方法验证试验的一般内容及要求

(完整word版)方法验证试验的一般内容及要求

方法验证试验的一般内容及要求---青岛科标检测方法验证一般要求：1.标准编制组应编制方法验证方案，根据影响方法的精密度和准确度的主要因素和数理统计学的要求，选择合适的实验室、样品类型、含量水平、分析人员、分析设备、分析时间等内容。

2.标准编制组除可以使用有证标准物质/标准样品外，还应提供实际样品进行方法验证，实际样品应尽量覆盖方法标准的适用范围。

3.在方法验证前，参加验证的操作人员应熟悉和掌握方法原理、操作步骤及流程，必要时应接受培训。

4.方法验证过程中所用的试剂和材料、仪器和设备及分析步骤应符合方法相关要求。

5.参加验证的操作人员及标准编制组应按照要求如实填写《方法验证报告》中的“原始测试数据表”，若有必要，应附上与该原始测试数据表内容相符的图谱或其他由仪器产生的记录打印条等。

6.标准编制组根据方法验证数据及统计、分析、评估结果，最终形成《方法验证报告》。

具体要求1.检出限的验证确定检出限，按方法操作步骤及流程进行分析操作，计算结果的平均值、标准偏差、相对标准偏差、检出限等各项参数。

最终的方法检出限为各验证实验室所得数据的最高值。

2.精密度的验证有证标准物质/标准样品的测定：采用高、中、低3 种不同含量水平（应包括一个在测定下限附近的浓度或含量）的统一样品，每个样品平行测定6 次以上，分别计算不同浓度或含量样品的平均值、标准偏差、相对标准偏差等各项参数。

实际样品的测定：各验证实验室应对1 ～3 个含量水平的同类型样品进行分析测试，按每个样品平行测定6 次以上，分别计算不同样品的平均值、标准偏差、相对标准偏差等各项参数。

对各验证实验室的数据进行汇总统计分析，计算实验室间相对标准偏差、重复性限r 和再现性限R。

3.准确度的验证若各验证实验室使用有证标准物质/标准样品进行分析测定确定准确度，则需对1 ～3个不同含量水平的有证标准物质/标准样品进行测定，按全程序每个有证标准物质/标准样品平行测定6 次以上，分别计算不同浓度或含量水平有证标准物质/标准样品的平均值、标准偏差、相对误差等各项参数。

(完整版)检验方法验证标准操作规程.

标准操作规程STANDARD OPERATING PROCEDURE目的：建立检验方法验证标准操作规程，规范验证操作。

适用范围：所有检验方法的验证。

责任者：质量保证部、质量控制部程序：1、检验方法验证的基本内容检验方法验证的基本内容包括方案的起草及审批，检测仪器的确认．适用性验证(包括准确度试验、精密度测定．线性范围试验、专属性试验等)和结果评价及批准四个欠的方面。

它的基本内容可以用下图表示。

2、检验方法验证的基本步骤首先是制定验证方案，然后对大型精密仪器进行确认，最关键的一步是检验方法的适用性试验，最后是检验方法评价及批准。

2．1验证方案的制定检验方法的验证方案通常由质量验证小组提出。

根据产品的工艺条件、原辅料化学结构、中间体、分解产物查阅有关资料，提出规格标准，确定检查项目，规定杂质限度，即为质量标准草案。

根据质量标准草案确定检查和试验范围，对检验方法拟定具体操作步骤，最后经有关标题检验方法验证标准操作规程共7页第1页制定人颁发部门GMP办公室编号： SOP--F—004分发部门质量验证小组、质量保证部新订√替代审核人批准人生效日期年月日人员审批方可实施。

2．2大型精密仪器的确认分析测试中所用的检测仪器一般可分为三类(1)普通仪器：崩解仪，折光仪、分析天平、酸度计、溶点测定仪、电导仪等：(2)较精密仪器：旋光仪、永停滴定仪、费休氏水分测定仪、自动滴定仪、药物溶出度仪、可共7页第2页见分光光度计、电泳仪等；(3)大型精密仪器：紫外分光光度计、红外分光光度计、气相色谱仪、高效液相色谱仪、薄层扫描仪等。

为了保证分析测试数据准确可靠，每台检测仪器在投入正式使用之前都应进行确认。

检测仪器的确认是检验方法验证的基础，应在其它验证试验开始之前首先完成。

检测仪器确认工作内容应根据仪器类型。

技术性能而定，通常包括：安装确认、校正、适用性预试验和再确认。

2．2．1安装确认同工艺验证中机械设备一样，仪器安装确认的土要内容包括如下各点：(1)要登记仪器名称．型号。

分析方法验证

新药申报时，药品质量标准中分析方法必须验证；药物生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法必须进行验证。

