免疫球蛋白的提取方法
免疫球蛋白合成、提取
免疫球蛋白的合成和提取涉及到多个步骤。
首先，免疫球蛋白是由免疫系统产生的一种蛋白质，具有特异性，可以与抗原结合，发挥抗体、凝集和促进细胞毒性等功能。
免疫球蛋白的合成和提取通常从血液或血浆中提取。
血浆中包含了免疫球蛋白，而健康人的血浆可以用于提取免疫球蛋白。
在提取过程中，通常使用低温乙醇蛋白分离法分段沉淀提取免疫球蛋白组分，经超滤或冷冻干燥脱醇、浓缩和灭活病毒处理等工序制得。
其纯度应不低于90%。
此外，基因工程技术也是合成免疫球蛋白的一种方法。
这种方法通过基因重组技术，将编码免疫球蛋白的基因导入到细胞中，让细胞表达并产生免疫球蛋白。
在临床应用上，免疫球蛋白主要用于预防麻疹和传染性肝炎等疾病。
此外，免疫球蛋白还用于治疗某些自身免疫性疾病和感染性疾病。
在某些情况下，人体内的免疫球蛋白数量不足，需要从外部补充。
除了直接从血浆中提取外，还可以通过基因工程技术人工合成免疫球蛋白。
总的来说，免疫球蛋白的合成和提取是一个复杂的过程，需要考虑到多个因素，包括蛋白质的结构、生物活性、安全性以及生产成本等。
免疫球蛋白生产工艺
免疫球蛋白生产工艺
免疫球蛋白生产工艺是通过提取人或动物体内的免疫球蛋白，进行纯化加工而生产的。
工艺过程主要包括以下几个步骤：
1. 免疫原制备：选择适量的抗原，加工成适宜形态，如蛋白质、病毒、细菌等。
2. 动物免疫：将免疫原注射到动物体内，使其产生免疫反应，并获取免疫动物的血液或血浆。
3. 血浆采集：采用多次穿刺或动脉切开方式，将免疫动物的血液或血浆采集出来。
4. 分离纯化：采用各种化学物质、膜分离等方法，去除血浆中的不必要成分，纯化出目标物质。
5. 灭活：对分离出的免疫球蛋白进行灭活处理，确保无病原体含量，保证产品安全。
6. 瓶装灌装：将纯化灭活的免疫球蛋白进行灌装，瓶盖封口，附上标签，包装储存。
以上就是免疫球蛋白生产工艺的基本步骤。
生产过程需要严格控制各个环节，确保产品的质量和安全。
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定-1
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定-1血液及组织样品的制备分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律，经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织，也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品，有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。
掌握以上各种实验样品的正确处理和制备方法是保证生化实验顺利进行的关键。
一、血液样品(一）采血测定用的血液，多由静脉采集。
一般在饲喂前空腹采取，因此时血液中化学成分含量比较稳定，采血时所用的针头、注射器，盛血容器要清洁干净；接血时应让血液沿着容器壁慢慢注入，以防溶血和产生泡沫。
(二）血清、全血及血浆的制备1.血清的制备血清是全血不加抗凝剂自然凝固后析出的淡黄清亮液体。
制备方法是：将刚采集的血液直接注入试管或离心管中。
将试管放成斜面，让其自然凝固，一般经3h 血块自然收缩而析出血清；也可将血样放入37 ℃恒温箱内，促使血块收缩，能较快约析出血清。
为了缩短时间，也可用离心机分离（未凝或凝固的均可离心），分离出的血青，用吸管吸出置于另一试管中，若不清亮或带有血细胞，应重离心，加盖冷藏备用。
2.全血及血浆的制备取清洁干燥的试管或其它容器，收集动物的新鲜血液，立即与适量的抗凝剂充分混合，所得到的抗凝血为全血。
每毫升血液中加入抗凝剂的种类可以根据实验的需要进行选择，但是用量不宜过大，否则将影响实验的结果。
将已抗凝的全二于 2，000r / min 离心10min ，沉降血细胞，取上层清液即为血浆。
血浆比血清分离得快而且量多：两者的差别，主要是血浆比血清多含一种纤维蛋白原，其它成分基本相同。
3.抗凝剂凡能够抑制血液凝固反应进行的化合物称为抗凝剂。
抗凝剂种类甚多，实验室常用的有如下几种，可根据情况选择使用。
