革兰氏染色原理
革兰氏染色机理
革兰氏染色机理介绍革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，能够将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。
本文将详细介绍革兰氏染色的原理、步骤和应用。
原理革兰氏染色的原理是利用革兰阳性和革兰阴性细菌细胞壁的差异，通过染色后的颜色反映出两者的区别。
步骤革兰氏染色步骤如下：准备细菌样品1.取一份细菌培养液的样品。
固定细菌样品1.将细菌样品滴在洁净的玻璃片上。
2.用火焰将玻璃片加热，使细菌附着在玻璃片上。
染色1.用紫色碘溶液滴在固定的细菌样品上，静置1分钟。
2.用水冲洗碘溶液。
脱色1.将酒精滴在细菌样品上，直至从玻璃片上脱色。
染色1.用红色素溶液滴在细菌样品上，静置1分钟。
2.用水冲洗红色素溶液。
倒置晾干1.将玻璃片倒置在纸巾上晾干。
结果解读根据革兰氏染色的结果，可以得出以下结论：革兰阳性细菌革兰阳性细菌在染色后呈紫色，这是因为细菌细胞壁含有较多的革兰阳性染色颗粒。
革兰阴性细菌革兰阴性细菌在染色后呈红色，这是因为细菌细胞壁含有较少的革兰阴性染色颗粒。
应用革兰氏染色技术在微生物学领域有广泛的应用，包括但不限于以下方面：细菌分类革兰氏染色可以帮助鉴定不同类型的细菌，根据染色结果可以进行初步的分类和鉴定。
感染诊断医学上，革兰氏染色可以用于感染诊断，帮助医生判断细菌感染的类型和严重程度。
细菌研究在细菌研究领域，革兰氏染色常用于观察细菌形态和细胞壁结构的变化，为研究细菌的生长和繁殖机制提供基础数据。
食品安全革兰氏染色也可以用于食品安全领域，帮助检测食物中是否含有细菌污染物，保障食品的安全性和卫生标准。
总结革兰氏染色机理通过染色反映了革兰阳性和革兰阴性细菌细胞壁的差异。
通过上述步骤，我们可以得到染色后的细菌样品，并通过染色结果对不同类型的细菌进行初步分类和鉴定。
革兰氏染色在微生物学研究、临床医学和食品安全等领域有着广泛的应用。
《革兰氏染色原理》课件
3 抗生素耐药性
革兰氏阴性细菌对抗生素的耐药性较强。
革兰氏染色在微生物检测中的应用
实验室检测
革兰氏染色是微生物学实验室中 常用的检测方法之一。
临床诊断
革兰氏染色可用于诊断感染性疾 病和选择合适的抗生素治疗。
水质检测
革兰氏染色可用于水质检测，判 断是否存在细菌污染。
革兰氏染色的优点和局限
优点
• 简单、快速 • 可判断细菌类型 • 适用于大多数细菌
局限
• 不适用于非细菌微生物 • 无法判断细菌代谢活性 • 可能出现假阳性或假阴性结果
总结和展望
革兰氏染色是微生物学中重要的染色技术，具有广泛的应用前景。
5
5. 染色
滴上红粉碱，静置片上约30秒，然后冲 洗干净。
革兰氏阳性细菌特点
密集细胞壁
革兰氏阳性细菌细胞壁富含 胞壁多糖和肽聚糖。
染色结果
革兰氏阳性细菌在染色后呈 紫色。
抗生素敏感性
革兰氏阳性细菌通常对青霉 素等抗生素敏感。
革兰氏阴性细菌特点
1 薄细胞壁
革兰氏阴性细菌的细胞壁相对较薄。
2 染色结果
《革兰氏染色原理》PPT 课件
革兰氏染色原理简介：介绍革兰氏染色的基本概念和应用背景。
革兰氏染色步骤
1
1. 涂片
在载玻片上涂抹细菌样品。
2. 固定
2
用热空气固定细菌样品，使其附着在玻
片上。
3
3. 静置涂染剂
将紫晶染钟。
使用酒精或乙醚脱色涂片，直到紫色不
再溢出为止。
简述革兰氏染色机理
简述革兰氏染色机理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过这种方法可以将细菌分为两大类：革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）。
以下是革兰氏染色的机理：
1、脱色：革兰氏染色过程中的关键步骤之一是脱色。
在经过结晶紫初染和碘液媒染后，G+菌和G-菌都呈现深紫色。
此时，通过在酒精或其他脱色剂中短暂停留，可以将G-菌的细胞壁中的脂质成分溶解，使得脱色剂更容易进入细胞内部，将其染成无色或浅色。
而G+菌由于其细胞壁结构较为坚韧，不易被脱色剂渗透，因此保持深色。
2、复染：在脱色后，通过施加沙黄或其他染料进行复染，使所有细菌都被染上颜色。
由于G-菌已被脱色至无色或浅色，因此沙黄会使其呈现红色。
而G+菌由于未被脱色或仅被部分脱色，呈现深紫色或蓝黑色。
