大肠杆菌电转化感受态细胞制备.
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化1. 引言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，广泛应用于生物学研究和工业生产中。
其中，大肠杆菌感受态细胞的制备与转化是生物工程领域中的重要技术，对于基因工程、药物研发等方面具有广泛的应用价值。
2. 大肠杆菌感受态细胞的制备大肠杆菌感受态细胞的制备是通过基因工程手段将目标基因（外源基因）导入大肠杆菌细胞内，使其表达目标蛋白或产生目标产物。
通常情况下，制备大肠杆菌感受态细胞需要进行以下步骤：2.1 培养基的选择在进行大肠杆菌感受态细胞的制备过程中，需要选择适合的培养基。
常用的培养基包括LB培养基、SOB培养基等，这些培养基中含有适量的氨基酸、碳源等，能够满足大肠杆菌细胞的生长需求。
2.2 载体的构建在进行大肠杆菌感受态细胞的制备时，需要将目标基因导入大肠杆菌细胞内。
这一过程中，通常需要将目标基因插入至载体（如质粒）中，构建重组质粒。
2.3 转化大肠杆菌细胞转化是将重组质粒导入大肠杆菌细胞内的过程。
常用的转化方法包括热激转化、电穿孔法等。
通过这些方法，可以将构建好的重组质粒导入大肠杆菌细胞内。
3. 大肠杆菌感受态细胞的转化大肠杆菌感受态细胞的转化是基因工程中的一个重要步骤，该技术可以使外源DNA片段导入并稳定集成到大肠杆菌的染色体内。
3.1 转化方法大肠杆菌感受态细胞的转化有多种方法，如热激转化法、化学转化法和电穿孔法等。
这些方法都是通过改变细菌细胞膜通透性，使外源DNA片段能够进入细胞内。
3.2 转化效率的影响因素影响大肠杆菌感受态细胞转化效率的因素很多，包括DNA片段的长度、外源DNA的纯度、细胞复活时间、转化温度等。
在进行大肠杆菌感受态细胞的转化时，需要考虑这些因素，以提高转化效率。
4. 个人观点和理解大肠杆菌感受态细胞的制备与转化是生物工程中的重要技术，对于基因工程、蛋白表达等方面具有重要意义。
通过对该技术的深入了解和实践，可提高对基因工程的理解与实践能力。
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化
（二）细胞转化
1. 取100l感受态细胞悬液加入PUC19质粒 DNA 1-10 l(10-100ng), 轻轻摇匀，冰上 放置20-30min。 2. 42℃水浴中保温1－2min，然后迅速冰上 冷却2min。 3. 42℃水浴中保温1－2min，然后迅速冰上 冷却2min。
3. 吸取1ml细菌到1.5ml离心管中，冰上冷却 10min，于4℃，4000r／min离心5min； 4. 倒净上清培养液，用1ml冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，冰浴30min； 5. 0～4℃，4000r／min离心10min； 6. 弃上清，加0.5ml冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶 液，小心悬浮细胞，冰上放置片刻后，即制 成了感受态细胞悬液 。
转化（transformation）： 是将异源DNA分子引入受体细胞，使其获得 新的遗传性状的一种技术方法。 进入细胞的DNA分子通过复制表达，才能实 现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传 性状。 转化过程所用的受体细胞一般是限制－修 饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和 甲基化酶的突变株。
实验 一
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化
杨受保 绍兴文理学院生科院 Yangsb@
一. 目的和要求
学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细 胞和将外源质粒DNA转入受体菌细胞的 技术及转化体筛选的技术方法。
二. 实验原理
感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法（如： CaCl2 ，RuCl等化学试剂法）的处理后， 细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多 有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞 (competent cell) 。
大肠杆菌电转化及电转感受态细胞的制备
3.大肠杆菌电转化及电转感受态细胞的制备电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，同时，DNA在电场力的作用下进入细胞，随后细胞复苏和弥合，从而实现质粒DNA的物理转移。
为避免电击时出现“击穿”，即产生电流，细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。
转化效率为109～1010转化子/µg DNA。
3.1．感受态细胞的制备（1）感受态细胞及材料准备同钙转化感受态细胞的制备相同。
（2）选合适的大肠杆菌在4℃，3000 rpm下离心10min，弃上清液（如需要，沉淀可在4℃的10%甘油中保存1～2天）。
（3）弃上清，离心管中加入少量ddH2O，轻柔的悬浮沉淀后，再将水注满离心杯，4℃，3000 rpm离心10min。
（4）重复步骤（3）1次。
（5）小心弃上清（沉淀可能会很松散），再往离心管中加入少量10%甘油（灭菌，预冷），重悬菌体，再加满10%甘油，4℃，4000 rpm离心10min。
（6）用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2～3ml，将细胞按200μl等份装入微量离心管，放置于－80℃下保存。
（7）按照钙转化感受态细胞方法进行转化效率和抗性检测。
3.2．电转化为了降低离子浓度，待转化的质粒DNA，如质粒或酶连产物，在电转化前应该进行纯化（乙醇沉淀），以下所有步骤都需要保持无菌操作。
（1）从－80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻；加入待转化的质粒DNA，冰浴10min；同时将电转化杯进行冰浴。
