MICM检测在恶性血液病中运用
MICM acute leukemia血液疾病诊断治疗研究方案
FISH
t(8;21)(q22;q22.1) RUNX1RUNX1T1
inv(16)(p13.1q22) or t(16;16)(p13.1;q2 2);
t(15；17)
CBFB-MYH11 PML-RARA
11q23.3
MLL
AML-M0
AML-M1
AML-M2
AML-M3
AML-M7
Scoring system for the definiton of biphenotypic acute leukemia ≥2.5诊断HAL
Scoring points
B lymphoid T lymphoid
Myeloid
即刻送检--取材2小时内细胞活性好
无菌操作，溶血、凝血，污染的标本等均 为不合格标本。
成人AML染色体异常检出率在55%以上
AML常见染色体异常示例
伴t(8;21)(q22;q22)(AML1/ETO)的AML 伴t(15;17)(q22;q21)(PML/RAR )的APL 伴inv(16)(p13q22)(CBF /MYH11)和骨髓嗜 酸粒细胞异常的AML 伴11q23(MLL)重排的AML
AML 免疫分型
FAB CD34 /
M1 ＋
CD33
＋
HLA- CD13 DR
＋＋
CD14 CD15 CD11b
－± －
其它
M2 ± ＋ ＋ ＋ － ± －
M3 － ＋ － ＋ － ± － CD38
CD9
M4 － ＋ ＋ ± ＋ ＋ ±
M5 － ＋ ＋ ± ＋ ＋ ±
M6 ± ± ± ± － ± － CD71
细胞系列 干/祖和嗜碱粒细胞
白血病MICM分型及其意义
白血病MICM分型及其意义白血病MICM分型白血病MICM分型白血病MICM分型，是指形态学（morphology）、免疫学（immunology）、细胞遗传学、（cytogenetics）、分子特征（molecular）分型。
形态学分型（FAB）分型急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）或急性髓系白血病（AML）：Ｍ１型：急性原粒细胞性白血病未分化型，骨髓中原粒细胞≥90％，POX染色阳性率＞3％。
Ｍ２型：急性原粒细胞性白血病部分分化型，以原幼粒细胞为主，早幼粒细胞＞3％，中、晚幼及成熟粒细胞＞10％为Ｍ２a型。
Ｍ３型：急怀多颗粒早幼粒细胞性白血病，以颗粒增多的异常早幼粒细胞为主，＞30％。
其又分为粗颗粒型（Ｍ３a）和细颗粒型（Ｍ３b）。
Ｍ4型：急性粒－单核细胞性白病，粒系及单核细胞均增生。
Ｍ５型：急性单核细胞性白血病，Ｍ5a为原单核细胞型，原单核＞80％；Ｍ5b为部分分化型，以幼单核细胞为主，原单核＜80％。
Ｍ6型：急性红白血病，原幼红细胞≥50％，非红系细胞中原始细胞＞30％。
Ｍ7型：急性巨核细胞性白血病，原巨核细胞＞30％，并经电镜、血小板过氧化物酶检查、血小板免疫标志物或血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa检查等证实。
Ｍ0型：近年确定，为髓系最早阶段的白血病，形态学上极少髓系分化，不能鉴别，必须用免疫标志物确定。
急性淋巴细胞性白血病(ALL)：L1：以小原淋巴细胞为主，大小较一致。
L2：以大原淋巴细胞为主，大小不一致。
L3：以大原淋巴细胞为主，胞质内含大量空泡。
3.急性白血病的主要化学染色特点：免疫学分型－基本免疫表型1.急性非淋巴细胞白血病（ANLL）FAB分型与免疫标志：2.急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)FAB分型与免疫学标志：3.急性非T淋巴细胞白血病(non-T-ALL)FAB分型与免疫学标志：4. 混合细胞性白血病：有极少部分病人白血病细胞为淋巴系和髓系细胞双克隆或同一细胞系免疫标志双表型，即混合细胞性白血病。
MICM在AML诊断中的应用
MICM在AML诊断中的应用病例提供者：江苏省丹阳市人民医院检验科周文俊病例整理者：江苏省泰州靖江市人民医院张姝审校：江苏省人民医院血液科张建富现病史患者王XX，男，82岁了，江苏镇江市丹阳人。
职业工人。
患者5天前无明显诱因下出现畏寒、发热，最高体温39.9℃。
伴有全身乏力、头昏、纳差。