3、结果观察：通过显微镜观察染色后的细菌，可以看到G+菌呈蓝紫色，而G-菌呈红色。
这一差异是由于革兰氏染色过程中对细胞壁脂质成分的处理和脱色剂的渗透能力不同所致。
革兰氏染色的机理主要基于细菌细胞壁的差异，特别是脂质含量的差异。
G+菌的细胞壁富含肽聚糖，不易被脱色剂渗透，而G-菌的细胞壁中含有较多的脂质，使得脱色剂能够更好地进入细胞内部。
此外，革兰氏染色还涉及到结晶紫和碘液等染料的结合和吸附性质的不同，进一步增强了G+菌和G-菌在染色过程中的颜色差异。
总之，革兰氏染色的机理主要基于细菌细胞壁的结构和化学成分差异，通过脱色和复染等步骤，将细菌分为G+和G-两大类，为后续的细菌鉴定和分类提供重要依据。
革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色原理及步骤革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它能够区分细菌的结构特征，帮助我们进行细菌分类和鉴定。
革兰氏染色的原理和步骤对于微生物学和临床医学都具有重要意义。
下面我们将详细介绍革兰氏染色的原理及步骤。
首先，让我们来了解一下革兰氏染色的原理。
革兰氏染色是利用细菌细胞壁的化学成分差异来区分细菌的一种染色方法。
细菌细胞壁由多聚糖和肽聚糖构成，而革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的肽聚糖，可以保持紫晶染色剂的结合，呈紫色；而革兰氏阴性菌的细胞壁含有较多的多聚糖，不能保持紫晶染色剂的结合，呈粉红色。
接下来，我们来看一下革兰氏染色的步骤。
首先，准备好需要的试剂和材料，包括革兰氏染色试剂、细菌液、石蜡片、酒精灯等。
然后，将细菌涂抹在石蜡片上，用酒精灯加热杀菌。
接着，滴加革兰氏染色试剂，静置片上1分钟，然后用水冲洗。
最后，用干净的纸巾吸干水分，镜检。
革兰氏染色的步骤看起来简单，但是在操作过程中需要注意一些细节。
首先，细菌的涂抹要均匀，太多或太少都会影响染色效果。
其次，加热杀菌的时间和温度要掌握好，过热会破坏细菌结构，影响染色效果。
再者，革兰氏染色试剂的使用要注意按照说明书上的要求进行，时间过长或过短都会影响染色效果。
最后，在镜检时要仔细观察，区分细菌的染色情况，准确判断细菌的类型。
总的来说，革兰氏染色是一种简单而有效的细菌染色方法，通过对细菌细胞壁的特性进行染色，帮助我们区分和鉴定细菌。
在实际操作中，我们需要严格按照步骤进行，注意细节，确保染色效果的准确性和可靠性。
革兰氏染色的原理和步骤对于微生物学研究和临床诊断都具有重要意义，希望大家能够加强对革兰氏染色的理解和掌握，提高实验操作的技能水平。
革兰氏染色的原理
革兰氏染色的原理
革兰氏染色是细菌学中最为常用的染色方法之一，其原理是利用革兰氏染色技术来将细菌区分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
具体原理如下：
在进行革兰氏染色时，首先将待检测的细菌样本涂在玻片上，然后通过以下几个步骤进行染色：
1. 涂以革兰染色剂（紫色）：首先将革兰染色剂（紫色）涂抹在玻片上，待其充分渗透。
2. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水冲洗玻片，以洗去多余的革兰染色剂。
3. 涂以碘液：再将碘液涂抹在玻片上，待其充分渗透。
4. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水冲洗玻片，以洗去多余的碘液。
5. 涂以解染剂（酒精/乙醇）：将解染剂（酒精/乙醇）涂抹在玻片上进行漂洗，革兰氏阳性菌的细胞壁不易被漂掉，
表现为紫色或紫黑色，而革兰氏阴性菌的细胞壁被漂洗掉，表现为无色或浅红色。
6. 涂以对比染色剂（红色）：最后将对比染色剂（红色）涂抹在玻片上，革兰氏阴性菌会被染成红色。
通过以上步骤，革兰氏染色技术可将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌显色为紫色或紫黑色，而革兰氏阴性菌显色为红色。
该技术的原理基于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构不同，可用于细菌的初步鉴定和分类。
简述革兰氏染色的步骤和原理
简述革兰氏染色的步骤和原理
革兰氏染色是一种临床检测菌种的重要方法。
