抗可提取性核抗原(ENA)抗体(6种)定性 化学发光蛋白 …

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6） 洗涤：弃去芯片反应孔内液体，并用洗涤液进行冲洗一次，剥离蛋白芯片集成块的上部 将蛋白芯片集成块下部放入洗盒中加入洗涤液， 并将洗盒直立固定于恒温摇床内， 设定恒温 摇床运行参数为 37℃、250rpm，温育振荡 8 分钟，弃去洗盒内洗涤液。共洗涤四次。 7） 发光：将洗涤完成的蛋白芯片集成块拍干，在每个芯片的膜表面加入 20μl 已混合 15 分 钟的检测液 A 和 B 混合液，静置 1.5 分钟。 8） 阅读与数据分析：将蛋白芯片集成块放入生物芯片阅读仪，软件自动读取图象（时间 60s） ，设置阳性对照和阴性对照的位置，输入各指标临界系数，分析各被测样本的测试结果 并打印数据报表。 质量控制 1） 单个芯片反应孔有效性： 若同一芯片反应孔内阳性对照指标（IgG）检测信号值>500,且阴性对照指标（BSA）检测信 号值<150，则判定该芯片反应孔检测结果有效；反之，则该芯片反应孔无效。 2） 实验整体有效性控制： A）根据单个芯片有效性判定，阳性对照品和阴性对照品反应孔均有效。 B） 根据临界系数判定， 阳性对照品判定 6 指标均为阳性， 阴性对照品判定 6 指标均为阴性。 3） 同时符合上述两个条件则判定整体实验有效；有任一条件不符，则试验无效。
【试验原理】 抗可提取性核抗原（ENA）抗体（6 种）定性检测试剂盒(化学发光蛋白芯片法)基于间 接化学发光酶联免疫方法、蛋白芯片技术检测血清中的抗 ENA 抗体。检验原理如下： 1） 将 SSA/Ro、SSB/La、Jo-1、RNP、Sm、Scl-70 等 6 种 ENA 抗原以微阵列方式固定在硝 酸纤素膜上制备成蛋白芯片。 2） 加入待检样本，经第一次温育，待检样本中抗 ENA 抗体与蛋白芯片固定的抗原特异性 结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上以微阵列方式只留下各种特异性结 合的抗原抗体复合物。 3） 加入 HRP 酶标记抗体，经第二次温育，与固相载体上抗原抗体复合物特异性结合，形 成“抗原---抗体---HRP 酶标记抗体”复合物。洗涤后，固相载体上的酶量体现待检样本中 各个抗 ENA 抗体含量。 4） 加入化学发光底物，HRP 酶催化底物经化学发光产生光信号。 5） 利用生物芯片阅读仪对化学发光光信号进行捕获和数字化转化，并根据光信号的强弱， 可以检测出待检样本中每个指标抗体含量。
【参考文献】 [1]von Muhlen CA, Tan EM. Autoantibodies in the diagnostics of systemic rheumatic diseases. Semin Arthritis Rheum, 1995, 24:323-358. [2]Mongey AB, Hess EV: Antinuclear antibodies and disease specificity. Advances in Int. Med. 36(1): 151-169, 1989. [3]Reiehlin M.Autoantibodies to the RoRNP particles[J].Clin Exp lmmunot,1995，99[1]:7-8 [4]Meilof JF.Autoantibodies and their target antigens in Sjogren’s syndrome[J].Netherlands Med， 1995-40(11)：1405-1409 [5]Meilof J.F. 1992. Autoantibodies against small cytoplasmic ribonucleoproteins: the anti-Ro/SS-A and anti-La/SS-B autoimmune response. A review of autoantibody detection, autoantigen composition,autoantibody-disease associations and possible etiologic mechanisms. Rheumatol. Int. 12: 129–140 [6]Alspaugh M.A., Maddison P.J. 1979. Resolution of the identity of certain antigen-antibody systems in systemic lupus erythematosus and Sjögren’s Syndrome: an interlaboratory collaboration. Arthritis Rheum. 22: 796–798 [7] Moore TL, Weiss TD, Neucks SH, et al: Extractable nuclear antigens. Semin Arthritis Rheum 10:309-318, 1981. [8]Tan EM, Kunkel HG: Characteristics of a soluble nuclear antigen precipitating with sera of patients with systemic lupus erythematosus. J. Immunol. 96:464-471, 1966. [9] Aeschlimann A et al: Anti-Scl-70 antibodies detected by immunoblotting in progressive systemic sclerosis: specificity and clinical correlations. Annals of Rheumatic Diseases, 48: 992-997,1989. [10]Tan EM. Antinuclear antibodies: diagnostic markers for autoimmune diseases and probes cell biology. Adv Immunol,44:93-151, 1989.
