霍乱弧菌的微生物学诊断检查方法

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霍乱弧菌ppt参考课件

霍乱弧菌ppt参考课件
1883年,埃及发生了一次瘟疫大流行,一批 批的病人相继死亡,共计58500人。
患者往往起病急,出现严重的腹泻和呕吐, 米泔水样(rice water)腹泻物。若得不到及时救 治,常常在短时间内因全身脱水、肌肉痉挛和周 围循环衰竭,造成休克而死。
问题: 1、患者患有什么疾病? 2、如何确诊? 3、如何治疗?
二、幽门螺杆菌
1、形态、染色和培养特性:呈螺旋形、S 形或海鸥展翅状。有鞭毛,运动活泼。革兰染 色阴性。微需氧菌,营养要求高,需加血液, 37℃培养3d后,可见针尖状半透明的菌落。
尿素酶丰富,快速尿素酶试验强阳性,是 鉴定该菌的主要依据之一。
二、幽门螺杆菌
2、所致疾病:是引起慢性胃炎和消化性溃 疡(胃溃疡、十二指肠溃疡)的病原菌,与胃 癌、胃黏膜相关B细胞淋巴瘤的发生密切相关。
霍乱弧菌
德国细菌学家科赫通过尸体解剖和镜检, 从肠道乳白色液体中发现了外形短小、略有弯 曲、拖曳细小尾部而形如逗号的霍乱弧菌。通 过水、食物、生活接触和苍蝇等传播而进入人 体的“逗号”,导致了霍乱。
霍乱弧菌
一、生物学特性
形态与染色:革兰染色阴性,弧菌,排列如 “鱼群”状。单端鞭毛,运动活泼。可取呕吐或 腹泻物,作悬滴法活菌检查,可见细菌呈穿梭状 或流星雨样运动。加入鞭毛血清(抗鞭毛抗体), 运动终止(制动试验阳性)。
霍乱弧菌
2.The microbial responsible for the patients’s diarrhea is a toxin(毒素)that A.Blocks EF-2 and inhibits protein synthesis B.Yields increased intracellular levels of cAMP C.Yields increased intracellular levels of cGMP D.Inbibits the release of acetylcholine(乙酰胆 碱)at the synapse(突触) E. Stimulates neural receptors

《医学微生物学》第11章弧菌属练习题及答案

《医学微生物学》第11章弧菌属练习题及答案

《医学微生物学》第11章弧菌属练习题及答案【知识要点】1.掌握:霍乱弧菌的生物学性状、致病性。

2.熟悉:(1)霍乱弧菌的微生物学检查法与防治原则。

(2)副溶血性弧菌的致病性3.了解:副溶血性弧菌诊断与防治。

【课程内容】第一节霍乱弧菌一、生物学性状(一)形态与染色(二)培养特性与生化反应(三)抗原构造与分型(四)抵抗力二、致病性与免疫性(一)致病物质(二)所致疾病(三)免疫性三、微生物学检查法(一)标本(二)直接镜检(三)分离培养(四)血清学诊断四、防治原则第二节副溶血性弧菌一、生物学性状(一)形态与染色(二)培养特性与生化反应(三)抗原结构与分型(四)抵抗力二、致病性(一)致病物质(二)所致疾病三、诊断与防治【应试习题】一、名词解释1.霍乱肠毒素(CT)2.O139群霍乱弧菌3.O1群霍乱弧菌4.非O1群霍乱弧菌5.神奈川现象二、填空题1.霍乱弧菌可分为O1群霍乱弧菌、_______和_______,前者包括_______和_______两个生物型。