一、分析方法学验证事项药物分析检验时药品生产的GMP的药物分析的方法学验证，是保证药物分析结果准确性的前提和基础，也是实现药物分析检测GMP的必然要素。

构成药物分析中的检测方法验证，这要涉及到以下些方面的内容：1、分析方法验证成功的前提条件：（1）仪器已经确认、校正并在有效期内（2）经过培训的人员（3）可靠稳定的对照品（4）可靠稳定的实验试剂（5）确认受试溶液的稳定性，在规定时间内无降解。

2、分析方法学验证所要求验证的内容：（1）含量的测定（2）杂质的含量测定（3）药物的定性鉴定（4）药物的含量均匀度测定（5）药物的微生物检测（6）药物的细菌内毒素的检测验证内容准确度：准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。

测定回收率R（recovery）的具体方法可采用加样回收试验法来进行测定。

加样回收试验已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。

数据要求:规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次精密度：（重复性、中间精密度和重现性精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。

用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。

（1）重复性(repeatability):在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价（2）中间精密度同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度（3）重现性(reproducibility)不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度（4）数据要求：需报告SD，RSD和可信限。

检验方法验证规程

目的:检验方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。

适用范围:在制定药品质量标准时所采用的检验方法应验证，药物生产方法变更、制剂组分变更、原检验方法进行修订时，检验方法应进行再验证。

责任者:化验室、研究开发实验室内容:1.验证项目药品检验方法包括化学检验、生物测定和仪器分析三种。

验证项目应包括：鉴别试验；杂质定量或限度检查；制剂中其他成分(如降解产物、防腐剂等)测定；有效成分含量测定；溶出度释放度检查中溶出量的测试方法。

2.一般步骤2.1方案的起草及审批通常由研究开发实验室提出，检验实验室会签，根据产品工艺条件、原辅料化学结构、中间体、分解产物查阅有关资料提出规格标准，确定检查项目，规定杂质限度和操作步骤，并经有关领导审批方可实施。

2.2仪器的确认验证过程中所用的仪器设备均应校验，对于新的大型精密仪器应进行确认，确保测试数据的准确可靠。

大型精密仪器应制定确认方案，经安装确认、运行确认符合要求，有关领导批准确认报告后方可投入使用。

2.3适用性试验适用性试验内容包括：准确度试验、精密度测定、线性范围试验、选择性试验、检测限等。

2.3.1准确度试验准确度是指测量值与真值接近的程度，测量值与真值愈接近，测量值的误差愈小，测量就愈准确。

在准确度试验中可用对照试验、回收试验和空白试验三种方法。

准确度通常用回收率表示。

原料含量测定方法的准确度一般用已知含量的对照品或标准品作样品，以所用的方法对它进行定量测定，从分析结果与标准样品或纯净物的含量差值就可知道误差。

制剂含量测定方法的准确度一般用已知含量的原料和处方中相应的辅料按比例模拟配制成制剂进行测定。

杂质定量测定方法的准确度一般用加入已知量杂质进行测定，应能明确证明单一杂质或杂质总量相当于主成分的重量百分比。

在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，如制备3个不同浓度的样品，各测定3次，或把被测物浓度当作100%，用至少测定6次的结果进行评价。

2.3.2精密度测定精密度系指在规定的测试条件下，用同一方法对某一成份进行多次测定，所测得值彼此符合的程度，所以也称重现性，测定值彼此愈接近，测量值的偏差愈小，测量就愈精密。

分析方法的方法学验证

一、方法验证1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。

验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。

可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。

2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。

具体的验证方法为：在80％至120％的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。

以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。

可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。

3．精密度 1）重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。

2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。

4．专属性可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。

以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。

5．检测限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。

6．定量限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。

另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。

7．耐用性分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20％时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。

可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%。

8、系统适应性配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。

HPLC分析方法验证指导原则

HPLC分析方法验证指导原则产品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。

在建立产品质量标准时，分析方法需经验证；在产品生产工艺变更、配方的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。

方法验证理由、过程和结果均应记载在产品标准起草说明或修订说明中。

需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量检查或限度检查，有效成分含量测定，以及其他成分（如防腐剂等）的测定。

验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。

视具体方法拟订验证的内容。

附表中列出的分析项目和相应的验证内容可供参考。

方法验证内容如下：一、准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。

准确度应在规定的范围内测试。

1．含量测定方法的准确度原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。

制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。

如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。

如该分析方法已经测试并求出了精密度、线性和专属性，在准确度也可推算出来的情况下，这一项可不必再做。

2．杂质定量测定的准确度可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。

如不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。

在不能测得杂质或降解产物的响应因子或对原料药的相对响应因子情况下，可用原料药的响应因子。

应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（%）或面积比（%）。

3．数据要求在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价，例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。