实际操作中，如果电转化杯浸泡在乙醇中，可提前取出电转化杯，在无菌的超净台上吹干。
（2）打开电转仪，调至Manual，调节电压为2.1KV。
特别注意，不同的电转化杯，所使用的电压不同。
防止电压不够，难以有效转化，以及，电压过高，击爆电转化杯，产生火花，产生危险。
（3）将冰浴后的感受态细胞（含DNA）转移到电转化杯中，轻轻敲击电极杯使混合物均匀进入电极杯的底部（注意：其体积以填充电转化杯到电极之间空间即可，具体的用量可参见具体所使用的电转化杯的说明）。
大肠杆菌热击感受态细胞的制备、注意事项和转化
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化大肠杆菌感受态细胞制备的原理：大肠杆菌自然条件下很难进行转化，其主要原因是转化因子的吸收较为困难。
在转化实验中，通常先采用人工的方法制备感受态细胞，代表性的方法之一是Ca2+诱导法。
感受态形成后，细胞生理状态会发生改变，出现各种蛋白质和酶，负责供体DNA的结合和加工等。
细胞表面正电荷增加，通透性增加，形成能接受外来的DNA分子的受体位点等。
Ca2+诱导DNA对大肠杆菌细胞的转化：①在0℃的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀，同时CaCl2使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，诱导大肠杆菌形成感受态。
②Ca2+能与加入的DNA分子结合，形成抗DNA酶（DNase）的羟基-磷酸钙复合物，并黏附在细菌细胞膜的外表面上。
当42℃热刺激短暂处理细菌细胞时，细胞膜的液晶结构发生剧烈扰动，并随之出现许多间隙，为DNA分子提供了进入细胞的通道。
一、受体菌的培养从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。
将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB 液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。
（OD600值在0.4到0.6之间）二、感受态细胞的制备 ( CaCl2 法)1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。
2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。
3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。
4、感受态细胞分装成200μl的小份,贮存于-80℃可保存半年。
大肠杆菌感受态过程中的注意事项：1、细菌的生长状态：不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从-80℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
大肠杆菌菌株感受态制备_电击转化及转化效率检测
3. 此步骤动作要快：将杯子外壁擦干，2 mm的杯子用电转化程序Ec2，1 mm杯子用电转化程序Ec1，电击后立即加入900~1000 ?L37oC预热的SOC（见分子克隆），轻柔吸打，转到2 mL的离心管中，37oC摇床，150 rpm，45~60 min后取适量涂平板。
大肠杆菌DH10B（Streptomycin resistant）电转化感受态制备
1．从保存的甘油管中取出200 ?L菌液到100 mL的LB液体中，37oC，200 rpm培养约13~16小时后（对数期），按2%接种到SOB培养基中；
o2．37C，约2~2.5小时后，OD600约0.5左右，取出，冰上缓慢摇育30 min。
5．用50 mL的冰预冷灭菌10%甘油洗菌体两次，用枪吸打时一定要轻柔，并时刻保持在冰上，离心后立即倒掉上清；
6．最后一次甘油洗涤后立即倒掉上清，视菌体量加入0~x ?L的10%冰预冷甘油重新悬浮细胞，75~200 ?L/管,分装到预冷的离心管中，电转化或立即放入-80oC冰箱保存，该感受态可以在-80oC保存半年。
? 菌体时刻保持冰上（4 oC以下）！尽ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ减少离开冰的时间。
? 最后分装的菌体浓度要浓。
? 对待菌体要尽量轻柔。
? 收集菌体用的管和枪头要灭菌，并在超净台操作。
电击转化
1. 75 ?L的感受态细胞加入TE溶解的质粒和连接产物最好不要超过0.6 ?L，不然容易击穿，如果质粒是用纯水溶解的可以适当提高，冰上放置10~30 min；
感受态细胞转化效率检测
1．取已知浓度的pUC19质粒（例如0.1 ng/?L）0.2 ?L到制备好的75 ?L感受态细胞中，按上述方法转化；
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化
实
验
原
理
如需将质粒载体转移进受体细菌，
】
02
需诱导受体细菌产生一种短暂的
感受态以摄取外源DNA。受体细胞
经过一些特殊方法(如电击
法,CaCl2等化学试剂法)的处理后,
细胞膜的通透性发生了暂时性的
改变,成为能允许外源DNA分子进
入的感受态细胞(Compenent
cells)。
转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获 得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基 因工程等研究领域的基本实验技术。其原理是细菌处于0℃的 CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形 成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细菌表面，经42℃短时 间热激处理，促进细胞吸收DNA复合物。进入受体细胞的DNA分 子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗 传性状。
