免疫学文献

新疆农业大学专业文献综述题目: 免疫学检测技术在食品安全检测中的应用姓名: 苗森学院: 食品科学与药学学院班级: 13级研究生学号: 1340020241指导教师: 王子荣2013年4月20 日新疆农业大学教务处制免疫学检测技术在食品安全检测中的应用摘要: 免疫学检测技术是指以抗原与抗体的特异性结合反应为基础的分析技术，具有灵敏度高、特异性强、检测成本低、安全可靠、方便快捷等优点，在食品的安全检测中有着广阔的应用前景。

本文主要介绍了免疫荧光技术、酶免疫检测技术、放射免疫技术、免疫胶体金检测技术、单克隆抗体技术、免疫测定新技术在食品安全检测中的应用, 对食品安全相关的免疫学检测技术进行了综述,并提出了存在的问题以及展望。

关键词: 免疫学检测技术;食品安全检测;应用Immunological Detection Technology Application In The Food Safety TestingAbstract:The immunological detection technology refers to the specificity of the antigen and antibody binding reaction on the basis of analysis technology. With high sensitivity, high specificity, detection of low cost, safe, reliable, and the advantages of convenient and quick, in food safety testing has a broad application prospect. Immunofluorescence technique is mainly introduced in this paper, enzyme immune detection technology, ria technology, immune colloidal gold test technology,he monoclonal antibody technology, the new technology of immunoassay in food safety testing.The application of immunological detection of food safety related technology were summarized and put forward the existing problems and prospects.Key words: Immunological detection technology; Food safety testing; Application 随着社会的发展和人们生活水平的提高，食品种类越来越丰富，在食品中检测出的有毒有害物质组分和种类也越来越多，食品安全问题是全球关注的焦点，已经成为全世界关注的重大问题，它直接影响人类健康和经济发展，近年来的苏丹红事件、啤酒甲醛风波、人造蜂蜜事件、毒奶粉事件、狐狸肉冒充驴肉事件等都给人们敲响了食品安全的警钟。

食品中很多需要检测的物质含量都是极低的，样品中待检物的浓度常为μg、ng 甚至pg 级，除此之外很多的检测物除了需要检测物质本身成分以外，还需要对其相关衍生物和降解物进行测定，区别元素的价态以及同位异构体等。

如何快速、有效检测食品中的污染物残留,保证食品的安全供应是食品检验中的一个重点。

免疫学检测技术是指以抗原与抗体的特异性结合反应为基础的分析技术，具有灵敏度高、特异性强、检测成本低、安全可靠、方便快捷等优点，在食品的安全检测中有着广阔的应用前景[1]。

1、免疫荧光技术（IFA）在食品安全检测中的应用免疫荧光技术（IFA）是指利用用荧光素标记的抗体，进行检测抗原或抗体的免疫学标记免疫检测技术。

IFA通常有的直接法和间接法两种操作形式，是使示踪物质和抗体分子相结合,通过抗原抗体的反应进行细胞或组织内的抗原物质定位。

现在对于霍乱弧菌、痢疾志贺菌、炭疽杆菌和布氏杆菌等的试验诊断有着良好的效果,流式细胞分析是荧光抗体技术的一种特殊应用,该应用不仅能够用于检测受染细胞表面的病毒抗原, 而且能够检测受染细胞内的病毒抗原[2]。

除此以外,免疫荧光技术对于检测抗生素残留也有一定的应用。

食品安全检测的各个领域都可以应用到免疫荧光技术所衍生出的许多新技术和方法,从而达到更加精确的检测的目的。

张冬青等[3]研究了膜溶解、密度梯度分离纯化结合免疫荧光技术对饮用水中的隐孢子虫和贾第鞭毛虫进行定性定量分析检测, 结果是其回收率分别为56%和35%均高于EPA1623 方法的质量控制要求。

免疫荧光技术不但操作方法简单而且成本低,在国内的水源检测方面广泛的进行使用是可以实现的。

有研究者把免疫荧光技术与微菌落技术结合使用, 就是我们通常说的菌落免疫荧光技术(M-CIF)[4]。

微菌落免疫荧光技术法重复性和敏感性都很好,通过实验用已知沙门氏菌浓度测定最低检出量,普通的方法检出为10个/mL, 而菌落免疫荧光技术为5个/mL; 通过试验阳性对照和阴性对照重复10次, 阳性菌落均颜色稳定,荧光明亮；而阴性菌落均荧光相对很弱[5]。

仅需5~ 6 h就能用菌落免疫荧光技术对不同菌落进行特异性的荧光染色鉴别细菌, 所以该技术在食品中的有害微生物检测方面有着广泛的应用前景[6]。

2、酶联免疫吸附技术（ELISA）在食品安全检测中的应用酶联免疫吸附技术的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。

在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应[7]。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。