应报告已知加入量的回收率（%），或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差或可信限。

分析方法验证

分析方法验证一、原则1.本附件介绍了进行分析方法验证应考虑的特性。

可以采用并接受本附件未规定的其他方法。

生产企业应选择最适合检验其产品的验证方案和规程。

2.生产企业（通过验证）证明检验规程适用于其使用目的。

3.分析方法不管其是否能显示稳定性，都应经过验证。

4.必要时，分析方法在转移到质量控制部门前应由研发部门验证。

二、总体要求1.物料和成品两者都应有质量标准。

所要进行的测试应在标准检验方法的文件中有规定。

2.可使经过国家药监部门批准的药典收载的质量标准和标准检验方案（“药典方法”），或专门研发的质量标准或检验方法（“非药典方法”）。

3.应在验证研究中使用特性良好、纯度有文件记录的对照品。

4.最常见的检验规程包括鉴别试验、原料药和成品的含量、杂质含量的定量检测和杂质限度检测。

其他检验规程包括溶出度试验和粒径测试。

5.检验规程的结果应可靠、准确并可重现。

分析方法应经过验证。

6.核实或再验证应在例举的相关情况时进行，如原料药合成工艺变更、制剂成品的组分变更、检验规程变更、分析方法从一个实验室转移到另一个实验室、主要设备仪器变更。

7.核实或再验证的程度取决于变更的性质。

8.应有证据证明，负责某些检测的检验人员具有适当的资质来进行这些分析（检验人员的熟练性）。

三、药典方法1.采用药典方法时，应有证据证明，在实验室中该方法适用于常规检验。

2.用于检测原料药杂质含量的药典方法，也应证明对相关被检验的物质是专属的（无空白干扰）。

四、非药典方法非药典方法应恰当地经过验证。

五、分析方法验证1.应根据验证方案实施验证，方案应包括规程和所有方面的可接受标准。

结果应在检验报告中有文件记录。

2.如有药典方法但使用非药典方法时，应进行评估。

评估应包括与药典方法或其他方法对比的数据。

3.标准检验方法应有详细说明，并提供足够的信息，能使经过正确培训的检验人员可靠地进行检验。

说明的内容至少应包括色谱条件（如系色谱检验）、所需的试剂、对照品、结果计算的公式和系统适应性试验。

实验室认可如何进行方法验证

实验室认可如何进行方法验证检验方法验证的基本内容包括方案的起草及审批，检测仪器的确认。

适用性验证（包括准确度试验、精密度测定、线性范围试验、专属性试验等）和结果评价及批准四个的方面。

首先是制定验证方案，然后对大型精密仪器进行确认，最关键的一步是检验方法的适用性试验，最后是检验方法评价及批准。

1、验证方案的制定检验方法的验证方案通常由质量验证小组提出。

根据产品的工艺条件、原辅料化学结构、中间体、分解产物查阅有关资料，提出规格标准，确定检查项目，规定杂质限度，即为质量标准草案。

根据质量标准草案确定检查和试验范围，对检验方法拟定具体操作步骤，最后经有关人员审批方可实施。

2、大型精密仪器的确认分析测试中所用的检测仪器一般可分为三类：A、普通仪器：崩解仪，折光仪、分析天平、酸度计、溶点测定仪、电导仪等;B、较精密仪器：旋光仪、永停滴定仪、费休氏水分测定仪、自动滴定仪、药物溶出度仪、可见分光光度计、电泳仪等；C、大型精密仪器：紫外分光光度计、红外分光光度计、气相色谱仪、高效液相色谱仪、薄层扫描仪等。

