7 实验6 植物NR活性的测定(活体法)
植物活力素检测标准
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TTC法利用氯化三苯基四氮唑检测根系还原能力；α-萘胺氧化法则评估过氧化物酶活性反映活力。
②样品准备：采集代表性植物组织（如根系），迅速处理以保持其生物活性，清洗干净，按需切成小段或匀浆。
③试剂配制：根据所选方法准备相应试剂，如TTC溶液或α-萘胺溶液，确保浓度准确。
④反应处理：将样品与试剂充分混合，在适宜条件下（如恒温振荡器中）进行一定时间的反应，使活细胞内的脱氢酶催化形成有色产物。
⑤测量与计算：反应后，通过分光光度计或其他适当仪器测定产物的吸光度或颜色强度，与标准曲线对比，计算活力指数。
⑥数据分析：记录并分析数据，比较不同样本或处理组间活力差异，评估植物活力素的效果。
⑦结论得出：根据检测结果判断植物活力素的作用效果，为农业生产或科研提供参考。
注意，实际操作应严格遵循具体实验操作规程，确保检测结果的准确性和可重复性。
05NR活性测定
磺胺 （2 ml）
2
2 2 2 2 22 2
各2
-萘胺（2 ml） 2
2 2 2 2 22 2
各2
注意：磺胺比色法很灵敏，显色速度易受温度，酸度等因 素的影响，故要严格控制实验条件：标准液与样品反应液 同时反应、比色）
5. 用比色法在520 nm下读取光密度值。
NaNO2 (µg/ml) 光密度值
亚硝酸还原 叶绿体 前质体
硝酸还原酶是诱导酶，且受光和光合作用所促进。
一、 实验原理
硝酸还原酶（NR）是植物氮素代谢作用中的关键 性的酶 ，该酶为诱导酶。
NO3- + NADH + H+ NR NO2- + NAD+ + H2O
产生的NO2-很快从植物组织渗透到外界溶液中， 故测定反应液中NO2-含量的增加，可计算该酶活 性的大小。
X（µg）
样品中酶活性 ＝
V2（ml） × V1（ml）
（ NO2- µ g ·g-1 ·h-1 ） 样品鲜重（g）× 酶反应时间（h）
公式中：X—从标准曲线查出反应液中亚硝态氮总量（µg ）
V1—提取酶时加入的缓冲液体积（ml）10 ml V2—显色反应时加入的酶液体积（ml）1 ml 样品鲜重 0.5 g 酶反应时间 0.5 h
3. 配制下列标准梯度NaNO2溶液各1 ml于试管中
0、0.5、1、2、3、4、5、10 μg/ml （母液10 μg/ml）
NaNO2（μg/ml）
10 μg/ml NaNO2 (ml)
蒸馏水（ml）
0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 10.0 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1.0 1 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.0
植物生理学实验报告植物NR活力测定——体内法(活体法)
实验报告课程名称：植物生理学及实验实验类型：探索、综合或验证实验项目名称：植物NR活力测定——体内法（活体法）一、实验目的和要求掌握体内法测定植物组织中的硝酸还原酶原理和方法，明确诱导酶含义。
二、实验内容和原理实验原理：硝酸还原酶是植物氮元素代谢过程中的关键酶，与作物的吸收和利用氮元素有关，他们作用于硝酸根，使之还原为亚硝酸根：NRNO3-+NADH++H+ NO2-+NAD++H2O测定原理：根产生的亚硝酸根可以从组织内渗入到外界溶液中，从而测定溶液中亚硝酸根的含量的增加。
磺胺先与亚硝酸钠形成重氮盐，再与α-奈氨偶联形成紫色物质。
反应液的酸度和温度都会对反应产生影响。
三、主要仪器设备1.材料：在20℃蒸馏水培养一周小麦苗，实验前一天分两组，一组加KNO3，一组加0.5 mM CaCl2，在白天置光照下处理。
2.试剂：磺胺试剂、萘基乙烯二胺溶液，酶促反应液（PBs+KNO3）3.器材：分光光度计、注射器、试管、天平、烧杯、移液管、恒温箱四、操作方法与实验步骤1. 事先制作好NO 2-标准曲线。
2. 在20℃蒸馏水培养一周小麦苗，实验前一天分两组，一组加KNO 3，一组加0.5 mM CaCl 2，在白天置光照下处理。
3. 取各组苗地上部约0.5 g 左右,切成合适长度(1cm 左右)，放入50mL 注射器中。
4. 加酶促反应液10ml,抽气直到材料完全下沉（一只手戴上手套，用戴手套的食指封住注射器头，另一只手反复推拉抽气减压，将叶片中的空气赶尽，直到材料完全下沉）。
5. 置恒温箱30℃ 20min ，取出后将反应液注射入烧杯中。
6. 取4ml 反应过的液体，加磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml,室温放置5min 后测540 nm OD 。
五、实验数据记录和处理1. NO 2-标准曲线2.六、实验结果与分析NO 2-标准曲线为： y = 0.0062x + 0.0283 (R 2 =0.9962)对照组NO 2-（nmol ）= （0.115-0.0283）/0.0062 = 13.98处理组NO 2-（nmol ）= （0.280-0.0283）/0.0062 = 40.60NR 活力（NO 2-生成nmol/（鲜重g.h ））= NO 2-（nmol ）×3×（10/4） /实际重量g对照组NR 活力 = 13.98 * 3 * 2.5 /0.52 = 201.63（nmol/g.h ） 取苗上部重量 OD540值 对照组 0.52g 0.115 处理组 0.51g 0.280处理组NR活力 = 40.60 * 3 * 2.5 /0.51 = 597.06（nmol/g.h）七、讨论、心得1.比较KNO3诱导和加NH4Cl的NR活力大小，诱导时如用NaNO3替代KNO3结果会如何，为什么？如不进行光照，结果会怎么样，为什么？A.如用NaNO3替代KNO3，那么光合呼吸作用减弱，酶的活力降低，从而影响硝酸根转化为亚硝酸根，实验中可能两组紫红色的颜色差别很小，使测得的还原酶活力偏低。
植物生理学 实验3_NR活性测定
一 实验目的
理解硝酸还原酶的特性； 掌握硝酸还原酶活性测定方法。
实验原理
NR是诱导酶，在取样前一天用50mM KNO3- 或 NaNO3-加到培养苗的水中以诱导硝酸还原酶的产生。
NO2-产生
NO3- +NADH+ + H+→ NO2- +NAD++H2O
外界溶液中的NO3-渗入植物组织后，经硝酸还原酶作 用，所产生的NO2-可以从组织内渗透到外界溶液中；
测定反应溶液中NO2- 含量的增加，即表现该酶活性的 大小。