它是用品种特殊的
颜料对菌体进行染色，以提示不同类别细菌的性质，来识别出微生物
的种类或菌群。
具体步骤：
（1）将菌株接种到特定培养基上，并按照规定的时间培养；
（2）采用硝酸的抗原特异性染色方法，即用特定的结合剂和染料将微
生物染色；
（3）按预期染出颜色，通过颜色差异来识别菌体种类；
（4）再搭配结果识别出菌种类及其数量，获得最终的革兰氏染色结果。
原理：染料的作用是将被染的物质和它本身的抗原结合在一起，
形成特定结构，使物质与染料化学结合，形成不易被溶解的色斑。
因此，微生物的种类可以根据染出的不同颜色识别出来。
革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
简述革兰氏染色法
简述革兰氏染色法革兰氏染色法是由19世纪德国医学家威廉革兰发展的一种医学染色方法，是一种利用化学特性显示细胞中各种结构的常用技术。
1882年，威廉革兰开创了这种技术，被公认为医学染色的先驱。
革兰氏染色法也称革兰染色法，简称革兰氏染色。
革兰氏染色是一种化学反应技术，通过配制特定的染料与植物、细菌细胞或血液中的其他活体物质发生反应，其反应结果是使得特定的染料在物体表面形成明亮的染色，从而可以简单准确地观察、分类和研究植物、细菌、血液、病毒等活体结构的特性。
革兰氏染色的原理是，活体的细胞结构具有固有的电荷，当染料与活体细胞发生反应时，染料就会因为电荷的作用而在活体细胞表面结合，产生染色。
根据染料结合细胞表面的类型和强度，可以得出不同的深浅程度和颜色。
革兰氏染色法的应用非常广泛，它不仅可以用来研究细胞的结构，而且还可以用于检测血液中的疾病，如感染性疾病、肿瘤等，还可以检测细菌的抗药性，以及病毒、血液中抗原和抗体的存在。
此外，由于革兰氏染色法反应和结果都很明显，也常常用于活体组织学研究，如病理检查、局部病原学研究和病理病理学研究。
在革兰氏染色法中，染料是细胞杂质检测的关键因素，它们必须是安全、可以长期存储，具有良好的抗氧化性和可溶性，能够在活体组织中稳定存在，同时能够与活体细胞中的其他物质发生反应，以达到染色的效果。
常用的染料包括绿唑酮（Gram）、南方染料（Safranin）、血蛋白（Haematoxylin）和紫色素（Purple）等。
革兰氏染色法在19世纪被发明出来，是一种广泛应用于医学检测、医学研究和病理学研究的重要技术。
它有助于研究细胞结构特性，进一步提高活性物质的筛选，提高疾病的检测效率，也有助于解决很多医疗难题，为现代医学技术提供了重要的帮助。
革兰氏染色法的原理和步骤
革兰氏染色法的原理和步骤革兰氏染色法是细菌学中常用的染色方法之一，可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法是由丹麦细菌学家克里斯蒂安·革兰于1884年首次提出的。
革兰氏染色法的原理是基于细菌细胞壁的化学成分不同。
细菌细胞壁是由多糖和蛋白质组成的，而革兰氏阳性菌的细胞壁较为厚重，含有大量的多糖和蛋白质，同时还含有少量的酸性物质。
而革兰氏阴性菌的细胞壁相对较薄，多糖和蛋白质含量较少，但含有较多的脂质。
根据细菌细胞壁的化学成分不同，革兰氏染色法通过一系列的染色步骤，可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法的步骤如下：1. 准备细菌涂片：首先，需要将培养好的细菌涂片制备好。
取一滴细菌培养物，涂抹在玻璃片上，形成一薄薄的细菌涂片。
2. 固定细菌涂片：将制备好的细菌涂片在空气中晾干，然后使用火焰进行固定。
通过火焰烘烤，可以使细菌附着在玻璃片上，不易脱落。
3. 染色：将固定好的细菌涂片放入碘酒中浸泡，使细菌吸收碘酒中的碘离子。
碘离子会与细菌细胞壁中的多糖结合，形成暂时性的紫色复合物。
4. 去碘：将浸泡过的细菌涂片用酒精洗涤，去除多余的碘离子。
此时，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁都会变为紫色。
5. 染色：将去碘的细菌涂片放入洋红溶液中浸泡。
洋红溶液可以与细菌细胞壁中的酸性物质结合，形成紫色或红色的复合物。
6. 洗涤：将染色过的细菌涂片用水清洗，去除多余的洋红溶液。
7. 干燥：将洗涤过的细菌涂片在空气中晾干。
通过以上的步骤，革兰氏染色法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
