初始污染菌 检测讲诉
初始污染菌检查
初始污染菌检查生物学检查初始污染菌检查空气中细菌总数检测方法物体表明和生产人员手细菌总数检测方法初始污染菌检测初始污染菌检测目的:保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。
引用标准: GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。
对一次性使用医疗用品(包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品)生产企业中生产、装配、包装车间(空气中细菌总数检查方法)等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。
检测环境和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。
洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品(10个包装) 方法主要步骤采样初始污染菌检测初始污染菌检测检验方法将每样取5份平行样(取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……) 初始污染菌检测结果计算公式:平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次(或g) ―――――――――――――――――――件次或重量(g) 注意事项: 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。
应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。
产品初始污染菌数限值: 灭菌产品管道类内腔?10cfu/件次，外部?100cfu/件次，非管道类?100cfu/件次，敷料类?100cfu/g;消毒产品?1000cfu/件次或重量(g) 初始污染菌检测细菌计数细菌计数先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏(可辅助菌落计数器)记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数(每个稀释度的5个平板值，相加后除以5)。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书一、引言在日常生活和工业生产中，微生物污染是一个不可忽视的问题。
特别是在食品加工、制药、卫生保健和医疗设施等领域，微生物污染可能对人体健康造成严重影响。
因此，对于这些领域中的设施和设备进行初始污染菌检测至关重要。
本指导书旨在提供一份详细的指南，以帮助进行有效的初始污染菌检测。
二、定义1. 初始污染菌：指在设施和设备投入使用之前，存在于环境中的微生物菌群，可能对人体健康产生影响的细菌、真菌、病毒等。
2. 初始污染菌检测：是通过采集、分离和鉴定设施和设备表面的微生物来评估其是否受到初始污染的检测方法。
三、初始污染菌检测的步骤1. 准备工作在进行初始污染菌检测之前，需要做好以下准备工作：- 确定检测的目标区域：根据需要，确定需要检测的设施和设备区域。
- 收集必要的工具和材料：包括培养基、采样棉签、橡胶手套、消毒剂等。
- 清洁检测区域：确保待检测的区域清洁整齐，以减少外界污染的干扰。
2. 采样- 选择合适的采样方法：根据不同的设施和设备，选择合适的采样方法，常见的包括印迹法、刷子法、划线法等。
- 采样过程中的注意事项：确保采样过程中的卫生条件，佩戴橡胶手套，并在每个采样点上更换新的采样棉签，以避免交叉污染。
- 采样点的选择：根据设施和设备的特点，选择具有代表性的采样点，如接触频繁的表面、接口和难以清洁的区域。
3. 分离与鉴定- 样品处理：将采集到的样品，按照合适的程序进行处理，包括加入适量的培养基，进行可行菌总数的分析。
- 培养与鉴定：将样品在适当的温度和湿度条件下进行培养，待细菌或真菌生长形成菌落后，再通过各种常见鉴定方法（如形态学观察、生化试验、分子生物学技术等）来鉴定菌落的种类。
- 数据记录与分析：将分离鉴定得到的数据记录下来，进行统计和分析，了解初始污染的菌群组成和水平。
四、初始污染菌检测结果的评估与应对1. 结果评估根据初始污染菌检测结果，可以对设施和设备的初始污染情况进行评估。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书
一、引言
污染菌是指存在于环境中、能够引起食品、水、土壤等特定物质污染的微生物菌种。
这些污染菌对人类健康和环境质量构成潜在威胁。
为了保障公众健康和环境平安，进行初始污染菌检测是必要的。
二、目的
本指导书的目的是提供一个简明的初始污染菌检测流程，以确保检测结果的准确性和可靠性。
通过采用合理的检测方法和技术，有助于及早发现并控制可能存在的污染源，以保护公众的健康和环境的可持续发展。
三、检测方法
1. 样品采集
a. 样品采集前，请确保操作者严格遵守个人卫生要求，包括洗手、穿戴一次性手套等，并准备好干净的采样容器。
b. 根据具体的检测目的和样品类型，选择合适的采集方法。
例如，对于食品样品，可以使用无菌勺子、无菌容器等进行采集。
c. 采集样品时，应避免污染，尽量避免触摸容器内壁，同时避免与外界环境接触。
2. 样品处理和制备
a. 样品采集后，尽快将样品送至实验室进行处理和制备。
b. 根据具体的检测要求，进行样品的预处理，如去除杂质、负离子等。
c. 样品制备过程中，请注意避免交叉污染，使用一次性无菌工具、器皿等进行操作。
3. 检测方法选择
a. 根据检测目标，选择适当的检测方法。
常见的初始污染菌检测方法包括培养法、荧光定量PCR法等。
b. 对于食品等需要进行快速检测的样品，可以选择快速检测方法，如基于抗原-抗体反应原理的快速检测方法等。
赵月琳初始污染检测
口罩 普通级 消毒级
— ≤10 000
≤200 ≤20 ≤200 ≤20
不得检出 不得检出 不得检出 不得检出
不得检出 不得检出 不得检出 不得检出
尿布等 普通级 消毒级
≤10 000
注：致病性化脓菌指绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌与溶血性链球菌。
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初始污染菌的检测
•方法主要步骤：
采样
供试液制备
培养
菌落计数
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初始污染菌检测
菌落计数
•菌落计数基本规则
3、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌
