ ｓ ｃｏｎｔ ｅｎｔ ｏｆ ｐｒ ｏｐｏｌｉ ｓ ｉ ｎ ｄｉ ｆ ｆ ｅｒ ｅｎｔ ｐｒ ｏｐｏｌｉ ｓ ｐｒ ｏｄｕｃｔ ｓ ｗａｓ ｉ ｎｔ ｒ ｏｄｕｃｅｄ ｉ ｎ ｔ ｈｉ ｓ ｐａｐｅｒ ． Ｄｉ ｓｓｏｌｖｅｄ ｉ ｎ ９５％ ｅｔ ｈａｎｏｌ， ｔ ｈｅ ｃｏｌｏｒ ｏｆ ｔ ｈｅ ｅｘｔ ｒ ａｃｔ ｓ ｐｒ ｅｓｅｎｔ ａ ｄｉ ｒ ｅｃｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ ｔ ｏ ｔ ｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔ ｒ ａｔ ｉ ｏｎ ｔ ｏ ａ ｃｅｒ ｔ ａｉ ｎ ｅｘｔ ｅｎｔ ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔ ｅｎｔ ｃａｎ ｂｅ ｄｅｔ ｅｒ ｍｉ ｎｅｄ ｂｙ ｍｅａｓｕｒ ｉ ｎｇ ｔ ｈｅ ａｂｓｏｒ ｂａｎｃｅ ａｔ ２９１ ｎｍ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ： ｐｒ ｏｐｏｌｉ ｓ； ｅｔ ｈａｎｏｌｉ ｃ ｅｘｔ ｒ ａｃｔ ； ｃｏｎｔ ｅｎｔ ｄｅｔ ｅｒ ｍｉ ｎａｔ ｉ ｏｎ
［４］ 朱恩圆， 邹彦平， 魏东芝， 等． 蜂胶有效成分的含量测定及 质量控制［Ｊ］． 中成药， ２００５， ２７（７）： ８３５－ ８３６
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
浆 蜜 双 高 产 种 蜂 王 “ 浆 蜂 ”金 平 湖 Ｒ 详情参阅 《蜜蜂杂志》第一期广告
１ ．３６５
（ 精确到 ０．１ｍｇ） ， 置于烧杯中， 加入适量 ９５％乙醇放 入 超 声 波 内 使 其 溶 解 并 用 滤 纸 过 滤 ， 用 ９５％乙 醇 反 复清洗残渣， 将上清液过滤后移入 １００ ｍＬ 容量瓶中， 最后加 ９５％乙醇至刻度， 待测。 ３．５ 测定
取 处 理 好 的 样 品 １ ｍＬ 于 ５０ ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 加 ９５％乙 醇 至 刻 度 ， 摇 匀 于 ２９１ｎｍ 处 ， 以 ９５％ 乙 醇 为 空白， 检测吸光度， 并根据标准曲线计算浓度。 ３．６ 计算
王进 电话： １３７０６７３５６６８
参考文献：
［１ ］ 胡福良， 李英华， 朱威． 蜂胶蜂花粉加工技术［Ｍ］． 北京： 金盾出辑室． 蜂产品标准汇编［Ｍ］． 北京： 中国标准出版社， ２００３．
［３］ 章征天， 周平， 胡福良． 蜂胶质量控制中的几个关键问题［Ｊ］． 蜜蜂杂志， ２００４， （１ １ ）： ９－ １ １ ．
蜂胶乙醇提取物含量被习惯称为蜂胶含量， 是指 蜂胶中溶于乙醇的物质总量， 是衡量原料蜂胶质量的 重要指 标 之 一［１］。 原 料 蜂 胶 中 乙 醇 提 取 物 的 含 量 多 采 用 ＳＢ／Ｔ１００９６－ ９２ 中 ５．３．１ 乙 醇 提 取 物 含 量 的 测 定 方 法进行 检 测［２］。 现 在 市 售 的 蜂 胶 产 品 多 以 蜂 胶 乙 醇 提 取物为主要原料加工而成。由于蜂胶成品中加入了其 他辅料， 如： 蜂胶软胶囊中的植物油、聚乙二醇、大 豆卵磷脂等， 而这些辅料中很多成分溶于乙醇， 使得 原有方法已不能适用。蜂胶产品的加工只能从配料工 序来控制产品中乙醇提取物的含量， 这给蜂胶产品的 质量控制带来很多不便。蜂胶产品中乙醇提取物含量 的高低直接影响产品的功效， 因此， 检测蜂胶产品中 乙醇提取物的含量是直接衡量蜂胶成品品质的重要指 标之一［３， ４］。本文以蜂胶提取物溶于乙醇后在一定的浓 度范围内溶液的颜色与溶液的浓度成正比的原理， 介绍 一种快速检测蜂胶产品中蜂胶乙醇提取物含量的方法。