在一定条件下，NO2-的生成量与硝酸还原酶活性呈正相关。 NO2-含量的测定用磺胺比色法。在酸性溶液中磺胺与NO2形成重氮盐，再与α-萘胺偶联形成红色的偶氮化合物，可用 分光光度计在540nm下比色测定。
NO2-含量测定
NH2
NO2-含量测定
当磺胺与α-萘胺均过量时，所生成的红色深浅与NO2-含 量成直线关系。 NO2-含量标准曲线： [ NO2- ] （µ Mol / ml）= 0.0026＋0.359OD540
硝酸还原酶活性测定
NR酶活性（ NO2- µMol/h•gfw）= [ NO2- ] ×10ml/1ml÷（鲜重g×0.5h）
6
五
结果记录、计算
[ NO2- ] （µmol/ml）= 0.0026＋0.359OD540 酶活性（ NO2- µmol/h•gfw）= [ NO2- ] ×10ml/1ml÷（鲜重g×时间h）
表
处 理 A液 吸光度
硝酸还原酶的活性
B液 吸光度 ODB-ODA NR活性
H2O KNO3
六 思考题
实验二 问题分析
植物组织内过氧化物酶(POD)活性的测定
实验七植物组织内过氧化物酶(POD)活性的测定
一、实验目的
掌握植物组织内过氧化物酶活性测定的原理和方法。
二、实验原理
过氧化物酶广泛存在于植物的各个组织器官中。
在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶可以使愈创木酚氧化，产生茶褐色物质，在470nm处有最大吸收峰，可根据单位时间内A470的变化值，计算POD活性大小。
三、实验材料与设备
1．实验设备与仪器
电子天平、冰冻高速离心机、可见光分光光度计、电动玻璃匀浆剂等。
2．实验材料与试剂
20mM KH2PO4，
100mM PBS：取0.2M Na2HPO4，87.7ml与0.2MNaH2PO4，12.3ml混合。
反应液：取100mM PBS 50ml，加入愈创木酚28μl，搅拌溶解，待溶液冷却后加入30%的H2O219μl，混合均匀保存于冰箱中备用。
四、实验步骤
1．酶液制备
取1.0g植物叶片剪碎，置入玻璃匀浆杯中，加入预冷的20mM KH2PO45ml进行冰浴研磨提取。
匀浆液低温离心8500rpm 15min，上清液为酶粗提液，定容到50ml供测定。
2．酶活性测定
取光程为1cm的玻璃比色杯2只，一只加入反应液3ml，20mMKH2PO41ml作为调零管。
另一只加入反应液3ml，提取的酶液1ml，立即开始计时，在470nm波长处进行比色，开始记录数据，然后每隔一分钟记录一次吸光度值，共测3min。
3．计算
以每分钟A470的化变值0.01为一个相对酶活单位，计算植物组织内过氧化物酶酶活力的大小（单位：U/g鲜重）。
7 实验6 植物NR活性的测定(活体法)
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
硝酸还原酶是一种诱导酶，诱导物是NO3- ， 光照可促进硝酸盐的还原过程。
学 大 诱导酶：又称适应酶，指植物体内本来不含有， 林 农 但在特定外来物质的诱导下可以生成的酶。如硝 建 福 学 大 酸还原酶可为NO3-所诱导。 林 农 建 例如：水稻幼苗本无硝酸还原酶，但如果培 福 养在硝酸盐溶液中，水稻体内就会诱导生成硝酸
学 大 林 农 建 福
学 大 林 农 建 福
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
五、试剂配制：
1、0.2mol/L 硝酸钾 学 大 2、0.1mol/L 的磷酸缓冲液，pH=7.5 林 农 A 液：0.2mol/L NaH PO 2 4 建 福 学 B 液：0.2mol/L Na HPO 2 4 大 林 3、1%磺胺 农 建 福 4、0.02%萘基乙烯胺 5、亚硝酸钠标准液 6、30%三氯乙酸
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
白天和夜晚植物还原硝酸盐的速度是否 相同？为什么？
植物对硝酸盐的还原速度白天显著快于夜晚。这 学 大 是因为白天光合作用产生的还原力及丙糖能促进硝酸 林
农 建 盐的还原。 福
学 大 林 农 建 福
还有为什么测定硝酸还原酶的材料要 白天在强光下，大量光合产物运至细胞质中， 参与糖酵解反应，形成更多的NADH，加速硝酸盐的 进行一段光合作用后取样测定？ 还原。
学 大 叶片要用打孔器取样(或用剪刀剪成大小一致的小块)。 林 农 建 无机磷对NR活性有促进作用，因此常用磷酸缓冲液。 福 学 大 活体法酶促反应在暗条件下进行，以防止亚硝酸盐还原为氨。 林 农 亚硝酸的磺胺比色法比较灵敏，显色速度受温度和酸度等因 建 福 素的影响.因此标准液与样品的测定应在相同条件下进行，
植物体内硝酸还原酶活力的测定
实验 6 植物体内硝酸还原酶活力的测定硝酸还原酶（ nitrate reductase,NR ），是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐（ NO 3 ˉ +NADH+H ＋→ NO 2 ˉ +NAD ＋ +H 2 O ）。
产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α - 萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
其反应如下：生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般单位鲜重以 N μg ／（ g · h ）为单位。
NR 的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好。
Ⅰ离体法二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水稻、小麦叶片、幼穗等。
（二）试剂1 ．亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯 NaNO2 0.9857 g 溶于无离子水后定容至 1000 mL ，然后再吸取 5 mL 定容至 1000 mL ，即为含亚硝态氮的 1 μg ／ mL 的标准液。
2 ． 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸缓冲液： Na 2 HPO 4 · 12H 2 O 30.0905 g 与 NaH 2 PO 4 · 2H2 O 2.4965 g 加无离子水溶解后定容至 1000 mL 。
