第八讲 农药生物测定
农药生物测定
《农药生物测定》复习重点农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~ 1920至1923年间:研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法.特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比较来估计其相对药效。
第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代1937年欧文首先提出了系统的生物测定方法报告;1947年芬尼出版了系统的生物测定统计方法;1950年芬尼及古德温出版《生物测定标准化》一书;1957年布斯维纳（）出版《杀虫剂生物测定评述》;1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中,以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述;1963年张泽溥等出版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》;1984年张泽溥出版《生物测定统计》专着。
特点：研究出以生物群体为反应基础的生物测定方法，提高了测定精度。
第三时期：20世纪70年代至今1. 研究利用昆虫神经电生理方法检测化合物对昆虫的拒食活性已取得进展。
2. 杀菌剂也由以传统的病原菌离体试验方法为主，转变为寄主植物上的活体试验为主。
3. 20世纪80年代以来介于活体与离体之间的植物组织培养生物测定方法受到了广泛的重视，有可能发展成一类新的杀菌剂生物测定方法。
如适用于细菌性病害筛选的块根法；适用于大麦白粉病筛选的芽鞘表皮法等。
第四时期：20世纪70年代至今发展趋势：1.随着分子生物学及生理、生化方面研究技术的提高，运用分子生物学技术和生化技术进行生测的研究亦发展很快，如对新药剂的筛选及利用酶学试验进行害物抗药性的监测和增效剂的筛选等等。
2.由于电子计算机软、硬件的迅速发展，农药生物测定中的统计分析，早已普遍程序化和微机化，使生物测定结果的分析计算更加简便、快捷，也更加准确、可靠。
农药生物测定中应注意的几点：1.运用特定的试验设计；2.在一定条件下（局部控制）进行；3.均以群体反应为基础，以生物统计为工具。
农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。
《农药生物测定》课后复习题
《农药生物活性测定》课后复习题1．简述农药生物测定的概念、意义。
度量农药对生物群体、个体、活体组织或细胞产生效应大小的生物测定技术。
通常采用不同药剂剂量或浓度对测定对象产生的效应强度，来评价两种或两种以上药剂的相对效力。
2．简述农药生物测定的原理、原则。
原理：研究药剂与生物的相关性原则标准目标昆虫：是指被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义，以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。
6．杀虫剂生物测定中移取试虫的方法有哪些？（1）一般移取法：对于活动强度不大或具有假死习性的试虫（棉铃虫等），可用镊子移取。
体型小，软体或易碰伤的试虫（蚜虫、红蜘蛛等），用毛笔移取，注意刺吸式口器的口针。
沾药未干的试虫，必须等药干后才能移取。
（2）趋光法：利用昆虫的趋光性来移取试虫（如家蝇）。
（3）吸虫法：适用于活动强度不大，微小的或易受机械伤害的目标昆虫（拟谷盗、米象等），用真空或喉管空气注射吸虫法移取。
（4）自行迁移移虫法：利用试虫的自行迁移生活特性达到混匀移虫的目的。
如蚜虫等。
（5）麻醉法：对于飞翔或活动强度大的试虫，采用物理或化学方法进行麻醉处理。
7．论述胃毒、触杀、熏蒸、内吸、忌避作用测定技术的基本原理及方法。
一、胃毒作用测定技术的基本原理：通过试虫吞食带药食料，由消化道中毒致死，以测定胃毒毒力的杀虫剂生物测定技术。
无限取食法：试虫可以无限制地取食含有杀虫剂的饲料，不计算实际吞食药量的用药方法。
此法简单，但不能避免其他毒杀作用的干扰；药量不易掌握，有拒食效应时难获得满意结果。
8．简述叶片夹毒法的基本原理和实验方法。
基本原理是用两张叶片，中间均匀地放入一定量的杀虫剂饲喂目标昆虫，然后由被吞服的叶片面积，计算出吞服的药量。
1、夹毒叶片的制备2、饲喂方法3、结果检查4、致死中量的计算9．何为杀菌剂生物测定。
利用病原菌或感菌生物体对杀菌剂的反应，来确定杀菌剂效力(毒力,药效)的农药生物测定。
10．简述菌种保存的方法？1）传代培养保藏法：是将菌株定期的移植到新鲜的培养基上进行培养保存的方法。