无出血。
既往有二型糖尿病。
患者家属诉既往有白细胞增高和血小板减少史。
体格检查：神清，精神欠佳。
发育正常，全身无皮肤黏膜黄染，无瘀点瘀斑，浅表淋巴无肿大，肝脾肋下未触及。
未及包块。
无B超和CT结果。
细胞形态学老师们的讨论骨髓报告结果流式报告结果病理报告结果分子生物学检查结果专家组评析细胞形态学诊断组：张建富一、该患者为老年患者，男性，头昏、高热就诊。
体格检查未见肝脾淋巴结肿大。
外周血常规检查白细胞总数增高，人工分类多见原始细胞，约占16％。
因此，临床拟AL或MDS入院。
外周血细胞形态学分析非常重要，周老师做的很好。
当然，其他医院看到这样的外周血常规也肯定会外周血细胞形态分析，但就怕不认识原幼细胞，不给临床描述清楚原幼细胞占多少？只是写见异常或异形细胞等，这样不能引起临床医师重视！更有甚者，可能外周血细胞形态分析不做，只是在外周血细胞常规单上盖章（危急值），那你让临床医师怎么办？二、临床医师根据外周血细胞形态分析结果，行骨髓常规检查、免疫分型、染色体检查及分子生物学检查。
这些及时的检查项目的开立，得益于是我们外周血细胞形态的正确分析。
反之，临床医师不可能这么及时开立这么多精准的检查项目。
三、诊断，该患者诊断应该没问题，同学们回答很正确。
1.该患者是急性白血病，这一点肯定都同意，根据细胞形态特征和化学染色结果，该患者诊断急性髓系白血病也没问题。
同学们肯定异口同声的说“对头”。
2.该患者诊断M2？还是M4、M5呢？我看同学们没有纠结，基本上会异口同声的诊断M5。
如果我没记错的话，只有@迈皋桥医院史晓姣?同学讲到了M2。
我的观点，你们的诊断都不错，患者是急性髓系白血病，不是急性早幼粒细胞白血病，又不是和M7！那不剩下M1、M2、M4和M5了吗？3.为何同学们大部分倾向于诊断M5呢？我看主要是受POX和NAE及NAE+NaF的染色结果的影响。
急性白血病MICM分型
急性白血病MICM分型：白血病MICM分型，是指形态学（morphology）、免疫学（immunology）、细胞遗传学（cytogenetics）、分子特征（molecular）分型形态学分型（FAB）分型1.急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）或急性髓系白血病（AML）：Ｍ１型：急性原粒细胞性白血病未分化型，骨髓中原粒细胞≥90％，POX染色阳性率＞3％。
Ｍ２型：急性原粒细胞性白血病部分分化型，以原幼粒细胞为主，早幼粒细胞＞3％，中、晚幼及成熟粒细胞＞10％为Ｍ２a型。
Ｍ３型：急怀多颗粒早幼粒细胞性白血病，以颗粒增多的异常早幼粒细胞为主，＞30％。
其又分为粗颗粒型（Ｍ３a）和细颗粒型（Ｍ３b）。
Ｍ4型：急性粒－单核细胞性白病，粒系及单核细胞均增生。
Ｍ５型：急性单核细胞性白血病，Ｍ5a为原单核细胞型，原单核＞80％；Ｍ5b为部分分化型，以幼单核细胞为主，原单核＜80％。
Ｍ6型：急性红白血病，原幼红细胞≥50％，非红系细胞中原始细胞＞30％。
Ｍ7型：急性巨核细胞性白血病，原巨核细胞＞30％，并经电镜、血小板过氧化物酶检查、血小板免疫标志物或血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa检查等证实。
Ｍ0型：近年确定，为髓系最早阶段的白血病，形态学上极少髓系分化，不能鉴别，必须用免疫标志物确定。
2.急性淋巴细胞性白血病(ALL)：L1：以小原淋巴细胞为主，大小较一致。
L2：以大原淋巴细胞为主，大小不一致。
L3：以大原淋巴细胞为主，胞质内含大量空泡。
3.急性白血病的主要化学染色特点：免疫学分型－基本免疫表型1.急性非淋巴细胞白血病（ANLL）FAB分型与免疫标志：2.急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)FAB分型与免疫学标志：3.急性非T淋巴细胞白血病(non-T-ALL)FAB分型与免疫学标志：4. 混合细胞性白血病：有极少部分病人白血病细胞为淋巴系和髓系细胞双克隆或同一细胞系免疫标志双表型，即混合细胞性白血病。
此型白血病用形态方法极难诊断，必须结合多参数流式细胞术分析才能确诊。
血液MICM诊断
骨髓活检和骨髓/血涂片
骨髓/血涂片
• 骨髓涂片细胞细微结构清楚
评估红系、粒系增生情况及幼稚 细胞比例具有优势