本实验以E.coli DH5a菌株为受体细胞,并用CaCl2处理,使其处 于感受态,然后与pUCm-T质粒（T-载体）共保温，实现转化。 由于pUCm-T质粒带有氨苄青霉素抗性基因(Ampr )，可通过Amp 抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入pUCm-T，则在含Amp 的培养基上不能生长。能在Amp培养基上生长的受体细胞（转 化子）肯定已导入了pUCmT。转化子扩增后，可将转化的质粒 提取出，进行电泳、酶切等进一步鉴定。
01
设备
【设备、材料 与试剂】
02
恒温摇床，电热恒温培养箱，台式高速离心机， 无菌工作台，低温冰箱， 恒温水浴锅， 制冰 机， 分光光度计，微量移液枪。
03
材料
04
E. coli DH5α菌株: Rˉ,Mˉ,Ampˉ； pUCmT质粒DNA: 购自上海生工生物工程有 限公司。
大肠杆菌感受态细胞的制备
大肠杆菌感受态细胞的制备大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，广泛应用于生物技术领域。
在生物技术中，大肠杆菌感受态细胞的制备是非常重要的一步。
感受态细胞是指细胞表面有特定的受体，能够感受到外界的信号，从而引发细胞内的反应。
下面将介绍大肠杆菌感受态细胞的制备方法。
1. 菌株的选择首先需要选择适合的大肠杆菌菌株。
常用的菌株有DH5α、BL21等。
这些菌株具有较高的转化效率和稳定性，适合用于感受态细胞的制备。
2. 受体的构建感受态细胞的制备需要构建受体。
受体是一种蛋白质，能够与外界的信号分子结合，从而引发细胞内的反应。
常用的受体有蛋白激酶、离子通道等。
构建受体需要进行基因克隆、表达、纯化等步骤。
3. 质粒的构建构建受体需要使用质粒。
质粒是一种环状DNA分子，能够在细胞内自主复制。
常用的质粒有pET、pGEX等。
构建质粒需要进行基因克隆、转化、筛选等步骤。
4. 细胞的转化将构建好的质粒转化到大肠杆菌中。
转化是指将外源DNA导入到细胞内，使其表达外源蛋白。
转化需要进行化学转化、电转化等步骤。
5. 细胞的培养转化后的细胞需要进行培养。
培养条件包括温度、氧气、营养物质等。
培养时间需要根据不同的实验目的进行调整。
6. 受体的表达和纯化经过培养后，细胞内的受体会被表达出来。
为了得到纯净的受体，需要进行蛋白质纯化。
常用的纯化方法有亲和层析、离子交换层析等。
7. 受体的功能验证得到纯净的受体后，需要进行功能验证。
功能验证是指验证受体是否能够与外界的信号分子结合，并引发细胞内的反应。
常用的功能验证方法有荧光共振能量转移（FRET）、酶联免疫吸附实验（ELISA）等。
大肠杆菌感受态细胞的制备需要进行菌株的选择、受体的构建、质粒的构建、细胞的转化、细胞的培养、受体的表达和纯化、受体的功能验证等步骤。
这些步骤需要严格控制，才能得到高质量的感受态细胞。
大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法
大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法(Jin-Lab)随着基因工程和生物技术的发展，基因克隆和DNA转化技术已经成为生命科学研究的基本技术之一。
大肠杆菌是广泛应用的微生物基因克隆和表达系统，其中电转化是一种常用的DNA转化方法。
在电转化过程中，使用感受态细胞进行DNA 转化可以提高转化效率和获得更多的转化子。
因此，制备感受态细胞及其转化方法研究对开展基因克隆和表达等方面的研究具有非常重要的意义。
感受态细胞制备方法1.大肠杆菌菌株及培养基选择本实验使用大肠杆菌DH5α菌株，培养基为Luria-Bertani（LB）培养基。
2.细胞质壁分离方法将DH5α菌株经过预培养后，用LB培养基洗涤一次，收集菌落后进行以下步骤。
•在含有1mM EDTA的冷0.5M葡萄糖缓冲液中洗涤细胞三次；•加入60mg/mL的亚胺青钾（IPTG）处理4小时取得感受态细胞。
3.细胞计数及保存使用平板计数器计数，将细胞用LB培养基稀释至约1 x 10^9/mL，添加10% v/v的甘油保存在-80℃。
电转化方法1.大肠杆菌菌株及培养基选择本实验使用大肠杆菌DH5α菌株，培养基为SOC培养基（Super Optimal broth with Catabolite repression）。
2.DNA处理方法将所需构建质粒经过酶切和纯化等操作处理后，加入所需菌株中进行转化。
3.转化操作•取感受态细胞保存液用LB培养基洗涤3次；•加入所需DNA，静置30分钟使其与感受态细胞充分结合；•以1mm间隔安置两条电极在电转化仪中；•用微管脚吸取约50μL细胞转移到抗电极侧的铝箔上，用蒸馏水润湿铝箔；•将铝箔上细胞转移到电极之间的空间内，使用脉冲电压脉冲电压 1.8 kV, 25 uF, 200Ω电阻取得转化产物。
以上是大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化的实验步骤。
感受态细胞制备方法和电转化方法的优化将提高转化效率和转化获得率，从而为生命科学研究提供更好的服务。
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化一、实验原理体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。
研究发现，用含Ca2+ 的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源DNA。
大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。
细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。
用理化方法可以诱导细胞进入感受态，如电转化法、CaCL2法。
CaCL2法是目前实验室常用的制备感受态细胞的方法，其原理是使细菌处于0°C 、CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形，细胞膜的通透性发生改变，外源DNA附着于细胞膜表面，经42°C短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物。
宿主细胞一般是限制?D修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，而质粒载体携带有某一抗生素抗性基因，如抗氨卞青霉素的基因（AP＋）。