农药生物测定复习资料
农药生物测定中应注意的几点：1.运用特定的试验设计；2.在一定条件下（局部控制）进行；3.均以群体反应为基础，以生物统计为工具。
农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。
农药生物测定的内容及应用1.测定农药对昆虫、螨类、病原菌、线虫、杂草以及鼠类等靶标生物的毒力或药效2.研究农药对植物的生理作用3.筛选新农药品种4.研究化合物的化学结构与生物活性关系的规律，为定向创制新农药提供依据5.研究农药的理化性质及加工剂型与毒效关系，提高农药的使用效果6.研究有害生物的生理状态及外界环境条件与药效的关系，以便提高农药使用水平，做到适时用药7.测定不同农药混用的效力，为农药的合理混用及寻找增效剂提供依据8.对有害生物抗药性的监测和研究克服或延缓抗药性发展的有效措施9.研究农药的作用机理及生理效应10.还可利用敏感生物（如蚊幼虫等）来测定农药的有效含量及残留量。
11.测定农药对温血动物及有益生物的毒性农药生物测定基础1.药剂浓度的表示方法:(1)百分浓度(2)百万分浓度（ppm）(3)倍数法(4)波美度(1)百分浓度:分容量百分浓度和质量百分浓度两种。
液体与液体之间配药时常用容量百分浓度。
固体与固体或固体与液体之间配药时多用质量百分浓度。
新增登记和生产许可的农药产品，其有效成分含量原则上统一以质量百分含量（%）表示。
(2)百万分浓度（ppm）ppm：part per million（百万分之…）10-6ppb：part per billion（十亿分之…）10-9ppt：part per trillion（万亿分之…）10-12与“％”一样，ppm、ppb、ppt 不是浓度单位。
但可定义为摩尔比、体积比、质量比或质量体积比等。
(2)百万分浓度:即100万份药液或药粉中含有这种药剂成分的份数，以10-6(ppm)表示，其基本单位为百万分之一。
农药生物测定课程教学大纲
《农药生物测定》课程教学大纲一、课程基本信息课程代码：课程名称：农药生物测定英文名称： Bioassay of Pesticide课程类别：专业选修课学时： 30学分： 1.5适用对象 : 植物保护考核方式：考试 ( 期末考试占 70%、试验占 20%、平时占 10%)先修课程：《植物化学保护》、《农业昆虫学》、《农业病理学》、《杂草学》、《田间试验和统计方法》、《普学》、《有机化学》、《仪器分析》等。
二、课程简介农药生物测定是度量农药对动植物群体、个体、活体组织或细胞产生效应大小的生物测定技术，是制药工程专业重要的必修课之一。
三、课程性质与教学目的学习本课程的主要目的是使学生学习并掌握杀虫剂、杀菌剂、除草剂及杀线虫剂的室生物测定和大田药效试验的基本理论和基本技能。
掌握各类农药生物测定结果的评判和统计分析方法。
通过本课程的学习，要求学生掌握杀虫剂的室毒力测定原理、触杀毒力、胃毒毒力、吸毒力、熏蒸毒力、拒食活性等生物活性测定的方法；掌握杀菌剂室孢子萌发法，含毒介质培养法及盆栽试验等的测定方法；掌握除草剂生物测定原理及种子发育、植株生长量、生理生化指标的测定方法；掌握大田药效试验的设计原理和统计分析方法。
四、教学容及要求第一章绪论（一）目的与要求（二）教学容1.主要容：论述农药生物测定的概念、发展历史、农药生物测定的容及地位。
2.基本概念和知识点：3．问题与应用（能力要求）：正确理解生物测定、农药生物测定的定义，了解农药生物测定的发展历史，掌握农药生物测定研究容，领会农药生物测定的地位和作用。
( 三) 课后练习1．查阅资料，了解农药生物测定的现状及主要技术。
（四）教学方法与手段本课程采用课堂教学与课堂讨论的形式开展教学。
第二章杀虫剂的生物测定（一）目的与要求：1．正确理解和熟练掌握杀虫剂（包括特异性昆虫抑制剂）基本理念和概念和具体方法；2．掌握农药室生物测定的评判和统计分析方法；3．熟悉标准目标昆虫的饲养。
农药生物测定-绪论
用该直线可求出毒力回归式y = a+bx，取线上任意两点 的座标（A:yl，xl，B：y2，x2），求b和a，将a和b代入 y = a+bx,得回归方程。
y 2 y1 b x 2 x1
a y1 bx1
•图1 做图法求毒力回归线及LD50值
• B、机率值分析法
– 该法必需将剂量转换成对数(x ＝ lgC，为 自变量）；死亡率经校正得校正死亡率， 转换为机率值（P = Y，为依变量），经过 统计分析进行计算。
三、生物测定的内容
• 可以概括为活性筛选的常规测定、田间药效试验、残 留分析。也可以归纳为：