在显微镜下观察细菌涂片，革兰氏阳性菌呈紫色或紫红色，而革兰氏阴性菌呈粉红色。
革兰氏染色法在细菌学研究中具有重要的应用价值。
通过该方法，可以快速鉴定细菌的革兰氏染色结果，从而对细菌的形态特征和分类进行初步判断。
同时，该方法也为细菌感染的诊断提供了重要的依据。
革兰氏染色法是一种简单而有效的细菌染色方法，通过该方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
微生物实验-革兰式染色
细菌的革兰氏染色与显微观察一、实验原理革兰氏染色原理：细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结，当用乙醇处理时，由于脱水而引发网状结构的孔径变小，通透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
革兰氏阴性菌的细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
显微镜成像原理：现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
在载玻片与镜头之间加滴镜油主要是为了增加照明亮度和增加显微镜的分辨率。
以油代替空气作为光的传播介质，减少光线的折射或全反射，使观察到的像更加清晰。
二、实验器材1.菌落：大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物、金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物。
2.溶液或试剂：蒸馏水、碘液、结晶紫染色液、95%酒精、番红染色液、香柏油。
3.仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、镊子、擦镜纸。
三、实验步骤革兰氏染色：1.涂片取出载玻片，点燃载玻片，燃尽载玻片上的酒精和灭菌，在中间轻轻点一小滴蒸馏水，用接种环在试管的斜面培养基上，轻轻挑取少量菌体，整个过程试管口都要处在酒精灯的上方，而且速度要快，以防污染培养基。
然后在载玻片的小水滴以转圈的动作涂片，待水滴混浊后停住，等其干燥、固定。
2.初染滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于菌落上，染色1～2min ，倾去染色液，有细水从载玻片上方向下冲洗，至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。
3.媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
4.脱色将载玻片上面的水甩净，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管加95%的酒精脱色，直至流出的酒精刚好不出现蓝色，立即用水冲净酒精，将载玻片上水甩净。
革兰氏染色基本原理及方法
革兰氏染色一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
二、原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
三、实验用品准备：灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器四、操作：1 涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。
2 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。
3 固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。
4 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。
5 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
6 媒染：用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。
革兰氏染色原理
革兰氏染色原理
革兰氏染色法的原理是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙。