2.霍乱弧菌耐_______不耐酸,其选择性增菌培养基是_______。

3.霍乱肠毒素的A1肽链作用于腺苷酸环化酶,使_______不断转化为_______,引起肠液大量分泌,导致严重腹泻。

4.霍乱肠毒素的毒性中心是_______,结合中心是_______,后者与肠上皮细胞的_______结合,使毒素分子变构。

5.霍乱弧菌根据O抗原不同可分为_______个血清群,其中_______和_______引起霍乱。

6.副溶血性弧菌是一种嗜_______性弧菌,能引起_______。

7.O1群霍乱弧菌有两个生物型分别是__________和__________。

三、单选题(一)A型题1.霍乱弧菌的主要致病物质不包括A.鞭毛 B.菌毛 C.毒素共调菌毛D.外毒素 E.内毒素2.关于霍乱弧菌的生物学性状,叙述错误的是A.革兰阴性弧菌,有单鞭毛B.霍乱弧菌耐碱不耐酸C.在霍乱病人粪便悬滴标本中,可见“鱼群样穿梭”现象D.E1Tor生物型霍乱弧菌抵抗力强,是因为有芽胞形成E.有菌毛和荚膜3.关于霍乱肠毒素,叙述正确的是A.A亚单位与细胞受体结合B.B亚单位进入细胞发挥毒性作用C.激活鸟苷酸环化酶,使cGMP升高D.其受体是糖蛋白 E.不耐热外毒素致病4.霍乱病人排泄物的特点A.脓血便 B.水样便 C.米泔水样便D.果酱样便 E.柏油样便5.关于霍乱的叙述错误的是A.属于烈性传染病B.人类是霍乱弧菌的唯一易感者C.病愈后,少数病人可长期带菌D.病后的免疫力短暂E.接种霍乱死菌苗可增强人群的特异性免疫力6.弧菌主要分布于A.空气 B.水 C.土壤 D.人体肠道 E.动物肠道7.关于ElTor生物型霍乱弧菌与古典生物型霍乱弧菌所致疾病的叙述,下列错误的是A.两者感染后,机体免疫力有强弱之别B.两者所致疾病的临床表现轻重不一C.人类是唯一易感者D.传染源均为病人或带菌者E.传播途径均为污染水源或食物经摄入8.对可疑病人的“米泔水”样大便作细菌培养,应接种于A.S.S琼脂平板B.巧克力色琼脂平板C.血清肉汤培养基D.血琼脂平板E.碱性蛋白胨水培养基9.副溶血性弧菌引起的食物中毒经哪一途径传播A.污染用水 B.病畜肉C.病鼠尿污染食物 D.苍蝇污染食物 E.海产品或盐渍制品10.一男性病人,43岁,头晕,腹胀,剧烈腹泻呈水样便伴呕吐l天。

医学微生物学大题答案

医学微生物学大题答案

医学微⽣物学⼤题答案医学微⽣物学⼤题Ps:不是很全(如⼄型肝炎病毒就没有,偷个懒)且有繁琐倾向1.真核细胞、原核细胞和⾮细胞型三⼤类微⽣物的主要⽣物学特征特点真核细胞型微⽣物原核细胞型微⽣物⾮细胞型微⽣物直径 6.0~15.0 0.2~5.0 0.02~0.3细胞核结构细胞核分化程度很?⾼,有核膜核仁,细胞器完整⽆核膜、核仁,仅有核糖体⽆典型细胞结构构体外培养培养基细菌、⽀原体和⾐原体需在活细胞或鸡胚培养,其他可由培养基培养有些病毒可在活细胞中复制,其余仅能在⼈或动物体内复制传代2.试⽐较G+菌与G-菌细胞壁结构的特征和区别?细胞壁结构⾰兰阳性菌⾰兰阴性菌肽聚糖组成由聚糖、侧链、交联桥构成坚韧三维⽴体结构由聚糖、侧链构成疏松⼆维平⾯⽹络结构肽聚糖厚度20~80nm 10~15nm肽聚糖层数可达50层仅1~2层肽聚糖含量占胞壁⼲重50~80% 仅占胞壁⼲重5~20%磷壁酸有⽆外膜⽆有3.⾰兰⽒阳性菌与⾰兰⽒阴性菌细胞壁结构差异的⽣物学意义(1)与染⾊有关:G+菌的细胞壁致密、肽聚糖厚,脂含量低,酒精不容易透⼊;G-菌的细胞壁疏松、肽聚糖薄,外膜、脂蛋⽩、脂多糖脂含量极⾼,酒精容易透⼊。

细胞内结合染液中的结晶紫-碘的复合物容易被酒精溶解⽽脱⾊。

(2)与细菌对药物的敏感性有关:主要结构基础是肽聚糖。

G+菌的细胞壁对青霉素、溶菌酶敏感,青霉素可抑制肽聚糖四肽侧链与五肽交联桥之间的联结,⽽⼲扰肽聚糖的合成;溶菌酶杀菌机理是⽔解肽聚糖N-⼄酰葡萄糖胺和N-⼄酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键。