落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30 以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4、如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最 接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。 5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平 均菌落数小于1时，应报告菌数为最低稀释级数据 cfu/g或ml 注：菌落计数规则参照GB7918.2-87
初始污染菌检测
1
初始污染菌检测
一．检验依据 二．环境要求 三．试验器具 四．初始菌检测目的 五．初始污染菌检测步骤 六．结果判断
2
初始污染菌检测
检验依据 GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 GB 15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准
引用标准： • GB7918.2 化妆品微生物标准检验方法 细菌总数测定 • 2010年版《中国药典》无菌检查法 • YY 0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范
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初始污染菌检测
抽样数量
每批产品随机抽取12件样品；1/4用于 检测， 1/4用于留样，1/2用于复检，从每 个包装中取样，准确称取10g±1g样品；剪 碎后加入200mL无菌生理盐水中，充分混匀， 得到供试品样液。 • 液体产品用原液直接做样液。
初始污染菌检验规程知识讲解
初始污染菌检验规程初始污染菌检验规程1. 目的检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。
2. 适用范围适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。
3.职责由质检部负责执行实施。
4.技术要求产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g5.引用标准GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典（2015版）GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法6.试剂和培养基6.1洗脱液 0.9%Nacl称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。
6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为7.3±0.2，灭菌分装。
6.3玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基31.5 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为6.0±0.2，灭菌分装。
7.仪器设备锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球8.操作方法8.1样品处理8.1.1无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。
8.1.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。
8.2接种8.2.1需厌氧菌取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。
取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
8.2.1霉菌取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。
取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
8.3培养需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d9.观察计数达到培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，记录每个平皿菌落数10.结果计算与报告10.1公式污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重10.2菌落计数基本规则选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
《初始污染菌检测》课件
新技术应用
自动化技术
利用机器人和自动化设备进行样 品处理和检测，提高检测效率和
准确性。
生物技术
利用基因组学、蛋白质组学等技术 手段，对初始污染菌进行更精确的 检测和鉴定。
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术提高检测 灵敏度和特异性，实现痕量污染物 的快速检测。
检测标准与规范
制定统一的检测标准
建立全球通用的初始污染菌检测标准，确保检测结果的准确性和 可比性。
新。
分享最佳实践
分享各国在初始污染菌检测方面 的最佳实践和经验，提高全球检
测水平。
感谢您的观看
THANKS
提供食品卫生教育和培训，以提 高员工的食品卫生意识和技能。
医疗和制药行业的管理
制定严格的药品和医疗设备管 理程序，确保其安全性和有效 性。
定期检查药品和医疗设备的存 储和使用情况，以确保其符合 法规和标准。
提供药品和医疗设备管理和使 用的培训和教育，以提高员工 的意识和技能。
05
初始污染菌检测的未来发 展
02
初始污染菌的来源与种类
空气传播
空气中的微生物
空气中的细菌、病毒、霉菌等微生物是初始污染菌的来源 之一。这些微生物可随空气流动而传播，污染食品生产环 境。
空气传播的途径
空气传播是初始污染菌的主要传播途径之一，尤其是在食 品加工环境中，由于人员流动、通风设备的使用等，使得 空气中的微生物容易附着在食品上。
食品和水中的细菌、病毒、霉菌等微 生物也是初始污染菌的来源之一。这 些微生物可能来自于原料本身或是在 加工过程中污染。
控制措施
为了降低食品和水源中的初始污染菌 ，食品加工企业应加强原料检验和质 量控制，定期进行水质检测和处理， 加强食品加工过程的卫生管理。
初始污染菌
1、在超净工作台内以无菌方式打样品，将样品剪成1-2cm的碎段，全部 投入到200ml灭菌过的缓冲溶液中，用封口膜密封，充分震荡至少80次样 品，使附着微生物充分洗脱，标记供试液A。
4、将其余平行样品重复1/2/3的操作，制作实验样品2和实验样品3
5、将空白的缓冲溶液经集菌仪过滤，将滤膜取出，菌面朝上贴于琼脂培 养基平板上，做空白对照，标记样品0.