（1）草酸钾（钠）优点是溶解度大，可迅速与血中钙离子结合，形成不溶性草酸钙，使血液不凝固。
每毫升血液用1-2mg 即可。
配制方法：配制10％草酸钾水溶液二吸取此液0.1ml 放入一试管中，慢慢转动试管，泛草酸钾尽量铺散在试管壁上，置80 ℃ 烘箱烤干（若超过150 ℃ 则分解），管壁即呈一薄层三色粉末，加塞备用。
免疫球蛋白G(IgG)三种提取方法比较
ＩＧ 纯度较 高 、 率也 高 ， 时 间较 长 ； 酸一 酸铵 分 步沉 淀法所 得 Ｉ 纯度很 高 ， 所 用时 间较 长 ， ｇ 得 但 辛 硫 ｇ Ｇ 但 得 率也较低 。３种提 取方 法各有特 点 ， 可根 据不 同的 实验 条件 和 目的选择 不 同的提 取方 法。
关键 词 ： 猪血 清 ； 免疫球 蛋 白 ； 取 方法 ； 提 比较
・３ ・ ８
免疫球蛋 白 Ｇ（ Ｇ ＝种提取方法比较 Ｉ ） ｇ
刘生 杰 也， 朱茂 英 ， 顾士彬 。唐 梅 。周 扬 。余为一 ’ ， ， ，
（安徽农业大学生命科学学院， ｔ 安徽合肥 ２ １ ７ ；阜阳师范学院生命科学学 院， ３ ０ ２ 安徽阜阳 ２ ６４ ） ３ ０ １
摘 要： 比较 ３种提 取猪 血清 中免疫球 蛋 白 ＩＧ 方法的提取效 果 。分 别 用辛酸 沉淀 法 ， 酸铵分 步沉淀 ｇ 硫 法． 辛酸一 酸 铵 沉淀 法粗提 猪 血 清 免疫球 蛋 白 ＩＧ， 硫 ｇ 并通 过 Ｓ － ＡＧ ＤＳ Ｐ Ｅ凝胶 电泳 、 ｌ ａ ａ Ｆ Ａｐ Ｅ ｓ Ｃ凝胶 ｈ ｅ 成像分析 软件 、 ｒｄｏｄ 白浓度测 定法等 比较 ３种方 法的提 取 纯度和得 率 ， Ｂ ａｆｒ 蛋 同时比较 ３种 方 法的时效 性和 经济性 。辛酸沉 淀法提取 ＩＧ 所 用时间最短 ， ｇ 只需 １ ， ｈ 得率较 高但 纯度不 高 ； 酸铵 盐析 法提 取的 硫
中图分类号 ： １ ８ Ｑ８ ； ５ ￥ 文 献标识 码 ： Ａ
Ｃｏ ｐ ｒｓ ｎ ｏ ｒ ｅＭ ｅｈ ｄ ｆＰｕ ｉ ｉ ｇＩ Ｇ ｒ ｍ ｗｉ ｅＳ ｒ ｍ ｍ ａ ｉｏ ｆＴｈ ｅ ｔ ｏ ｓｏ ｒｆ ｎ ｇ ｆｏ Ｓ ｎ ｅ ｕ ｙ
ＨｕＳ ｅ ｇ ｅ ， ｈ ｏｉｇ， ｕＳ ｉｉ Ｔ ｎ ｉ Ｚ ｏ ａ ｇ， ｕＷｅ ｉ ｈｎ ｊ Ｚ ｕＭａｙ ２ Ｇ ｈｂｎ， ａ ｇＭｅ ， ｈ ｕＹ ｎ ２Ｙ ｉ ｉ ｎ ｙ
免疫球蛋白原料
免疫球蛋白原料
免疫球蛋白的原料是20种氨基酸。
免疫球蛋白是一种非常复杂的蛋白质，目前为止还不能够人工工业合成，所有的商用免疫球蛋白无一例外都是生物工程的产物。
大多数采用细胞工程，原理是这样的：对一个生物注射某种抗原，使得该生物能够产生相应的抗体，也就是免疫球蛋白。
然后提取这个生物的免疫细胞，并筛选出能够产生免疫球蛋白的浆细胞。
然后选择一种肿瘤细胞，使其与这种浆细胞融合，然后再合适环境下扩增生产足够多的融合细胞，融合细胞会自行生产出所需要的免疫球蛋白，在培养液中提取即可。
还有其他的生产方式，主要是基因工程的产物，也就是切出能够产生该抗体的基因导入一种生物细胞内并激活，然后培养这种细胞就可以了。
ige制备方法
免疫球蛋白E（IgE）制备方法
一、引言
免疫球蛋白E（Immunoglobulin E，IgE）是一种重要的抗体类型，参与机体的过敏反应和寄生虫感染防御。
IgE的研究对于理解过敏性疾病的发生机制具有重要意义。
因此，掌握有效的IgE制备方法是进行相关研究的基础。
二、IgE的生物学特性
IgE是由浆细胞分泌的一种抗体，主要存在于血液和黏膜表面。
它与肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的FcεRI受体结合，引发速发型过敏反应。
此外，IgE还参与抗寄生虫免疫反应。
三、IgE的制备方法
1. 血液提取法：通过收集健康人的血清或血浆，然后通过离心、超滤、层析等步骤纯化出IgE。
2. 细胞培养法：将能够产生IgE的B细胞或杂交瘤细胞在体外培养，然后收集细胞培养上清液，再经过纯化得到IgE。
3. 基因工程法：通过基因克隆技术，将编码IgE的基因导入到表达系统中，如细菌、酵母或哺乳动物细胞，使这些宿主细胞大量生产IgE。
四、IgE的纯化