G-菌的细胞壁肽聚糖少,有外膜保护,对化学药物有抵抗⼒,对多种抗⽣素敏感性低,青霉素作⽤效果差。

(3)与细菌致病性有关:G-菌的细胞壁含有磷酸脂多糖(LPS),其中的脂类A是其主要毒性成分。

(4)与抗原性有关:G-菌细胞壁磷酸脂多糖(LPS)中的特异性多糖具有抗原性,属于O 抗原,依其可对细菌进⾏分群、分型。

4.细菌特殊结构的⽣物学意义。

弧菌属

弧菌属

三、微生物学检查
烈性传染病及时做出疫情报告
四、防治原则
1.切断传播途径。
2.治疗
1)及时补液和电解质,预防大量失水导致的低血 容量性休克和酸中毒是治疗霍乱的关键; 2)抗生素
强化
1.悬滴标本中呈穿梭样运动的细菌是 A.大肠埃希菌 B.伤寒沙门菌 C.幽门螺杆菌 D.霍乱弧菌 E.变形杆菌 2.根据霍乱弧菌鞭毛的数量和位置,它属于 A.周毛菌 B.从毛菌 C.双毛菌 D.单毛菌 E.无鞭毛细菌
• 疾病特征: 1)胃部的炎症,胃酸产生的改变和组织的 破坏; 2)一旦定植,尤其导致的炎症可持续数年, 甚至终生。
4.微生物检测 检测尿素酶活性 1)胃镜检查时“搭车”采样,快速尿素酶检测 2)13C呼气试验(吃一粒药,吹口气) 4.治疗 胃黏膜保护剂+抑酸剂+抗菌治疗
1.形态与染色 革兰染色阴性,常排列成 S形或海鸥状。
2.培养特性 微需氧菌 3.生化反应 尿素酶丰富,可迅速分解 尿素释放氨,是鉴别该菌 的主要依据之一。
4.致病性 与免疫性 传染源: 传播途径:粪口途径 致病相关因素: 1)Hp能在其他细菌很难生存的胃中生存;(可产生酸 抑制蛋白,封闭胃酸的产生;尿素酶分解食物中的尿 素产生氨气,缓解局部胃酸的杀菌作用;) 2)黏附性强; 3)免疫产生的细胞因子,引起胃酸的大量分泌并造成 胃上皮细胞程序性死亡。
副溶血弧菌
主要引起食物中毒,是我国沿海地区食物中毒最常见的一种 病原菌。该菌引起的食物中毒经烹饪不当的海产品或盐腌制 品传播。临床表现:腹痛、腹泻、呕吐和低热。水样粪便, 但恢复较快。该菌具有嗜盐性。 某单位发生了以呕吐、腹泻呈水样便为主要症状的食物中毒, 防疫站调查后认定为与吃新鲜海蜇丝拌凉菜有关。 问题: 1)如何进行微生物学诊断? 2)请问致病菌可能是什么?

霍乱弧菌

霍乱弧菌
为什么这个故事中特别指出是“冷水”? 霍乱可能通过什么途径传播? 冷水中有多少霍乱弧菌才可能使柴可夫斯基发病?
“千军万马过胃部”“集团作战”。
1883年,埃及发生了一次瘟疫 大流行,成千上万的病人一批批死亡。 患者往往起病急,出现严重的腹泻和 呕吐,米泔样大便。若得不到及时救 治,常常在短时间内因全身脱水、肌 肉痉挛和周围循环衰竭,造成休克而 死。
霍乱
• 剧烈的喷射状呕吐 • 休克、电解质紊乱及酸中毒 • 腹泻物呈米泔水样 • 不治疗,死亡率达60%
致病性与免疫性
• 所致疾病: 霍乱
易感者:人类是霍乱弧菌的唯一易感者 传播途径:消化道
可疑水、食物(菌 103—105,108—1010)
2-3天突然出现剧烈腹泻与呕吐
严重脱水,电解质紊乱,肾衰、死亡
甘油盐水缓冲保存液普通高等教育十一五国家级规划教材悬滴法观察细菌呈鱼群穿梭样运动有助于诊断普通高等教育十一五国家级规划教材目前常用的选择培养基为tcbs硫代硫酸钠柠檬酸胆盐蔗糖培养基霍乱弧菌因分解蔗糖呈黄色菌落血清学反应玻片凝集反应普通高等教育十一五国家级规划教材形成菌膜在ph8890碱性蛋白胨水中生长表面形成菌膜普通高等教育十一五国家级规划教材霍乱弧菌在霍乱弧菌在tcbstcbs琼脂琼脂平板上的菌落特征平板上的菌落特征181824h24h在选择培养基琼脂平板tcbs上生长形成较大黄色菌普通高等教育十一五国家级规划教材血清学反应血清学反应普通高等教育十一五国家级规划教材防治原则防治原则肌肉注射保护率5036个月口服保护率82100b亚单位灭活菌细胞3年以上基因工程菌苗普通高等教育十一五国家级规划教材致病性与免疫性治
培养特性:耐碱怕酸,pH 8.8-
9.2,可在无盐环境中生长
抗原构造与分群:

霍乱弧菌

霍乱弧菌
–1817年开始的六次大流行(古典型霍乱) –1961年开始的第七次大流行(El-Tor霍乱) –1992年O139霍乱开始流行(第八次大流行?)
World-wide cholera pandemic
Time (Y)
1st
1817-1823
2nd
1829-1852
3rd
1852-1859
4th
1863-1879
疑似诊断
符合以下其中一项:
①有典型症状,但病原学检查未明确 ②流行期间有明显接触史,且出现泻吐症状,不能
• 包括O2、O3、、、O138等200以上个血清型, 一般无致病性
• 其中的O139血清型具有特殊性
O139群霍乱
• 1992年10月19日开始,沿孟加拉湾的沿岸城市包括印度 的马德拉斯和加尔各答以及孟加拉国南部发生典型霍乱 样腹泻病流行,发生10万余例,分离的124株霍乱弧菌 在O1群霍乱弧菌诊断血清中不凝集,在非O1群(O2O138)诊断血清也不能分群,这种细菌属于尚未记载的 新型,后被命名为O139血清群。
5th
1881-1896
6th
1899-1923
7th
1961-present
8th?
1992-
Note: 1883 - Robert Koch cultured V. cholerae
V. cholerae
O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/El Tor biotype O139 serogroup