3 ． 1 ％磺胺溶液： 1.0 g 磺胺溶于 100 mL 3mol/L HCl 中（ 25 mL 浓盐酸加水定容至 100 mL 即为 3 mol/L HCl ）。
4 ． 0.02 ％萘基乙烯胺溶液： 0.0200 g 萘基乙烯胺溶于 100 mL 无离子水中，贮于棕色瓶中。
5 ． 0.1 mol/L KNO 3 溶液： 2.5275 g KNO 3 溶于 250 mL 0.1 mol/L pH7.5 的磷酸缓冲液。
6 ． 0.025 mol/L pH8.7 的磷酸缓冲液： 8.8640 g Na 2 HPO 4 · 12H 2 O ， 0.0570 g K 2 HPO 4 · 3H 2 O 溶于 1000 mL 无离子水中。
植物原生质体分离纯化与活力检测
植物原生质体分离、纯化与活力检测刘亚靖200911020一.实验器材：普通生物显微镜、移液枪及枪头、恒温水浴箱、离心机、pH计、离心管、剪子、镊子、培养皿、烧杯、三角瓶、载玻片、盖玻片、镊子、血球计数板、酒精灯等。
二. 试剂：(1) CPW溶液： KH2PO4 27.2 mg/L，KNO3101mg/L，CaCl2·2H2O 148 0mg/L，MgSO4·7H2O 246 mg/L，KI 0.16 mg/L，CuSO4·5H2O 0.025 mg/L，pH 5.6。
(2) 预处理液：700 mmol/L甘露醇(约13%甘露醇)，用CPW溶液配制。
(3) 酶解液：1%纤维素酶（cellulase Onzuka R-10）、0.1%果胶酶（pectinase）、0.5%离析酶（MacerozymeR-10）用洗涤液配制。
(4) 洗涤液：含600 mmol/L甘露醇(约11%甘露醇)的CPW溶液。
(5) 原生质体染色贮液： 0.4%的台盼兰（用洗涤液配制）。
三. 实验材料：胡萝卜根皮层0.5-1.0 mm。
四.实验程序与操作要点1. 原生质体的分离与纯化(1) 取胡萝卜根去表皮和里心0.4293 g，置薄层预处理溶液中，室温黑暗下预处理1h。
(2) 用吸管吸去预处理液，按材料：酶液=1：10的比例加入4.3 mL酶解液，在26℃下保温黑暗酶解，其间不时轻轻摇动培养皿。
(3) 酶解2 h后，取样在显微镜下观察到细胞壁的酶解情况，每0.5 h观察一次，有圆球形原生质体释放到溶液中时即停止酶解。
实际情况为未能观察到圆球形原生质体而一直未停止酶解。
2. 原生质体的纯化由于纯化时的离心转速过大会导致原生质体破碎，故略过本步骤。
而实际情况是原生质体已经破碎，离心后破碎的是细胞器。
3.原生质体活力测定台盼兰活体染色法：吸取纯化的原生质体悬浮液1滴于载玻片上中，滴加染料混匀在明视野显微镜下观察，未被着色者为有活力的胡萝卜根皮层原生质体，深蓝色者是死细胞。
硝酸还原酶活性的测定
3.1%对氨基苯磺酸 对氨基苯磺酸1g，加浓盐酸25mL，用 蒸馏水定容至100mL；共配制2次， 200mL
4.0.2%α-萘胺 α-萘胺0.2g，加冰乙酸25mL，用蒸馏水 定容至100mL；共配制2次，200mL
5.30%三氯乙酸 三氯乙酸30g，用蒸馏水定容至100mL
五、操作步骤
1．酶反应和酶活性的测定
硝酸还原酶活性的测定
一、目的
❖ 硝酸还原酶（NR）是硝酸盐同化中第一个酶， 也是限速酶，处于植物氮代谢的关键位置。 它与植物吸收利用氮肥有关，对农作物产量 和品质有重要影响，因而硝酸还原酶活性被 当作植物营养或农田施肥的指标之一，也可 作为品种选育的指标之一。
❖ 通过本实验可以初步掌握测定硝酸还原酶活 性的原理和方法。
测吸光光度值
显色反应
取1mL
绘制亚硝酸钠 标准曲线
计算含量
六、结果与计算
❖ 把在标准曲线上查得的NaNO2含量代入下式， 计算硝酸还原酶活性：
NaNO2含量(µg) ×稀释倍数 NR活性[NaNO2(µg)/鲜重(g)·h]=
样品重(g)×时间(h)
七、思考题
❖ 1．为什么要将加有样品和试剂的三角瓶放入 真空干燥器抽气？
(按顺序加试剂)
试管号
123456
5µg/mL NaNO2 ，mL 0 0.2Байду номын сангаас0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水 ，mL
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
1%磺胺，mL
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
0.2%α-萘胺，mL
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
取样 称量、编号 加缓冲溶液 暗处保温 抽气
实验 植物根系活力的测定
实验植物根系活力的测定植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。
本实验学习测定根系吸收面积和活力的方法。
一、根系总吸收面积和活跃吸收面积的测定【原理】根据植物矿质吸收的理论，植物对溶质的最初吸收具有吸附的特性，并假定这时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，因此可以根据根系对某种物质的吸附量来测定根的吸收面积。
常用甲烯蓝作为被吸附物质，它的被吸附量可以根据供试液浓度的变化用比色法准确地测出。
已知1mg甲烯蓝成单分子层时所占面积为1.1m2，据此即可求出根系的总吸收面积。
当根系在甲烯蓝溶液中已达到吸附饱和而仍留在溶液中时，根系的活跃部分能把原来吸附的物质吸收到细胞中去，因而继续吸附甲烯蓝。
从后一吸附量求出活跃吸收面积，可作为根系活力指标。
【仪器与用具】分光光度计1台；100ml烧杯3只；50或100ml量筒1个（依根系大小而定）；吸量管1ml 1支，10ml 1支；试管（15×150mm）10支；容量瓶1000ml 1个，100ml 1个；吸水纸适量；试管架1个。
【试剂】0.0002mol/L甲烯蓝溶液：精确称取74.8mg甲烯蓝（C16H18N3SCl·3H2O），加水溶解，定容至1000ml。
此溶液每ml含甲烯蓝0.0748mg。
0.010mg/ml的甲烯蓝溶液：用刻度吸管吸取0.0002mol/L甲烯蓝13.37ml定容至100ml，摇匀即成。
【方法】1．植物材料的准备本实验最好采用水培或砂培植物，以获得完整而无损伤的根系。
玉米根系发达，是较好的材料。
如无水培、砂培试材，也可用盆栽植物，用水将盆土仔细冲净后使用。
田间栽培的材料因不可能无损地挖出全部根系，最好避免在正式试验中使用。