因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差。
在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
扩展资料：
一、方法概述
细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。
阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。
有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
二、常见种类
常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。
常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。
革兰氏染色法
Ⅱ、革兰氏染色法一、实验原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C．Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
革兰氏染色法的主要步骤是先用结晶紫进行初染；再加媒染剂--碘液，以增加染料与细胞间的亲和力，使结晶紫和碘在细胞膜上形成分子量较大的复合物；然后用脱色剂(乙醇或丙酮)脱色；最后用蕃红复染。
凡细菌不被脱色而保留初染剂的颜色(紫色)者为革兰氏阳性菌，如被脱色后又染上复染剂的颜色(红色)者为革兰氏阴性菌。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
二、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28℃培养16h的枯草杆菌(Bacillussubtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。
4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；三、操作步骤1、涂片在一张载玻片上加两滴蒸馏水后，分别涂布枯草芽孢杆菌和大肠杆菌(注意涂片切不可过于浓厚)。
2、固定将制成的涂片干燥固定，固定时通过火焰1-2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
3、染色⑴初染将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。
倾去染色液，用自来水小心地冲洗。
⑵媒染滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。
革兰氏染色原理和结果
革兰氏染色原理和结果：1先用结晶紫染色，菌体呈紫色2再加碘液媒染，菌体呈紫色3然后用乙醇脱色，革兰氏阳细菌成紫色，阴性细菌无色4最后用番红复染，革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈红色。
革兰氏染色结果与细胞壁组成有关，革兰氏阳性细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网络结构较密，含脂量又低，当他被酒精脱色时引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小，从而阻止了不溶性结晶紫-碘复合物的逸出，故菌体呈紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁肽聚糖层较薄，含量低，而脂类含量高，当酒精脱色时，脂类物质溶解，细胞壁透性增大，结晶紫-碘复合物也随之被抽提出来，故革兰氏阴性细菌呈红色。
立克次体支原体衣原体病毒：立克次体是介于细菌与病毒之间，许多方面又类似于细菌专性活细胞内寄生的原核微生物类群。
支原体是介于细菌与立克次体之间又不具细胞壁的原核微生物衣原体是介于立克次体与病毒之间，能通过细菌滤器，专性活细胞内寄生的一类原核微生物病毒是一类具超显微的没有细胞结构的专性活细胞内寄生的实体，它们在活细胞外具有一般化学大分子特征，一旦进入宿主细胞又具有生命特征。