– – – – – – – 1.比较农药对昆虫、病菌或植物的药效或药害； 2.比较农药不同方法、加工质量、物理性状对供试生物的药效； 3.测定两种或两种以上农药混用的效力大小； 4.新研制化合物或农药对供试生物的药效、药害的筛选和评价； 5.研究供试生物内在因素和环境因素对药剂效力的关系； 6.鉴定生物体对农药的抗药性； 7.测定农药在生物体内外、土壤或环境中的残留量。
Sm
1 1 (m x) 2 ( ) 2 2 b nw nw( x x)
nwx x nw
2 nw ( x x ) nwx 2
( nwx) 2
nw
• (5)致死中量的置信限 致死中量(有效中量)的
置信限是表明致死中量可靠范围的限度，在统 计上要求，100次测验中如果有95次能成功， 就认为达到最低可靠标准。也就是95%的可靠 性，当然也可以要求99％的可靠性。计算公式 为：
第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代
• 事件：
– 1937年欧文（J.O.Irvin）首先提出了系统的生物测定方法报 告； – 1947年芬尼（D.J.Finney）出版了系统的生物测定统计方法； – 1950年芬尼及古德温（L.G.Goodwin）出版《生物测定标准 化》一书； – 1957年布斯维纳（J.R.Busvine）出版《杀虫剂生物测定评 述》； – 1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中，以专章对杀虫剂 生物测定 及统计分析作了系统的论述； – 1963年张泽薄等出版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》；
第八章 农药生物测定与田间药效试验
将药剂通过处理植物的某一特定部位，药剂能 5. 拒食作用 被植物吸收，并通过传导，到达其他部位，让昆虫 取食未直接用药的部位后观察昆虫的中毒症状，以 判断该药剂是否具有此特性。
6. 引诱作用 性引诱剂、食物引诱剂和产卵引诱剂。
Y型嗅觉仪
（二）杀螨剂的毒力测定方法 1. 玻片浸渍法
FAO推荐为用于杀螨剂毒力测定和害螨抗性监测的 方法，是测定药剂对螨类毒力的常用方法。
二、生物测定试验设计的基本原则
4.必须设立对照
空白对照 不含药剂对照 标准药剂对照
对照死亡率<5%，无需校正；在5%~20%，要加以校正 ；>20%,试验需重做。
5.必须设立重复
6.运用生物统计分析试验结果
三、供试材料 应参考的原则
1.在室内人为环境条件下，应用较简便、快速的 繁殖技术，可保证全年定时大量供应，不受季 节限制。
田间调查各种取样方法示意图
1.五点式（面积）2.棋盘式 3.单对角线式 4.五点式（长度） 5.分行式 6.双对角线式 7.“Z”字形 8.平行线式
调查、记录与效果计算
药效调查：药前调查虫口基数，药后根据 试验方案调查虫口数或受害率。 药效计算机数据的统计分析。
（一）杀虫剂的毒力测定方法 1. 触杀作用：指害虫接触到药剂时，药剂通过昆虫 的表皮进入虫体内而发挥作用。 喷雾法
药膜法 浸虫法 点滴法
Potter喷雾塔
2. 胃毒作用 饲喂法：单叶饲喂法、毒饵饲喂法和叶片夹毒法
饲喂叶片法
饲喂毒饵法
3. 熏蒸作用 气态的形态通过昆虫的呼吸系统起到毒杀作用。 4. 内吸作用
2.应是广泛发生为害的主要农林有害生物，具有 重要的经济意义。 3.对药剂的敏感性符合要求，试验时易操作。
第八章 农药生物测定与田间药效试验
生物测定的应用
☆活性筛选的常规测定 ☆农药残留的微量生物分析
☆抗性毒力测定 ☆药害毒性测定
二、生物测定试验设计的基本原则
1.药品应是纯品，至少要有明确的有效成分含量
2.供试生物应是纯种，个体差异小，生理标准较一致
二、生物测定试验设计的基本原则
3.相对的可控环境条件
室内测定：两个变量，药剂浓度作为自变量，死亡率或抑 制率作为因变量。 田间试验：应力求所选试验田土壤肥力、作物长势及管理 水平等条件均匀相似 。
2.应是广泛发生为害的主要农林有害生物，具有 重要的经济意义。 3.对药剂的敏感性符合要求，试验时易操作。
我国常采用的生物种类
稻飞虱
烟粉虱
蓟马
烟蚜
烟 草 甲
赤 拟 谷 盗
玉米螟
病原菌：稻瘟病菌、小麦锈病菌、柑橘 青霉病菌、番茄灰霉病菌等。
杂草：稗草、荠菜、苋菜、播娘蒿等。
四、室内毒力测定的方法ຫໍສະໝຸດ 田间调查各种取样方法示意图
1.五点式（面积）2.棋盘式 3.单对角线式 4.五点式（长度） 5.分行式 6.双对角线式 7.“Z”字形 8.平行线式
调查、记录与效果计算
药效调查：药前调查虫口基数，药后根据 试验方案调查虫口数或受害率。 药效计算机数据的统计分析。
叶碟浸渍法将带有螨卵若螨或成螨的叶片直接浸渍在药液中5s后取出饲养一定时间后观察卵的孵化率螨的死对峙培养法六除草剂的毒力测定方法一对种子萌发的测定方法培养皿法琼脂测定法黄瓜幼苗形态法二植株生长量的测定方法去胚乳小麦幼苗法萝卜子叶法三生理指标的测定方法单细胞藻类法七试验结果的统计与分析试验完成后最终反映为实验数据必须通过科学的统计分析才能得出正确的结论