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【检测方法的局限性】 1、本品只能用于血清样本的测定而不能用于其他体液样本。 2、通过其他方法得到的值与本品测定结果不具有直接的可比性。
【产品性能指标】 1.分析灵敏度 采用公司内部灵敏度参考品（六个指标各一份）进行检测，检测结果为相应指标阳性。 2.精密度 采用公司内部精密性参考品进行检测 10 孔，检测结果为六指标的 CV 值均（n=10）≤15%。 3.特异性 3.1、阴性符合率：检测 10 份经欧蒙斑点法检测试剂盒检测结果为 SSA/Ro、SSB/La、Jo-1、 RNP、Sm、Scl-70 抗体阴性的血清，检测结果为阳性的血清不大于 1 份。 3.2、阳性符合率：检测经欧蒙斑点法检测试剂盒检测结果为 SSA/Ro、SSB/La、Jo-1、RNP、 Sm、Scl-70 抗体单一或者多指标阳性的血清（每个指标阳性份数≥10 份） ，结果为各指标阴 性份数不大于 1 份。 4.干扰实验 0.23mg/ml 胆红素、7 mg/ml 血红蛋白（牛血红蛋白）和 51.36 mg/ml 脂类（甘油三油酸酯） 对检测无影响；检测结果不受溶血、脂血和黄疸的干扰； 5.交叉反应 所用抗原的高纯度保证了本品的高特异性，未发现与其他自身抗（CENP-BRib.p.protein、
【包装规格】 48 人份/盒
【临床意义】 抗可提取性核抗原（ENA）抗体（6 种）定性检测试剂盒(化学发光蛋白芯片法)定性检 测血清样本中的 6 种可提取抗核抗体，包括 SSA/Ro、SSB/La、Jo-1、RNP、Sm、Scl-70。 它们的临床意义如下： （1）抗 SSA／Ro 抗体：SSA／Ro 是小分子细胞浆核糖核蛋白（scRNPs） ，是蛋白 和小分子核糖核酸形成的复合物。 抗原是含有 Y1－Y5 RNA 的蛋白质， 其分子量有 52KD 及 60KD。52KD 的多肽条带与干燥综合征（SS）相关，而 60KD 的多肽条带则更多存 在于 SLE 患者中。抗 SSA 抗体主要见于原发性干燥综合征，阳性率高达 60％～75％。 此外， 抗 SSA 抗体常与亚急性皮肤性红斑狼疮、 抗核抗体阴性狼疮、 新生儿狼疮等相关。 （2）抗 SSB/La/Ha 抗体：SSB 抗原是 RNA 多聚酶转录中的小 RNA 磷酸蛋白质。 其分子量为 48KD、47KD、45KD，其中 48KD 更具特异性。抗 SSB 抗体较抗 SSA 抗体 诊断干燥综合征更特异，是干燥综合征血清特异性抗体。原发性干燥综合征阳性率达 40％左右。其他自身免疫性疾病中如有抗 SSB 抗体，常伴有继发性干燥综合征。 （3）抗 Scl-70 抗体：天然 Scl-70 抗原是分子量为 100KD 的 DNA 拓朴异构酶 I 的 降解产物，因其主要见于硬皮病，且其相应抗原分子量为 70KD，故取名为抗 Scl-70 抗 体。系统性硬化症中阳性率达 20%～59%，重症弥漫性 PSS（SSc）中抗 Scl-70 抗体阳 性率高达 75％。
48 人/块×1 块 6ml×1 瓶 1 瓶（冻干品） 1 瓶（冻干品） 50ml×1 瓶 50ml×1 瓶 0.6ml×1 瓶 0.6ml×1 瓶 1份
【储存条件及有效期】 试剂盒在 2℃~8℃条件下储存； 试剂盒自检定合格日起有效期为六个月； 阴、阳性对照品复溶后应在 2 小时内使用。
Байду номын сангаас
【适用仪器及型号】 HD-2001A 生物芯片阅读仪（湖州数康生物科技有限公司）
Mi-2、histone、dsDNA）之间的交叉反应。
6.稳定性 本品试剂盒 4℃放置 6 个月或置（37±1℃）4 天，检测产品性能合格。
【注意事项】
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1、 阴、阳性对照品已经过 HBsAg、梅毒抗体、HCV 抗体、HIV1&2 抗体检测均为阴性。 2、 不同批号的试剂盒所含组分不可混用。 3、 避免试剂和样本的交叉污染以免造成错误结果。 4、 本品为一次性使用的产品，不可重复使用。 5、 有效日期已注明，请勿在有效日期后使用。 6、 本品的检测结果只作为医生的辅助诊断依据。
【预期用途】 同时并行定性检测人血清样本中的抗 SSA/Ro、SSB/La、Jo-1、RNP、Sm、Scl-70 抗体， 用于夏普综合症 （混合性结缔组织病， MCTD） 、 系统性红斑狼疮 （SLE） 、 干燥综合症 （SS） 、 进行性系统性硬化症、多肌炎/皮肌炎（PM/DM）等的临床辅助诊断。
抗可提取性核抗原（ENA）抗体（6 种）定性 检测试剂盒(化学发光蛋白芯片法) 使用说明书(48 人份)