2．甲烯蓝溶液标准曲线的制作取试管7支编号，按表14-1次序加入各溶液，即成甲烯蓝系列标准液。
表14-1 各试剂加入顺序试管号 1 2 3 4 5 6 70.01mg/ml甲烯蓝溶液(ml)蒸馏水(ml)甲烯蓝浓度mg/ml 010190.001280.002460.004640.006820.008100.01以第1管（水）为参比在分光光度计下比色，取波长660nm，读出光密度，以甲烯蓝浓度为横坐标，光密度为纵坐标绘成标准曲线。
植物生理学 实验6__种子生活力的测定
染料染色法
1. 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选 择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内， 胚部不染色。
2. 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了 选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。 所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命 力。
染料染色法
TTC法
材料、设备及试剂
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软 不硬)；
3. 将培养皿置于35 ℃下培养 1hr，对光观察，如 种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是 死种子。
TTC/红墨水染色法
1. 2. 3. 4. 5. 将种子用温水（30℃）浸泡2-6h，使种子充分吸胀； 随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半 TTC备用，另一半红墨水法备用； 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中，于恒温箱（3035℃）中保温30min； 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min（室温）； 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。
实验六 植物种子生活力的快速测定
实验目的
1. 了解种子生活力快速测定的方法
2. 理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理பைடு நூலகம்
种子生活力（seed viability）：指种子能够萌发 的潜在能力或种胚具有的生命力。 种子活力（seed vigor）：
实验原理
TTC法
1. 2. 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应， 而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被NADH或 NADPH还原时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚便染 成红色。 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显 减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚 染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。
实验七 种子生活力的快速测定
实验七种子生活力的快速测定一、氯化三苯基四氮唑法（TTC法）[原理] 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚无此反应。
当TTC溶液深入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH3或NADPH2）还原时，可产生红色的三苯基甲曁（TTF），胚便染成红色。
当种胚的生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化则不明显，故可由染色的程度推知种子生活力的强弱。
[仪器与试剂] 培养皿2套，镊子1靶；单面刀片1片；垫板（切种子用）1块；烧杯1个；综合试剂瓶；取1gTTC溶于1dm3蒸馏水或冷开水中，配成0.1%的TTC 溶液。
药液pH应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后在加水）。
[方法]1．将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2．随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3．把切好的种子分别放在培养皿内，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4．放入30～50℃的恒温箱内保温30min。
也可在20℃左右的温室下放置40～60min。
5．保温后，倾出药液，用自来水冲洗种子2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，办判断结果记入表内。
[注意事项]1．TTC溶液最好现配现用。
如需要贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2．染色温度一般为25～35℃为宜。
3．判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4．判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失技能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚叶轴的连接处或在培根上有较重的坏死部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
实验六植物种子活力的快速测定
实验六植物种子活力的快速测定一、实验目的1、掌握快速测定植物种子生命力的方法2、理解TTC/BTB/染料法测定种子活力的原理二、实验原理1、TTC法TTC法测定主要作物种子生活力要点2、染料（红墨水）染色法有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。