二、田间药效试验的基本要求
农药生物测定课程教学大纲
《农药生物测定》课程教学大纲一、课程基本信息课程代码：课程名称：农药生物测定英文名称：Bioassay of Pesticide课程类别：专业选修课学时： 30学分：1.5适用对象:植物保护考核方式：考试(期末考试占70%、试验占20%、平时占10%)先修课程：《植物化学保护》、《农业昆虫学》、《农业病理学》、《杂草学》、《田间试验和统计方法》、《普学》、《有机化学》、《仪器分析》等。
二、课程简介农药生物测定是度量农药对动植物群体、个体、活体组织或细胞产生效应大小的生物测定技术，是制药工程专业重要的必修课之一。
三、课程性质与教学目的学习本课程的主要目的是使学生学习并掌握杀虫剂、杀菌剂、除草剂及杀线虫剂的室生物测定和大田药效试验的基本理论和基本技能。
掌握各类农药生物测定结果的评判和统计分析方法。
通过本课程的学习，要求学生掌握杀虫剂的室毒力测定原理、触杀毒力、胃毒毒力、吸毒力、熏蒸毒力、拒食活性等生物活性测定的方法；掌握杀菌剂室孢子萌发法，含毒介质培养法及盆栽试验等的测定方法；掌握除草剂生物测定原理及种子发育、植株生长量、生理生化指标的测定方法；掌握大田药效试验的设计原理和统计分析方法。
四、教学容及要求第一章绪论（一）目的与要求（二）教学容1.主要容：论述农药生物测定的概念、发展历史、农药生物测定的容及地位。
2.基本概念和知识点：3．问题与应用（能力要求）：正确理解生物测定、农药生物测定的定义，了解农药生物测定的发展历史，掌握农药生物测定研究容，领会农药生物测定的地位和作用。
(三)课后练习1．查阅资料，了解农药生物测定的现状及主要技术。
（四）教学方法与手段本课程采用课堂教学与课堂讨论的形式开展教学。
第二章杀虫剂的生物测定（一）目的与要求：1．正确理解和熟练掌握杀虫剂（包括特异性昆虫抑制剂）基本理念和概念和具体方法；2．掌握农药室生物测定的评判和统计分析方法；3．熟悉标准目标昆虫的饲养。
（二）教学容第一节杀虫剂生物测定的基本概述1.主要容：杀虫剂生物测定的定义、意义和容，杀虫剂生物测定的一般原理和原则。
农药生测
1、试举例说明农药生物测定在植物保护研究中的应用。
农药生物测定的含义及其用途农药生物测定是指利用靶标生物(昆虫、蜗类、病原微生物、线虫、植物等)的活体或离体器官、组织、细胞或其代谢物等(如酶、蛋白质等)为试材，测试或鉴别生物活性物质的类型、反应症状或其活性大小的一种方法。
简单地说，农药生物测定技术就是利用靶标生物等对药剂的反应来鉴别农药毒力或药效的一种技术.农药生物测定主要包括杀虫剂(杀蜻剂)、杀菌剂(杀线虫或抗病毒剂等)、除草剂、杀鼠剂以及植物生长调节物质等的生物测定技术。
它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。
一个好的生物测定技术或方法应具备易于操作、结果反应灵敏、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。
农药生物测定技术与农药的使用和开发同时产生，经过长期不懈创新、完善和发展，已经成为研究生理活性物质、靶标生物以及反应强度三者关系的一项专门技术，被广泛应用于新农药的筛选以及作用特性和应用技术评价等研究之中。
纵观目前农药生物测定的研究概况，室内农药生物测定技术主要应用于以下几个方面:1.创制农药生物活性筛选研究:随着农业生产的发展和人们对地球环境生态和人类健康等的要求不断提高，高效、低毒、环境友好型新农药的开发应用给人类社会和生产企业带来巨大的效益，但同时也由于新农药开发的难度与费用日益增加，如何利用生物测定技术快速高效地筛选新化合物，并准确评价其生物活性以及应用技术，估测其市场前景及将来在市场上的占有率和利润额，是决定其创制农药研究成功与否的关键。
利用生物测定方法研究同一类结构或同一作用类型化合物的化学结构与生物活性关系的规律〔3AR)以及与靶标作用位点的结合关系，为定向创制新农药和计算机辅助设计新化合物提供基础数据和理论依据。
生物活性筛选被称为农药创制的“眼睛”.对新农药开发研究起着举足轻重的作用。
2.研究农药的理化性质、制剂加工类型、加工方法与其生物活性及其安全性之间的关系，为剂型加工和生产应用服务:农药制剂的加工及助剂的选择和应用与其有效成分的生物活性、安全性以及应用技术和田间使用效果密切相关，好的加工剂型与工艺不仅可改善有效成分的生物活性，增加对保护作物的安全性，并且可以减少对生态环境的污染。
农药生物测定 标准
农药生物测定标准
农药生物测定的标准通常是指用于评估农药对生物的毒性效应的参考方法或准则。