【产品名称】 通用名称：抗可提取性核抗原（ENA）抗体（6 种）定性检测试剂盒(化学发光蛋白芯片法) 英文名称：Qualitative kit for anti-ENA antibody （Protein Chip-Chemiluminescence）
【参考临界值】 参见说明书附录 I：本批次阳性对照品中各指标临界系数。
【检验结果的解释】 1) 输入各指标临界系数（参见附录 I） ，由生物芯片阅读仪读取对照品及各样本在芯片上对 应于各指标的信号强度值 2) 通过阳性对照品各指标的信号值与相应指标临界系数的比值获得临界信号值，样本指标 信号值大于该指标临界信号值，则样本为该指标阳性；反之，则样本为该指标阴性。
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【主要组成成份】 见表 1
表 1 抗可提取性核抗原（ENA）抗体（6 种）定性检测试剂盒组分表
1.蛋白芯片集成块（各种指标的抗原微阵列 NC 膜集成模块） 2.反应液（酶标羊抗人 IgG，稳定剂稀释） 3.阳性对照品（阳性血清稀释冻干品） 4.阴性对照品（阴性血清稀释冻干品） 5. 浓缩洗液（Tris-Hcl+Tween+Nacl 缓冲液） 6. 样品稀释液（蔗糖+PB 缓冲液） 7.检测液 A（过氧化物稳定剂和过氧化氢的混合物） 8.检测液 B（鲁米诺和增强子的混合物） 9. 说明书
【样本要求】 1) 样本为静脉采血后自然析出的血清。 2) 血 样 采 集 后 ， 应 不 加 抗 凝 剂 ， 并 放 置 在 干 净 、 干 燥 的 试 管 内 静 置 １ 小 时 ， 离 心 （2000rpm× 5min） ，吸出血清，待测。 3) 溶血样本和黄疸血样本不宜检测；脂血的样本应先离心（20000rpm× 3min） ，去除上层油 脂后，取下层血清检测。 4) 若样本当天不检测而在一周内检测，则应放置在 2-8℃保存；若样本当天不检测而在一个
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月内检测，则应放置在-20℃保存。样本冻融之后，应立即检测，不宜反复冻融。 5) 样本应避免微生物污染。
【试验方法】 试验准备工作 1） 取出试剂盒，在实验室内平衡至室温（15-30C） 。注：试剂盒内各组份为一次性使用， 不可回收重复使用。整个实验过程操作人请戴乳胶手套操作。 2） 样本稀释： （1）待检测血清样本用样品稀释液按照 1：101 稀释，比如 5ul 样本加入 500ul 样品稀 释液； （2）阳性对照品、阴性对照品中分别加入 120ul 纯化水复溶。 3） 浓缩洗涤液稀释：用纯化水稀释 15 倍。温育至 25C 左右。 4） 调试恒温摇床，确认可以正常运行。 试验过程 1） 加样：用 200μl 微量移液器依次吸取阴性对照品、阳性对照品、待测样品各 100μl 加入 芯片个反应孔内，避免产生气泡，每吸取一个样本应更换一个枪头。 注：在开始温育前加完所有样本。 2） 温育第一次：将已加样完成的芯片，平放固定于恒温摇床内，设定恒温摇床运行参数为 37℃、250rpm，温育振荡 30 分钟。 3） 洗涤：弃去芯片反应孔内液体，并用洗涤液进行冲洗一次，将芯片放入洗盒中加入洗涤 液，并将洗盒直立固定于恒温摇床内，设定恒温摇床运行参数为 37℃、250rpm，温育振荡 8 分钟，弃去洗盒内洗涤液。共洗涤四次。 4） 加反应液：在芯片各反应孔内加入 100μl 反应液，避免产生气泡。 5） 温育第二次：与温育第一次操作方法相同。
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（4）抗 Jo-1 抗体：Jo-1 抗原是组氨酰-tRNA 合成酶在胞浆中以小分子核糖核蛋白 （scRNPs）形式出现，分子量为 50KD。抗 Jo-1 抗体对多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 的诊断具有较强的特异性，阳性率为 25％-35%。 （5）抗 RNP 抗体：临床上应用较多的是 U1RNP 抗体，U1snRNP 由 U1RNP 和 9 种不同的蛋白质组成，所作用的抗原是 U1 小分子细胞核核糖核蛋白（U1snRNP） ，所以 又称抗 U1RNP 抗体。混合性结缔组织病(MCTD)的抗 RNP 阳性率>95%。抗体滴度与疾 病活动相关。抗 RNP 抗体在 SLE 中的阳性率为 40%左右，但几乎总伴有抗 Sm 抗体。 （6）抗 Sm 抗体： Sm 抗原是 U 族小分子细胞核核糖核蛋白（UsnRNP） 。Sm 抗体 和 SnRNP 是同一分子复合物中的不同抗原位点，故抗 Sm 抗体很少单独出现，它常于 U1RNP 抗体相伴，在 SLE 中阳性率为 30.2%，为 SLE 的标记抗体。