IgE的纯化通常采用亲和层析法，利用IgE特异性的配体（如抗IgE抗体）与IgE结合，然后通过洗脱条件的选择，分离出纯化的IgE。
五、结论
IgE的制备方法多种多样，各有优缺点。
选择何种方法需要根据实验目的和条件来确定。
无论哪种方法，都需要注意保持操作过程的无菌性和避免IgE的变性，以保证制备出的IgE的质量。
六、展望
随着科学技术的进步，我们期待能发展出更高效、更经济的IgE制备方法，为过敏性疾病的研究提供更好的工具。
同时，对IgE结构和功能的深入研究，也将有助于我们开发新的治疗方法，改善患者的生活质量。
免疫球蛋白的提取方法
免疫球蛋白的提取方法根据猪血中含有的各种蛋白质的分子大小、电荷多少、溶解度以及免疫学特征等,从血液中提取免疫球蛋白,常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法等。
免疫球蛋白的提取盐析法盐析法是分离蛋白质的重要方法之一,是利用抗体与杂质之间对盐浓度敏感程度的差异性进行的。
选择一定浓度范围的盐溶液使部分杂质呈“盐析”状态,抗体成分呈“盐溶”溶解状态。
离心去除盐析沉淀状态的杂蛋白,得到的上清液再选择一定浓度范围的盐溶液使抗体成分呈盐析状态,离心得到的沉淀物即为纯化的目标抗体。
目前常用的盐析法有饱和硫酸铵分步盐析法、辛酸沉淀法、氯化铁沉淀法、多聚磷酸盐盐析法等。
饱和硫酸铵分步盐析硫酸铵是盐析法最常用的无机盐,主要原因是它溶解度大,随温度变化小,对蛋白质有保护作用,高浓度时可抑制微生物和蛋白酶的活性,价格也不贵。
免疫球蛋白的饱和硫酸铵分步盐析法操作简单,对设备和操作条件要求不高,便于工业化生产。
其具体步骤为:取一定量血浆,加生理盐水稀释,边搅拌边缓慢加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度20%,4℃静置1h,4000r/min离心10min,弃沉淀,上清液中继续加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度50%,浓氨水调pH值至7.0,4℃静置2h,4000r/min离心20m弃上清,将沉淀溶于生理盐水,超滤除盐浓缩,滤液中无S2- 4为止,即得IgG粗提物。
免疫球蛋白的辛酸沉淀法辛酸沉淀法提取IgG时,对设备和操作条件要求较高,在离心时,转速为10000 r/min,普通离心机达不到要求。
在调节溶液pH值时,要控制得当,pH值稍低或稍高对IgG的得率和纯度都有很大影响,这些都限制了它的广泛应用。
其具体步骤为:取一定量0.1mol调pH值至4.5;室温下边搅拌边缓慢加入辛酸(按辛酸25 μl/mL血清混合液添加),继续搅拌30min 后,10000r/min离心30min,弃沉淀,留上清液,上清液用多层纱布过滤,留滤液,然后将滤液装入透析袋中析48h,每8～10h换一次透析液,最后超滤浓缩即得1gG粗提液。
免疫球蛋白G_IgG_三种提取方法比较_刘生杰
１．８ 经济性比较 分别计算 ３ 种方法所用药品价钱的总和，除以所
用血清的量，来比较其经济性效益，所得结果越小，其 经济效益越好。
·４０·
管号 ＢＳＡ／μｌ ＰＢＳ／μｌ 考马斯亮蓝溶液 ／ｍｌ 总量 ／ｍｌ ＢＳＡ 浓度 ／（ｍｇ．ｍｌ－１） ＢＳＡ 吸光度值
总量 ／ｍｌ
血清 １：６４
５０
１００
２．８５
３．００
辛酸沉淀上清 １：５
５０
１００
２．８５
３．００
硫酸氨沉淀 ＰＢＳ 稀释液 １：２０
５０
１００
２．８５
３．００
辛酸 － 硫酸氨沉淀 ＰＢＳ 稀释液 １：１０
５０
１００２．８５３．００１．７ 粗提时效性比较 分别统计 ３ 种方法每一步骤所需时间，最后计算
１３０
１２０
１１０
１００
９０
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
３．００
３．００
３．００
３．００
３．００
３．００
３．００
０
０．００３３３４
０．００６６６７
０．０１
０．０１３３３４
畜牧兽医科学
中国农学通报 第 ２３ 卷 第 １１ 期 ２００７ 年 １１ 月 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｓｂ．ｏｒｇ．ｃｎ