这些标准的制定旨在确保农药的使用安全，并对环境和人类健康产生最小的潜在风险。
农药生物测定的标准可以包括以下内容：
1. 毒性测定方法：包括急性毒性、亚急性和慢性毒性测定方法，用于评估农药对不同物种的短期或长期暴露的毒性效应。
这些方法通常包括了不同暴露路径和剂量水平的考虑，以及对动物行为、生理和病理变化的观察。
2. 致畸、致突变和致癌性评估方法：用于评估农药对生殖和发育过程的潜在毒性，并确定其对基因的突变和突变的潜在致癌性。
3. 生态毒理学评估方法：用于测定农药对非靶标生物（如鱼类、昆虫、蘑菇等）的毒性效应的方法。
这些方法通常包括了对生物种群和群落的潜在影响的考虑。
4. 农药残留检测方法：用于检测农产品中农药残留物的含量的方法。
这些方法通常包括了样品准备、提取、纯化和测定的步骤。
5. 毒性数据评估及风险评估方法：用于评估农药毒性数据和相关信息的方法，以确定农药的安全使用水平和潜在风险。
这些标准通常由国际标准化组织、国家农药监管机构和国际农药制造商协会等机构制定和颁布。
不同国家和地区的农药生物测定标准可能存在一定的差异，但都共同追求保护环境和人类健康的目标。
[农学]第八讲 农药生物测定
![[农学]第八讲 农药生物测定](https://img.taocdn.com/s3/m/5692e2441ed9ad51f01df2c2.png)
②饲饮法 此法适用于蝇、蝽类等有吸食习性的昆 虫。 • 又分为自由饲饮法和强制饲饮法 • 自由饲饮法：是一种无限制的饲饮方法，让昆虫 自己取食配好的混有药剂的糖液，通过测定吸食 前后昆虫的重量或药液的体积计算昆虫吸食药剂 的量； • 强制饲饮法：是将昆虫固定后，将装有药液的移 液管口放在昆虫的口边，昆虫吸食到一定的体积 后就移开移液管，保证每头虫体吸取药剂的量相 同。
B. 植株生长量的测定方法
• 主要针对已经发芽的除草剂，尤其是抑制光合作用的除草 剂的常规室内生物测定方法。 a、去胚乳小麦幼苗法 • 此法是测定抑制光合作用除草剂的专用方法； • 先挑选出长势一致的幼苗，摘除胚乳后，用供试药液处理 幼苗，培育一定的时间，测定幼苗的株高，以株高抑制率 来衡量药剂的活性。 b、萝卜子叶法 • 此法适用测定触杀性及影响氮代谢的除草剂； • 先将萝卜籽催芽成幼苗后切下子叶，并用不同浓度的供试 药液处理子叶，保持恒温，并在一定的光强下培养一段时 间，称量鲜重及测定叶绿素的含量，计算IC50。
C.高通量筛选
a.活体筛选 • 只对个体较小、对药剂敏感而且容易培养和操作的供试昆 虫，如鳞翅目低龄幼虫、水蚤等较为适用； • 操作步骤：将一定量的待测药液和昆虫人工饲料或营养液 分别加入微量滴定板的孔中，混匀；然后将单头供试昆虫 或者卵置于每一孔内，用透明盖封好，放置在温度、湿度、 光照等适宜的控制条件下培养一定时间，后检查结果，观 察记录供试昆虫的生命指标，如生存或死亡、生长取食情 况等，推测判断供试药剂的生物活性。 b.离体筛选 • 受体结合试验：适用筛选对供试昆虫神经受体有抑制活性 的化合物； • 靶标酶活性测定：用于筛选对昆虫靶标酶有活性的化合物。
c. 希尔反应法 • 基本原理是叶绿体在光照条件下，使水光解产生H+和电子， 同时放出氧气，产生的电子使电子受体（氧化剂）还原， 可筛选光合作用抑制剂； • 如铁氰化钾，在光下可以发生从水中释放氧气的反应，同 时氧化剂被还原变色，利用这一反应，用分光光度计对底 物Fe(CN)6 3-的减少量或产物Fe(CN)6 4-及O2的形成量进行 测定，就可以定量测定希尔反应活力，判定药剂的活性。 d、酶水平测定方法 • 如通过测定植物体内莽草酸的累积量，作为评价草甘膦活 性的衡量指标； • 根据磺酰脲类除草剂可抑制乙酰乳酸合成酶ALS活性的原 理，可用乙酰乳酸合成酶活性的变化测定植物对磺酰脲类 除草剂的活性。
农药生物测定 名词解释+简答题
名词解释：1，生物测定：生物测定是通过生物活体产生的反应来评价一种物质或一种过程的本质、组成或效力的一种方法。
农药生物测定：度量农药对生物体群体、个体和活体组织、细胞产生效应大小的生物测定技术。
杀虫剂生物测定：度量杀虫剂对螨类及昆虫产生效应大小的生物测定方法引诱剂生物测定：通过诱聚昆虫数量的变化来反映引诱剂效力的生物测定方法杀菌剂生物测定：是将一种杀菌活性化合物作用于靶标生物或施药于植物或非靶标生物产生各种效应的测定技术除草剂生物测定：度量除草剂对杂草生物效应大小和对作物安全性的生物测定方法植物生长调节剂生物测定：利用某些敏感植物某些性状作为指标，对生理活性物质进行定性测量或定量测定的生物测定技术。