微生物学--弧菌

微生物学--弧菌

分离培养与鉴定
分离培养 粪便或肛拭标本:直接接种改良Campy-BAP
选择平板 血、脑脊液标本:布氏肉汤增菌后转种分离培
养基 微氧环境培养 不同细菌培养温度不同
Key Points
革兰阴性逗点状或S形的菌,运动活泼 微需氧:最佳生长环境为含5%O2、10% CO2、
85%N2 最适生长温度因菌种而异 营养要求高 氧化酶、触酶阳性,不能利用、不发酵各种糖类,
(3)快速诊断:O1和O139抗体做玻片凝集
(4)霍乱毒素的测定
二 分离培养和鉴定
初次分离用pH8.5碱性蛋白胨水,经4~6小时 液体表面大量繁殖,形成菌膜。
二 分离培养和鉴定
TCBS(硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板)
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成 发酵蔗糖的较大的黄色菌落
含亚碲酸钾的培养基:4号琼脂 庆大霉素琼脂
临床意义 (致病因素)
1.侵袭力
进入小肠,鞭毛、菌毛、分泌黏液,O139群有荚膜
穿过小肠黏膜表面黏液层
黏附于小肠黏膜上皮细胞刷 状缘的微绒毛上大量繁殖
临床意义 (致Βιβλιοθήκη 因素)2.霍乱肠毒素 MW:80000-90000 A1:活性亚单位 21812 A2:连接亚单位 5000 B:结合亚单位
霍乱弧菌肠毒素(CE, cholera enterotoxin)



生物学特性(培养特征)
需氧或兼性厌氧 营养要求不高,嗜盐(无盐不生长,最适盐浓度
3%) TCBS上形成绿色菌落
副溶血弧菌在TCBS 上菌落
鉴定特征
革兰阴性弧菌或杆菌,动力(+) 氧化酶(+),临床分离株脲酶常(+) TCBS上绿色菌落、氯化钠生长试验 神奈川现象(+) 各种生化试验 TDH和TRH的检测:毒素和基因检测

霍乱的实验室检查

霍乱的实验室检查

霍乱的实验室检查(一)血液检查红细胞和血红蛋白增高,白细胞计数(10~20)×109/L或更高,中性粒细胞及单核细胞增多。

血清钾、钠、氯化物和碳酸盐降低,血pH下降,尿素氮增加。

治疗前由于细胞内钾离子外移,血清钾可在正常范围内,当酸中毒纠正后,钾离子移入细胞内而出现低钾血症。

(二)尿检查少数病人尿中可有蛋白质、红白细胞及管型。

(三)病原菌检查1.常规检查(1)粪便镜检可见黏液和少许红、白细胞。

取粪便或早期培养物涂片作革兰染色镜检,可见革兰阴性稍弯曲的弧菌,无芽孢,无荚膜。

O139群弧菌除了可产生荚膜外,其余与O1群弧菌同。

(2)悬滴检查将新鲜粪便作悬滴或暗视野显微镜检,可见运动活泼呈穿梭状的弧菌。

2.培养(1)增菌培养所有疑为霍乱病人的粪便,除作显微镜检外,均应作增菌培养。

粪便留取应在使用抗菌药物之前,且应尽快送到实验室作培养。

增菌培养基一般用pH8.4的碱性蛋白胨水,36~37℃培养6~8小时后表面能形成菌膜。

应进一步作分离培养、动力观察和制动试验。

(2)分离培养常用庆大霉素琼脂平皿或碱性琼脂平板。

前者为强选择性培养基,36~37℃培养8~10小时霍乱弧菌即可长成小菌落。

采用后者则需培养10~20小时。

选择可疑或典型菌落,用霍乱弧菌“O”抗血清作玻片凝集试验,若阳性即可出报告。

近年来国外亦有应用霍乱毒素基因的DNA探针作菌落杂交,可迅速鉴定出产毒素O1群霍乱弧菌。

3.免疫学试验制动试验取急性期病人的水样粪便或碱性胨水增菌培养6小时左右的表层生长物,先作暗视野显微镜检,观察动力。

如有穿梭样运动物时,则加入O1群多价血清一滴,若是O1群霍乱弧菌,由于抗原抗体作用,则凝集成块,弧菌运动停止。

如加O1群血清后,不能制止运动,应再用O139血清重复试验。

4.分子生物学检查PCR方法:近年来应用PCR技术来快速诊断霍乱。

检测基因亚单位CtxA、Zot和毒素协同菌毛基因(TcpA)。

根据TcpA 基因的不同DNA序列又可区别古典生物型和埃尔托生物型霍乱弧菌。

霍乱的临床诊断

霍乱的临床诊断

【tips】本文由王教授精心编辑整理,学知识,要抓紧!
霍乱的临床诊断
霍乱的诊断是临床执业医师考试须了解的内容,医学|教育网搜集整理了相关内容与考生分享,希望给予大家帮助!霍乱的诊断(一)诊断标准
符合以下三项中一项者即可诊断为霍乱:
①凡有吐泻症状,粪便培养有霍乱弧菌生长者;
②流行区人群,凡有典型症状,但粪便培养无霍乱弧菌生长者,经血清抗体测定效价呈4倍增长,亦可确诊为霍乱;
③在流行病学调查中,首次粪便培养阳性前后各5d内,有腹泻症状者及接触史,可诊断为轻型霍乱。