为了保证分析测试数据准确可靠，每台检测仪器在投入正式使用之前都应进行确认。

检测仪器的确认是检验方法验证的基础，应在其它验证试验开始之前首先完成。

检测仪器确认工作内容应根据仪器类型。

技术性能而定，通常包括：安装确认、校正、适用性预试验和再确认。

3、校正校正是仪器确认及检验方法验证中的一个重要环节，应当在验证试验以前进行校正。

紫外分光光度计校正包括波长校正、吸收度测试、准确度测试、杂散光检查。

气相色谱仪与高效液相色谱仪均要求做系统适用性试验。

在规定的色谱条件下测定色谱柱的最小理论塔板数。

分离度和拖尾因子，并规定变异系数应不大于2％。

对于化学检验中使用的计量仪器包括容量瓶、移液管、滴定管、分析天平亦均应校正。

4、适用性预试验仪器的安装确认完成以后，在其功能试验符合要求的情况下，应用标准品或对照品对其进行适用性检查，以确认仪器是否符合使用要求。

分析方法的验证

耐用性
耐用性系指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。一般开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。经试验，应说明小的变动能否符合系统适用性试验要求，以确保方法有效。如果通过耐用性研究发现分析方法对某个或某些测试条件敏感或要求苛刻，则建议在方法中予以写明。
耐用性
典型影响耐用性的变动因素 1. 被测溶液的稳定性 2. 液相色谱法(HPLC)中的典型影响耐用性的变动因素（流动相的组成、流动相的pH值、不同品牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等）
再验证
当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证当质量标准中某一项目分析方法发生部分改变时，如HPLC测定含量时，检测波长发生改变，则需要相应的验证，证明修订后分析方法的合理性、可行性。
再验证
再验证原则：根据改变的程度进行相应的再验证。当这种改变到达一定程度时，则需要完整的验证。如分析方法完全改变时，则应视为新方法并需要完整的验证。方法再验证是对分析方法的完善过程，应根据实际改变情况进行再验证，从而保证所采用的分析方法的可靠性。
准确度-原料药含量测定准确度原料药含量测定
方法1：用已知纯度的对照品或供试品进行测定。方法2：用本法所得结果与已知准确度的另一 2 方法测定的结果进行比较如：测定含量的准确度, 按标示量的80%, 100%和120%配制三个浓度的溶液，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。根据测定结果与配制浓度计算出平均回收率以及相对标准偏差。
耐用性---溶液的稳定性研究
溶液的稳定性研究：用来证明样品溶液和标准品溶液在规定的储存条件下在一定时间内保持稳定。如果方法中没有规定有效期，样品溶液和标准品溶液需进行稳定性研究。研究方法：配制好的样品溶液和标准品溶液，在室温或其他条件下（如冰箱2-8°C ）储存适当的时间。每个间隔点，用新鲜配制的标准品溶液做对照，测定储存的样品溶液和标准品溶液。测定结果与初始结果进行比较，符合接受标准便可确认样品溶液和标准品溶液在规定的储存条件下在规定储存时间是稳定的。

检测机构：扩项必备的方法验证内容及流程

检测机构：扩项必备的方法验证内容及流程一、检验方法验证的基本内容检验方法验证的基本内容包括方案的起草及审批，检测仪器的确认。

适用性验证（包括精准度试验、精密度测定、线性范围试验、专属性试验等）和结果评价及批准四个的方面。

二、检验方法验证的基本步骤首先是订立验证方案，然后对大型精密仪器进行确认，最关键的一步是检验方法的适用性试验，最后是检验方法评价及批准。

1、验证方案的订立检验方法的验证方案通常由质量验证小组提出。

依据产品的工艺条件、原辅料化学结构、中心体、分解产物查阅有关资料，提出规格标准，确定检查项目，规定杂质限度，即为质量标准草案。

依据质量标准草案确定检查和试验范围，对检验方法拟定实在操作步骤，最后经有关人员审批方可实施。

2、大型精密仪器的确认分析测试中所用的检测仪器一般可分为三类：A、一般仪器：崩解仪，折光仪、分析天平、酸度计、溶点测定仪、电导仪等；B、较精密仪器：旋光仪、永停滴定仪、费休氏水分测定仪、自动滴定仪、药物溶出度仪、可见分光光度计、电泳仪等；C、大型精密仪器：紫外分光光度计、红外分光光度计、气相色谱仪、高效液相色谱仪、薄层扫描仪等。

为了保证分析测试数据精准牢靠，每台检测仪器在投入正式使用之前都应进行确认。

检测仪器的确认是检验方法验证的基础，应在其它验证试验开始之前首先完成。

检测仪器确认工作内容应依据仪器类型。

技术性能而定，通常包括：安装确认、校正、适用性预试验和再确认。

3、校正校正是仪器确认及检验方法验证中的一个紧要环节，应当在验证试验以前进行校正。

紫外分光光度计校正包括波长校正、吸取度测试、精准度测试、杂散光检查。

气相色谱仪与高效液相色谱仪均要求做系统适用性试验。

在规定的色谱条件下测定色谱柱的最小理论塔板数。

分别度和拖尾因子，并规定变异系数应不大于2%。

对于化学检验中使用的计量仪器包括容量瓶、移液管、滴定管、分析天平亦均应校正。

4、适用性预试验仪器的安装确认完成以后，在其功能试验符合要求的情况下，应用标准品或对比品对其进行适用性检查，以确认仪器是否符合使用要求。

药品质量标准分析方法验证的内容有

体内药分作业J药剂0901 3091158012 钱晨药品质量标准分析方法验证的内容有：准确度，精密度(包括重复性，中间精密度和重现性)，专属性，检测限，定量限，线性，范围和耐用性。

一、专属性1、体内：必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，内源性物质和相应的代谢物不得干扰样品的测定。