而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可以自由进入细胞内，使胚部染色。
因此，可以根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命力。
3、BTB（溴麝香草酚蓝）法活细胞呼吸释放CO2，CO2溶于水成H2CO3解离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB 来反映酸度的改变。
BTB变色范围为pH6.0~7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。
本实验观察种胚周围的黄色晕圈。
三、仪器与材料植物材料：小麦种子仪器设备：小烧杯；刀片；镊子；温箱实验试剂：0.12％～0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应随用随配）。
0.02％～0.2％靛红溶液或5％红墨水（酸性大红G）。
四、实验步骤1、TTC法（1）浸泡将待测种子在30 ～35 ℃温水中浸种（大麦、小麦6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。
（2）显色取吸胀的种子200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿100 个半粒，加入适量的0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。
然后置于30 ℃恒温箱中1 h 。
观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。
（3）计算活种子的百分率2、红墨水染色法（1）将种子浸于30一35C温水中,5一8小时后捞出。
（2）随机取50粒种子,沿胚部切成两半,取带种胚的一半浸干5%红墨水溶液中,浸泡约半小时后用清水反复冲洗。
凡有生活力的种子,种胚无红色反应。
植物细胞活性检测报告
肇庆学院实验题目：细胞活性检测一、实验目的掌握用质壁分离法检测植物细胞活性的方法。
二、实验原理植物细胞膜具有选择透过性。
当植物细胞处于高渗溶液中时，细胞内液渗出，整个原生质体缩小，细胞膜逐渐与细胞壁脱离，产生质壁分离。
若将已经发生质壁分离的细胞再移入低渗溶液或水中，水重新进入细胞，原生质体逐渐恢复原状，即质壁分离复原。
质壁分离实验可检测植物细胞发生渗透作用的情况，当选择透过性膜失去其功能时，不发生质壁分离现象，所以可用这种方法判断细胞活性。
三、实验器材与材料1、实验器材：显微镜、温度计、刀片、医用镊子、滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸2、实验材料0．4g/ml蔗糖溶液、洋葱四、实验步骤1、取洋葱鳞叶，在外表皮上划数个5mm2的正方形，用尖头镊撕取切片，置于蒸馏水中备用。
2、将撕取的洋葱外表皮分别在0°、30°、60°的蒸馏水中处理5min，平展放在滴有蒸馏水的载玻片中，盖上盖玻片，防止气泡产生。
3、先用光学显微镜的低倍镜观察，找到细胞位置，再使用高倍镜观察。
4、从盖玻片的一侧滴入0．4g/ml蔗糖溶液，在盖玻片另一侧用吸水纸吸引，重复几次观察，细胞中质壁分离现象。
五、实验结果0°处理下死亡率=22/110×100%=20%30°处理下死亡率=2/48×100%=4%60°处理下死亡率=89/89×100%=100%六、结果分析经0°、30°处理下的洋葱鳞片外表皮细胞均发生质壁分离现象。
其中经0°蒸馏水处理下的细胞暂时性失活，发生质壁分离程度较低，发生时间较长；而在30°处理下的细胞发生质壁分离较快，程度较深。
在60°处理下细胞全部失活，无质壁分离现象。
在发生质壁分离后的细胞的盖玻片一侧滴少量蒸馏水，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引，重复几次。
可观察到经0°、30°处理的细胞发生质壁分离复原。
实验六 种子生活力的快速测定
实验六种子生活力的快速测定一、实验目的1.加深对种子作用的理解；2.掌握种子生活力的测定方法。
二、实验原理在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。
因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。
种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H）有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深；死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC还原成红色；种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色；三、实验材料及用品材料：绿豆种子实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片实验试剂：0.5%TTC溶液（避光保存）四、实验步骤1. 浸种：将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色：a、种子处理：随即选取吸胀的种子 40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。
b、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h。
c、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min后，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保温1h。
3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染色情况。
有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染色。