细菌放线菌属原核生物，细胞壁的主要成分是肽聚糖，脂多糖，酵母菌霉菌属真核生物，酵母菌细胞壁的主要成分是葡萄糖，甘露聚糖，霉菌细胞壁的主要成分是纤维素和几丁质，另有少量的蛋白质和脂类。
细菌菌落：一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。
放线菌与细菌有明显差别的菌落：干燥、不透明、表面呈致密的丝绒状，上有一层彩色的“干粉”；酵母菌：菌落与细菌相仿，呈现湿润、较透明，表面较光滑、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等特点。
霉菌：外观上很易辨认，形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或松或紧的蛛网状、绒毛状、棉絮状或毡状；噬菌体是侵染细菌放线菌等细胞型微生物的病毒。
根据噬菌体与宿主细胞的关系可分为烈性噬菌体和温和噬菌体两类。
革兰氏染色原理
一、染色原理与方法（1）染色原理由于微生物细胞含有大量水分，机体是无色透明的，与周围背景没有明显的反差，必须进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通过染色的方法，在显微镜下才能看得清楚，并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性，以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。
（2）染色方法①简单染色法简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上颜色，观察细菌的形态。
②复染色法用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。
主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。
（3）革兰氏染色法①原理革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。
1884年由丹麦医师Gr a m创立。
染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G―表示。
细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
②细菌的革兰氏染色步骤涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥→观察A）取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同；B）用草酸铵结晶紫染色1m i n后水洗；C）加碘液媒染1mi n后水洗；D）斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20～30s，随即水洗；E）用蕃红染液复染30s，水洗；F）用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。
二、影响革兰氏染色结果准确性的关键因素1.试剂影响。
这是我们首先应该确保的，我们使用的试剂必须是有效的。
实验室应当建立有效的试剂管理程序，从试剂的验收到存放、使用、过期后的废弃处理都应有严格规定，确保我们使用的试剂是有效的。
工欲善其事必先利其器，这也是我们试验成功最基础的一环。
2.染色菌的选择。
菌龄对革兰氏染色结果的影响是十分大的。
革兰氏染色原理
革兰氏染色原理
革兰氏染色原理是一种被用来鉴定细菌的技术，由古斯塔夫·革兰（Gustaf Jahannesso ）于1884年提出，被公认为是系统微生物学的创始人。
一、染色原理
革兰氏染色原理是指，细菌和一些真菌有一种特殊的结构——外护壳，称为外护壳或质壳。
外护壳内含有许多有机质或无机质，表面有特异性结构抗原，可被某些特异抗体识别。
细菌在染色时，一些染料会和其表面抗原结合，从而呈现出不同的
颜色，从而可以正确识别的细菌属种类。
二、染色过程
革兰氏染色有六个步骤：
（1）培养物采集：将细菌培养物采集，置于培养皿中细菌的膜上，可以获得足够
的菌柄。
（2）抗原稀释：将有效抗原配制一定浓度的培养水稀释，以稀释抗原液供染色使用。
（3）添加染料：将配好的抗原液加入染料中，进行充分混合，以便使染色完全结合。
