辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G

辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G

一、实验目的：

1、了解蛋白质纯化的基本技术；

2、学习辛酸—硫酸铵法纯化抗体的方法。

二、实验原理：

根据免疫球蛋白的性质利用生物化学各种纯化方法进行抗体的纯化，主要有常规生物化学和特异性亲和层析两类方法。本实验采用辛酸—硫酸铵沉淀法从动物血清中纯化抗体，纯度和回收率较高，且抗体活性不被破坏；同时此方法操作简便、周期短、成本低、不需要复杂的仪器设备，不仅使用于小量抗体的纯化，也适合大批量抗体的制备。

三、实验材料试剂和器材：

1、实验材料：兔血清。

2、试剂：乙酸-乙酸钠缓冲液、10×磷酸盐-NaCl缓冲液、透析液、5 mol/LNaOH、0.1mol/L NaOH。

3、器材：电磁搅拌器、离心机、透析袋。

四、操作方法：

1、动物血清用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释，0.1mol/L NaOH调整血清稀释液pH至4.5。

2、室温下用电磁搅拌器边搅拌边缓慢滴加辛酸（加入量为1L血清稀释液加25ml），滴加完

后继续搅拌30min。

3、离心（10000转/分，20分钟）,收集上清液，弃去沉淀，上清液用滤纸过滤除去悬浮物，

量体积。

4、按照10%体积加入10×磷酸盐-NaCl缓冲液，用5 mol/LNaOH调pH至7.4。

5、上清液4℃预冷10min，测量溶液总体积，在4℃按277g/L缓慢加入硫酸铵粉末（终浓

度达到45%饱和度），边加边搅拌，加完后继续搅拌30min。

6、离心（5000转/分，15分钟）,弃去上清液，收集沉淀。

7、沉淀用少量透析液溶解（一般为原血清体积的1/10），透析并更换两次透析液。

8、透析后的抗体溶液在50～55℃水浴中加热20min，离心（5000转/分，20分钟）,上清液于-20℃保存。