对于色谱法至少要提供空白生物样品色谱图，空白生物样品外加对照色谱图记用药后的生物样品色谱图。

对于复方制剂应特别加强专属性研究，以排除可能的干扰。

2、体外：专属性系指在其他成分（如杂质，降解产物，辅料等）可能存在的情况下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。

鉴别反应，杂质检查和含量测定方法，均应考察专属性。

如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。

A、鉴别反应应能与可能共存的物质或结构相似的化合物区分。

不含被测物成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，应均呈负反应。

B、含量测定和杂质测定色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明方法的专属性，并标明诸成分在图谱中的位置，色谱中的分离应符合要求。

二、标准曲线和线性范围1、体内：根据所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法获得标准曲线。

标准曲线高低浓度范围为线性范围，在线性范围内浓度测定结果应达到实验要求的精密度和准确度。

必须用至少6个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相同的生物介质，线性范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将线性范围外推求算未知样品的浓度。

标准曲线不包括零点。

标准曲线上各浓度点的实测值与标示值的偏差（bias）在可接受范围内时，可判定标准曲线合格。

回归值系将各浓度点的响应值代人标准曲线计算所得的浓度值；标示值系指制备标准曲线时，各相应浓度点的配制浓度，标准曲线上各浓度点偏差的可接受范围一般规定为：最低浓度点的偏差在±20%以内，在其余各浓度点的偏差在±15%以内。

只有合格的标准曲线才能用于临床待测样品的浓度计算。

当线性范围较宽时，推荐采用加权最小二乘法（weighted least square method）进行同归计算2、体外：线性是只在设计范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

(完整版)检验方法验证标准操作规程.

标准操作规程STANDARD OPERATING PROCEDURE目的：建立检验方法验证标准操作规程，规范验证操作。

适用范围：所有检验方法的验证。

责任者：质量保证部、质量控制部程序：1、检验方法验证的基本内容检验方法验证的基本内容包括方案的起草及审批，检测仪器的确认．适用性验证(包括准确度试验、精密度测定．线性范围试验、专属性试验等)和结果评价及批准四个欠的方面。

它的基本内容可以用下图表示。

2、检验方法验证的基本步骤首先是制定验证方案，然后对大型精密仪器进行确认，最关键的一步是检验方法的适用性试验，最后是检验方法评价及批准。

2．1验证方案的制定检验方法的验证方案通常由质量验证小组提出。

根据产品的工艺条件、原辅料化学结构、中间体、分解产物查阅有关资料，提出规格标准，确定检查项目，规定杂质限度，即为质量标准草案。

根据质量标准草案确定检查和试验范围，对检验方法拟定具体操作步骤，最后经有关标题检验方法验证标准操作规程共7页第1页制定人颁发部门GMP办公室编号： SOP--F—004分发部门质量验证小组、质量保证部新订√替代审核人批准人生效日期年月日人员审批方可实施。

2．2大型精密仪器的确认分析测试中所用的检测仪器一般可分为三类(1)普通仪器：崩解仪，折光仪、分析天平、酸度计、溶点测定仪、电导仪等：(2)较精密仪器：旋光仪、永停滴定仪、费休氏水分测定仪、自动滴定仪、药物溶出度仪、可共7页第2页见分光光度计、电泳仪等；(3)大型精密仪器：紫外分光光度计、红外分光光度计、气相色谱仪、高效液相色谱仪、薄层扫描仪等。

为了保证分析测试数据准确可靠，每台检测仪器在投入正式使用之前都应进行确认。

检测仪器的确认是检验方法验证的基础，应在其它验证试验开始之前首先完成。

检测仪器确认工作内容应根据仪器类型。

技术性能而定，通常包括：安装确认、校正、适用性预试验和再确认。

2．2．1安装确认同工艺验证中机械设备一样，仪器安装确认的土要内容包括如下各点：(1)要登记仪器名称．型号。

分析方法验证及确认管理规程

文件制修订记录1.目的: 制定分析方法验证及确认的管理规程。

2. 范围: 适用于分析方法的验证及确认。

3. 责任: QC检测员，QC主管。

4. 内容：4.1 方法验证方法验证就是根据检验项目的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法是都符合检验项目的要求。

4.1.1 方法验证的一般原则通常情况下，分析方法需进行方法验证。

对于仅需按照实验室日常测试操作步骤即可测定的检验项目不需要进行验证，如外观、崩解时限、密度、重量、pH值、灰分、装量等。

方法学验证的内容应根据检验项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。

同一分析方法用于不同的检验项目会有不同的验证要求。

4.1.2 需要验证的检验项目检验项目是为控制药品质量，保证药品安全有效而设定的测试项目，根据检验项目的设定目的和验证内容的不同要求，需验证的检验项目分为四类：1. 鉴别试验；2. 杂质的限度检查；3. 杂质的定量测定；4. 含量测定，包含原料药或制剂中有效成分的含量，制剂中其他成分（如防腐剂等）的含量，溶出度与释放度等检查中的溶出量。