6、将上述制备好的培养基平板放置在生化培养箱内32.5℃，培养5天，进 行菌落计数，空白对照应无菌生长。
实验结果 WORK HARD
所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。
实验的目的
1.通过对样品初始污染菌的检测及时了 解产品的质量情况
2.通过检测了解车间环境，发现异常 及时采取措施进行改善。
实验用仪器及试剂
胰酪大豆胨琼脂培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨
缓冲溶液
天平、平皿、立式灭菌器、酒精灯、超净工作台、锥 形瓶、量筒、放大镜、剪刀、镊子、鼓风干燥箱、集 菌仪、微孔滤膜
✓ 温度 ✓ 湿度 ✓ 风速 ✓ 静压差 ✓ 悬浮粒子 ✓ 沉降菌 ✓ 浮游菌 ✓ 噪声 ✓ 照度Leabharlann 检测工具热球式风速仪
悬浮粒子测试仪
培养皿
照度测试仪
检测环境
隔离系统
无菌实验室
超净工作台
超净工作衣
03PART THREE 生物项检测
检测标准
医疗器械无菌检验标准
GB/T 14233.2 -2005 医用输液、 输血、注射器具检验方法 第2 部分：生物学试验方法
实验前准备工作
01
初始污染菌检测
随着时间的推移，相关法规与标准可能会发生变化。检测机构应关注法规与标准的更新 动态，及时调整自己的检测方法和操作规程。
提高检测效率的建议
优化实验流程
采用自动化设备
加强团队合作
通过合理安排实验流程，减少不必要 使用自动化设备进行初始污染菌检测，
的环节和操作，提高检测效率。例如， 可以大大提高检测效率和准确性。例
培训方式
02
采用理论教学和实践操作相结合的方式，确保采样人员能够熟
练掌握相关技能。
培训考核
03
对完成培训的采样人员进行考核，确保其具备从事初始污染菌
检测工作的能力。
03
检测操作流程
采样
采样点选择
根据检测目的和要求，选择具有代表性的采样点，如食品生产车 间、食品加工设备、食品接触表面等。
采样量控制
在实施过程中，持续监测污染菌 的情况，评估措施的有效性，并 根据需要进行调整和改进。
05
注意事项与建议
保证检测的准确性
选择合适的检测方法
根据不同的污染菌种类和检测目的，选择合适的检测方法， 确保准确性和可靠性。
严格控制实验条件
确保实验室环境、设备、试剂等符合相关标准和规定，避 免交叉污染和误差。
定期校准和验证
对检测设备、仪器进行定期校准和维护，确保其准确性和 可靠性。同时，对检测方法进行验证，确保其符合预期的 检测要求。
遵守相关法规与标准
熟悉相关法规与标准
在进行初始污染菌检测时，应熟悉并遵守国家或地区的相关法规与标准，确保检测合法 有效。
遵循操作规程
按照规定的操作规程进行检测，确保数据的准确性和可靠性，同时避免违反相关法规与 标准。
合理安排样品的处理、培养、观察等 如，自动化细菌分离、鉴定设备等。
初始污染菌检验操作规程
初始污染菌检验操作规程方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。
每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。
4.6.3结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。
若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。
初始污染菌检验操作规程目的：本规程的目的是为了测定样品细菌总数，以判断样品细菌污染的程度，并评估生产单位的卫生状况，为下一步的灭菌提供参考依据。
适用范围：本规程适用于所有需要消毒灭菌前的产品和洁净车间。
作业条件：1.无菌检测需要在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。
2.超净台及工作台面必须进行洁净度验证。
作业方法与步骤：1.制作营养琼脂培养基，并按要求培养16-18小时后，检查无菌生长方可使用。
2.进行无菌室洁净度验证。
3.进行产品采集与样品处理，制备供试液。
4.进行供试液的10倍递减稀释。
5.进行接种检验。
6.进行培养。
结果与判定：1.计数方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。
每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。
2.结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。
若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。
菌落计数是食品微生物学检验中常用的方法之一。
在进行菌落计数时，需要注意以下基本规则。
首先，不宜采用菌落层片状生长的平板。
其次，计数符合要求的平板上的菌落，按照公式计算结果。
具体而言，菌数除以每件次（或g）的重量，等于件次或重量（g）。
选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
如果只有一个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数进行报告。
初始污染菌检查课件
阳性结果
在培养基上观察到菌落生长，表 明样品中存在污染菌。根据菌落 的形态、颜色、大小等特征，可
初步判断污染菌的种类。
可疑结果
培养基上观察到的菌落特征不明 显或难以辨认，需要进行进一步
的鉴定。
结果解释与报告
解释污染菌的来源
根据检测结果，分析污染菌可能来自生产环境、操作人员、 原材料等环节，提出相应的改进措施。
在实验过程中，注意个人防护和实验 室安全，避免交叉感染和意外事故的 发生。
实验结束后，按照实验室规定正确处 理废物，保持实验室的清洁卫生。