骨髓活检
• 骨髓活检显示骨髓的组织结构和各
成分的分布及相互关系，对巨核细 胞的评估具有优势
•
• •
骨髓纤维化、细胞致密可干抽
可做组织化学染色（如铁染） 对缺铁性贫血、慢性疾病引起的 贫血、巨幼细胞性贫血、和急性 白血病的诊断尤其有帮助。
检测结果 copies
检测项目 MLL/AF6 CBFB/MYH11 MLL/AF10 dupMLL E2A/HLF TEL/AML1 AML1/MDS1 MLL/AF1Q MLL/AF9 BCR/ABL DEK/CAN PML/RARa NPM/ALK NPM/RARa HOX11 阴性对照
检测结果 -
形态+免疫
形态+免疫+遗传+分子 形态+免疫+遗传+分子
为什么需要MICM综合诊断？
形态或病理或加细胞化学分析受观察者个体经验 及分辨力的限制，一致率仅50-70%； 在此基础上增加免疫组化和/或FCM分析大大增加 了分型的准确率，可达90%以上； 染色体、FISH及基因分析，进一步提高分型的准 确率
• 确定细胞分化阶段
– 不同发育阶段细胞，其抗原表达不同
• 预后判断
– 有些抗原表达和淋巴瘤/白血病预后相关
• • 治疗方法选择-治疗靶向 疗效判断、复发监测
急性髓系白血病免疫表型与FAB分型相关性
M0 M1 CD34,CD33,CD13 MPO,CD34,CD33,CD13, HLA-DR
M2
M3 M4
TCR和IgH重排项目
初诊急性白血病MICM分型的诊断研究
初诊急性白血病MICM分型的诊断研究目的探讨MICM分型运用在初诊急性白血病诊断中的临床价值。
方法选择我院2015年3月-2017年2月期间收治的97例急性白血病患者为研究对象，均行细胞遗传学、骨髓细胞形态学、分子生物学以及细胞免疫学检查，对MICM 分型、细胞免疫学联合形态学分型、单一细胞免疫学分型以及单一形态学分型诊断白血病的符合情况进行比较分析。
结果所有患者均顺利完成检查，细胞免疫学联合形态学分型、单一形态学分型、MICM分型以及单一细胞免疫學分型诊断白血病的准确率分别为92.78%（90/97）、80.41%（78/97）、100.0%（97/97）、81.44%（79/97）；同时，与单一细胞免疫学分型和形态学分型相比，细胞免疫学联合形态学分型的准确率较高，对比差异明显（P＜005），并且MICM分型的诊断准确率高于形态学联合细胞免疫学分型（P＜005）。
结论临床上给予急性白血病患者MICM分型能够使诊断准确率提高。
标签：免疫学；形态学；MICM分型；急性白血病白血病是发生于造血系统的一种恶性肿瘤，在临床上又被称之为血癌，以出血、感染、发热以及贫血等症状为主要表现，如果不及时治疗，容易出现诸多并发症，严重的情况下，甚至危及患者生命安全[1]。
当前在诊断白血病时，骨髓细胞形态学（M）检查是常用的一种方法，但是因为细胞形态缺乏典型特征而无法诊断，随着现代医学技术的不断发展，分子生物学（M）、细胞遗传学（C）以及细胞免疫学（I）被广泛运用在临床上，并且逐渐形成了WHO诊断白血病骨髓细胞形态学、细胞免疫学、细胞遗传学以及分子生物学联合（MICM分型）的统一标准。
因此，本文对初诊急性白血病采用MICM分型的临床诊断效果，如下报道。
资料和方法一、一般资料选择2015年3月-2017年2月期间我院收治的急性白血病患者97例为研究对象，年龄10-78岁，平均（43.5±18.4）岁，其中41例为女性、56例为男性，所有患者均自愿参与研究，且签署知情同意书。
MICM分型在白血病诊断中的应用价值
MICM分型在白血病诊断中的应用价值作者：彭勇泉来源：《上海医药》2016年第23期摘要目的：探讨MICM（形态学、免疫学与细胞遗传学）分型在白血病诊断中的应用价值。
方法：收集2015年2月—2016年1月我院治疗的103例白血病患者，比较分析单一的骨髓细胞形态学分型，单一细胞免疫学分型与MICM分型3种检查方法对白血病诊断的符合率。