以及含量均匀度。

除此之外还有一些物理项目的检测如粒径分布、旋光度、熔点和硬度，其要求与其他检验项目有所不同，通常其分析方法验证应有不同的要求。

鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其他物质。

用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性和耐用性。

杂质检查主要用于控制主成分意外的杂质，如无机杂质、有机杂质等。

杂质检查分为限度检查和定量测定这两部分。

用于限度检查的分析方法验证侧重专属性、检测限和耐用性。

用于定量测定的分析方法验证强调专属性、准确度、精确度、线性、范围、定量限和耐用性。

含量测定对准确度要求较高，因此所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性要求。

《中国药典》2010年版中规定了不同的检验项目需要验证不同的内容，详见表一：表一验证项目和验证内容备注：1. *：已有重现性验证，不需验证中间精密度；2. **：如一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充；3. ***：视具体情况予以验证；4. “是”代表该项内容需要验证，“否”代表该项内容不需要验证。

方法验证的具体内容

验证内容：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。

一、准确度：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以百分回收率表示。

至少用9次测定结果进行评价。

二、精密度：是指在规定的条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度。

用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

1、重复性：相同条件下，一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。

至少9次。

2、中间精密度：一个实验室，不同时间不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。

3、重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。

分析方法被法定标准采用应进行重现性试验。

三、专属性：指在其他成分可能存在的情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性，用于复杂样品分析时相互干扰的程度。

鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，圴应考察专属性。

四、检测限：指试样中被测物能被检测出的最低量，无须定量。

用百分数、ppm或ppb 表示。

五、定量限：指样品中被测物能被定量测定的最低量，测定结果应具一定的精密度和准确度。

六、线性：系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

七、范围：能达到一定的精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

八、耐用性：指在一定的测定条件稍有变动时，测定结果不受影响的承受程度。

方法验证内容如下。

一、准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。

准确度应在规定的范围内测试。

1．含量测定方法的准确度原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。

制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。

如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。

如该分析方法已经测试并求出了精密度、线性和专属性，在准确度也可推算出来的情况下，这一项可不必再做。

药物分析的方法学验证所要做到的事项

药物分析的方法学验证所要做到的事项（一）新药申报时，药品质量标准中分析方法必须验证；药物生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法必须进行验证；2005版药典中分析方法验证指导原则只规定了项目和基本方法而没有合格标准:附录XIX A；中国GMP(98)非常关注验证的过程,分析方法验证不完善是常见的问题药物分析检验时药品生产的GMP的药物分析的方法学验证，是保证药物分析结果准确性的前提和基础，也是实现药物分析检测GMP的必然要素。

构成药物分析中的检测方法验证，这要涉及到以下些方面的内容：1、分析方法验证成功的前提条件：（！）仪器已经确认、校正并在有效期内（2）经过培训的人员（3）可靠稳定的对照品（4）可靠稳定的实验试剂（5）确认受试溶液的稳定性，在规定时间内无降解。

2、分析方法学验证所要求验证的内容：（1）含量的测定（2）杂质的含量测定（3）药物的定性鉴定（4）药物的含量均匀度测定（5）药物的微生物检测（6）药物的细菌内毒素的检测验证内容：准确度：准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。

测定回收率R（recovery）的具体方法可采用加样回收试验法来进行测定。

加样回收试验已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。

数据要求:规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次精密度：（重复性、中间精密度和重现性精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。

用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。

（1）重复性(repeatability):在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价（2）中间精密度同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度（3）重现性(reproducibility)不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度（4）数据要求：需报告SD，RSD和可信限。