实验误差控制
严格控制实验条件和操作过程，减小 误差对实验结果的影响，确保实验结 果的准确性和可靠性。
01
初始污染菌检查的 结果分析
结果判读
阴性结果
在培养基上未观察到菌落生长， 表明样品中未检测到污染菌。
01
初始污染菌检查的 实验操作
实验前的准备
实验器材
准备实验所需的所有器材 ，如培养皿、接种环、酒 精灯等，确保其清洁和无 菌。
实验试剂
根据实验要求准备适量的 培养基、生理盐水等试剂 ，确保其质量和有效性。
实验样品
确保样品来源可靠，采集 过程规范，避免交叉污染 和外界污染。
实验操作流程
实验操作步骤
自动化检测技术
自动化检测技术将进一步提高初始污染菌检查的 效率和准确性，减少人为误差。
生物传感器技术
生物传感器技术可用于快速、准确地检测初始污 染菌，具有广阔的应用前景。
应用领域的拓展
食品安全领域
初始污染菌检查在食品安全领域的应用将进一步拓展，涉及食品 生产、加工、储存、运输等各个环节。
医疗领域
初始污染菌检查在医疗领域的应用将更加广泛，涉及医疗器械、药 品、手术室等环境的消毒和灭菌。
初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证背景在生命科学领域，微生物污染在实验中是一个非常普遍的问题。
不仅会影响实验结果的准确性和可靠性，还会影响重要的生产过程。
因此，为了保证实验的成功，必须开发出一种可靠的方法来验证实验室中的物品是否存在微生物污染。
本文将介绍一种简单的方法来验证初始污染菌。
必备材料•无菌纯水•Tryptic Soy Broth（TSB）•青霉素和链霉素组合液•离心管•移液器•微量移液器步骤步骤一：制备TSB培养基取适量的TSB培养基，按照说明书的指示加入适量的无菌纯水，在无菌条件下进行混合并调整pH值至7.2-7.4。
步骤二：检查无菌水和青霉素和链霉素组合液的无菌性取适量的无菌纯水和青霉素和链霉素组合液，并在15ml的离心管中进行热处理。
在121℃下进行30分钟烘烤。
热处理之后，检查管子是否依然无菌。
步骤三：制备初始污染菌样品选取一种已知的细菌菌株，并放入无菌纯水的250ml Erlenmeyer三角瓶中，密封好瓶口，并在温育箱中以37℃的恒温培养24小时，制备出初始污染菌样品。
步骤四：制备验证菌液取一定量的TSB培养基，加入青霉素和链霉素组合液（最终浓度为10ug/ml），并进行热处理，待培养基冷却后，取一定量的初始污染菌样品用微量移液器加入到青霉素和链霉素培养基中，制备出验证菌液。
步骤五：分配验证菌液将验证菌液分别加入到无菌纯水的离心管中，接种量为1ml、0.1ml、0.01ml、0.001ml、0.0001ml等不同容量，序列号编好，每种容量配制三个重复。
这些离心管可在30℃下进行24小时的培养，检查有无微生物的生长。
步骤六：观察结果观察离心管培养基中有无微生物的生长。
如果所有序列号中均无微生物的生长，即可认为实验室物品无微生物污染，反之则有微生物污染。
初始污染菌实验方法验证可以有效地检查实验室物品中的微生物污染情况。
它易于操作，实验过程简单明了，并且针对不同容量的接种进行了细致的设计，以检查有无微生物生长。
初始污染菌检查PPT演示文稿
产品初始污染菌数限值：
灭菌产品管道类内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次，非管道类≤100cfu/件次，敷料类≤100cfu/g；消毒产品≤1000cfu/件次或重量（g）
初始污染菌检测
供试液制备
推荐的制备方法
样 品 制 备
供试液制备
梯度稀释
加 样
用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。作为1：10供试液。
细菌计数
先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏（可辅助菌落计数器）记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数（每个稀释度的5个平板值，相加后除以5）。 若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。
菌落特征
⑴ 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为红色） ⑵ 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。 ⑶ 大小差异很大。
平
皿
号
细
菌
数
平行
行间
1：10
1:100
阴性 对照
37℃48h菌落计数
37℃48h菌落计数
初始污染菌检测
梯度稀释
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
供试液
9mlNacl
9mlNacl
1:10
1:100
1:1000
检验方法
将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……）
初始污染菌检测讲义课件
衰亡期：稳定期后如再继续培养 细菌死亡率逐渐增加，以 致死亡数大大超过新生数，群 体中活菌数目急剧下降，出现 了“负生长”，此阶段叫衰亡期
稳定期：又称恒定期或最高生长期。处于稳定期 的微生物，新增殖的细胞数与老细胞的 死亡数几乎相等，整个培养物中二者处 于动态平衡，此时生长速度又逐渐趋向 零。
微生物操作技术－无菌环境是前提！ 无菌技术概念
真核细胞型 微生物
病毒 亚病毒因子
细菌 放线菌 衣原体 支原体等
真菌
原生生物
细菌形态特征
• 细菌个体形态
细菌是一类细胞细而短（细胞直径约0.5μm,0.5-5μm）、结 构简单、细胞壁坚韧以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生 物，分布广泛。 形态图