2，LD50：（致死中量）能使供试昆虫50%死亡的所用试剂剂量LC50：（致死中浓度）能使供试昆虫50%个体死亡所用的药剂浓度LT50：（致死中时）能使供试昆虫50%个体死亡所用的时间KT50：（击倒中时）能使供试昆虫50%个体中毒击倒所用的时间3，ED50：（有效中量）能使供试病原菌半数表现出某种药效所用的剂量EC50：（有效中浓度）能使供试菌体半数表现出某种药效所用的药剂浓度4，IC50：（抑制中浓度）能使某种杂草供试群体的生长发育和生理生化指标减少或抑制50%所需要的药剂浓度。
5，生物源农药：指直接利用生物活体或生物代谢过程中产生的具有生物活性的物质或从生物体提取的物质作为防治病虫草害的直接农药。
植物源农药：指利用植物杀菌、杀虫、杀草的某部位或提取的有效成分制成的农药。
6，触杀毒力测定：使杀虫剂经体壁进入虫体，到达作用部位而产生中毒致死反应，由此来衡量杀虫剂触杀毒力的生物测定。
胃毒毒力测定：通过试虫吞食带药食料，引起消化道中毒致死反应，由此来。
內吸毒力测定：使药剂经根茎叶或种子吸收传导后，通过供试昆虫吸食含毒汁液而引起中毒反应，由此来、、、、、、熏蒸毒力测定：使药剂从气门进入虫体，到达作用部位而引起昆虫中毒致死反应，由此来。
农药生物测定及其重要节点44页PPT
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
•
29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
农药生物测定及其重要节点源自•26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
•
28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
农药生物测定及其重要节点
三、试验设计的基本原则
1、要控制影响因素
上面我们已经大致分析了影响农药生物测定的因素，由于这些因 素很多，在不同的因素条件下会产生不同的效果。 设效果为y=a+b1x1+b2x2+b3x3+…….bnxn。这样是一个复杂的偏 回归关系。这不是我们生物测定的目的，我们的目的是为了寻求 生测效果与药剂剂量之间的关系，即y=a+bx 其中，y是死亡率的 几率值，而x则为剂量对数。这样很清楚明了。如果不控制其它因 素，便无法得到这一回归式。 不过目前,已经有人尝试寻求多元的回归关系,这样可能更切合实际 一些。如死亡率与温度、时间等的关系。
(3)反应率：包括所有出现症状的反应情况（前面介绍的几种情况） 反应率：包括所有出现症状的反应情况（前面介绍的几种情况） 反应率 一般都是用死亡率表示； 一般都是用死亡率表示； 死亡率%=死虫数 试虫数×100% 死虫数/试虫数 死亡率 死虫数 试虫数× 死亡率从广义上应理解为虫口减退率。死亡率可以是正的， 死亡率从广义上应理解为虫口减退率。死亡率可以是正的，也可 以是负的，比如处理后的虫口可以是增加的。 以是负的，比如处理后的虫口可以是增加的 (4)校正死亡率 校正死亡率 为了消除自然死亡因素的影响， 为了消除自然死亡因素的影响，精确的研究和正规的实验结果报告 要采用校正死亡率来表示。校正死亡率的计算可采用生存率， 要采用校正死亡率来表示。校正死亡率的计算可采用生存率，也可 采用死亡率，分别如下： 采用死亡率，分别如下： 校正死亡率={（处理组死亡率—对照组死亡率 （ 对照组死亡率） 校正死亡率 （处理组死亡率 对照组死亡率）/（1—对照组死亡 对照组死亡 率）}×100% × 公式适用范围是对照的自然死亡率在5%-20%之间； 之间； 公式适用范围是对照的自然死亡率在 之间 5%以下时，可将处理组死亡率减去自然死亡率即可校正； 以下时， 以下时 可将处理组死亡率减去自然死亡率即可校正； 20%以上时；则表示该目标昆虫种群不宜供试验用，试验结果不可 以上时； 以上时 则表示该目标昆虫种群不宜供试验用， 靠。
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e、高通量筛选方法
（a）活体筛选方法 • 以各种病原物为筛选靶标的直接筛选方法：首先将一定浓度样品用移 液器移至微量滴定板上，再用另一移液器将均匀的供试菌菌丝体或孢 子悬浮液接种到每一孔上，混匀后用分光光度计测定混合液的初始光 密谋值Ⅰ，然后置适宜条件下振荡培养一定时间，再测定光密度值Ⅱ， 如果二者相等或光密度值Ⅱ降低，说明菌体不能生长，判定被测物有 活性，否则无活性。 • 以酿酒酵母菌为模型菌的筛选方法：在控制条件下，将酿酒酵母菌与 待测化合物相互作用一定时间后，观察化合物对酵母菌生长的抑制情 况。 （b）离体筛选方法 • 靶标酶的测定方法：如将菌体悬浮液与牛心线粒体及待测化合物分别 加入微量滴定板孔中，混匀，控制条件下反应一定时间后，在340nm 下测定光密度值，计算NADH的含量，如果NADH含量降低，说明待测物 抑制了电子传递过程，化合物有活性。 • 全细胞测试：用于筛选真菌甾醇生物合成抑制剂。