检验方法验证的类型及基本要求

检验方法验证的类型及基本要求（一）概述方法验证的目的是证明所采用的方法达到相应的检测要求。

由于分析性质的差异，本节中所讨论的验证内容不适用微生物分析方法。

验证的内容主要包括准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、粗放性和耐用性9个方面。

药典收载的方法一般比较成熟，需验证的内容与新开发的检验方法有很大差异，美国药典中明确规定其所收载的方法需做系统适应性试验，这即是美国药典对方法验证的要求。

某一方法需到底须进行哪些项目的验证，应根据实际情况而定，并不是所一的方法都必需进行以上9个方面的验证试验。

方法验证的范围，一般来说，可分为以下3种情况区别对待。

1、对于直接引用有法定依据的方法，如药典标准和部颁标准，仅做系统适应性试验即可。

但若将法定方法用于测定新药，或将某一品种的法定方法用于另一品种，就需进行系统的方法验证。

2、对于已在一实验室验证过但需在另一个实验室使用的分析方法，可采用对照试验法。

即取同一批样品，按此方法在两实验室分别进行检验，将结果进行比较（如用t检验法计算），判断是否有显著性差异。

这特别适用于大公司（包括跨国公司）的情况。

母公司完成了系统的方法验证工作，子公司实验室均可用结果对照的方法进行判断，节省了大量人力、物力。

国外称这种做法为“技术转移”（Technical transfer）。

3、其他分析方法可分为4种类型，验证要求可参见下表不同分析方法的验证要求验证项目类型类型I 类型II 类型III 类型IV定量测定限度试验准确度要求要求 * * ——精密度要求要求——要求——专属性要求要求要求 * 要求检测限————要求 * ——定量限——要求—— * ——线性要求要求—— * ——范围要求要求 * * ——注：“——”表示不坐要求；“*”表示需根据实验特性决定是否坐要求。

类型I指用于测定原料药中主要成分或制剂中活性组分（包括防腐剂）的定量分析方法。

类型II指用于测定原料药中杂质或制剂中降解产物的分析方法，包括定量分析和限度试验。

方法验证的具体内容概述

验证内容：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。

一、准确度：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以百分回收率表示。

至少用9次测定结果进行评价。

二、精密度：是指在规定的条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度。

用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

1、重复性：相同条件下，一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。

至少9次。

2、中间精密度：一个实验室，不同时间不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。

3、重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。

分析方法被法定标准采用应进行重现性试验。

三、专属性：指在其他成分可能存在的情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性，用于复杂样品分析时相互干扰的程度。

鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，圴应考察专属性。

四、检测限：指试样中被测物能被检测出的最低量，无须定量。

用百分数、ppm或ppb 表示。

五、定量限：指样品中被测物能被定量测定的最低量，测定结果应具一定的精密度和准确度。

六、线性：系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

七、范围：能达到一定的精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

八、耐用性：指在一定的测定条件稍有变动时，测定结果不受影响的承受程度。

方法验证内容如下。

一、准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。

准确度应在规定的范围内测试。

1．含量测定方法的准确度原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。

制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。

如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。

如该分析方法已经测试并求出了精密度、线性和专属性，在准确度也可推算出来的情况下，这一项可不必再做。

分析验证方案及要求

分析验证⽅案及要求分析⽅法验证⽅案及要求⽬的：各项⽬验证⽅案相对同⼀，并达到相应要求。

适⽤范围：适⽤于起始原料、原料药和制剂的有关物质、异构体、含量、溶出度和残留溶剂的⽅法验证。

1.参考标准及参考⽂献参考标准：USP/BP/EP/JP/CP 国标部标/进⼝注册标准符合说明/其他参考标准/参考⽂献等，并分析判断。

资料中结果和⽅案尽量以表格形式列出。

⼩数位数：所有有关物质百分含量计算过程中保留⼩数后3位，最终结果保留⼩数后2位。

如果样品特别纯，最⼤杂质也在0.01%以下，则最终结果保留⼩数后3位。

（四舍五⼊保留双）*每个项⽬各⾃始终重点保留好已知杂质（包括起始原料和中间体）、异构体、购买对照品（包括包装说明书空瓶）、⾃制对照品和粗品等。

2.1优化⽅法UV扫描（杂质可⽤DAD），确定波长、优化流动相、柱温、样品配制溶剂及浓度和进样量等。

粗品估计样品浓度（限度：限度浓度的对照溶液逢⾼⾄少⼤于LOQ两倍以上）。

模⽅法及⽅法波长不能完全确定时，可以选择双波长进⾏。

要求：优化流动相跟他每⼀个条件重复进样两针，写所有试验详细记录，注意问题讨论和结论。

图谱性能报告按有关物质放⼤⽐例打印。

最后资料体现⼏个代表性的优化过程及附图。

（⼏个参考⽅法列表，你⽐较优劣，如⽅法是在USP等法定或别的基础上优化的，则需有实验和图谱证明等同性或优越性。

并做1-n批的对⽐测试，证明结果相当）*原料和制剂报告限度、鉴定限和控制限的算法。

原料制剂中降解的未知组分超过鉴定限和控制限应该排除分析上的问题后着⼿从⼯艺、原辅料质量和贮存条件等上下功夫解决。

2.2耐⽤性有专家说考察系统适应性溶液的耐⽤性即可。

建议在专属性前优化⽅法时就做（破坏试验之前），以更好的了解⽅法本⾝；建议⽤粗品做：为兼顾到含量的系统适应性溶液的配制，可以设计系统适应性溶液为“活性成分含量的浓度+有关物质限度的浓度”。