样品编号
１ ２ ３ ４ ５
浓 度 （ ｍｇ／ｍＬ） ０．００８ ０．０１ ６ ０．０２４ ０．０３２ ０．０４０
吸光度
０．２３５ ０．５００ ０．７６７ １ ．００８ １ ．２５６
３．４ 样品处理
３．４．１ 蜂胶原料
取蜂胶原料样品约 １０ ｇ， 粉碎并混合。称取 （ 精
确到 ０．１ ｍｇ） １ ０００ ｍｇ 置于烧杯中， 加入适量 ９５％乙
ＷＡＮＧ Ｌｅｉ ， ＺＨＥＮＧ Ｃｈｕｎ－ Ｑｉ ａｎｇ， ＨＵ Ｆｕ－ Ｌｉ ａｎｇ
（ １ ． Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｔｉ ａｎｃｈｕ Ｍｉ ｙｕａｎ Ｈｅａｌｔ ｈ Ｆｏｏｄ Ｃｏ． Ｌｔ ｄ．， Ｔｏｎｇｌｕ ３１ １ ５１ ９， Ｃｈｉ ｎａ； ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉ ｍａｌ Ｓｃｉ ｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｚｈｅｊ ｉ ａｎｇ
３
蜜蜂杂志 （月刊）
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＥＥ （ Ｍｏｎｔｈｌｙ）
ＮＯ．７ ２００７ Ｊｕｌ．
快速检测蜂胶制品中蜂胶乙醇提取物含量的方法研究
王 磊 １， 郑春强 １， 胡福良 ２ （ １． 杭州天厨蜜源保健品有限公司， 杭州 桐庐 ３１１５１９； ２． 浙江大学动物科学学院， 浙江 杭州 ３１００２９）
分别取 １～５ 号标 准 溶 液 ， 以 ９５％乙 醇 为 空 白 分 别 于 ２９１ ｎｍ 处 测 定 吸 收 值 ， 并 以 标 准 溶 液 的 浓 度 （ ｍｇ／ｍＬ） 为 横 坐 标 ， 以 吸 光 度 为 纵 坐 标 绘 出 标 准 曲 线 。１～５ 号 浓 度 与 吸 收 值 如 表 １ 所 示 ， 曲 线 如 图 ２ 所 示 ， 标 准 曲 线 回 归 方 程 为 ： ｙ＝ ３１．８６７７９ｘ － ０．０１１５６， 线 性 范 围 ： ０￣０．０４ ｍｇ／ｍＬ， 相 关 系 数 ０．９９９５２。
度较高， 如检测时不在此范围内， 可通过计算并控制
试样的称重或控制溶液的稀释比例来适当调整。
０．５００
（ ２） 保持被测液澄清， 如被测样品中杂质较多，
可采取过滤的方法来除去杂质减少干扰。
０．１ ３３ ０．００８
图２
０．０２０
０．０５０
浓度 （ ｍｇ／Ｌ）
１￣ ５ 号浓度标准曲线
０．０４０
表 １ １￣５ 号浓度与吸收值
Ａ×Ｖ１×Ｖ３ Ｘ＝
×１００
Ｍ×Ｖ２
式中： Ｘ — 试样中乙醇提取物的含量， ％ Ａ — 由标准曲线算得被测液中黄酮量， ｍｇ／ ｍＬ Ｍ — 试样质量， ｍｇ Ｖ１ — 测定用试样定容体积， ｍＬ Ｖ２ — 取样体积， ｍＬ Ｖ３ — 样品定容体积， ｍＬ
４ 检测注意事项
１ ．０００
（ １） 检测时样品的吸光度在 ０．２～０．７ 之间时准确
９５％乙醇分析纯 （ 上海三鹰化学试剂有限公司） ， 定性滤纸!１１ｃｍ （ 杭州新华纸业有限公司） 。 ２．３ 蜂胶
杭州天厨蜜源保健品有限公司生产的提纯蜂胶。
３ 检测方法
３．１ 标准溶液配制 称 取 提 纯 蜂 胶 ５ ｇ 放 入 １００ ｍＬ 锥 形 瓶 中 ， 加 入