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值巨大。但有效利用 ＩｇＧ 的关键是缺乏快速高效的提 取技术，由于血清蛋白种类多，目前还没有技术能实现一 步 提 取 纯 化 ，须 多 种 方 法 结 合 方 能 奏 效 ［１］，但 粗 提 的 效果却制约着纯化的得率和纯度。从血液中提取免疫 球蛋白，常用的方法有盐析法（如多聚磷酸钠絮凝法， 硫酸氨盐析法）、有机溶剂沉淀法（如冷乙醇分离法、 辛酸沉淀法）、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法、纤维 素层析法、凝胶层析法、超滤法等，许多学者对提取免 疫球蛋白作过一些深入的研究［２］，但对抗体纯化的综 合方法比较的较多，而限制纯化纯度和得率的瓶颈阶 段— ——粗提阶段则比较研究较少，尤其是以大量提取 免疫球蛋白为目的的比较研究较少，笔者比较了辛酸 沉淀法、硫酸铵分步盐析法和辛酸 － 硫酸铵盐析法 ３ 种常用提取 ＩｇＧ 方法的效果，以期为猪血清免疫球蛋 白的快速、经济、大量提取和综合利用提供参考。 １ 材料与方法 １．１ 材料
实验方案_低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白
实验方案_低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白的实验方案：实验目的：通过低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白，获取纯度较高的免疫球蛋白样品。
实验原理：低温乙醇法是一种常用的蛋白质沉淀方法，其基本原理是在低温下，添加适量的乙醇，使蛋白质发生沉淀，从而实现分离纯化目的。
实验步骤：1.实验前准备：1.1.预先配制10%的乙醇溶液，使用冷藏保存。
1.2.准备人血清样品。
1.3.准备离心管和离心机。
2.实验操作：2.1.取一定体积的人血清样品，将其转移到离心管中。
2.2.在离心管中加入等体积的10%乙醇溶液。
2.3.混匀溶液，并在4℃下静置20-30分钟，使免疫球蛋白发生沉淀。
2.4.将离心管放入离心机中，以1500-2000g的速度离心15分钟，沉淀免疫球蛋白。
2.5.将上清液倒掉，并用凉蒸馏水轻轻洗涤沉淀2-3次，以去除杂质。
2.6.加入一定储存缓冲液（如磷酸盐缓冲液）重悬沉淀，得到免疫球蛋白样品。
2.7. 可进一步使用其他方法（如电泳、Western blot等）检测免疫球蛋白的纯度和活性。
3.结果分析：通过低温乙醇法提取的免疫球蛋白样品，可以通过其他实验方法来检测其纯度和活性。
同时，实验中的收率和纯度也可以根据实验结果进行分析和评估。
注意事项：1.实验操作要在低温下进行，以避免免疫球蛋白的降解和失活。
2.实验过程中离心操作要平稳，避免产生气泡和颗粒。
3.在操作过程中要小心避免受到污染，以确保提取的免疫球蛋白的纯度。
4.提取的免疫球蛋白样品可以进一步保存、分析和应用于实验研究中。
总结：低温乙醇法是一种简便、经济、有效的免疫球蛋白提取方法，适用于从人血清等样品中提取纯度较高的免疫球蛋白样品。
通过该实验方案，可以得到稳定、纯度较高的免疫球蛋白样品，为后续实验研究提供基础数据和支持。
需要注意的是，在实验过程中要严格控制实验条件，以确保实验结果的可靠性和有效性。
免疫球蛋白分离提取方法及其应用的研究进展_顾有方
专论与综述
免疫球蛋白 （!""#$%&’%(#’)$， 是具 !&） 有抗体活性的，能与相应的抗原发生特异 性结合反应的球蛋白，是脊椎动物在对抗 原刺激的免疫应答中， 由淋巴细胞产生的， 普遍存在于哺乳动物的血液、 组织液、 淋巴 液和体外分泌液中的一类蛋白质。免疫球 蛋 白 是 由 德 国 学 者 *+,-)$& 和 日 本 学 者 北 里于 ./01 年首次发现， 随后人们用电泳技 术证明了血液中抗体的活性存在于 ! 区、 "2 区、 " 区和 # 区。为了避免名称上的混乱，
2@@.11