c、生长速率测定法 • 是趁热在培养基中加入药液，混合均匀后 冷却，然后在无菌条件下将病原菌接入装 有培养基的培养皿中央，经过一定时间培 育后，观察病原菌菌丝的生长情况。 d、对峙培养法 • 是将天然提取物及病原菌同时放在同一有 培养基的培养皿的两边，经过一定时间培 育后，观察菌丝生长的情况。如果提取物 有抑菌作用，则病原菌的生长会受到一定 的限制。
第八讲 农药生物测定与田间药效试验
主要内容： 1、农药的生物测定 2、农药田间药效试验
一、农药的生物测定
1、概述
• 农药的生物测定：是指利用生物（动物、植物、微生物等） 的整体或离体组织、细胞以及细胞中的活性物质（如靶标 酶、细胞膜等）对某些化合物的反应如死亡率、抑制率等， 作为评价他们生物活性的量度，运用特定的实验设计，以 生物统计为工具，测定供试对象在一定条件下的效应。 • 生物测定涉及的内容和范围： • （1）活性筛选的常规测定； • （2）农药残留的微量生物分析； • （3）抗性毒力测定； • （4）药害毒性测定。
c. 希尔反应法 • 基本原理是叶绿体在光照条件下，使水光解产生H+和电子， 同时放出氧气，产生的电子使电子受体（氧化剂）还原， 可筛选光合作用抑制剂； • 如铁氰化钾，在光下可以发生从水中释放氧气的反应，同 时氧化剂被还原变色，利用这一反应，用分光光度计对底 物Fe(CN)6 3-的减少量或产物Fe(CN)6 4-及O2的形成量进行 测定，就可以定量测定希尔反应活力，判定药剂的活性。 d、酶水平测定方法 • 如通过测定植物体内莽草酸的累积量，作为评价草甘膦活 性的衡量指标； • 根据磺酰脲类除草剂可抑制乙酰乳酸合成酶ALS活性的原 理，可用乙酰乳酸合成酶活性的变化测定植物对磺酰脲类 除草剂的活性。
C.高通量筛选
a.活体筛选 • 只对个体较小、对药剂敏感而且容易培养和操作的供试昆 虫，如鳞翅目低龄幼虫、水蚤等较为适用； • 操作步骤：将一定量的待测药液和昆虫人工饲料或营养液 分别加入微量滴定板的孔中，混匀；然后将单头供试昆虫 或者卵置于每一孔内，用透明盖封好，放置在温度、湿度、 光照等适宜的控制条件下培养一定时间，后检查结果，观 察记录供试昆虫的生命指标，如生存或死亡、生长取食情 况等，推测判断供试药剂的生物活性。 b.离体筛选 • 受体结合试验：适用筛选对供试昆虫神经受体有抑制活性 的化合物； • 靶标酶活性测定：用于筛选对昆虫靶标酶有活性的化合物。
（2）必须设立对照 • 空白对照：不做任何处理的对照； • 不含药剂对照：与药剂处理所用溶剂或乳化剂 完全一样，只是不含药剂； • 标准药剂对照：用标准药剂作对照。 （3）处理必须设重复 • 一般至少重复3次。 （4）运用生物统计分析试验结果
3、供试材料
• 应参考的原则：
• 在室内人为环境条件下，应用较简便、快速的繁 殖技术，可保证全年定时大量供应，不受季节限 制； • 应是广泛发生为害的主要农林有害生物，具有重 要的经济意义，而且在分类地位上有一定的代表 性； • 对药剂的敏感性符合要求，试验时易操作。
f.引诱作用
• 分性引诱剂、食物引诱剂和产卵引诱剂。
g.驱避作用
• 其原理与引诱作用相类似。
h.生长发育与生育干扰作用
• 通过胃毒、接触、熏蒸、内吸等处理方法，观察 昆虫蜕皮、化蛹、羽化的变化及其形态的变化、 产卵量及卵的孵化率等指标来观察药剂作用的效 果。
B.细胞水平及分子水平的生物测定
a.预期作用靶标抑制活性的测定 • 可以简化生物筛选测定的步骤与时间。 b.MTT（四噻唑蓝）法 • 活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生紫色结晶状颗 粒积于细胞内和细胞周围，其量与细胞数及细胞活力呈正 比。药剂处理细胞后，加入MTT，再测出所有混合液体的 吸光值，可推断细胞的活力，衡量供试药剂的毒力大小。 c.生物传感器 是一种以生物的部分活性物质作为敏感部件， 结合物理化学分析仪器，对特定种类化学物质或生物活性 物质具有选择性和可反应的分析装置。 • 按照识别元件可分为：基于分子（酶、抗原或抗体、受体、 核酸、脂质体等）的传感器、基于细胞的传感器和基于组 织切片的传感器。
• 我国常用的生物种类：
（1）昆虫和螨类 • 粘虫、棉铃虫、玉米螟、二化螟、小菜蛾、褐飞 虱、棉蚜、豆蚜、米象、杂拟谷盗、家蝇、淡色 库蚊、朱砂叶螨等。 （2）病原菌 • 稻瘟病菌、水稻纹枯病、小麦条锈病菌、甘薯黑 疤病菌、黄瓜霜霉病菌、柑桔青霉病菌等。 杂草 • 野燕麦、稗草、看麦娘、苋、荠菜、播娘蒿、藜 等。
B. 植株生长量的测定方法