若将转化的细胞涂布与于含氨卞青霉素的平板上，则只有那些含有被转化质粒的细胞才能生存并生长增殖。
从而可以筛选出哪个克隆含有质粒。
本实验以E.coli JM109菌株为受体细胞，用CaCl2处理受体菌使其处于感受态，然后与pUC18质粒共保温实现转化。
将经过转化后的全部受体细胞进行适当稀释，在含有氨卞青霉素的平板培养基上培养，只有转化体才能存活，而未有转化的受体细胞则因无抵抗氨卞青霉素的能力而死亡。
转化子经过扩增后，可将转入的质粒DNA分离提取出来，用于电泳分析、限制性内切酶图谱的制作以及DNA测序等实验。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温摇床、电热恒温培养箱、电热恒温水浴锅、超净工作台、分光光度计、高速冷冻离心机、台式离心机。
2. 材料E.coli JM109受体菌、质粒pUC18。
3. 试剂：LB培养液（1L）：胰蛋白胨 10g酵母粉 5gNaCl 10g（高盐）或5g（低盐）氨苄青霉素（Ampicillin） 100mg/ml在三角瓶中将胰蛋白胨 10g，酵母粉 5g以及 NaCl 5g溶于1L的重蒸水中并高压灭菌。
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
实验六大肠杆菌感受态细胞的制备和转化PCR质粒基DNA 提取和酶切因工程连接的基本本路转化路线实验目的掌握氯化钙法制备与转化感受态细胞的原理、方法和技术。
学会对质粒转化结果的评估。
实验原理转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生种短暂的感受态以摄取外源DNA。
细胞经过些特殊方生一种短暂的感受态以摄取外源DNA细胞经过一些特殊方法（电击法、CaCl法等处理后，细胞膜的通透性发生了2暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的细胞，即感暂时性的改变成为能允许外源DNA分子进入的细胞即感受态细胞(Compenent cells)。
0.1mol/L CaCl是一种低渗溶液,在0℃冷冻处理大肠2杆菌细胞时,细胞膨胀成球形，DNA可吸附在其表面。
在短杆菌细胞时细胞膨胀成球形DNA可吸附在其表面在短暂的热冲击下，细胞可吸收外源DNA。
摄入了外援DNA的细胞在丰富培养基内复制并增殖，表达外源基因。
带有选择标记基因的外源载体在受体细胞内表达时，受体细胞表现标记基因的表型，使转化子与非转化子在选择培养基区分开来转化子在选择培养基上区分开来。
Amp r：抗氨苄青霉素–β内酰胺酶多克隆位点：外源DNA片段的插入位点Amp s菌株培养基上含有X-Gal和Amp r IPTG时，可使用蓝白斑筛选方法鉴别真正的重组的转化子。
涂布于含的培养基上可以生长Amp的培养基上，可以生长。
次日可见白色菌落--转化子。
蓝白斑筛选的原理（α-互补）蓝白斑筛选的原理（α-互补）现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有现在使用的许多载体都带有个大肠杆菌的的短区段其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。
在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化
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三、试剂
1. LB固体和液体培养基 2. Amp母液 3. 含Amp的LB固体培养基 4. SOC液体培养基 5. 0.1mol/L CaCl2溶液
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【实验步骤】
一、 受体菌的培养 从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α
单菌落,接种于20 ml LB液体培养基中,37℃ 下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。 将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中,37℃振荡培养1-2小时至 OD600 ＝0.5左右。
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二、 感受态细胞的制备 ( CaCl2 法)
1、将培养液转入离心管中,冰上放置10-30分 钟，然后于4℃下5000 rpm离心10分钟。
2、 弃上清，用预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶 液30ml轻轻悬浮细胞，冰上放置10分钟后， 4℃下5000 rpm离心10分钟，弃去上清。
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【思考题】
1、如何正确地设置连接和转化的各种对照？ 其意义何在？
2、如何提高连接和转编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
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实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备 与转化
【实验目的】
学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞的原 理与技术。
学习大肠杆菌转化的原理与技术。
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1
【实验原理】
在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转 移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般 缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完 成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。
