细菌转化

转化率
统计每个培养皿中的菌落数。 统计每个培养皿中的菌落数。 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子， 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据 此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／ 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／ 涂板菌液体积 转化频率（转化子数／ mg质粒DNA）＝转化子总数／ 质粒DNA）＝转化子总数 转化频率（转化子数／每mg质粒DNA）＝转化子总数／质 DNA加入量 加入量(mg) 粒DNA加入量(mg) 感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数× 感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数×菌液总体 积／涂板菌液体积 感受态细胞转化效率＝转化子总数／ 感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数
实验结果
实验报告
写明实验目的、实验原理、仪器、材料与试 剂 详细列出实验步骤； 画出实验结果的示意图并做分析，计算转化 效率。
转化中的受体细胞
转化过程所用的受体细胞一般是限制性 修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性 内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。
实验原理
转化方法：电击法、 CaCl2、 RuCl等化 学试剂法 感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性 发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通 过时细胞的状态。 转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子 的受体细胞( Transformant )。
Baidu Nhomakorabea
实验原理
本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18 pUC18质粒携 pUC18 带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质 粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符 号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适 应稀释，在含氨苄青霉素的平板培养基上培养 ，只有转化体才能存活，而未受转化的受体细 胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。
对照组
对照组1 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 无菌双蒸水代替 对照组1: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 溶液,其它操作与上面相同。 溶液,其它操作与上面相同。此组正常情况 下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。 含抗生素的LB平板上应没有菌落出现 下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 无菌双蒸水代替 对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗 溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗 生素的LB平板上 LB平板 生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大 量菌落。 量菌落。
大肠杆菌感受态细胞及转化
实验目的
1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中 的意义。 2.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛 选转化体的方法。
实验原理
转化( Transformation )是将异源 DNA 分子 引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗 传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子 遗传、基因工程等研究的基本实验技术。
抗Amp
宿主细菌
含Amp培养基 Amp培养基
影响转化率的因素
细胞生长状态和密度。 转化的质粒 DNA 的质量和浓度。 试剂的质量。 防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。
实验仪器
超净工作台
恒温空气摇床
水浴锅
恒 温 培 养箱 养皿 培
实验试剂
大肠杆菌DH5α LB培养基 氨苄青霉素 pUC18质粒
实验步骤
转化
1. 取目的DNA加入大肠杆菌感受态细胞中，于 冰上放置30min 2. 于42℃水浴90S ℃ 3. 冰上放置 冰上放置2min 4. 加入800µlLB液体培养基于37培养1小时 5. 将培养液均匀涂布在含Amp+的培养基平板上 6. 将平板放置于37℃恒温培养箱中培养12-14个 ℃ 小时，然后观察结果