生活力的种子数计算种子生活力的比率= ————————X 100%实验组测定种子数五、实验现象与结果保温1h后种子染色情况：被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6煮沸的种子 0 20表一种子染色情况记录表图1 未煮沸的种子染色情况图2 煮沸的种子染色情况生活力的种子数未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%实验组测定种子数生活力的种子数煮沸的种子生活力的比率= ———————X 100% =0/20 X 100% = 0实验组测定种子数六、分析和讨论1.在实验中，去种皮时要小心防止伤及种胚，因为胚是种子中的活细胞，若损失可能使实验无法进行反应，造成实验的误差。
硝酸还原酶活性的测定
实验二、硝酸还原酶活性的测定-活体法[原理]：硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐，产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸（或对-氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（或萘基乙烯胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般以每克鲜重含氮量表示，即以ug.g-1.h-1为单位。
NR 的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好。
[试剂]1．亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯NaNO20.9857g溶于去离子水后定容至1 000ml，然后再吸取5ml定容至1000ml，即为含亚硝态氮1ug.ml-1的标准液；2．0.1molpH7.5的磷酸缓冲液：Na2HPO4.12H2O30.0905g与NaH2PO4.2H2O 2.4965g加去离子水溶解后定容至1 000ml；3．1%（W/V）溶液：1.0g 对氨基苯磺酸溶于100ml 3 mol.L-1HCL中（25ml浓盐酸加水定容至100ml 即为 3 mol.L-1HCL）；4．0.02%（W/V）萘基乙烯胺溶液：0.020g萘基乙烯胺溶于100ml 去离子水中，贮于棕色瓶中；5．0.1mol.L-1KNO3溶液：2.5275g KNO3溶于250Ml 0.1mol.L-1Ph7.5的磷酸缓冲液中；6．0.025mol.L-1Ph 8.7 的磷酸缓冲液：8.864 0g Na2HPO4.12H2O，0.0570g KH2OP4.3H2O，溶于1 000ml去离子水中；7．30%三氯乙酸溶液：30g三氯乙酸。
水溶后定容至100ml。
[方法]摇匀后在25度下保温30min，然后在540nm下比色测定。
以亚硝态氮（ug）为横坐标（X），吸光值为纵坐标（Y）建立回归方程。
2.样品中硝酸还原酶活力测定1.在取材的前一天加50mmol/L KNO3或NaNO3到培养苗的水中就可以诱导酶的产生。
植物生理学 实验3 NR活性测定
一 实验目的
? 理解硝酸还原酶的特性； ? 掌握硝酸还原酶活性测定方法。
实验原理
? NR是诱导酶，在取样前一天用50mM KNO3- 或 NaNO3-加到培养苗的水中以诱导硝酸还原酶的产生。
? NO2-产生 NO3- +NADH+ + H+→ NO2- +NAD++H2O 外界溶液中的NO3-渗入植物组织后，经硝酸还原酶作 用，所产生的NO2-可以从组织内渗透到外界溶液中；
? 诱导酶(induced enzyme) 植物体本来不含有，但在特定的外来物质 (如底物) 的影响下诱导形成的酶
NR基因表达的调控
实验证明 NO3-能诱导 NR的表达
? NO3－的还原在根或叶中 均可进行
? NO3－供应少时，主要在 根中还原
? NO3－供应量大而根中还 原力不足时， NO3－运 到叶片进行还原
当磺胺与α-萘胺均过量时，所生成的红色深浅与NO2-含
量成直线关系。 NO2-含量标准曲线：
[ NO
2
]
（μ
Mol
/
ml）=
0.0026＋0.359OD540
硝酸还原酶活性测定
NR酶活性（ NO2- μMol/h?gfw）=
[ NO
2
]
×10ml/1ml÷（鲜重g×0.5h）
三 材料与方法
两种处理的小麦材料[水（W）， KNO3 （N）]
表 硝酸还原酶的活性
处理
A液 B液 吸光度 吸光度
ODB-ODA NR活性
H2O
KNO3
六 思考题
为何提前一天施 KNO3，并且取样应在晴天 进行？
七 注意事项
? 摇晃直至叶段沉于溶液中（试管内放入滤网） ? 磺胺试剂和 α-萘胺试剂（加入时注意 顺序） ? 加入磺胺和 α-萘胺后要混合摇匀，静置 30分钟 ? 分光光度计使用 （测定之前注意波长）
实验 植物根系活力的测定
【方法】
1．定性测定
（1）配置反应液把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。
（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
【仪器与用具】
分光光度计1台；100ml烧杯3只；50或100ml量筒1个（依根系大小而定）；吸量管1ml 1支，10ml 1支；试管（15×150mm）10支；容量瓶1000ml 1个，100ml 1个；吸水纸适量；试管架1个。
【试剂】
0.0002mol/L甲烯蓝溶液：精确称取74.8mg甲烯蓝（C16H18N3SCl·3H2O），加水溶解，定容至1000ml。此溶液每ml含甲烯蓝0.0748mg。
2．甲烯蓝溶液标准曲线的制作取试管7支编号，按表14-1次序加入各溶液，即成甲烯蓝系列标准液。
表14-1 各试剂加入顺序
试管号
1
2
3
4
5
6
7
0.01mg/ml甲烯蓝溶液(ml)
蒸馏水(ml)
甲烯蓝浓度mg/ml
0
10
0
1
9
0.001
2
8
0.002
4
6
0.004
6
4
0.006
8
2
0.008
10
0
0.01
被吸收的
甲烯蓝量
(mg)
烧杯1
烧杯2
烧杯1＋2
烧杯3
根体积(ml)
植物硝酸还原酶(NR)活力测定(活体法)
植物硝酸还原酶（NR）活力测定（活体法）一、原理硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐,产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般以Nμg·g-1·h-1为单位。
NR的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好二、仪器与用具分光光度计；真空抽气泵（或20ml注射器筒）；天平；单面刀片；保温箱（或恒温水浴）；刻度试管（15ml）；移液管（5ml×2，2ml×8，1ml×2）。