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分子生物学：大肠杆菌感受态细胞的制备与转化
实验目的
1、学习和掌握CaCl2法制备大肠杆菌感受态 细胞的实验技术。 2、掌握热激转化实验技术。
实验原理
细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指外 源DNA导入细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗 溶液中，菌体细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗 DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间 热激处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择 性培养基中保温复苏一段时间，促使在转化过程中获得的新的 表型（如Amp）得到表达，然后将此细菌培养物涂在含有氨 苄青霉素的选择性培养基上，进行转化结果的筛选。
然后观察结果
实验步骤
对照组1: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,其它 操作与上面相同。此组正常情况下在含抗生素的LB 平板上应没有菌落出现。 对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,但 涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上， 此组正常情况下应产生大量菌落。
实验步骤
转化率统计 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据
此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/
涂板菌液体积 转化频率（转化子数/每mg质粒DNA）＝转化子总数/质粒
DNA加入量(mg) 感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数×菌液总体
积/涂板菌液体积 感受态细胞转化效率＝转化子总数/感受态细胞总数
养基平板表面划线，于37℃培养16小时 ➢ 挑取一个单菌落，转到3～5mlLB培养基中，于
37℃培养3～5小时 ➢ 3．将培养液全部转到100mlLB培养基中培养2～3
小时，到OD600＝0.3－0.4
大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法
摘要：本文主要介绍了大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法.第一天：1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升）,保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用第二天4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升摇瓶5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时6. 定时监控OD600值（培养1小时后每半小时测定一次）7. 当OD600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟,弃上清液（如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天）9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞.先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升）,然后加水稀释至离心管的2/3体积.10. 照上面步骤重复离心,小心弃去上清液11. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞12. 离心,弃上清液13. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞14. 照上面步骤离心,小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）15. 用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml16. 将细胞按150μl等份装入微量离心管,于-80°C保存转化方法：1. 在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA,冰上培育约5分钟2. 添加1-3μl DNA,冰上培育约5分钟3. 转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中4. 加载P1000,准备好300μl LB 或2xYT5. 对电穿孔容器进行脉冲（200 欧姆, 25μFd,2.5 千伏）（检查时间常数,应该在3以上）6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至电穿孔容器中7. 37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原8. 转移细胞至适当的选择培养基上培养高效率感受态细胞的制备注意要点摘要：根据实验室的实际情况,我们将其稍作修改,做成了GLP文件,但其中仍有许多可改进或需要注意的地方,其中有一些对普通感受态效率的提高也有一定的帮助.关于大肠杆菌的感受态制备及转化的方法很多,最复杂的莫过于电转化,而最简单的则是将LB平板上的菌落直接挑入装有缓冲液的EP管冰箱即开始转化.对于做克隆工作的人而言,高而稳定的感受态可减轻不少麻烦.现在大肠杆菌转化效率最高的要数电转化,可达到1010,但是操作起来比较麻烦.要想又简单,又能有较高的转化效率,最好的莫过于1990年《Gene》上刊登的由Inoue H.等提出的高效感受态细胞的制备与转化方法.