•细菌菌落形态
单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的 一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。细 菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀 以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征 因种而异。 可作为鉴定细菌种的依据。 菌落图
无菌技术
•分离技术
•划线分离法
组段间接种环的灭菌、冷却！
分段划线法
无菌技术
•金黄色葡萄球菌的保藏
增菌性培养 一般为冻干粉剂，安瓿 瓶密封包装。
选择性培养基分离菌种。 选择性培养基分离 菌种。
斜面接种、培养
低温保藏
无菌技术
•无菌器材
实验器材 灭菌器材 消毒器材
凡是检验中使用的器材，能灭菌处 理的，必须灭菌处理。如：玻璃器 皿、吸管、培养基、稀释剂、无菌 衣、口罩等，在使用前必须经过适 当方法灭菌，并在较洁净的环境中 保存备用。
凡检验用器材无法灭菌处理的，使 用前必须经消毒处理。如：无菌室 的桌凳、天平、工作台以及工作人 员的手等。
初始污染菌检测PPT课件
2020/3/24
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酵母菌形态特征
大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚， 菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和 边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色， 个别为黑色。
啤酒酵母的菌落
2020/3/24
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微生物群体生长规律
•规律的描述
将少量单细胞纯培养接种到一恒定容积的新鲜液体培养基 中，在适宜的条件下培养，定时取样测定其细菌含量，可以看 到以下现象：开始有一短暂时间，细菌数量并不增加，随之细 菌数目增加很快，既而细菌数又趋稳定，最后逐渐下降。如果 以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速度为纵坐标 作图，可以得到一条曲线，称为繁殖曲线，通常又称为生长曲 线。生长曲线代表了细菌在新的适宜的环境中生长繁殖直至衰 老死亡全过程的动态变化。根据细菌生长繁殖速率的不同，可 将生长曲线大致分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶 段。
•细菌菌落形态
单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的 一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。细 菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀 以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征 因种而异。 可作为鉴定细菌种的依据。 菌落图
2020/3/24
•酵母菌个体形态
酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵 圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要 大得多，一般为1~5微米′5~30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。酵 母菌具有典型的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、 液泡、线粒体等，有的还具有微体。
2020/3/24
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微生物的分类 微生物
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梯度稀释
1ml
1ml
1:10 供试液
1ml
1ml
1:100 9mlNacl
1:1000 9mlNacl
1ml 1ml
1ml 1ml
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转至培养基
膜过滤法—适用于微生物浓度较低的悬 液
平板倾注—适用于微生物浓度较高的悬 液
平板涂布—适用于微生物浓度较高的悬 液
螺旋涂布
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菌落特征： ⑴ 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、
淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四 氮唑试剂)，菌落为红色） ⑵ 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起 或扁平。 ⑶ 大小差异很大。
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计数方法的验证—回收率
验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计 算各试验菌每次试验的回收率。
1）如只有1个稀释级平均菌落数符合上述规定，则将稀释级的菌落数乘以 稀 释倍数报告。