(二)疑似诊断
符合以下两项中之一项者,可诊断为疑似霍乱:
①有典型症状,但病原学检查未确定者应作疑似病例处理;
②霍乱流行期间有明显接触史,且发生泻吐症状,不能以其他原因解释者。

霍乱弧菌检测的方法与结果探究

霍乱弧菌检测的方法与结果探究

霍乱弧菌检测的方法与结果探究摘要目的:探究分离培养法和胶体金免疫层析法,两种霍乱弧菌检测方法和结果差异。

方法:从2015年至2016年,选取608例霍乱弧菌样本,同时使用分离培养法和胶体金免疫层析法进程检测,并就两种方法的结果符合率进行比较。

致性为优,符合率定位100%。

结果:608例霍乱弧菌样本中,培养法阳性20例,胶体金免疫层析法检测结果与培养法一致为阳性;培养法阴性588例,胶体金免疫层析法检测585例为阴性,3例为阳性,经培养法复核,确定3例为阴性。

结论:胶体金免疫层析法作为一种新兴的霍乱弧菌检测方法,可以快速完成霍乱弧菌的检测,且具有较高的准确性,将其应用于霍乱弧菌检测,可有效提高疫情防控质量。

关键词霍乱弧菌;检测的方法;结果霍乱弧菌(V.cholera)是霍乱的病原体,属于弧菌科,是革兰氏阴性菌的一种。

霍乱弧菌主要分为埃尔托生物型(EL-Tor bio-type)和古典生物型(Classical biotype)两种。

培养法是卫生部规定的霍乱弧菌标准方法,适用于各种霍乱弧菌标本,检测结果准确、可靠,但整体检测时间相对较长。

近几年,胶体金免疫层析法被提出用于霍乱弧菌标本检测,与培养法相比,胶体金免疫层析法检测更加快速。

本文针对两种检测方法进行对比,实验结果如下。

1材料与方法1.1材料pH8.6碱性蛋白胨水(杭州微生物试剂厂);TCBS(硫代硫酸盐枸橼酸盐胆盐琼脂);霍乱弧菌O1群多价血清和小川稻叶O139分型血清(浙江省疾病预防控制中心);霍乱弧菌胶体金免疫快速检测卡(郑州博赛生物技术有限公司)。

所有试剂均在有效期以内。

1.2样本来源本组试验中608例霍乱弧菌样本,均收集于疑似霍乱感染者粪便以及霍乱疫情采集标本。

试验中检测为阳性的霍乱弧菌样本,均送至相关疾病预防控制中心进一步确认(其中呕吐物2份,肛拭18份)。

其余腹泻患者肛拭988分,均通过培养法检测验证为阳性。

1.3方法根据《霍乱防治手册》(第五版)规定进行病原菌分离培养和血清鉴定;胶体金免疫层析法操作方法如下:一,采取适量以增菌的碱性蛋白胨水滴入检测卡中,均匀摇晃,观察5min内的试验结果。

医学微生物学实验考试

医学微生物学实验考试

1测量细菌大小用以表示的单位是___________。

2.在消毒灭菌时应以杀死___________作为判断灭菌效果的指标。

3.细菌的形态鉴别染色法最常用的是___________,其次是_________。

4.根据细菌的外形,可分为___________、_________、___________。

5.细菌群体生长繁殖分为_________、___________、_________、___________。

6.人工培养基按功能或用途分为____________、____________、__________、____________、______________5类培养基。

