实验四甘油三酯测定ppt课件
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3
生化分析相关概念 正确度 大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),
4
生化分析相关概念 精密度：表示测量结果中的随机误差大小的程度，即指在一定条件下进行多
次测定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。
5
生化分析相关概念 实验方法分类 ①决定性方法（definitive method） ②参考方法（reference method） ③常规方法（routine method）
标准液 （ul） ——
20 ——
样本 （ul） —— —— 20
酶工作液（ml) 1.5
1.5 1.5
混匀，37℃孵育15min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。
25
酶工作液
试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂
试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二氯-2-羟基苯
条件温和，但灵敏度低 基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色
21
色谱法 核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的
建立及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应 用。
22
酶法 1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用
酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽 2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定 3.甘油氧化酶法
6
①决定性方法（definitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详 细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定 结果为“确定值”，与“真值”最接近。由于技术要求太高，费用昂贵，
用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( 一般不用于常规工作 )
7
②参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方 法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不 计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条 件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常规方法，评价其误 差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。
15
TG的代谢 外源性途径 内源性途径
16
外源性途径： 指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入
细胞，再合成TG并与其他脂质形成CM，通过淋巴系统入血。CM中的 TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离脂肪酸（FFA）， 被细胞利用或贮存。
17
内源性途径： CM水解产物—CM残粒以受体介导的形式被肝脏吸收，其衍生物和一些新
磺酸盐 Mg2+
26
计算TG的含量 甘油三酯浓度（mmol/L)=A样/A标×标准液浓度
(2.26mmol/L) 单位换算：
甘油三酯mmol/L×88.5=甘油三酯mg/dL
27
实验操作(自动分析）
空白管 校准管 质控管 样本管
试剂1 （ul） 240
240
240
240
蒸馏水（ul） 3
—— ——
用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂盒等。 ( 有条件实验 室可用于常规工作 )
8
③常规方法（routine method）有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。 用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。 例如： TG 定量 决定性方法——同位素稀释/质谱（ID/GC/MS） 参考方法——酶法 常规方法——酶法
23
磷酸甘油氧化酶法实验原理:
பைடு நூலகம்
TG + H2O 甘油+ATP 甘油-3-磷酸+O2 H2O2+4-AAP+DHBS
LPL GK
甘油+FFA 甘油-3-磷酸+ADP
GPO
POD
磷酸二羟丙酮+H2O2 醌亚胺+ H2O
24
实验操作(手工分析）:
加入物
空白管 标准管 样本管
蒸馏水（ul） 20
—— ——
生化分析相关概念 准确度为一次测量结果与被测量的真值之间的一致程度。 准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如谈准确度高、低，是否合格。
1
测量误差:是测量结果减真值之差。 误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。
2
不准确度的数字表达是不确定度 (标准差和置信区间的半宽度表示)。 可以理解为测量结果与约定真值之差的范围。
——
标准液 （ul） ——
3
——
——
质控液 （ul） ——
——
3
——
样本（ul） ——
—— ——
3
混匀，37℃孵育5min
试剂2（ul） 60
60
60
60
混匀，37℃孵育5min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。
28
注意要点： 1．酶试剂发红时，不可再用。 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 线性范围上限为11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水稀释。
13
TG的生物化学 二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要
来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。
14
除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离 甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL） 及其残粒中，TG含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋 白（RLP）
9
实验方法选择原则 ①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。 ②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。
10
实验四 血清三酰甘油测定
11
实验目的: 1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理和意义． 2.了解三酰甘油的正常值范围.
12
TG的生物化学
一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是一项重要的临床血脂常规测定指 标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心 病的一项独立的危险因素日益受到重视 。
组分合成VLDL。
18
TG测定的方法学 ➢ 化学法 ➢ 色谱法 ➢ 酶法
19
化学法 化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，
用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测 甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不能自动化，而不适于常规工 作应用。
20
化学法 1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-变色酸法） 比较准确 2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便，
生化分析相关概念 正确度 大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),
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生化分析相关概念 精密度：表示测量结果中的随机误差大小的程度，即指在一定条件下进行多
次测定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。
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生化分析相关概念 实验方法分类 ①决定性方法（definitive method） ②参考方法（reference method） ③常规方法（routine method）
标准液 （ul） ——
20 ——
样本 （ul） —— —— 20
酶工作液（ml) 1.5
1.5 1.5
混匀，37℃孵育15min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。
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酶工作液
试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂
试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二氯-2-羟基苯
条件温和，但灵敏度低 基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色
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色谱法 核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的
建立及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应 用。
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酶法 1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用
酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽 2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定 3.甘油氧化酶法
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①决定性方法（definitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详 细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定 结果为“确定值”，与“真值”最接近。由于技术要求太高，费用昂贵，
用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( 一般不用于常规工作 )
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②参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方 法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不 计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条 件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常规方法，评价其误 差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。
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TG的代谢 外源性途径 内源性途径
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外源性途径： 指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入
细胞，再合成TG并与其他脂质形成CM，通过淋巴系统入血。CM中的 TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离脂肪酸（FFA）， 被细胞利用或贮存。
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内源性途径： CM水解产物—CM残粒以受体介导的形式被肝脏吸收，其衍生物和一些新
磺酸盐 Mg2+
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计算TG的含量 甘油三酯浓度（mmol/L)=A样/A标×标准液浓度
(2.26mmol/L) 单位换算：
甘油三酯mmol/L×88.5=甘油三酯mg/dL
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实验操作(自动分析）
空白管 校准管 质控管 样本管
试剂1 （ul） 240
240
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蒸馏水（ul） 3
—— ——
用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂盒等。 ( 有条件实验 室可用于常规工作 )
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③常规方法（routine method）有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。 用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。 例如： TG 定量 决定性方法——同位素稀释/质谱（ID/GC/MS） 参考方法——酶法 常规方法——酶法
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磷酸甘油氧化酶法实验原理:
பைடு நூலகம்
TG + H2O 甘油+ATP 甘油-3-磷酸+O2 H2O2+4-AAP+DHBS
LPL GK
甘油+FFA 甘油-3-磷酸+ADP
GPO
POD
磷酸二羟丙酮+H2O2 醌亚胺+ H2O
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实验操作(手工分析）:
加入物
空白管 标准管 样本管
蒸馏水（ul） 20
—— ——
生化分析相关概念 准确度为一次测量结果与被测量的真值之间的一致程度。 准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如谈准确度高、低，是否合格。
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测量误差:是测量结果减真值之差。 误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。
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不准确度的数字表达是不确定度 (标准差和置信区间的半宽度表示)。 可以理解为测量结果与约定真值之差的范围。
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标准液 （ul） ——
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——
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质控液 （ul） ——
——
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样本（ul） ——
—— ——
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混匀，37℃孵育5min
试剂2（ul） 60
60
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混匀，37℃孵育5min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。
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注意要点： 1．酶试剂发红时，不可再用。 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 线性范围上限为11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水稀释。
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TG的生物化学 二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要
来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。
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除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离 甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL） 及其残粒中，TG含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋 白（RLP）
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实验方法选择原则 ①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。 ②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。
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实验四 血清三酰甘油测定
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实验目的: 1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理和意义． 2.了解三酰甘油的正常值范围.
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TG的生物化学
一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是一项重要的临床血脂常规测定指 标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心 病的一项独立的危险因素日益受到重视 。
组分合成VLDL。
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TG测定的方法学 ➢ 化学法 ➢ 色谱法 ➢ 酶法
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化学法 化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，
用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测 甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不能自动化，而不适于常规工 作应用。
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化学法 1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-变色酸法） 比较准确 2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便，