再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。

此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析[8]。

常用的 ELISA 检测的农药残留种类有:有机磷农药: 有报道采用 ELISA 法检测对乙酰甲胺磷。

拟除虫菊酯类农药: 骆爱兰等以菊酯类农药的通用结构间苯氧基苯甲酸(PBA)为半抗原, 与牛血清蛋白(BSA)结合制备多种菊酯类农药有特异性的广谱性抗体, 建立间接竞争 ELISA 检测方法, 对 PBA 最低检出限达0.193μg/mL,抑制中浓度为 3.707μg/mL,且对氯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯均有特异性识别[9]。

有机氯类农药:Deschamps等用毒莠定与 BSA 结合免疫兔和小鼠,分别制备多克隆抗体和 McAb, 比较两者的灵敏度和特异性, 兔抗血清的线性范围为 5-5000 ng/mL, 最低检出限为 5 ng/mL, 小鼠 McAb 的线性范围为1-20 ng/mL, 最低检出限为 1 ng/mL[10]。

生物毒素是其产生菌在适合产毒的条件下所产生的次生代谢产物。

在食品加工时虽然经加热、烹调等热处理, 但所产生的毒素结构一般不能被破坏,所以食品中生物毒素也日益受到关注[11]。

黄曲霉毒素是一种各国都严格限制其在食品中的含量致毒性和致癌性很强的真菌毒素。

20世纪70年代LA WELL 采用了酶联免疫吸附技术法来检测黄曲霉毒素。

蒋建云等研究了酶联免疫吸附技术的试剂盒, 通过对抗黄曲霉毒素抗体与待测抗原、酶标抗原的竞争免疫反应和酶的显色催化反应相结合的技术来检测黄曲霉毒素的含量[12]。

具有提取和纯化步骤简便、分析速度快、成本低、污染少, 准确度高和一次可测定大批量等优点[13]。

酶联免疫吸附技术因具灵敏度高、特异性强、价廉、快速和不需烦琐的预处理的优点成为现场分析的首选方法[14]。

类似酶联免疫吸附技术在农药残留的检测过程中抗农药抗体对于结构非相关的靶抗原具有很高的特异性, 与检测农药结构密切相关的个别的某些的农药或待检的代谢产物则可能与抗待检农药抗体发生交叉反应。

样品中如果存在的类似的物质,会导致该农药的定量检测降为定性检测或半定量或者出现定性假阴性与假阳性,会导致定量检测的准确程度变低,从而很大程度的影响了酶联免疫吸附技术的灵敏度和可靠性[15]。

酶联免疫吸附技术应用于食品安全检测方面同时也存在着一些问题有待解决，比如在制备抗体的时候比较较困难、也不能够多种成分进行同时分析、对试剂的要求和选择性比较高、有对类似一定程度的结构的化合物有交叉反应、分析不稳定或低分子量的化合物有一定的困难等[16]。

3、放射免疫技术（RIA）在食品安全检测中的应用放射免疫技术（RIA）是由BERSON和YALOW 1960年创建的以放射性核素为标记物的标记免疫分析的技术。

放射免疫技术测定准确性良好，灵敏度高，由于标记物放射性核素的检测灵敏性特别适用于激素、多肽和蛋白质的精确定量测定[17]。

放射免疫技术测定是指利用放射性物质作为抗原或抗体耦联物从而不需要ELISA 中的标记酶的技术。

通常在食品的安全检测过程中的同位素是C14和H3，放射免疫检测分析技术最先用于检测人血的对硫磷残留,残留量限为10-20 ng/mL，水中的残留量检测为4 ng/mL。

CHRAM等研究了放射免疫检测在快速检测方面的应用，并建立了CharmⅡ6600/7600 抗生素快速检测系统。

CharmⅡ系统是利用专一的受体来识别母环（结合于同一类抗生素族中的）以便最快速检测在样品中同一抗生素的残留情况[18]。

目前该检测系统就氯霉素类、β-内酰胺类、磺胺类、氨唑西林、四环素类及碱性磷酸酶这六项检测以被美国食品和药物管理局认可。

1986年EVRAD等将牛的尿液提取并浓缩后，通过放射免疫技术对牛尿液中诺龙的残留量进行了检测，检测结果表明其灵敏度8 pg/mL，IC50值60 pg/mL。

通过对免疫原的设计使得放射免疫技术对它的代谢产物19- NA和19- NE也有很高检出率。

放射免疫技术能够有效的避免假阳性，可以将其大量检测阳性率较低的样品，在肉类、果疏以及水产品中的农药残留的检测中有广泛应用。

放射免疫技术还能够检测食品中的细菌、真菌、病毒和寄生虫及分子类物质，例如有学者采用放射免疫技术对牛奶中的天花粉蛋白进行了测定[19]。

4、免疫胶体金检测技术在食品安全检测中的应用胶体金免疫技术是从20世纪在荧光素、放射性同位素和酶三大标记技术之后发展起来的固相标记免疫测定技术。