根据实验室的实际情况,我们将其稍作修改,做成了GLP文件,但其中仍有许多可改进或需要注意的地方,其中有一些对普通感受态效率的提高也有一定的帮助.1、所用器具的洁净程度.这一点非常重要,是所有与感受态有关的方法与文章上必讲的,毋庸置疑.2、培养基的装量.培养基的装量是很重要的,这关系到菌体生长过程中的能量代谢问题,是有氧还是无氧生长.厌氧生长出来的菌体是做不出效率高的感受态的.建议装量不要高于此值：培养基体积/三角瓶容量=100ml/500ml,50ml/250ml.3、培养基的pH值.这里讲的pH值并非单指配制或灭菌后的pH值,而且还包括整个摇瓶结束后的pH值.一般来说,接种前的pH值在6.8-7.2.等菌摇好后,可以测一下pH值,不要低于6.0,最好在6.5以上.这表示菌体的代谢为有氧代谢,生长状态良好,按要求做,肯定效率不低.4、培养后的OD值.其实这是一个非常重要的参数,只是当OD值大到一定的程度后,菌体要保持对数生长已经不太可能,因此很多指导方法上强调OD不得大于0.6、0.8等等.同时,OD值大时菌体总量大,感受态绝对数量要大一点.因此需要在OD值的两方面影响中找一个平衡点.5、培养基中的各种离子.经验证明,当培养基中存在一定量的Mg2+离子时,该方法制得的感受态要相对较高.在制备普通感受时,使用20mM MgCl2做为培养基的添加物,在感受态收获之前20-30分钟加入,会收到很好的效果.6、培养温度.文献及经验告诉我们,较低的温度培养有利于感受态的形成,这样可以获得较高的感受态,但太低又不实用,因而产生了Inoue的高效感受态制备方法,它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一个非常理想方法.7、此外文献报道,在保存感受态时,DMSO要比甘油的效果要好,它会使感受态的效率增加.8、液氮速冻也会使感受态的效率提高,因此推荐用液氮速冻感受态,然后保存于超低温冰箱内.至于在液氮中保存12小时以后再转入超低温冰箱,这点未做实验,只是一种感觉,第一次这样做了,没问题,以后就照此办理而已.感受态细胞转化操作流程及提高转化效率的建议摘要：下文是感受态细胞转化操作流程及提高转化效率的建议.1、在冰上预冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管.1支用来转化样品,1支做pUC18对照.同时将NZY+ broth培养基在42°C预热.2、冰上融化感受态细胞.融化时轻轻将细胞混匀并分装成100ul/管.3、每管中加入随试剂盒提供的4 ml b-ME(巯基乙醇).4、温和转动试管,将细胞在冰上放置10分钟,每2分钟温和转动一下.5、每管细胞加入0.1–50 ng样品DNA (或2 ml连接反应物)(参见DNA 质量与体积说明.)用灭菌dH2O水按1:10稀释对照pUC18 DNA,并取1 ml稀释的pUC18 DNA加入转化细胞.6、温和转动试管,并在冰上放置30分钟.7、试管在42°C水浴热激30秒.热激时间对转化效率极度重要.8、试管冰浴2 分钟.9、每管加入0.9 ml 预热(42°C) 的NZY+ 肉汤,37°C、225–250 rpm 摇床培养1 小时.10、取200 ml转化混和物铺带有相应筛选抗生素的LB琼脂糖平板(如果进行颜色筛选还需加入IPTG和X-gal).pUC18阳性对照则取5 ml 铺氨苄青霉素LB琼脂糖平板.注意:细胞经1000 rpm离心10分钟会聚集,应将细胞沉淀用200 *l NZY+ 肉汤重悬.如果用于铺板的细胞<100 ml,先将细胞加入200 ml培养基中,然后用灭菌涂布棒铺板.如果采用100 ml细胞则可以直接铺板.倾斜涂布棒并轻轻拍打,尽量减少涂布棒上的细胞残留.11、37°C培养过夜.颜色筛选请参见以下Blue-White Color Screening的操作指南.12、pUC18阳性对照预计有约250个克隆(?5 ×109 cfu/mg pUC18 DNA).而样品DNA的转化效率随DNA的量和组成(超螺旋或连接产物)有较大差异,大质粒和非超螺旋DNA往往得到较少的克隆.。
大肠杆菌感受态细胞制备与转化
大肠杆菌感受态细胞制备实验（CaCl2法）细胞经过一些特殊方法（电击法、CaCl2法）等处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞，即感受态细胞（Compenent cells）。
实验原理：带有外源DNA的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒DNA，该过程称之为转化过程。
细胞在低温，低渗CaCl2（0.1M）作用下，会发生膨胀，细胞膜的通透性发生变化，能容许外源DNA的载体分子通过。
实验材料、试剂、仪器耗材：E. coli DH5α菌株LB固体培养基、LB液体培养基、CaCl2 (0.1M)等培养皿、恒温摇床、聚丙烯管、电热恒温培养箱、台式高速离心机、无菌工作台、恒温水浴锅、低温冰箱、制冰机、分光光度计、微量移液枪、锥形瓶、试管等实验步骤：1、取-70℃冰冻大肠杆菌DH5α菌种，用划线法接种细菌于培养皿，做好标记，于37℃培养过夜。
2、第二天，从平板上挑取单个菌落，接种至含有3ml LB培养液的试管中，37℃振荡培养过夜。
3、次日取菌液30 μL接种至含有3 ml LB培养基的试管中，37℃剧烈震荡培养约2~3小时（200~300r/min）。
4、当菌落600nm OD值达到0.3~0.4时，将试管取出放置冰上10~15分钟。
在无菌条件下，取1ml菌液装入1.5ml离心管中。
4℃,5000rpm离心5min。
弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。
4、当菌落600nm OD值达到0.3~0.4时，将试管取出放置冰上10~15分钟。
在无菌条件下，取1ml菌液装入1.5ml离心管中。
4℃,5000rpm离心5min。
弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。
制备感受态1、加200 μL冰预冷的0.1M CaCl2到离心管中，振荡混匀，使菌体悬浮，冰浴30min。
2、4℃，5000 rpm离心5分钟，弃上清，将管倒置于干滤纸上，吸干残留液体。
第一章 1-4 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化.