（4）染色：用混合液将细菌培养物染色，将细菌培养物采用不同的抗原，从而得
到不同的染色结果。
（5）分析：分析含有抗原的细菌抗体的染色图谱，并结合伴生抗原进行比较分析，辨别它们中耳变型装配度信息。
（6）记录：根据分析结果对培养物中细胞特性进行归类，将具体染色结果以记录
形式保存下来。
三、优点
革兰氏染色原理是一种速度快、简单、准确的技术，可用来测定各种细菌的属种，能够实现自动化的生物学分类，多用于细菌的鉴定性检验。
它精确地提取细菌的抗
原凝集特性，减少决策的不确定性，可以更快更准确地识别细菌属种，是鉴定细菌的最有效方法之一。
革兰氏染色法原理
革兰氏染色法原理革兰氏染色法是一种常用的细菌染色法，是由德国医学家威廉·革兰发明的，它的原理是根据细菌的结构和生理特性，利用特定的染料把细菌分类鉴定出来。
这种染色法在细菌学领域中应用广泛，可以用来辨认出不同细菌的种类和性质。
一、革兰氏染色法的原理革兰氏染色法的原理是根据细菌的结构和生理特性，利用特定的染料把细菌分类鉴定出来。
染色法的基本步骤是将细菌用特定的染料染色，染色过程中，染料会与细菌的结构和生理特性相互作用，染料的固定程度及细菌的色泽、大小、形状、染色效果等，可以用来鉴别出不同种类的细菌。
二、革兰氏染色法的特点1、廉价易得。
革兰氏染色法使用的染料廉价易得，染色法只需要简单的实验设备，而且染色过程简单，易于操作，安全可靠。
2、染色效果好。
革兰氏染色法使用的染料染色效果好，染色后的细菌可以清晰地观察出来，便于进行鉴定和研究。
3、灵敏度高。
革兰氏染色法的灵敏度高，可以检测出微量的细菌，而且它可以检测出更小的细菌，比其他染色方法敏感很多。
三、革兰氏染色法的应用1、医学检验。
革兰氏染色法可以用来检测体液中的病原体，检测它们的种类和数量，可以用来诊断疾病和确定病原体的种类，进一步确定治疗方案。
2、制药工业。
革兰氏染色法可以用来检测药物中污染物的存在，以及药物成分的含量，确保药物的质量和安全性。
3、食品卫生。
革兰氏染色法可以用来检测食品中的细菌，以确保食品的卫生安全性。
4、环境监测。
革兰氏染色法可以用来检测环境中的细菌，以监测环境质量，检测水质和土壤质量。
综上所述，革兰氏染色法是一种简单、安全、有效的细菌染色方法，具有廉价易得、染色效果好、灵敏度高的特点，在细菌学领域应用广泛，可以用来检测和鉴定不同种类的细菌，在医学检验、制药工业、食品卫生和环境监测等领域有着重要的应用价值。
革兰氏染色原理课件
通过革兰氏染色对细菌细胞壁的 影响，可以进一步了解细菌的生 理特性和结构特点，为临床诊断
和治疗提供依据。
03
革兰氏染色的操作流程
涂片与固定
涂片
将待染色的样品涂布在载玻片上 ，确保涂层均匀。
固定
通过加热或化学固定剂使涂片上 的微生物细胞固定在载玻片上， 防止在染色过程中细胞被冲走。
脱色与复染
脱色
此外，在法医学中，革兰氏染色也常用于刑 事侦查和尸体解剖，帮助鉴定死者是否死于 细菌感染以及细菌的种类和来源。总之，革 兰氏染色作为一种经典的染色技术，在医学 诊断、研究和其他领域中发挥着重要作用。
06
革兰氏染色的优缺点及未来展望
革兰氏染色的优点与局限性
优点 操作简便，结果准确可靠，是鉴别细菌的重要工具之一。
在肠道菌群检测中的应用
肠道菌群是人体内重要的微生物群落，对维持人体健康起着重要作用。肠道菌群失调可能导 致多种疾病，如肠道感染、消化不良等。革兰氏染色在肠道菌群检测中也有广泛应用。
通过革兰氏染色，可以区分肠道中的有益菌、有害菌和条件致病菌。有益菌如乳酸菌多为革 兰氏阳性菌，而有害菌如大肠杆菌多为革兰氏阴性菌。了解肠道中的菌群分布和种类，有助 于评估肠道健康状况和制定相应的治疗措施。
革兰氏染色结果的判定标准
革兰氏阳性菌
染色后呈蓝紫色，细胞壁厚，肽聚糖网状结构致密，脂质含量高。
革兰氏阴性菌
染色后呈红色，细胞壁薄，肽聚糖网状结构稀疏，脂质含量低。
革兰氏染色结果的分析与解读
01
02
03
形态学观察
观察染色后的细菌形态， 如球状、杆状、螺旋状等， 有助于初步判断细菌类型。
生理学特性分析
对某些化学物质容易透过。
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革兰氏染色原理
革兰氏染色是大家检测过程中常用到的基本技能之一，也是辅助我们鉴别菌种种类的基础方法之一。