7.根据细菌代谢时对氧气的需求与否分为_________、___________、_________、___________。

8.细菌生长繁殖的条件是_________、___________、_________、___________。

9.人工培养基按物理性状分为____________、___________、________3类培养基。

10.高压蒸汽灭菌的温度是________,压力是_________,时间持续_________。

11.半固体培养基主要用于_________,斜面培养基__________,平板培养基主要用于__________。

12.光学显微镜观察细菌应用_______镜观察,它的放大倍率是____倍。

13.抗酸染色把细菌分成两类,阳性菌呈___色,阴性菌呈____色。

14.细菌的色素分为____________和___________2种15.SS培养基多用于_____________的分离培养。

16.热力灭菌分为______________和_______________灭菌。

17.湿热灭菌分为____________、___________、_________、__________、________。

临床微生物学检验题目单选多选简答论述

临床微生物学检验题目单选多选简答论述

临床微生物学检验题目一、单选题1.下列检查中除哪项外均可用于霍乱的诊断:EA.大便悬滴法检查B.大便碱性蛋白胨水培养C.大便涂片革兰染色D.霍乱血清凝集试验找特异性抗体E.血培养找霍乱弧菌2.近年来发现对痢疾杆菌较敏感的抗菌药物为:DA.卡那霉素B.庆大霉素D.氟喹诺酮类E.氨苄青霉素3.在钩端螺旋体病血清学试验中,国内以下列哪种试验有较高的特异性和敏感性:AA.显凝试验B.炭凝试验C.红细胞凝集试验D.红细胞溶解试验E.补体结合试验4.乙脑患者早期的特异性诊断检查:EA.腰穿检测脑压B.脑脊液化验检查C.头颅CT检查D.补体结合试验检测乙脑IgG抗体E.酶联免疫吸附试验,检测乙脑IgM抗体5.流行性斑疹伤寒的实验室诊断方法常选:CA.血常规B.病原体接种分离C.外斐反应D.立克次体凝集试验E.补体结合试验6.血清流行病学调查时,若需要长期保存血清应置于:DA.-4℃冰箱B.-8℃冰箱C.-10℃冰箱D.-20℃冰箱E.以上都不对7.用于血清流行病学调查的静脉采血量一般为:E以下~2ml~3ml~5ml以上8.能长期或永久保存血清的温度条件是:E℃℃℃℃℃9.志贺菌属中,下列哪一项不正确:EA.在普通琼脂平板上生长形成中等大小、半透明的光滑型菌落抗原为型特异型抗原抗原为群特异性抗原D.分解葡萄糖,产酸不产气E.分解乳糖,产酸产气10.宋内氏志贺氏菌有两个变异相,急性患者分离的菌株一般是:AA.Ⅰ相B.Ⅱ相C.Ⅰ相或Ⅱ相D.Ⅰ相和Ⅱ相E.以上都不对11.有关细菌培养基的描述,哪项是不正确的:BA.按物理状态可分为液体、固体和半固体三类培养基属于鉴别培养基C.血琼脂平板属于营养培养基D.蛋白胨水为常用的基础培养基E.庖肉培养基属于厌氧培养基12.新从病人分离的肠道杆菌菌落是:B型型或S型和S型E.以上都不对13.接种立克次体的鸡胚应置于下列哪一个温度的孵卵箱中孵育:AA. 32~35℃B. 37~38℃C. 38~39℃D. 39~40℃E. 40~41℃14.用吉姆尼茨染色法染色立克次体时加石炭酸复红染色液一般需要:CA. 1分钟B. 2分钟C. 5分钟D. 10分钟E. 15分钟15.最早采用的检测方法为:BA. 分离培养B. 直接涂片镜检C. 血清学试验D. 动物试验E. 电镜检查16.下列哪种细菌的最适生长温度为25℃:CA. 肠炎沙门菌B. 空肠弯曲菌C. 假结核耶尔森菌D. O157:H7大肠杆菌E. 宋内志贺菌17.常用琼脂扩散试验的琼脂浓度为:B宋内志贺菌:DA. 快速发酵乳糖B. 为B群C. 包括10型D. 培养中常出现扁平的粗糙型菌落E. 为A群19.下列哪一项是痢疾志贺菌的特性:AA. 可产生志贺毒素B. 只有1型C. 迟缓发酵乳糖D. 有15个型E. 培养中常出现扁平的粗糙型菌落20.测定HIV感染的最简便方法是下列哪一个:AA. 测定HIV抗体B. 分离HIV病毒C. 测定HIV抗原D. 测定HIV核酸E. HIV基因测序21.庆大霉素培养基适用于培养何种细菌:CA. 鼠疫杆菌B. 布鲁氏菌C. 霍乱弧菌D. 白喉杆菌E. 奈瑟氏菌的抗原成分中哪一种与病毒的中和性作用有关:BA. HBvAgB. HBsAgC. HBcAgD. HBeAgE. HBuAg23.甲型肝炎实验室诊断方法主要依赖于检测患者血清中的下列哪种成分:CA. 抗HAV的IgAB. 抗HAV的IgGC. 抗HAV的IgMD. 抗HAV的IgDE. 抗HAV的IgE24.沙门菌属在普通平板上的菌落特点为:AA. 中等大小,无色半透明B. 针尖状小菌落,不透明C. 中等大小,粘液型D. 针尖状小菌落,粘液型E. 扁平粗糙型25.立克次体病原学检查,脏器组织和节肢动物可做切片检查,切法要求越薄越好,一般不超过:A~4微米~8微米~15微米~25微米~40微米26.