三、试剂1. 亚硝酸钠标准液称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml，吸取5ml用水稀释定容至1000ml，即为每ml含NaNO2 5μg（亚硝态氮近似1μg/ml）的标准液。
2. 0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液：K2HPO4 19.24g，KH2PO4 2.2g，加水溶解后定容至1000ml。
3. 1%（W/V）对-氨基苯磺酸溶液：称取10.0g加入250ml浓HCl中，用蒸馏水定容至1000ml。
4. 0.2%（W/V）α-萘胺溶液：称取2.0gα-萘胺溶于250ml冰醋酸中，用蒸馏水定容至1000ml。
5. 30%三氯乙酸溶液：75.0g三氯乙酸水溶后定容250ml。
6. KNO3（0.1mol/L）、异丙醇（1% V/V）、磷酸缓冲液（0.1mol/L）混合液：称10.10g KNO3溶于1000ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液中，再加10ml异丙醇混匀。
四、方法1. 标准曲线制作取7支洁净烘干的15ml刻度试管按表13-1顺序加试剂，即配成0-2.0μg的系列标准亚硝态氮溶液。
硝酸还原酶活性的测定(精)
酸性
重氮盐 ＋ α- 萘胺
紫红色偶氮染料
（颜色在2～3小时内稳定）
比色测定，得到 NO2- 的含量
磺胺比色法
【实验步骤】
1. 样品处理
⑴ 叶片水洗吸干 钻孔得小圆片（直径1cm） 称取2份，每份0.4g
⑵ 取2只三角瓶
NO.1: 磷酸缓冲液 5ml ＋蒸馏水 5ml NO.2: 磷酸缓冲液 5ml ＋0.2M KNO3 5ml
作业：
测定硝酸还原酶活性时，反应过程中为何要在避光 条件下进行？
⑶ 加入叶片 ⑷ 抽气至叶片沉淀（抽气彻底，以使溶液与质膜充分接触，使反应
顺利进行）
⑸ 30℃避光保温30min Nhomakorabea2. NO2- 含量测定
反应液1ml 磺胺试剂2ml α- 萘胺2ml
搅匀，静置30min
比色A520
3. 计算
C×反应液总体积（10ml） ＝ 反应时间（0.5hr）×样品重量（g）
实验三 硝酸还原酶活性的测定 （活体法）
【实验原理】
本身不存在该酶，外加 NO3-，诱导生成
硝酸还原酶（NR）是植物氮素代谢作用中的关键性的酶 ，该酶为诱导酶。
NO3- NR NO2-
NO2- 可以从细胞中很快地分泌到反应液中，故只要测 定反应液中的 NO2- 的增加，可计算该酶活性的大小。
NO2- ＋ 磺胺
ug / g·FW·h
4. 标准曲线绘制 配制 5，4，3，2，1，0.5，0ug/ml NaNO2
反应液1ml 磺胺试剂2ml α- 萘胺2ml
搅匀，静置30min
比色A520
磺胺比色法比较灵敏，显色速度易受温度，酸 度等因素得影响，故要严格控制实验条件：标准液 与样品反应液同时反应、比色）
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甘薯叶NO 2的测定
6 7
样 （参比） 测1
_
学 大 NaNO2标准液 0 林 农 0.1 0.2 （NO 25μg/ml） 建 蒸馏水(ml) 福 1.0 0.9 0.8
反应液(ml) 1%磺胺试剂(ml) 2
0.02%萘基乙烯胺(ml) 每管含NO-2 的μg数 540nm比色 OD值 2
学 大 林 1(对照) 2(测定瓶) 3(测定瓶) 农 建 0 1 0福
9 9 9 10min 10min 10min
为什么要 抽气？
→抽气
恒温培养箱30℃(暗)诱导
30min
0
30min
1
30min
1
为什么要 放暗处？
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《植物生理生化实验A》
3、标准曲线绘制及NO-2测定：
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《植物生理生化实验A》
硝酸盐的还原
在一般的土壤条件下，NO-3是植物吸收的
硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸： 主要形式。NO-3进入细胞后被硝酸还原酶和亚 学
大 林 硝酸还原酶还原成 铵 。其中硝酸还原酶(NR) NR 农 + NO 3+ NAD(P)H NO-2+ NAD(P)++ H2O 建 + H 福 学 是这一反应的限速酶。 大 林 农 建 福
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《植物生理生化实验A》
白天和夜晚植物还原硝酸盐的速度是否 相同？为什么？
植物对硝酸盐的还原速度白天显著快于夜晚。这 学 大 是因为白天光合作用产生的还原力及丙糖能促进硝酸 林
农 建 盐的还原。 福
学 大 林 农 建 福
还有为什么测定硝酸还原酶的材料要 白天在强光下，大量光合产物运至细胞质中， 参与糖酵解反应，形成更多的NADH，加速硝酸盐的 进行一段光合作用后取样测定？ 还原。
4、掌握测定过程相关仪器的使用方法。
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《植物生理生化实验A》
三、实验原理： 1、酶活性的诱导：
学 大 林 硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸： 农 建 福 学 NR 大 _ + 林 NO NO 2+ NAD(P)+ H O 3 + NAD(P)H+H 农 2 建 福
学 用磺胺显色法测定。在酸性条件下NO 大 2
下比色测定。反应如下：
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《植物生理生化实验A》
对氨基苯磺酰胺
重氮化合物
学 大 林 农 建 福
α萘胺
学 大 林 农 建 福
540nm
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《植物生理生化实验A》
四、仪器设备：
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《植物生理生化实验A》
标准曲线:
?
学 大 林 农 建 福
学 大 林 农 建 福
?