但大家在日常的革兰氏染色过程中有没有发现过这样的问题：明明是革兰氏阴性菌，怎么我的染色结果是阳性呢？或者怎么阳性菌被我染成阴性了呢？为什么会产生这样的偏差？
革兰氏染色是一项经典的细菌鉴别手段，自19世纪80年代丹麦的医师GRAM创立起，至今已经近一个半世纪，仍旧在细菌的检测和鉴定分类上被广泛应用着。
在我国，GB 4789系列的国标中很多致病菌的检测也都需要进行革兰氏染色，可见其重要性。
甚至可以说没有精准掌握革兰氏染色的微生物检验员，不会是一个合格的检验员。
革兰氏染色的原理：
细菌细胞通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色的步骤：
涂片、晾干、固定、染色、水洗、媒染、脱色、复染。
此处不加赘述。
影响革兰氏染色结果准确性的关键因素：
1.试剂影响。
这是我们首先应该确保的，我们使用的试剂必须是有效的。
实验室应当建立有效的试剂管理程序，从试剂的验收到存放、使用、过期后的废弃
处理都应有严格规定，确保我们使用的试剂是有效的。
工欲善其事必先利其器，这也是我们试验成功最基础的一环。
2.染色菌的选择。
菌龄对革兰氏染色结果的影响是十分大的。
我们染色过程中选择的菌应该是处于活跃生长期，这样的细菌活性强，生理特征明显，所以染色的结果准确度高，一般情况下不会出现误差。
培养时间较长的革兰氏阳性菌，由于细胞老化，甚至有部分菌在染色之前就已经死亡或者自行溶解了，造成细胞壁通透性增加，就会呈现出假阴性。
以金黄色葡萄球菌为例，金葡是典型的革兰氏阳性菌，有人曾经统计过培养至不同时间的金葡的革兰氏染色结果，结果表明，在金葡活跃期的22h-26h之间，染色结果的准确率基本可以达到100%，而超过26h之后，准确率就开始下降，培养至36h时，准确率大概会下降30%左右。
所以我们在染色时，一定要选择处于活跃期、活性较强的菌落，在检测过程中一定要严格的在国标要求的时间段内进行染色试验，不能提前或者延后。
3.涂菌的状态。
在染色最初的涂布中，在挑取菌体后应该在无菌水上涂成薄薄的菌膜。
而在涂布过程中，若是菌体堆积，也会极大影响染色结果的准确性。
菌落堆积过多，往往菌体之间变得毫无缝隙，而其细胞壁的成分影响造成了脱色的情况不佳，容易产生假阳性的结果。
同时，在初染、媒染及复染的过程中，应将染液覆盖整个菌膜，避免一部分菌染色而另一部分菌没有染色。
因此在涂片过程一定要将菌膜涂得少而均匀，这样才能达到最佳效果。
4.媒染时间。
媒染时间对革兰氏阴性菌的染色结果有很大影响。
由于媒染时间过长，结晶紫在碘液长时间作用下过分牢固结合在菌体细胞壁上，影响了酒精的脱色效果，从而会导致这种假阳性的效果。
以典型的革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌为例，有人做过统计，媒染时间严格控制在40s-60s之内，染色结果准确率基本可达到100%，而超过60s准确率会有一定的降低，若媒染超过100s，准确率甚至可降低接近20%左右。
因此在媒染过程中一定要注意媒染时间，控制在50-60s为宜。
5.酒精脱色。
酒精脱色也是一个对结果影响较大的操作过程。
革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌最主要的差异是细胞壁肽聚糖层厚度和结构，革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层很薄，脂多糖含量高因此在酒精脱色时，细菌细胞壁的多糖成分会被酒精溶解，增大了细胞壁的通透性，结晶紫及碘复合物就很快被酒精洗脱，之后就会被沙黄复染呈红色；而阳性菌肽聚糖层厚，脂多糖少，酒精只能起到脱水效果而无法进入，这样结晶紫和复合物就无法洗脱出来使细胞呈紫色。
因此，酒精脱色时间短，脱色效果不佳，会导致阴性菌菌体内的结晶紫和复合物不能有效的全部洗脱出来，就会出现明显的误差，使阴性菌出现假阳性。
而洗脱时间过长，也会导致阳性菌的细胞壁被酒精破坏，导致细胞内的紫色被洗脱，呈现假阴性。
因此洗脱时间也是革兰氏染色的关键环节。
洗脱时间应当严格控制在20s-30s之间，同时保证洗脱效果。
总结一下，在整个革兰氏染色过程中，在保证试剂有效的前提下，需要严格控制的几个方面：染色菌必须是在其活跃期内，涂布状态不可太厚，媒染时间严格控制在50s-60s之间，脱色时间严格控制在20s-30s。
把握以上的关键控制点，革兰氏染色基本就不会出现问题啦！。