做补体结合试验前血清加热灭活以破坏它所含有的补体,通常羊血清用下列哪一个温度灭活:BA. 48℃B. 58℃C. 68℃D. 78℃E. 88℃27.在CFT反应中为了查Ag,常常降低反应温度,称为冷CFT,冷CFT 反应温度通常是:EA. 37℃B. 18℃C. 24℃D. 30℃E. 4℃28.当进行抗球蛋白试验查不完Ab时,其中一个重要试剂是第二Ab,在抗球蛋白试验中第二抗体是:AA. 双价抗体B. 单价抗体C. IgE抗体D. 半抗体E. IgD抗体29.在CFT反应中有5种成份:Ag、被检血清、补体、溶血素和SRBC,CFT反应中补体的作用是:EA. 特异性结合B. 指示剂C. 抑制剂D. 中和作用E. 非特异性结合30.在进行免疫血清学检查时进行Ag-Ab反应,进行此反应有许多影响因素,一般Ag-Ab反应中无电解质时:BA. 敏感性下降B. 不反应C. 敏感性上升D. 反应正常E. 提高特异性31.某菌属的一个血清群只有1个血清型,诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清,这一菌属为:AA.志贺氏菌B.艾希氏菌C.沙门氏菌D.大肠杆菌E.耶尔森氏菌32.某菌属的一个血清群只有1个血清型,诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清,这一菌属分为几个血清群:B33.某菌属的一个血清群只有1个血清型,诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清,所述血清群为第几群:D群群群群E.以上都不对34.有关放射免疫测定,哪种说法是不正确的:DA.放射性强度常用毫居里mCi或微居里μCi表示B.广泛应用于蛋白质、酶的测定C.广泛应用于半抗原和药物的测定D.其特点是特异性强,但敏感性低E.可能存在的放射性污染为其缺点之一试验是测试细菌:CA.产生志贺样毒素的能力B.产生肠毒素的能力C.侵袭力D.产生内毒素的能力E.粘附能力36.军团菌培养时,BCYE-α琼脂与BCYE琼脂成分不同之处在于前者含有:BA.苏氨酸B.酮戊二酸C.头孢羟唑D.多粘菌素E.茴香霉素37.鲎试验用于何种物质的测定:CA. 外毒素B. 类毒素C. 内毒素D. 神经毒素E. 肠毒素38.可用于扩增未知序列的PCR方法是:BA. 对称PCRB. 反向PCRC. RT-PCRD. 不对称PCRE. 嵌套PCR39.把外源质粒导入细菌中的方法称为:BA. 转导B. 转化C. 转染D. 转入E. 克隆40.从有正常菌群存在的部位所采取的标本应接种在哪种培养基中分离培养病原菌:CA.增菌培养基B.营养培养基C.选择鉴别培养基D.基础培养基E.特殊培养基二、多选题1.可从粪便标本中分离的病毒有:ACDEA.甲型肝炎病毒B.麻疹病毒C.脊髓灰质炎病毒D.人类轮状病毒病毒2.血清学诊断法,正确的是:ABCDA.伤寒—肥达反应B.风湿病—抗“O”试验C.斑疹伤寒—外斐反应D.梅毒—瓦色曼试验E.莱姆病—IgA抗体检测三、简答题1.什么是PCR技术,典型的PCR技术分几个步骤答:PCR技术全称聚合酶链式反应Polymerase Chain Reacti-on技术,是一种扩增、复制小分子核酸片段的分子生物学技术;典型的PCR技术分为预变性,变性,退火,延伸,最后延伸5个步骤;2.什么是ELISA技术,依据原理不同ELISA技术一般可分为几类答:ELISA技术全称为酶联免疫吸附技术;依据原理不同ELISA技术可分为双抗体夹心法、双抗原夹心法、间接法、竞争法和捕获包被法;3.常用的药物敏感性测试AST技术有哪些答:纸片扩散法K-B法、E-Test法、琼脂稀释法、肉汤稀释法仅列出要点;4.细菌培养基按照其用途不同可分为哪五类答:基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基仅列出要点;5.霍乱弧菌在碱性蛋白胨水中培养形成菌膜的原因是什么答:霍乱弧菌为好氧、动力活泼菌,繁殖迅速,故在气液面形成菌膜仅列出要点;6.核酸探针杂交技术有哪几种答:共分为两种,分别为DNA印迹杂交Southern blot与RNA印迹杂交Northern blot 仅列出要点;三、论述题1.