结果：骨髓细胞学联合免疫学分型诊断白血病的符合率（94.17%）明显高于单一骨髓细胞学分型（76.69%）和单一细胞免疫学分型（78.64%）（P关键词骨髓细胞学免疫学分型血液病诊断中图分类号：R733.2； R730.4 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2016）23-0059-03 Value of MICM classification in the diagnosis of leukemia*PENG Yongquan**（Department of Laboratory， Ji-an central hospital，Ji’an 34300， China）ABSTRACT Objective： To investigate the value of MICM （morphology， immunology and cell genetics） classification in the diagnosis of leukemia. Methods： One hundred and three cases of leukemia patients treated in our hospital from February， 2015 to January， 2016 were selected as subjects， and the coincidence rates to the diagnosis of leukemia were compared among three detective methods including single bone marrow cytology classification， single cell immunology classification and MICM classification. Results： The coincidence rates to the diagnosis of leukemia were higher by bone marrow cytology classification combined with immunology classification than by single bone marrow cytology classification and single cell immunology classification （94.17% vs 76.69% and 78.64%）（P0.05）. Conclusion： The MICM classification has a higher value in the diagnosis of leukemia and is worthy of further clinical practice.KEY WORDS bone marrow cytology； immunology classification； blood disease； diagnosis血液病是指造血系统发生的生理或病理性疾病，临床表现为贫血、出血、发热等症状，常见的血液病有白血病（acute leukemia， AL）、再生障碍性贫血等[1]。
骨髓细胞形态学在诊断血液病中的应用价值及新进展
骨髓细胞形态学在诊断血液病中的应用价值及新进展骨髓细胞形态学检查是一门具有百年悠久历史的血液病诊断技术，一百多年来一直都是使用瑞氏及其先驱者发明的涂片染色法，它是血液病理学重要的诊断工具。
因为其制片的过程容易简单，能快速的对样品做出初步检查，即使在血液病检测手段与日俱进的今天，传统的骨髓细胞形态学检查仍然具有独一无二的魅力，它为现代血液病理诊断的发展奠定了基础。
本文通过骨髓细胞形态学检查对其本身的不断完善进步，并结合其他现代血液病诊断技术，在MICM方法上对各种白血病的发病机理的研究现状作一综述。
一、血细胞的生成，发育规律及正常形态学特征×109/L；④血小板减少，多在×109/L。
【骨髓象】慢性型再障的骨髓中可出现一些局灶性代偿性造血灶，故不同部位骨髓穿刺的结果可有一定的差异。
①骨髓增生程度多为增生减低；②巨核细胞、粒细胞、红细胞三系细胞均不同程度减少。
巨核细胞减少常早期就出现，治疗有效时恢复也最慢，故在诊断上的意义较大。
③淋巴细胞相对增多。
如穿刺部位为代偿性造血灶，则骨髓象呈增生活跃，粒系百分率可呈正常或减低，红系细胞百分率增高，但巨核细胞仍显示减少或明显减少。
×109/L之间，也有白血病计数在正常范围或减少。
白细胞分类计数可见一定数量的白血病性原始或幼稚细胞，所占百分率不定。
×109/L,多数在×109/L。