• 主要针对已经发芽的除草剂，尤其是抑制光合作用的除草 剂的常规室内生物测定方法。 a、去胚乳小麦幼苗法 • 此法是测定抑制光合作用除草剂的专用方法； • 先挑选出长势一致的幼苗，摘除胚乳后，用供试药液处理 幼苗，培育一定的时间，测定幼苗的株高，以株高抑制率 来衡量药剂的活性。 b、萝卜子叶法 • 此法适用测定触杀性及影响氮代谢的除草剂； • 先将萝卜籽催芽成幼苗后切下子叶，并用不同浓度的供试 药液处理子叶，保持恒温，并在一定的光强下培养一段时 间，称量鲜重及物测定试验设计的基本原则
基本要求：
• 室内测定的药品应该是纯品，至少要有确切的有 效成分含量； • 供试生物应该是纯种，个体差异小，生理标准较 为均一； • 确定的环境条件。
（1）相对的控制环境条件 • 室内应该尽量保持与田间环境条件的一致性； • 测定农药的毒力，原则上要求只有两个变数，一 个是药剂的剂量或浓度作为自变数，另一个是死 亡率或抑制率作应变数； • 室内测定：要控制温度和湿度；使用精密的测试 仪器及严格的测试方法；供试虫种或菌种要用室 内饲养标准化的纯种； • 小区试验：应尽量力求所选地区土壤肥力、病虫 害分布、作物长势及管理水平等条件均匀相似。
C. 生理指标的测定方法
a、浮萍法 • 基本原理是季胺盐类除草剂可以干扰植物细胞光合作用中 的电子传导系统，使植物失水失绿枯死； • 将药剂配成一定的浓度后，利用水中浮萍的失绿程度可以 作为评判药剂活性的指标； • 用乙醇提取被处理的浮萍中的叶绿素，以叶绿素的含量作 为评判指标。 b、单细胞藻类法 • 此法对抑制光合作用和呼吸作用的除草剂特别灵敏； • 一般选用小球藻作为指示植物，将供试药液跟有小球藻的 培养液混匀后，恒温培养一段时间，甲醇提取叶绿素，用 分光光度计测定叶绿素的透光率，推算出药剂的EC50。
（2）杀螨剂的毒力测定
A、玻片浸渍法 B、叶片残毒法 • 是在培养皿中放入已经用药液处理并晾干 的叶片，然后接入长势一致的成螨，放入 培养箱，一定时间后观察其死亡率。 C、叶碟浸渍法 • 是将带有成螨的叶片直接浸渍在药液中5s 后取出，一段时间后，观察螨的死亡率。
（3）杀菌剂的毒力测定方法
A. 基于离体平板培养的毒力测定方法 a、孢子萌发测定法 • 其原理是在载玻片或平板上，通过滴加或喷施等 方法将药液施于其上，然后滴加一定浓度的孢子 悬浮液，经过一定时间培育后，在显微镜下观察 孢子的萌发率。 b、抑菌圈法 • 先将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与培养基混匀， 待混合物冷却后，放入吸有不同浓度药液的纸片 （或圆环中加药液），经过一定时间培育后，观 察以纸片为圆心的抑菌圈的大小。
（2）组织筛选测定法
• 介于活体与离之间的筛选方法； • 测定药剂的保护作用：取小块寄主植物的主要寄 生部位经过供试药剂处理后，再接种病原菌，通 过一段时间的培养后，观察药剂是否对病原菌有 防治效果；如测药剂是否有治疗作用，则先接种 病原菌，然后再将药液处理植物组织。
（4）除草剂的毒力测定方法
（1）对种子萌发的测定方法 A、培养皿法 • 药剂处理种子后培育一段时间，观察敏感植物根 长抑制率或芽长抑制率。 B、黄瓜幼苗形态法 • 是每隔一定时间观察黄瓜幼苗的形态，与事先已 经用2,4-D系列浓度处理后的黄瓜幼苗形态作对照 的标准图谱进行对比，推测药剂活性的大小。 C、琼脂测定法 • 是将药剂定量的倒入融化的琼脂液中，混匀后倒 入培养皿中冷却凝固，之后接入供试植物的种子， 观察发芽后的情况。
b.胃毒作用
①饲喂法：饲喂的方法分为无限制给食法及定量给食法；根 据饲喂的方式又分为叶片夹毒法及单叶饲喂法。 • 叶片夹毒法：吞食药量的计算是以试虫吞食叶面积乘以单 位面积叶片的剂量（μg/g）。 • 叶面积计算：方格纸法、叶面积测定仪法、电脑扫描法。 • 致死中量的求法：按每头虫吞食剂量的大小顺序排列，并 标明该剂量下试虫的死活情况，从而将虫划分成生存组、 生死组和死亡组。生死组中既有生存的又有死亡的，分别 计算生死组中生存个体和死亡个体平均吞食的药量，记为 A和B。 • A=（生死组活虫剂量总和）/生死组活虫总数 • B=（生死组死虫剂量总和）/生死组死虫总数 • LD50=（A+B）/2
c. 熏蒸作用
• 要求：必须在密闭的条件下进行。 • 仪器装置：有静止气体的测定装置和有气流出入 控制的熏蒸器。
d.内吸作用 • 直接测定法： • 间接测定法：用药液处理植物的局部，一定时间后取未处 理的部位加以研磨，稀释成不同浓度的汁液，再放入一定 数量的水蚤等观察其死亡情况，利用此法间接测定药剂是 否有内吸作用。 e.拒食作用 • 以昆虫的取食量或昆虫对食物的所食部位和昆虫体重的变 化等做的分析，作为药剂对供试昆虫是否有拒食活性的依 据。 • 选择性拒食活性测定：在同一培养皿中交错放入处理叶碟 与对照叶碟的方法； • 非选择拒食活性测定：在培养皿中仅放入对照或处理叶碟 的方法。