外， 牛初乳的离心脱脂还可提高料液的蛋白质含量， 增加 !&8 的热稳定性。压强不大时， 对免疫球蛋白的活性没有影响， 当 压强超过一定限度时，免疫球蛋白活性会减少，甚至变性失 活。 但蔗糖等可以增加免疫球蛋白在高压处理时的稳定性。 高 压 对 牛 乳 !&8 的 稳 定 性 所 作 的 研 究 表 明 ， 在 211:NO 处 理 随压力升高， 21")$， !&8 活性未发生变化。 411:NO 时 !&8 开始 变性， 至 A11:NO 时， 无蔗糖存在， 则 !&8 完全变性。过酸或过 碱都会造成免疫球蛋白变性失活。当 T6 在 @Q3B=3Q2/ 时， 免 疫活力基本没有变化， 当 T6 低 于 @Q3B 或 高 于 3Q2/ 时 ， 免疫 活力开始下降。 所以免疫球蛋白在制备加工应用中， 应在弱酸 或中性的条件下进行。
对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较
Ｐ ｉ — ｕ ， ＺＨＡＮＧ ａ — ｏ ｇ Ｉ Ｊｎ ｋ ｉ Ｈｕ ｎ— ｎ ｒ
ｅ ｔ ｏ ｔ （ ｉ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏｙ Ｃ ｌ ｇ ｆＳ ｕｈ ｅｔＵ ｉ ｒｉ ｏ ａｉｎ ｌｉｓ Ｓｃ ｕ ｎ Ｃ ｅ ｇ ｕ ６ ０ ４１ Ｃ ｉａ Ｌｆ Ｓ ｉｎ ｅ ａ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｏｌ ｅ ｏ ｏ ｔｗ ｓ ｎｖ ｓ ｙ ｆｒ Ｎ ｔ ａｉｅ ， ｉｈ ａ ｈ ｎ ｄ １ ０ ， ｈｎ ） ｅ ｅ
本试验采用水稀释法初提 Ｉ ｇ Ｙ，然后分别用硫酸
铵 沉 淀 法和 冰 乙醇 分 级 沉 淀 法进 一 步 提 取 Ｉ ｇ Ｙ，检 测 Ｉ 提取 量 、 度 以及 活 性 效价 ， ｇ Ｙ 纯 择 较 好 的鸡 卵黄 为选 免 疫 球 蛋 白（ｇ 提 取 方法 提供 依 据 。 Ｉ Ｙ）
ｃ ｍｐ ｒｄ ｂ ｕ Ｉ Ｙ ｘｒ ｃｉｎ ｒ ｔ ｐ ｒｔ ａ ｄ ｎｉ ｏ ｙ ｉ ｒ ｏ ａｅ ａ ｏ ｔ ｇ ｅ ｔａ ｔｏ ａｅ， ｕ ｙ ｎ ａ ｔｂ ｄ ｔ ｅ ．Ｔｈ ｒ ｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈ ｔ Ｉ Ｙ ｅ ｔａ ｔｄ ｙ ｉ ｔ ｅ ｅｕ ｔ ｏ ｄ ｔ ａ ｇ ｓ ｘｒ ｃｅ ｂ ｂ ｔ ｍｅｈ ｄ ａ ｈｇ ｐ ｒｔ ａ ｄ ｏｈ ｔｏ ｓ ｈ ｄ ｉｈ ｕ ｙ ｎ ｍｅｈ ｄ ｗａ ｒｌｔｖ ｌ ｂ ｔ ｒ ｔ ａ ｍｅｈ ｄ ｉ ｅ ｔａ ｔｏ ａｅ ａ ｄ ｉ ｔ ｏ １ ｓ ｅａｉｅｙ ｅｔ ｈ ｎ ｅ ｔ ｏ ２ ｎ ｘｒ ｃｉｎ ｒ ｔ ｎ
摘 要 ： 文 比较 了水 稀释 一 和硫 酸铵 沉 淀 法 （ 本 饱 法一 ） 水 稀释 一冰 乙醇分 级 沉 淀 法 （ 和 法二 ） 离提 纯 分
鸡 卵黄 免疫 球 蛋 白（ Ｙ 的 产 率 、 Ｉ ） ｇ 纯度 及 抗 体 效 价 。 结 果表 明 ： 种 方 法提 取 的 ＩＹ 纯度 均 较 高 ， 一 纯 两 ｇ 法
IgG纯化指南
抗体的提取与纯化精制免疫球蛋白的方法很多。
一般采用综合技术，避免蛋白变性。
如分离IgG时，多结合使用盐析法与离子交换法，以求纯化。
提取IgM的方法也很多，如应用凝胶过滤与制备电泳法，或离子交换与凝胶过滤等。
一、盐析法1.取x ml血清加x ml生理盐水，于搅拌下逐滴加入2x ml饱和硫酸铵，硫酸铵的终饱和度为50%。
4℃，3h以上，使其充分沉淀。
2.离心（3000rpm）,20min,充上清，以x ml生理盐水溶解沉淀，再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。
置4℃3h以上（此时硫酸铵的饱和度为33%）。
3.重复上述第二步过程1～2次。
末次离心后所得沉淀物为γ-球蛋白，以 pH7.4 PBS溶解至x ml装入透析袋。
4.对PBS充分透析、换液3次，至萘氏试剂测透析外液无黄色，即无NH4+为止。
5.取透析袋内样品少许作适当倍数稀释后，以751型紫外分光光度计测定蛋白含量。
影响盐析的因素很多，如蛋白质的浓度，盐的浓度，饱和度和pH，温度等都可影响盐析的结果，操作时要充分注意。