分类计数粒细胞比例增高，可见各阶段粒细胞，尤以中性晚幼粒细胞为多见，原粒细胞和早幼粒细胞<10%。
嗜碱性粒细胞增高为慢性的特征之一；③血小板早期增多或正常，疾病加速期及急变期，血小板可进行性下降。
【骨髓象】①骨髓增生极度活跃；②粒细胞系显著增生，原粒和早幼粒细胞<10%，嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞也增多；③幼红细胞增生受抑制；④巨核细胞早期增多，晚期减少。
3、急性骨髓纤维化急性骨髓纤维化临床进展迅速，脏器浸润轻，外周血常呈全血细胞减少，无泪滴状红细胞，但伴少量原始细胞；骨髓穿刺常呈干抽，骨髓象增生低下，可伴少量原始细胞。
血液MICM诊断(1)
– 细胞遗传学：核型分析、FISH – 分子遗传学：融合基因（RT-PCR\Q-PCR)/基因突变
（测序）
血液MICM诊断(1)
白血病不是白血病？ • 急性？慢性？ • 系来源 • FAB分类 • 预后分层 • 治疗、疗效判断
• MRD
病史+形态 形态+免疫 形态+免疫+遗传+分子 形态+免疫+遗传+分子
• 活检增生活跃,涂片增生低下 骨髓增生不均匀 涂片稀释
血液MICM诊断(1)
流式细胞术
血液MICM诊断(1)
流式细胞免疫分型的作用
• 确定系来源
– 原理：不同系有特定的抗原表达 – 髓系/B系/T/NK系/组织细胞和树突状细胞
• 确定细胞分化阶段
– 不同发育阶段细胞，其抗原表达不同
• 预后判断
-5、del(5q)、-7、3q 亚二倍体、近单倍体、
异常、
t(9;22)、t(4;11)、t(1;19)
复杂异常
、t(8;14)
血液MICM诊断(1)
染色体检测常见问题
• 标本取材量不足：检测最低白细胞数为10的6 次方个细胞
• 培养后无分裂相或分裂相少于15个：标本白细 胞量低，患者正在进行化疗
– 有些抗原表达和淋巴瘤/白血病预后相关
• 治疗方法选择-治疗靶向 • 疗效判断、复发监测
血液MICM诊断(1)
急性髓系白血病免疫表型与FAB分型相关性
M0 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7
CD34,CD33,CD13 MPO,CD34,CD33,CD13, HLA-DR MPO,CD34,CD15,CD13, HLA-DR MPO, CD33,CD13、CD9(HLA-DR、CD11b常阴性) MPO,CD33,CD15,CD14,CD13 CD68,CD33,CD14,CD13,HLA-DR,CD36，CD64 CD33,CD235a,CD71 CD33,CD41,CD42b,CD61
白血病形态分型进展及MICM分型概述
contents
目录
• 白血病形态分型概述 • MICM分型概述 • MICM分型在临床实践中的应用 • MICM分型面临的挑战和展望 • 案例分析
01 白血病形态分型概述
传统形态学分型
形态学分型是白血病诊断的基础，根 据细胞形态学特征将白血病分为急性 淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓系 白血病（AML）等类型。
诊断标准不统一
目前MICM分型的诊断标准尚未 完全统一，导致不同医疗机构之 间的诊断结果存在差异。
分型复杂
MICM分型涉及多个方面，包括 细胞形态、免疫表型、细胞遗传 学和分子生物学特征，对技术要 求较高，操作复杂。
检测成本高
MICM分型需要借助多种检测手 段，包括流式细胞术、荧光原位 杂交、基因测序等，检测成本较 高，限制了其在临床的广泛应用。
临床应用普及
随着检测技术的进步和成本的降低， MICM分型有望在临床得到更广泛的 普及和应用。
05 案例分析
案例一
总结词
准确诊断，全面评估
详细描述
急性淋巴细胞白血病是一种常见的白血病类型，其诊断需要结合形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学等多 个方面的检查结果。通过MICM分型诊断，可以更加准确地判断病情，为后续的治疗提供依据。
展望
标准化和规范化
未来需要进一步统一和规范MICM分 型的诊断标准，提高诊断的准确性和 可靠性。
技术进步
随着技术的不断进步，新的检测手段 和方法将不断涌现，为MICM分型提 供更多、更准确的信息。