2）如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级 菌落数的比值。 高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数 比值=———————————————————— 低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数 当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告；当比值>2但不 超过5时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；当比值大于5， 或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查 明原因再进行检查，必要时，应进行方法的重新验证。
初始污染菌检测
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参考标准
《中华人民共和国药典》2005版 附录 微生物限度检 查法
ISO 11737-1:2006 Sterilization of medical devices – Microbiological methods – Part 1: Determination of a population of microorganisms on products
用？ml 氯化钠-蛋白胨缓冲液浸提？小时 （包括最内层包装的内壁）
-所需供试液的用量和浸提时间需验证 处理方法：振动、冲洗、擦拭法、袋蠕
动、超声、涡旋混合、搅拌
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举例—振动
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小型医疗器械可以投 入无菌的自封袋中， 加入缓冲液充分振动。
另外，用缓冲液冲洗 内包装袋的内壁。并 与产品缓冲液相混。
9ห้องสมุดไป่ตู้
薄膜过滤法
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培养
药典中的培养条件： 细菌 30-35℃ 48h 霉菌、酵母菌 23-28 ℃ 72h 必要时，可适当延长培养时间至5-7天
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菌落计数
计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接 以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细 观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。
每张滤膜上的菌落数应不超过100个 点计滤膜上的菌落，例如：对整件样品
以？cfu/件报告 若滤膜上无菌落生长，以“＜1cfu/单位”
报告菌落数
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A 试验组
供试液+试验菌（50~100cfu）
B 菌液组
试验菌（50~100cfu）
C 供试品对照组
D缓冲液对照组 缓冲液+试验菌（50~100cfu）
(A-C)/B>70%
D/B>70%
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菌落计数报告规则—平板法
选取细菌、酵母菌平均菌落数在30～300之间、霉菌平均菌落数在 30~100之间的稀释级作为报告菌落数的依据。
3）如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍 数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以 稀释倍数报告。
4）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长， 但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数
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菌落计数报告规则—薄膜过滤法
GB/T 19973.1 /ISO 11737-1:1995 医疗器械的灭菌 微 生物方法 第一部分：产品上微生物总数的估计
GB 15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准
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检测环境及检验量
应在环境洁净度10000级下的局部洁净度 100级的单向空气区域内进行
一般供试品的检验量为3~10个独立包装 的同批次供试品。（见ISO 117371:2006 A8.1）
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实验材料及设备
营养琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨 缓冲液
滤器、微孔滤膜（孔径0.45微米，直径 50mm）、量筒、剪刀、镊子、培养皿
过滤装置、电子天平、压力蒸汽灭菌器、 生化培养箱等
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主要步骤
采样
供试液制备
培养
菌落计数
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供试液的制备