（1）蛋白质的浓度盐析时，溶液中蛋白质的浓度对沉淀有双重影响，既可影响蛋白质沉淀极限，又可影响蛋白质的共沉作用。
蛋白质浓度愈高，所需盐的饱和度极限愈低，但杂蛋白的共沉作用也随之增加，从而影响蛋白质的纯化。
故常将血清以生理盐水作对倍稀释后再盐析。
（2）离子强度各种蛋白质的沉淀要求不同的离子强度。
例如当硫酸铵饱和度不同，析出的成分就不同，饱和度为50％时，少量白蛋白及大多数拟球蛋白析出；饱和度为33％时γ球蛋白析出。
（3）盐的性质最有效的盐是多电荷阴离子。
（4）PH值一般说来，蛋白质所带净电荷越多，它的溶解度越大。
改变PH改变蛋白质的带电性质，也就改变了蛋白质的溶解度。
（5）温度盐析时温度要求并不严格，一般可在室温下操作。
血清蛋白于25℃时较0℃更易析出。
但对温度敏感的蛋白质，则应于低温下盐析。
（6）蛋白质沉淀后宜在4℃放3小时以上或过夜，以形成较大沉淀而易于分离。
免疫球蛋白IgG的提取-3
免疫球蛋白IgG的提取-3五、蛋白质的盐析法向蛋白质溶液中加入不同浓度的中性盐，可以把不同的蛋白质分别沉淀出来。
这种方法称为蛋白质的盐析。
利用蛋白质的盐析法，可以得到我们所需的不同的免疫球蛋白。
最常用的中性盐包括，硅酸铵、硫酸镁、硫酸钠等，其中以硫酸铵最为常用：（一）、优点1、在水中溶解度大，其饱和溶液含有大量盐；2、在水中的溶解度受温度的影响很小；3、一般不会引起蛋白变性。
（二）、缺点提取的纯度较差，所以只能用它作为粗提。
饱和硫酸铵溶液配法：取760g～800g硫酸铵，放人70～80℃蒸馏水1000mL中，搅拌约20min，室温静置过液，硫酸铵结晶析出，即上清为饱和硫酸铵，再用NH40H调pH为7.0。
六、实验内容（一）稀释血清向血清中加入生理盐水，做1�U1稀释，主要目的，以防蛋白质溶液浓度过稠，引起其它蛋白质共沉，或局部蛋白质变性。
（二）用50%饱和度硫酸铵提取免疫球蛋白将用生理盐水按l�U1稀释的动物血清置于三角烧瓶或烧杯中，在电磁搅拌器不断搅拌下，逐滴加入与稀释的蛋白液等量的饱和硫酸铵（血清1体积+生理水1体积+饱和硫酸铵2体积），搅拌的目的是为了防止局部硫酸铵浓度过高。
搅拌后，室温放置0.5～1h，或置4℃冰箱过夜，次日取出，以每分钟4000转离心30min（离心管周围加冰块或冰水），离心后弃上清（内含白蛋白等），沉淀物中即含γ和β球蛋白。
硫酸铵溶液的饱和度是指在整个溶液中所占的百分比，与原蛋白液的浓度无关。
分子量大的蛋白质先沉淀，分子量小的蛋白质后沉淀，球蛋白的分子量20～30万，而白蛋白的分子量只有69000，所以50%饱和度硫酸铵沉淀的是球蛋白，而白蛋白则留在上清液中。
（三）用33%饱和度硫酸铵提取血清中的γ球蛋白当血清中饱和硫酸铵为50%饱和度时，沉淀三次，仍含有大量的α、β球蛋白及极少量的白蛋白，当硫酸铵饱和度由50%减少到33～35%时，沉淀蛋白质中的α、β球蛋白和白蛋白的含量相应逐渐减少，而γ球蛋白的纯度逐渐提高，第三次沉淀物只含有少量的α、β球蛋白及白蛋白。
血清免疫球蛋白IgG提取
此处添加副标题内容免疫球蛋白IgG提取原理；
熟悉血清免疫球蛋白IgG提取操作过程和方法
原理 1
IgG是血清中主要的免疫球 蛋白，占全部抗体含量的70 ％－75％，在临床免疫学检 验技术中常用到的第二抗体 就是通过用纯化人IgG作抗 原免疫动物而来
结果判断
效价可用免疫双扩散试验判断 特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察
1
思考题
2
盐析法提取免疫球蛋白的实验 原理？
盐析法提取免疫球蛋白时，主 要的影响因素有哪些？
注意事项
蛋白质的浓度、盐的浓度、PH值、 温度对盐析的效果有影响
饱和硫酸铵溶液的滴加方式
盐析后放置时间、离心操作的速度、 时间
透析袋的使用
01 方法评价
02 硫酸铵水中溶解度高，受温度影响小，不易使蛋白质变性，操 作简单，为盐析中常用的中性盐
硫酸铵中含有氮，会干扰蛋白质的测定，且溶液的缓冲能力差， 故多用于大量蛋白的粗提。若要获得纯化的免疫球蛋白，必须 经过凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析进一步提纯