个体化治疗
随着对白血病认识的深入，未来治疗 将更加个体化，MICM分型将为制定 个体化治疗方案提供重要依据。
生存期预测
流式细胞术在白血病MICM分型诊断中的作用
50 000/秒(分选) 3：5个激光 4：24色荧光 5：无菌环境
FACSAria II 1：高速分选 2：分选精度1/32滴 3：3个激光 4：13色荧光 5：仪器随开随用
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FCM原理（动画）
FACSCalibur光路图
但是，流式免疫分型结果的解释应与临床、形态学、细胞遗传学等其他方 法结合使用，综合考虑，做出疾病的诊断与分类。
正常血细胞发育过程的抗原表达规律
按《WHO造血和淋巴组织肿瘤分类》（2008年版）
Wood B,etc（2007）
急性白血病的免疫表型
急性髓细胞白血病的免疫表型
细胞碎片
单核细胞
淋巴细胞
阈值
检测信号及意义：
荧光信号 根据荧光素交联的单克隆抗体不同而表达不同的意义
（一）设门 （gating）
（二）荧光强度 （三）单参数分析 （四）多参数分析
二、数据解释及报告
1.定性的描述（阳性或阴性）
2.评估抗原表达强度
3. 区分弱阳性和阴性群体
运用流式分析造血细胞的抗原表达情况，远远多于对形态学结果的简单证 实，能够提供大量的信息，可能帮助形态学确认某些诊断，也可能提出之前 没有考虑的诊断；在一些典型表现下，流式免疫分型可以在其他方法的辅助 之下诊断疾病。
Hale Waihona Puke 免疫分型的抗体组合原则免疫分型的抗体组合原则
一、常用抗体
白细胞分化抗原（leukocyte differentiation antigen）是指血细胞在分化成熟 为不同谱系、不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记分子。
1982年，国际统一使用分化群（cluster of differentiation，CD）作为白细胞 分化抗原和相应单克隆抗体的命名，CD分子在流式细胞术的血液学应用中发挥着 重要作用。
急性淋巴细胞白血病MICM分型分析
急性淋巴细胞白血病MICM分型分析杨涛;熊峰【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2012(030)004【摘要】目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的骨髓细胞形态学(M)、细胞免疫学(I)、细胞遗传学(C)和分子生物学(M),即MICM的关系及其临床意义.方法采用细胞形态学检查、染色体R带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测和套式逆转录酶链反应(RT-PCR)检测bcr/abl融合基因等方法.结果以FAB分型为基础的形态学诊断L1型ALL占25.0%,L2型ALL占71.88%,L3型ALL占3.12%;免疫表型检测出B-ALL 25例(78.13%),T-ALL 3例(9.38%),还有4例患者同时表达髓系和B系,为急性杂合性白血病(HAL),占12.49%;染色体异常患者中,以t(9;22)(q34;q11)频率最高(87.50%).bcr/abl融合基因检测,有9例(28.13%)阳性.结论在形态学基础上结合免疫表型、细胞遗传学特征及融合基因表达可以对ALL进行准确的分型,对治疗方案的选择及预后的判断均具有临床价值.【总页数】2页(P155-156)【作者】杨涛;熊峰【作者单位】兰州市第一人民医院,甘肃,兰州,730050;兰州市第一人民医院,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】R195【相关文献】1.儿童急性淋巴细胞白血病MICM检测结果分析 [J], 沈伟;韦永琼;于霞;罗德幸;刘成桂2.FCM免疫表型分析在急性早幼粒细胞白血病MICM分型诊断中的意义 [J], 杨芝红;白永泽;王贵杰3.急性早幼粒白血病65例MICM分型分析 [J], 郭凡;潘洁茹;肖平4.96例初诊急性白血病MICM分型的诊断分析 [J], 栗杰;高九青;李斯展;张艺露5.经人工显微镜、MICM分型技术检查确诊的6例APL患者血细胞分析仪异常散点图特点 [J], 王肖静;欧歌;黄媛;陈建魁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