分别考察流动相的⽐例变化按相对⽐例±5%（注意梯度计算⽅法）、流动相缓冲盐的浓度按摩尔浓度的±10%，流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5°C、检测波长变化±5nm（如UV图半峰宽）⽐较⼩则±2nm）、流速相对值变化±20%（时间和分离度达不到则减⼩）以及采⽤三根柱⼦不同批号或不同品牌的⾊谱柱（最好是在精密度时做）进⾏测定时，仪器⾊谱⾏为的变化，每个条件下按⽅法的系统适⽤性溶液（研究时按已知杂质加样品）测试两次（有关物质耐⽤性：空⽩+系统适⽤性溶液2针）共6个数据；含量耐⽤性：除系统适⽤性溶液连续进样5针，计算RSD，最后总的RSD。

实验室方法验证方法及实例

定）
品粉末及溶液需要同时做。破坏后的样品溶液及空白溶剂均需调整至流
6、DAD 检测器下，水、1mol/l 动相 pH 方可进样，可避免对色谱柱产生不良影响。如果破坏超过 20%，酸、碱、氧（10%双氧水）、光需要降低破坏条件。照、高温破坏，各起始物料，中 5、分离度良好，测定无干扰，各峰峰纯度符合单峰要求。间体，辅料（制剂研究时需同时 6、梯度变化要有最高洗脱能力过程，目的证明所有的杂质成分均能够被进行空白辅料破坏）等成分分离。洗脱检测。
2. 2 更新版本的标准 CNAS－CL01: 2018 中规定，若发布机构修订了方法，应在所需的程度上重新进行验证。说法较为笼统，这一点可以参考 A002 化学领域的检测说明 :“当检测标准发生变更涉及到检测方法原理、仪器设施、操作方法时，需要通过技术验证重新证明正确运用新标准的能力”。对于实验室正在使用的标准方法下发新版本后，首先应对新旧版本的标准进行核查比对，明确变更内容; 必要时对人员进行重新培训，修订作业指导书。其次，符合 A002 中的说法时，应由技术管理者组织进行技术方面的验证。技术验证的重点是针对变更的项目，证明实验室仍能满足更新后的标准要求。第三，将新版标准和作业指导书( 如果有) 下发至检测现场，同时注意回收旧版标准; 下发通知，明确新版标准的投入使用时间。
3、 DAD 检测器下，波长选择主 3、续滤液峰面积达稳定最大值，续滤液体积在 5ml 以下时较为适宜，否
成分最大吸收或平台处。
则需要重新筛选溶剂。
4、分离条件选择；
4、破坏程度 10%左右（5%—15%）为宜，2mol/l 酸或碱 90℃水浴 12 小
5、色谱柱对比；（根据情况酌时无破坏即视为样品稳定，不必再追求降解度。4500lx 光照 48 小时，样

方法学验证要求

检测方法的验证订入质量标准的含量测定法不同于一般质量考察的方法，须经过严格的方法学验证，不同原理的测定法具有不同的验证内容及要求：（1）容量分析法的验证：①精密度：用原料药精制品考察方法精密度，平行试验5个样本RSD≤0.2%；②准确度：以测定原料精制品（含量>99.5%）的回收率（测定值与理论值的比值）计算，应在99.7%～100.3%之间（n＝5,RSD≤0.1%）；③滴定终点确定的依据：包括滴定曲线的绘制，如用指示剂法确定终点，应用电位法校准终点颜色，提供指示剂颜色与电位变化情况的对比结果；④耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、样品提取次数、时间等）有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时则应在方法中注明。

（2）HPLC法的验证：①精密度：RSD≤2%（n＝5）；②准确度：用于制剂时，要考察辅料的影响，将一定量药物加到按处方比例配制的辅料中（为标示量的80%～120%）制成高、中、低三个剂量，混合均匀后，每个剂量取三份样品，按拟定方法测定回收率，应在98%～102%之间（n＝9, RSD≤2%）。

③线性范围：用已知含量的精制品配制一系列浓度的溶液（n＝5～7），用浓度C对峰面积A 或峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，线性方程的相关系数r≥0.999，截距应趋于零，并提供线性关系图；④专属性：辅料、有关物质或降解产物峰对主药峰应无干扰；⑤耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、流动相组成和pH 值、不同品牌或批号的同类色谱柱、柱温、流速、样品提取次数、时间等）有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时则应在方法中注明；⑥灵敏度：作为常量分析法，此项可不作主要要求。

（3）UV法的验证：①精密度：RSD≤1%（n＝5）；②准确度：方法同HPLC 法，回收率应在98%～102%之间（n＝9, RSD≤2%），同时要求辅料、有关物质或降解产物在测定波长处无吸收。