分在此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。
原理
02
材料
样本 正常人血清
试剂
○ 生理盐水、饱和硫酸铵溶液、 ○ 透析缓冲液
主要器材 离心机 冰箱 透析 袋 紫外分光光度计等
操作步骤
1.25ML血清＋1.25ML生理盐水 滴加饱和硫酸铵溶液2.5ML
室温静置30min, 离心4000rpm,10min
弃去上清液（含清蛋白）
沉淀溶于生理盐水,使体积达1.25ML 滴加饱和硫酸铵溶液0.625ML
室温静置30min,
重
离心4000rpm,10min
猪血清免疫球蛋白的提取纯化
血清免疫球蛋白的提取纯化
一、试剂
饱和硫酸铵pH 7.1
纯水（电阻率>106Ω）经121℃15min灭菌
0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PB）pH 7.2
二、方法与步骤
1. 血清10ml经10000 rpm离心10min 去除沉淀，上清加10ml纯水2倍比稀释。
2. 20%饱和硫酸铵（SAS）沉淀：向20ml血清稀释液内缓慢滴加冰冷的硫酸铵5ml，
边滴加边混匀，则液体的硫酸铵终浓度为20%饱和度。
室温静置2小时。
3. 4000rpm 离心10min ，去除沉淀，上清滴加SAS 3.57ml ——则SAS终浓度30%饱
和度。
4℃静置过夜。
4. 5000rpm 离心10min ，分离沉淀和上清。
沉淀重悬于4ml p.w 成4.5ml溶液。
在磁
力搅拌的条件下滴加SAS 1.9ml 至终浓度30%饱和度。
继续磁力搅拌30min（压加冰杯冷却）。
4℃反应2hrs。
4000rpm离心10min，沉淀重悬于4ml p.w 成4.5ml溶液，滴加SAS 3ml 至终浓度40%饱和度，4℃保存备用。
三、硫酸铵饱和度的计算
y——表示滴加饱和硫酸铵的毫升数（ml）
Ｂ——表示要求达到的硫酸铵饱和度
A ——表示原溶液的硫酸铵饱和度
V ——表示原溶液的体积（ml）。
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定-2
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定-2二、组织样品在生化实验中，经常利用离体组织研究各种物质代谢途径和酶系的作用。
或者从组织中分离、纯化核酸、酶以及某些有意义的代谢物质进行研究。
但是，在生物组织中，因含有大量的催化活性物质，离体组织的采集必需在冰冷条件下进行，并日需尽快完成测定。
否则其所含物质的量和生物活性都将发生变化。
一般采用断头法处死动物，放出血液，立即取出所需脏器或组织，除去脂肪和结缔组织，用冰冷生理盐水洗去血液，再用滤纸吸干，称重后，按试验要求制成匀浆或者组织糜。
组织糜：迅速将组织剪碎，用捣碎机绞成糜状，或加入少量砂于乳钵中，研磨至糊状。
组织匀浆：取一定量新鲜组织剪碎，加入适量匀浆制备液，用高速电动匀浆器或者玻璃匀浆器磨碎组织。
由于匀浆器的柞头在高速运转中会产生热量，因此在制备匀浆时，需将匀浆器置于冰水中。
常用的匀浆制备液有生理盐水、缓冲液和0 .25mol/L 的蔗糖液等，可根据实验的要求，加以选择。
组织浸出液：上述组织匀浆液再经过离心分离出的上清液就是组织浸出液。
II 蛋白质的沉淀反应1．实验原理在水溶液中，蛋白质分子表面结合大量的水分子，形成水化膜，同时蛋白质分子本身带有电荷，与溶液的反离子作用，形成双电层，因而每个蛋白质分子可形成一个稳定的胶粒。
整个蛋白质溶液就形成稳定的亲水溶胶体系。
当某些物理化学因素导致蛋白质分子失去水化膜或失去电荷，甚至变性时，它就丧失了稳定因素，以固态形式从溶液中析出，这就是蛋白质的沉淀作用。
蛋白质的沉淀作用分为两类：1）可逆沉淀作用在发生沉淀作用时，虽然蛋白质已经沉淀析出，然而其分子内部结构并没发生明显的改变，仍保持原有的结构和性质。
如除去沉淀因素，蛋白质可重新溶解在原来的溶剂中。
因此，这种沉淀作用称为可逆沉淀作用。
属于此类的有盐析作用，低温下丙酮、乙醇使蛋白质沉淀的作用，以及利用等电点的沉淀。
盐析作用：用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。