“精准医疗”下血液病的精准诊断技术
“精准医疗”下血液病的精准诊断技术2015年1月30日，美国总统奥巴马在国情咨文演讲中宣布了“精准医疗计划(Precision Medicine Initiative)”，并拨款2.15亿美元旨在推动个体化医疗的发展。
精准医疗即以个人基因组信息为基础，结合转录组、蛋白质组、代谢组等分子生物学特征，借助信息时代的大数据分析的优势，为患者量身设计个体化的靶向治疗方案。
精准医疗的目的是精准治疗，精准治疗的前提是针对分子靶点的精确诊断分型。
目前国际上白血病诊断通用的是细胞形态学(Morphology)、免疫学(Immunology)、细胞遗传学(Cytogenetics)和分子生物学(Molecular biology)分型，即我们常说的MICM分型方法。
随着分子诊断技术的日益发展和白血病分子标志物被发现，各种先进的分子诊断技术已应用于白血病诊断领域，白血病的诊断已从过去以形态为主的诊断体系，正逐步向以精确分子诊断为核心的个体化诊断体系发展。
随着细胞遗传学、流式细胞术免疫表型分析和第2代测序技术等新的诊断技术在临床的推广应用，血液病进入一个精确诊断时代。
这些技术在白血病的诊断、微小残留病的监测、预后判断及靶向治疗等方面发挥了重要的作用，有些已成为临床必需的常规检测项目。
正确解读这些新兴的诊断技术及方法，可指导临床医生合理、优化及针对患者量身定做找到每一个白血病发病原因及治疗方法。
一、细胞与分子遗传学检测1. 荧光原位杂交(fluorescece in situ hybridization，FISH)：是临床上的常规检测方法,是检测融合基因的金标准方法。
比常规的染色体核型分析要方便、准确和快速，它可检出一些常规染色体核型分析不易发现或有不明来源的标志染色体。
可检测平衡易位和微缺失;用于快速诊断、分类、治疗。
2. 多色荧光原位杂交(multiplex-FISH,M-FISH),多用以确定微小的染色体易位、来源不明的标记染色体和隐匿的染色体异位。
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意义：升高见于严重感染，类白，急淋，骨纤，真 红，再障，ITP,淋巴瘤等。
降低见于慢粒，急性粒细胞白血病，PNH。
故可用于慢粒和类白、骨纤；再障和PNH；急粒和急 淋的鉴别。
• 6、糖原染色（PAS）：
油滴有无及分度。 • 2、粒细胞系统、红细胞系统、淋巴细胞系
统、单核细胞系统、巨核细胞系统、浆细胞系 统以及其他细胞（网状细胞、内皮细胞、纤维 细胞、成骨细胞、破骨细胞、组织嗜碱细胞、 退化细胞等）的形态及比例。血小板的情况。 • 3、骨髓小粒 • 4、有无转移瘤和寄生虫。
骨髓病理检测：在高倍镜下观察骨髓的组织结构 和各成分的分布及相互关系。
者阳性，后者为阴性。 • 2、多毛细胞白血病为阳性反应，且耐L-酒石
酸的抑制作用。淋巴肉瘤细胞和慢性淋巴细胞 白血病的淋巴细胞，酸性磷酸酶染色也呈阳性 反应，但此酸可被L-酒石酸抑制。 • 3、T淋巴细胞呈阳性反应，而B淋巴细胞为阴 性反应。
• 8、铁染色（Fe染色）：阳性为淡绿色。
• 细胞内铁观察有核红细胞； • 细胞外铁观察骨髓小粒及网状细胞。
• （3）帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞，巨核细胞呈强阳 性反应；霍奇金细胞呈弱阳性或阴性反应。
• （4）帮助鉴别白血病细胞和腺癌骨髓转移的腺癌细胞，腺癌细 胞呈阳性反应。
• 7、酸性磷酸酶染色（ACP）：阳性酶活
性部位出现红色沉淀，胞核为蓝色。 • 意义：1、鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞，前
• 阳性为红色。可以计算阳性率和阳性指数。
• 意义：（1）正常情况下，红细胞系统的原、
• 幼红细胞和成熟红细胞；粒细胞系统的原粒细胞、
• 原单核细胞和大多数淋巴细胞为阴性反应。自早幼粒