1第六节大肠杆菌感受态细胞的制备和转化一、基本知识核酸不能自己进入细菌,而是需要帮助,并对细菌经过处理,才能穿过细胞的内、外膜进入,在里边表达和复制。
☺感受态细胞:受体细胞经过一些特殊方法的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA 分子进入的感受态细胞(Competent cells 。
☺转化(Transformation :是将外源DNA 分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
2二、大肠杆菌感受态细胞的制备常用CaCl 2成批制备感受态细菌,这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA 产生5×106~2×l07个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在质粒上进行的常规克隆的需要。
适用于大多数大肠杆菌菌株,并且快速,重复性更好。
制备的感受态细胞可贮存于-70℃,数月至1年。
但保存时间过长会使转化效率受到影响。
新鲜细胞4 ℃保存可用5天。
用于电转化法的感受态细胞的制备使用低盐缓冲液或水洗细胞,通过高压脉冲的作用将载体DNA 分子导入受体细胞。
(具体操作及参数,参考仪器说明3☺下列有3个因素对于获得持续高的转化频率来说是至关重要的:–转化缓冲液中试剂的纯度–细胞的生长状态–玻璃和塑料器皿的清洁度4例:Cacl 2法制备感受态细胞(化学法步骤:1从于37℃培养16~20小时的新鲜平板中挑取一个单菌落(直径2~3mm ,转到一个含有100ml LB 或SOB 培养基的1L 烧瓶中。
于37℃剧烈振摇培养约3小时。
为得到有效转化,活细胞数不应超过108细胞/ml ,可每隔20~30分钟测量OD 600值来监测培养物的生长情况。
2在无菌条件下将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50ml 丙烯管中,在冰上放置10分钟,使培养物冷却至0℃。
3于4 ℃,离心10分钟,以回收细胞。
4倒出培养液,将管倒置1分钟以使最后残留的痕量培养液流尽。
(完整版)大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法(JinLab)
(Jin Quan-Wen Lab at XMU)
一、大肠杆菌电转化感受态细胞制备：
第Hale Waihona Puke 天：1. 用枪头或接种环挑取单克隆菌落， 接种入盛有 5ml LB 液体培养基的培养管中， 可以准备两管。 37 C，220rpm，培养过夜（ 14-16 个小时）。
2. 高温灭菌大的离心瓶（ 250-500ml）和几个 50ml 离心管，以备第二天离心收 集细菌用。
* Optimal efficiency is ca. 1X10 8 cfu/ gμDNA for general cloning. ** For library transformation, efficiency with ca. 1X10 9 cfu/ gμDNA is required.
感受态细胞制备简要流程： 收集细胞 冰水冲洗细胞 2 次 10% 甘油冲洗细胞 1 次 重悬细胞在 10% 甘油 分装
5．弃上清液，加少量灭菌水，重悬菌体，再加水至所有细胞悬浮约 中。 4 C，4000rpm，离心 15 分钟。
500ml 冰水
6．弃上清，往离心管中加入少量 10%甘油 (灭菌，预冷 )，重悬菌体，再加 10% 甘油至终体积约为 20ml。 4 C, 4000rpm, 离心 10min 。
7．小心弃去上清（沉淀可能会很松散 !），加入 2ml 10%甘油 (灭菌，预冷 )重悬 浮细胞。
二、电转化 [连接产物、纯化质粒或质粒 ]： 1．从 -80 C 冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。 2．将无菌的电击杯置于冰上预冷。 3．将解冻的感受态细胞按照 40～ 100ul/管转移至预冷的 1.5ml 的离心管中，小
心混匀，冰上放置。 4．取 1-2 μl 纯化的质粒或克隆连接产物于 1.5ml 的离心管中，冰上放置 10min。
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大肠杆菌电转化感受态细胞制备第一天:1.将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C 下过夜培养2.高温灭菌大的离心瓶(250-500ml以备第二天摇瓶用3.准备几瓶灭菌水(总量约1.5升,保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用第二天:4.转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基的1-2升挡板摇瓶中5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时6. 定时监控O.D.600值(培养1小时后每半小时测定一次7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时8.细胞在4°C 5000g下离心15分钟,弃上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天9.用灭菌的冰水重悬浮细胞。
先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升,然后加水稀释至离心管的2/3体积。
10.照上面步骤重复离心,小心弃去上清液11.照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞12.离心,弃上清液13.用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞14.照上面步骤离心,小心弃去上清液(沉淀可能会很松散15.用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml16. 将细胞按150μl等份装入微量离心管,于-80°C保存转化方法:1. 在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA ,冰上培育约5分钟2. 添加1-3μl DNA ,冰上培育约5分钟3. 转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器(无泡中4. 加载P1000,准备好300μl LB 或2xYT5. 对电穿孔容器进行脉冲(200 欧姆, 25μFd, 2.5 千伏(检查时间常数,应该在3以上6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至电穿孔容器中7. 37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原8. 转移细胞至适当的选择培养基上培养大肠杆菌感受态细胞制备及转化中的影响因素1、感受态细胞的概念重组DNA分子体外构建完成后,必须导入特定的宿主(受体细胞,使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状,这个导入过程及操作统称为重组DNA 分子的转化。
在原核生物中,转化是一个较普遍的现象,在细胞间转化是否发生,一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系,另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。
所谓的感受态,即指受体(或者宿主最易接受外源DNA 片段并实现其转化的一种生理状态,它是由受体菌的遗传性状所决定的,同时也受菌龄、外界环境因子的影响。
cAMP可以使感受态水平提高一万倍,而Ca2+也可大大促进转化的作用。
细胞的感受态一般出现在对数生长期,新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。