在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子的水化膜被剥夺。
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免疫球蛋白的提取方法
根据猪血中含有的各种蛋白质的分子大小、电荷多少、溶解度以及免疫学特征等,从血液中提取免疫球蛋白,常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法等。
免疫球蛋白的提取盐析法盐析法是分离蛋白质的重要方法之一,是利用抗体与杂质之间对盐浓度敏感程度的差异性进行的。
选择一定浓度范围的盐溶液使部分杂质呈“盐析”状态,抗体成分呈“盐溶”溶解状态。
离心去除盐析沉淀状态的杂蛋白,得到的上清液再选择一定浓度范围的盐溶液使抗体成分呈盐析状态,离心得到的沉淀物即为纯化的目标抗体。
目前常用的盐析法有饱和硫酸铵分步盐析法、辛酸沉淀法、氯化铁沉淀法、多聚磷酸盐盐析法等。
饱和硫酸铵分步盐析硫酸铵是盐析法最常用的无机盐,主要原因是它溶解度大,随温度变化小,对蛋白质有保护作用,高浓度时可抑制微生物和蛋白酶的活性,价格也不贵。
免疫球蛋白的饱和硫酸铵分步盐析法操作简单,对设备和操作条件要求不高,便于工业化生产。
其具体步骤为:取一定量血浆,加生理盐水稀释,边搅拌边缓慢加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度20%,4℃静置1h,4000r/min离心10min,弃沉淀,上清液中继续加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度50%,浓氨水调pH值至7.0,4℃静置2h,4000r/min离心20m弃上清,将沉淀溶于生理盐水,超滤除盐浓缩,滤液中无S2- 4为止,即得IgG粗提物。
免疫球蛋白的辛酸沉淀法辛酸沉淀法提取IgG时,对设备和操作条件要求较高,在离心时,转速为10000 r/min,普通离心机达不到要求。
在调节溶液pH值时,要控制得当,pH值稍低或稍高对IgG的得率和纯度都有很大影响,这些都限制了它的广泛应用。
其具体步骤为:取一定量0.1mol调pH值至4.5;室温下边搅拌边缓慢加入辛酸(按辛酸25 μl/mL血清混合液添加),继续搅拌30min 后,10000r/min离心30min,弃沉淀,留上清液,上清液用多层纱布过滤,留滤液,然后将滤液装入透析袋中析48h,每8～10h换一次透析液,最后超滤浓缩即得1gG粗提液。
免疫球蛋白的氯化铁沉淀法氯化铁沉淀法的原理是据蛋白质分子与金属离子反应形成盐复合物的形式和种类的不同,达到分离不同蛋白质的目的。
其具体步为:取一定量的血浆(加抗凝剂),用生理盐水稀释后,边搅拌边缓加入三氯化铁溶液,调pH值至4.5,搅拌混,40℃水浴保温60min后,4000r/min离心15min,弃去沉淀,上清液调pH值至9.0,常温静置2h,离心去沉淀过滤,上清液经超滤浓缩即得IgG粗提。
免疫球蛋白多聚磷酸盐盐析法多聚磷酸盐作为一种食品添加剂,常被添加在肉制品中以提高产品的保水性或者作为絮凝剂在食品加工中使用。
多聚磷酸盐作为沉淀剂具有安全和高效的特点,是解决猪血清IgG大规模分离制备有效途径之一,但目前尚未有深入系统的研究。
其具体步骤为:取一定量的血清加入相应量的多聚磷酸盐溶液,以0.1mol/L盐酸调至所需pH值,在一定温度水浴中保温反应一段时间后,取出8000r/min离心10min,弃沉淀,收集上清液,即为IgG粗提液。
免疫球蛋白的有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法广泛用于生产蛋白质制剂,常用的试剂是丙酮和乙醇等,其中以乙醇最为常用。
目前,国际上常用冷乙醇法有两种,一种是美国等国主要使用的Cohn-Oncley法,另一种是西欧等国主要使用的Kistler和Nitschmann法。
冷乙醇分离法是WHO规程和中国生物制品规程推荐用的方法,不仅分离物质多,可同时分离多种血浆成分,分辨率高,提纯效果好,而
且有抑菌、清除和灭活病毒的作用,但是要需要在低温下操作,一定程度上限制了它在工业化生产中的应用。