• 阶段以后的粒细）急淋、红白血病、戈谢病的原始细胞呈强阳性反应或阳性 反应；缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍、MDS亦可呈阳性反应； 急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、良性淋巴细胞增多症、 尼曼-皮克细胞呈阴性反应或弱阳性反应。巨幼细胞性贫血、溶 血性贫血、再生障碍性贫血等幼红细胞为阴性反应。偶有个别幼 红细胞呈阳性反应。
• 诊断不明确：取材部位是否有病灶 • 保存液：10%福尔马林固定
二、细胞组织化学染色
• 以形态学为基础，运用化学或生物化学 技术研究细胞内化学成分的分布及变化 的检测方法。对某些血液病的诊断、鉴 别诊断、疗效、判断预后有一定的意义。
• 常用的细胞化学染色有：
• 1、过氧化酶又称髓过氧化酶 (Myeloperoxidase，MPO或POX) ： 阳性为棕黑色。用于急性白血病的鉴别： 急性粒细胞白血病为阳性，其中M3为强 阳性，急性单核细胞白血病为弱阳性， 急性淋巴细胞白血病为阴性。
• 2、非特异性酯酶（NSE）：包括中性 非特异性酯酶（α-NAE，棕黑色）、酸 性非特异性酯酶（A-NAE，棕红色）， 碱性非特异性酯酶（ α-NBE，棕红 色） 。
• 意义：急性单核细胞白血病强阳性，且 能被氟化钠抑制。急性粒细胞白血病弱 阳性或阴性，不被氟化钠抑制。
• 3、特异性酯酶（SE）：阳性红宝石色 颗粒。
• 意义： • （1）铁低见于缺铁性贫血； • （2）铁高见于再生障碍性贫血、巨幼红细胞性贫血、
白血病、感染和多次输血病人 ； • （3）环形铁粒幼细胞（RS），环铁大于15%， 见于
RAS。
铁粒幼红细胞定义
三、免疫分型
应用：1、确定系来源：利用不同系有特定的抗原表达可以确定髓 系/B系/T/NK系/组织细胞和树突状细胞。
骨髓活检和骨髓/血涂片
骨髓/血涂片
骨髓活检
• 骨髓涂片细胞细微结构清楚
• 骨髓活检显示骨髓的组织结构和各
评估红系、粒系增生情况及幼稚
成分的分布及相互关系，对巨核细
细胞比例具有优势
胞的评估具有优势
• 骨髓纤维化、细胞致密可干抽 • 不存在干抽和骨髓稀释
• 可做组织化学染色（如铁染） • 可做免疫组织化学染色
• 意义：急性粒细胞白血病阳性或强阳 性。急性单核细胞白血病阴性。慢粒急 粒变阳性增强。
• 4、苏丹黑B染色（SBB）：阳性为黑色。 • 意义：和POX基本一样。
• 5、中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）：阳性为灰黑色或黑
色。计算阳性率和积分值：
• 阳性率：计数100个中性杆状核和分叶核粒细胞，观察其阳性细 胞的个数，即为阳性率。(正常值＜40%)
• 对缺铁性贫血、慢性疾病引起的 • 对再生障碍性贫血、低增生性白血
贫血、巨幼细胞性贫血、和急性
病、淋巴瘤、转移癌、骨髓增生性
白血病的诊断尤其有帮助。
肿瘤的诊断具有重要价值
骨髓涂片看细胞、骨髓活检看结构，相互补充相互验证不能相互替代
• 血凝块：废物利用、骨髓活检的补充
骨髓活检常见问题
• 标本取材条件：要求穿刺1 cm以上骨髓组 织
MICM检测在恶性血液病中的 运用
曾雁玲
背景介绍
血液病是原发于造血系统的疾病，或影响造血系统伴发 血液异常改变，以贫血、出血、发热为特征的疾病。
白细胞 疾病
造血系统 恶性肿瘤
常见血液病
贫血症
出血性疾 病
恶性血液病类型
多发性骨髓瘤（MM） 慢性髓系白血病（CML） 急性髓系白血病（AML） 慢性淋巴系白血病（CLL） 急性淋巴系白血病（ALL） 骨髓增殖性肿瘤（MPN） 骨髓增生异常综合征（MDS）
检测方法
MICM
• FAB形态学诊断(Morphology)：包括血 液和骨髓形态学及组织化学染色。
• 免疫学检查(Immunology ) • 遗传学检查(Cytogenetics) • 分子生物学检查(Molecular)
一、形态学
是诊断的基础，任何淋巴造血系统增生性 疾病的诊断都离不开形态学诊断。形态学诊断 技术包括
细胞学：外周血、骨髓涂片 组织学：骨髓活检、血凝块
• 外周血涂片检测（血液病血常规）：用 来观察外周血细胞形态、数量。是对血 液分析仪检测的血常规的镜下检测补充。
• 检测内容包括：白细胞如粒细胞、单核 细胞、淋巴细胞；红细胞；血小板。
• 骨髓涂片检测： • 1、骨髓增生程度，G:E，骨髓小粒及脂肪