土壤微生物分离纯化及测数.

土壤微生物分离纯化及测数

作者：土壤微生物|分离纯化及测数来源：生物秀时间：2008-5-28

一、实验目的要求

1 了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。

2 学习并掌握微生物分离纯化技术方法。

3 学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。

二、基本原理

土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。

三、实验步骤

（一）土壤样品采集

在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样，若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。

（二）好气性细菌的分离纯化及测数

1.制备土样稀释液

吹吸三次混匀

无菌操作

另留一管不稀释留作对照（CK）

2.培养基的准备

融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK（每个稀释度要两个平行皿，对照要两个平行皿）。

3.倾注法接种

先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中（每个平皿接入1ml），再向每个平皿倾注约15 ml的牛肉膏蛋白胨培养基（48℃）待冷凝，混合均匀。

4.保温培养

将已经接种的平皿静置10min后，放入温箱倒置培养3--5日（30℃），观察结果。

5.分区划线法纯化

平板划线分离，其划线方法有以下两种：

6.计数

要求30~300之间计数。CK除外。

每克湿土样细菌数量

＝平均菌落数×稀释倍数

土壤样品水分系数

＝1∕（1—样品水分百分数）

土壤样品细菌数量（个∕克干土）

＝每克湿土样细菌数量×样品水分系数

四实验报告及思考题

1记录计数结果并计算土壤样品含菌数。

2平板菌落计数的结果是土壤样品实际含菌数？

3 比较平板菌落计数与显微镜直接计数的异同，它们各有何优缺点