制备出的感受态细胞暂时不用时,可加入占总体积15%的无菌甘油或-70℃保存(有效期6个月。
2、转化的概念及原理在基因克隆技术中,转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内,使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法(如:电击法,CaCl2等化学试剂法处理后,使细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的DNA 分子通过复制、表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
大肠杆菌的转化常用化学法(CaCl2法,该法最先是由Cohen于1972年发现的。
其原理是细菌处于0℃,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增值,被转化的细菌中,重组子中基因得到表达,在选择性培养基平板上,可选出所需的转化子。
Ca2+处理的感受态细胞,其转化率一般能达到5×106~2×107转化子/ug质粒DNA,可以满足一般的基因克隆试验。
如在Ca2+的基础上,联合其它的二价金属离子(如Mn2+、Co2+、DMSO 或还原剂等物质处理细菌,则可使转化率提高100~1000倍。
化学法简单、快速、稳定、重复性好,菌株适用范围广,感受态细菌可以在-70℃保存,因此被广泛用于外源基因的转化。
除化学法转化细菌外,还有电击转化法,电击法不需要预先诱导细菌的感受态,依靠短暂的电击,促使DNA进入细菌,转化率最高能达到109~1010转化子/ug闭环DNA。
因操作简便,愈来愈为人们所接受。
3、感受态细胞制备及转化中的影响因素⑴、细胞的生长状态和密度最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
不要用已经过多次转接,及贮存在4℃的培养菌液。
细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。
即应用对数期或对数生长前期的细菌,可通过测定培养液的OD600控制。
对TG1菌株,OD600为0.5时,细胞密度在5×107个/ml左右。
(应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同。
密度过高或不足均会使转化率下降。
此外,受体细胞一般应是限制-修饰系统缺陷的突变株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。
并且受体细胞还应与所转化的载体性质相匹配。
⑵、质粒DNA的质量和浓度用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的,转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时,则会使转化率下降。
一般地,DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%,1ng的cccDNA即可使50ul的感受态细胞达到饱和。
对于以质粒为载体的重组分子而言,分子量大的转化效率低,实验证明,大于30kb 的重组质粒将很难进行转化。
此外,重组DNA分子的构型与转化效率也密切相关,环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍,因此重组DNA 大都构成环状双螺旋分子。
整个操作过程均应在无菌条件下进行,所用器皿,如离心管,移液枪头等最好是新的,并经高压灭菌处理。
所有的试剂都要灭菌,且注意防止被其它试剂、DNA酶或杂DNA所污染,否则均会影响转化效率或杂DNA的转入。
⑸、整个操作均需在冰上进行,不能离开冰浴,否则细胞转化率将会降低。
大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。
2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。
3.学习将外源质粒DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。
实验原理转化( Transformation 是将异源DNA 分子引入另一细胞品系,使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。
转化中的受体细胞:转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株,常用RM 符号表示。
转化方法:电击法、CaCl2、RuCl等化学试剂法感受态细胞:处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源DNA 分子通过时细胞的状态。
转化细胞(转化子:带有异源DNA 分子的受体细胞( Transformant 。
本实验以E.coli DH5α菌株为受体细胞,用CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态,然后与pUC18质粒共保温,实现转化。
pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因,因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性,用Apr符号表示。
将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释,在含氨苄青霉素的平板培养基上培养,只有转化体才能存活,而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。
影响转化率的因素细胞生长状态和密度。
转化的质粒DNA 的质量和浓度。
试剂的质量。
防止杂菌和其它外源DNA 的污染。
实验仪器离心设备实验试剂大肠杆菌DH5αLB培养基,0.1mol/LCaCl2溶液(预冷氨苄青霉素pUC18质粒实验步骤菌株活化:1.用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α,在LB培养基平板表面划线,于37℃培养16小时2.挑取一个单菌落,转到3-5mlLB培养基中,于37℃培养3-5小时3.将培养液全部转到100mlLB培养基中培养2-3小时,到OD600=0.3-0.4感受态细胞制备:4.将培养液转入1.5ml离心管中,在冰上放置15-30min5.4000rpm离心5min,弃上清6.加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀,冰上预冷10min7.4000rpm离心5 min,弃上清8.加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀,即可使用。
也可加入总体积15%的甘油可-70℃长期保存外源DNA的转化:9.取目的DNA加入大肠杆菌感受态细胞中,于冰上放置30min10.于42℃水浴90S11.冰上放置2min12.加入800μlLB液体培养基于37培养1小时13.将培养液均匀涂布在含Amp+的培养基平板上14.将平板放置于37℃恒温培养箱中培养12-14个小时,然后观察结果对照组对照组1: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,其它操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB 平板上,此组正常情况下应产生大量菌落。
转化率统计每个培养皿中的菌落数。
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率,公式如下:转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积转化频率(转化子数/每mg质粒DNA=转化子总数/质粒DNA加入量(mg 感受态细胞总数=对照组2菌落数×稀释倍数×菌液总体积/涂板菌液体积感受态细胞转化效率=转化子总数/感受态细胞总数。