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《植物生理生化实验A》
八、结果计算：
－ 根据测定的OD值，从标准曲线查出NO2 浓度 （OD值 / 0.307= ?μ 学g NO2- ）
学 大 叶片要用打孔器取样(或用剪刀剪成大小一致的小块)。 林 农 建 无机磷对NR活性有促进作用，因此常用磷酸缓冲液。 福 学 大 活体法酶促反应在暗条件下进行，以防止亚硝酸盐还原为氨。 林 农 亚硝酸的磺胺比色法比较灵敏，显色速度受温度和酸度等因 建 福 素的影响.因此标准液与样品的测定应在相同条件下进行，
《植物生理生化实验A》
学 实验六 植物体内硝酸还原酶活力的测定 大 林 农 —活体法 建 福 学 大 林 农 建 ( 福建农林大学 福柯玉琴 )
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《植物生理生化实验A》
实验六 植物体内硝酸还原酶活力的测定
一、测定意义：
学 大 林 农 NR）是硝酸盐同化中第一个酶, 硝酸还原酶（ 建 福 学 它与 也是限速酶，处于植物氮代谢的关键位置。 大 林 农 植物吸收利用氮肥有关，对农作物产量和品质有 建 福 重要影响，因而硝酸还原酶活性被当作植物营养
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《植物生理生化实验A》
硝酸还原酶是一种诱导酶，诱导物是NO3- ， 光照可促进硝酸盐的还原过程。
学 大 诱导酶：又称适应酶，指植物体内本来不含有， 林 农 但在特定外来物质的诱导下可以生成的酶。如硝 建 福 学 大 酸还原酶可为NO3-所诱导。 林 农 建 例如：水稻幼苗本无硝酸还原酶，但如果培 福 养在硝酸盐溶液中，水稻体内就会诱导生成硝酸
在一定条件下， 的生成量与硝 酸还原酶活性呈正相关。
_ NO 2
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《植物生理生化实验A》
2、
_ NO 2显色反应：
林 农 建 与对-氨基苯磺酰胺发生重氮反应，生成的 福 学 大 林 重氮化合物又与N-萘基乙二胺盐酸盐（或 农 建 福 α-萘胺）生成红色偶氮化合物，可在540nm
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《植物生理生化实验A》
六、植物材料：
学 大 林 农 建 福
甘薯叶片
A）用打孔器打小圆片 B）用剪刀剪成大小基 本一致的小方块
学 大 林 农 建 福
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七、操作步骤：
《植物生理生化实验A》
1. 取样：将新鲜甘薯叶片冲洗干净，用吸水纸擦干表
面水分，并打孔器打取直径约6mm的小圆片 （或用剪刀剪成大 小相近的小方块）,混合均匀，迅速称取0.5克样品3份，分别 学 大 置于3个50毫升三角瓶，编号。
林 农 2. 酶反应 ：按下表1操作 建 福
表1 NR诱导过程需要加入的试剂和操作步骤
三角瓶编号 试剂 （毫升）
30%三氯乙酸 0.1mol/L KNO3 放入真空干燥箱 30%三氯乙酸
硝态氮(NO-3)
必须经过还原
形成铵态氮
后才能被利用。
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《植物生理生化实验A》
硝酸盐的还原
在一般的土壤条件下，NO-3是植物吸收的 主要形式。NO-3进入细胞后被 硝酸还原酶和 学
大 林 农 还原成铵。其中硝酸还原酶 亚硝酸还原酶 建 福 学 大 (NR)是这一反应的限速酶。 林 农 建 福
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《植物生理生化实验A》
学 大 林 农 建 福
学 大 林 农 建 福
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学 大 林 农 建 福
学 大 林 农 建 福
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《植物生理生化实验A》
五、试剂配制：
1、0.2mol/L 硝酸钾 学 大 2、0.1mol/L 的磷酸缓冲液，pH=7.5 林 农 A 液：0.2mol/L NaH PO 2 4 建 福 学 B 液：0.2mol/L Na HPO 2 4 大 林 3、1%磺胺 农 建 福 4、0.02%萘基乙烯胺 5、亚硝酸钠标准液 6、30%三氯乙酸
方可比较。
6. 叶片要抽气，使叶圆片中的空气抽去而沉于溶液中。
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《植物生理生化实验A》
十、思考题：
1．测定硝酸还原酶活性的材料为什么要提前一天 学 施用一定量的硝态氮肥，并且取样应在晴天进 大 林 行？ 农 建 福 学 2．测定硝酸还原酶活性的活体法和离体法各有何特 大 林 点？ 农 建 福 3．酶的诱导为什么要在暗处进行？
为什么要 测定？
或农田施肥的指标之一，也可作为品种选育的指 标之一。
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《植物生理生化实验A》
植物主要利用土壤中的含氮化合物：
学 有机含氮化合物 大 林 农 建 福
氨基酸、酰胺、尿素等水 溶性的有机氮化物
无机氮化物
植物可直接吸 学 铵态氮(NH+4) 林大 收、利用并合 农 成氨基酸 建 福
大 林 农 代入以下公式： 建 福
NR活性(μg NO2=
学 大 林 农 /g鲜叶/h) 建 福
查标准曲线得NO-2浓度（μg）× 10ml
0.5g × 0.5 小时 × 1ml
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《植物生理生化实验A》
九、注意事项：
1. 取样前叶子需进行一段时间的光合作用，以积累碳水化合 物，否则酶活性低。 2. 3. 4. 5.
还原酶，这是高等植物中底物诱导的实例。
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《植物生理生化实验A》
测定方法：
离体法:需将材料磨成匀浆,经过低温离心除去残渣， 吸取上清液为硝酸还原酶粗酶液进行测定。 由于研磨中NADH 学 受损失,必需外加NADH方 大 林 可测定。 农 建 - 进 福 活体法： 直接用鲜活组织进行测定。环境中的 NO 学 √ 3 大 - 林 入细胞后,被NR还原成NO 2 ,并扩散到细胞外 农 建 福 NO 2 的含量即可 在溶液中积累,测定溶液中
得知NR活性的大小。活体法不破坏细胞原有 的酶反应系统，NADH可由代谢反应不断生 成，无需外加。
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
二、目的要求：
学 大 1、了解NR活性测定对植物氮代谢的重要意义 林 农 建 及实际应用。 福 学 大 林 2、了解离体法和活体法测定NR活性的不同点。 农 建 福 3、掌握活体法测定NR活性的原理及其技术要点。
试管编号
1
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3
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