高分子聚合物讲解

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《中国药典》2000年版二部
附录V C 柱色谱法 正文 个品种
《中国药典》2005年版二部
附录V H 分子排阻色谱法 正文20个品种
-内酰胺类抗生素高分子聚合物检查法
机理： 分子排阻色谱法 ，选择适当的色谱 系统，使所有高分子聚合物均一起几乎 无保留地被洗脱出，测出的是高分子聚 合物的总量。
要求：《中国药典》2005年版二部 附录V H 分子排阻色谱法中的 测定法（3）高分子杂质测定法
测定仪器
常压式：恒流泵--色谱柱--检测器 加压式：同高效液相色谱仪
例子：头孢他啶聚合物
用含硫酸铵的磷酸盐缓冲液作洗脱 液，结果能使头孢他啶与头孢他啶 聚合物分离开。
离子对试剂的离子强度
某些离子对试剂（如十二烷基硫酸钠、葡 萄糖等）在离子强度较低时可与 -内酰胺 类抗生素形成缔合物，后果是在Sephadex G-10中几乎不保留。 离子对试剂在离子强度增大时可消除这种 缔合现象，在Sephadex G-10中保留加大。
排阻色谱法
是一种液相色谱 固定相是多孔凝胶 分子筛机理
排阻色谱法常用固定相
亲水硅胶 凝胶 经修饰凝胶如葡聚糖凝胶（Sephadex） 和聚丙烯酰胺（Sepharose）
保留与洗脱规律
大于孔径的分子不保留 大分子保留时间短 小分子保留时间长
在《中国药典》2005中的应用
分子量测定法 生物大分子聚合物分子量与分子量 分布的测定法 高分子杂质测定法
例子：对照溶液的测定
用0.01% 十二烷基硫酸钠作为洗脱剂， 结果是几乎无保留洗脱出药物主峰。 这样保留时间就与样品溶液测定时聚合 物峰（几乎无保留）的保留时间一致， 有利于同等条件下比较。
流动相的pH值
一般在pH值4—8范围内选择 pH值降低，多元酸负电荷减少，离子对 结合力降低，洗脱加快。
计算方法：自身对照外标法
皮试（公认） 控制药品的过敏性物质（有争议）
过敏是质的反应，与量的关系不大 量变才会引起质变
-内酰胺类抗生素本身不是过敏原
均为分子量300—500附近的小分子 经试验：曾经对-内酰胺类抗生素药品过 敏的病人对高度提纯的同种药品不过敏 某些病人对-内酰胺类抗生素的过敏性： 同品种不同批号不一样
过敏原：高分子杂质
B-内酰胺类抗生素 高分子聚合物检查法
《中国药典》2005年版
-内酰胺类抗生素
青霉素类 头孢菌素类
药理作用及使用情况
抗菌机理：抑制细菌的细胞壁合成 抗菌谱：G+、G- ，因具体品种而异 用药方式：口服、注射 使用频率：最高
不良反应
胃肠道反应 注射疼痛 过敏反应
皮疹 休克
防止严重过敏反应的方法
ห้องสมุดไป่ตู้
常压式与加压式的比较
常压式
加压式
优点 柱容量大，可反复装 可大覆加大流速，对
填填料。
非测定组分的快速洗
脱尤其有用。
缺点 不可大覆加大流速， 很难找到大容量的密
对非测定组分的洗脱 封式色谱柱商品，实
只能等待。
验室一般不具备再装
填填料的技术。
系统适用性试验
一般情况下按高效液相色谱法 不能达到基线分离时，单体与其二聚体分 离度的计算公式为： R =二聚体的峰高/单体与二聚体之间的谷高 除另有规定外，分离度应大于2.0。
操作注意事项
填装固定相时及测定过程中应注意排除气泡； 测定时流速不宜过快，一般为0.51.0ml/min，但 样品溶液洗脱主成分峰时可加快流速冲洗 ； 完成测定后立即用蒸馏水冲洗干净保存，注意保 持填料泡在水里，切勿流干； 当发现色谱柱的分离效果不好时，可把填体倒出， 经再生后再填装使用。
Sephadex G-10填体的再生
用0.1mol/L NaOH与0.5mol/LNaCl混合 液浸泡半小时 用蒸馏水洗至中性 装柱（如前） 用蒸馏水冲洗干净
谢谢观看
常用流动相
pH7.0磷酸盐缓冲液 添加其它离子对试剂的pH7.0磷酸盐缓冲液 0.01%十二烷基硫酸钠 水
流动相因素对色谱效果的影响
离子对试剂的种类 离子对试剂的离子强度 pH值
流动相离子对试剂的种类
在 pH 7.0 条件下， -内酰胺类抗生素可 以与离子 HPO42- 、 Cl- 等结合，使在 Sephadex G-10中的吸附力加强，保留加大。 常用的离子对洗脱液（0.1 mol/L, pH7.0): 枸橼酸钠溶液、磷酸盐缓冲液、硫酸铵溶 液、醋酸钠溶液等
外源性：发酵工艺过程残留的微生物蛋 白、多肽类杂质（提高提纯工艺技术基 本可解决） 内源性：-内酰胺类抗生素自身聚合成 高分子聚合物（分子量约1000—5000）
高分子聚合物和产生
贮存过程慢慢形成 温度高可加速聚合物的形成 pH偏高可能促进聚合物的形成 光照、水分有一定的影响
-内酰胺类抗生素高分子聚合物检查法
使用 -内酰胺类抗生素主成分的对照品 以对照溶液的主峰作为对照峰 以样品溶液图谱的聚合物峰作被测峰 以外标法计算
有关进样方法：常压系统手工进样
先填体表面的流动相吸干或渗干，立即 用微量加样器将待测溶液沿着色谱管壁转 圈缓缓加入，注意勿使填体翻起，待之随 着重力的作用渗入固定相后，再沿着色谱 管壁转圈缓缓加入35ml流动相，以洗下 残留在色谱管壁的待测溶液，继续通流动 相洗脱。
不能达到基线分离时分离度的计算
测定系统
固定相：葡聚糖凝胶 Sephadex G-10 流动相：缓冲液、水、十二烷基硫酸 钠溶液等 检测波长：254 nm
固定相葡聚糖凝胶Sephadex G-10的装填
加水浸泡48小时使充分溶胀； 除去空气泡，除去漂浮物； 搅拌混悬，慢慢倾入玻璃柱，让自然沉 降，一次性装填完毕； 冲洗管壁，并使色谱柱面平整； 用水连续冲洗干净。