在食源性疾病暴发疫情的现场处置过程中,针对细菌性病原,如何进行样本采集与分离鉴定答:采集粪便用于细菌检测,最好是在病人使用抗菌药物之前,采集新鲜粪便;既可以使用灭菌棉拭子直接从消化道下端采集,也可以蘸取病人排泄物样本;采集的粪便样品一般有两种处理办法:1立即投入到相应致病菌增菌液中进行培养增菌,如用于霍乱增菌的APW和用于检测EHEC的mEC增菌肉汤中;2将采集的粪便拭子插入到Cary-Blair运送培养基中送至相关实验室进行检测;在进行分离鉴定时:1针对霍乱等弧菌,可将粪便拭子样本投入碱胨水APW中增菌6-8小时后用四号琼脂、庆大霉素琼脂或TCBS琼脂划线分离培养用于检测霍乱弧菌;而继续增菌16-18小时,接种麦康凯琼脂划线分离培养,可用以检测嗜水气单胞菌与类志贺邻单胞菌、副溶血弧菌等;2针对肠杆菌,可将粪便拭子投入SBG/SF/SC增菌液中增菌16-18小时后用沙门科玛嘉平板划线分离检测沙门氏菌;可将粪便拭子投入mEC肉汤中增菌16-18小时后用O157免疫磁珠富集/科玛嘉平板划线分离检测EHEC O157;还可直接将粪便拭子转种麦康凯/SS培养基37度培养16-18小时检测志贺菌与大肠杆菌;对于可疑大肠埃希氏菌,可用多重PCR的方法检测EA/ET/EI/EP/EH五种致泻大肠杆菌;3针对弯曲菌,可将粪便拭子转种与CCDA或skirrow绵羊血平板,37度微需氧环境下培养24-48小时检测空肠、结肠弯曲菌等;在整个分离培养过程中获得的可疑菌落也可以根据实际情况使用API、Vitek等系统生化鉴定方法进行鉴定与报告;4在应急检测中,也可以使用PCR技术进行致病菌的核酸检测;技术近年来在传染性病原的快速诊断领域中得到越来越广泛的应用,请概述PCR技术的原理,反应的基本成分,基本步骤及操作注意事项;答:PCR技术的原理是:双链DNA在高温条件下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝,当温度降低后又可以复性成为双链;因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制;典型PCR反应的基本成分为:特异性引物,热稳定DNA聚合酶/缓冲液包含Mg离子,4种dNTPs,模板、灭菌去离子水;PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA 的变性:模板DNA经加热至94-98℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火复性:模板DNA 经加热变性成单链后,温度降至40-55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板;每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍;PCR操作注意事项:1.严格操作,避免交叉污染与气溶胶污染;2.确保引物、试剂与扩增模板质量与配比;3.产物电泳小心处理EB染料,防止污染和对人体造成危害;3.请解释伤寒诊断中肥达氏反应O抗体与H抗体的诊断意义;答:肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断;其结果的解释必须结合临床变现和病程,病史,以及地区流行病学情况;机体患伤寒、副伤寒,一般于发病后1—2周内血液中出现特异性抗体并且随着病程延长而效价渐升,此时即可为阳性,第4周可达峰值,以后又逐渐降低;一般以“O”凝集效价在1:80或以上和“H”在1:160或以上为阳性;抗体主要是IgM,出现较早;H抗体主要是IgG,出现较晚;根据此特点,肥达试验结果有如下诊断价值:二者均超过正常值,患伤寒的可能性大;二者均在正常值内,患伤寒的可能性小;H抗体效价超过正常值,O 抗体效价正常,可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应;O抗体效价超过正常值,H抗体效价正常,可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染;一般间隔1—2周复查,若抗体效价比前次结果增高2—4倍,则具有诊断价值;4.霍乱是我国传染病防治法规定的甲类传染病,请列举霍乱弧菌实验室检测的方法及步骤,包括采样、增菌、分离培养、生化/血清学鉴定等环节;答:霍乱检测的采样主要对象是病人呕吐物,粪便与环境水样;对于粪便与呕吐物,可直接分离培养或用碱性蛋白胨水APW37度增菌6小时必要时可二次增菌后进行检测;对于环境水样,可用10×APW进行增菌;增菌处理结束后可用接种环挑取表面增菌液划线分离于四号琼脂/庆大霉素琼脂/TCBS琼脂37度培养16-18小时后观察是否有可疑菌落生长四号琼脂上为无色半透明黑心菌落,庆大霉素琼脂为无色半透明菌落,TCBS琼脂上为黄色菌落;挑取可疑菌落进行氧化酶/拉丝试验,氧化酶阳性/拉丝试验阳性菌落可初步判定为霍乱弧菌,可将其转种于营养平板培养后进行系统生化鉴定;鉴定为霍乱弧菌的菌株还需进一步进行O1/O139群、小川/稻叶血清分型;有条件的话还可以使用PCR/荧光定量PCR的方法检测其是否产CTX肠毒素;。

霍乱弧菌

霍乱弧菌

H抗原: 特异性低
4、抵抗力
较弱,不耐热
对酸敏感,耐碱耐低温
对一般消毒剂都敏感
对链霉素、氯霉素敏感
处理病人排泄物或呕吐物:按1:4比例加漂 白粉经1小时可达到消毒目的。
二、致病性与免疫性
1、致病物质--鞭毛、菌毛、霍乱肠毒素
鞭毛--运动、穿透(穿过肠粘膜粘液层接 近 是目前已知的致泻 肠黏膜细胞) 毒素中最为强烈的 菌毛--粘附、定居作用 毒素,也是肠毒素 的典型代表。
2 、所致疾病
烈性肠道传染病--------患者和带菌者(人类是霍乱弧菌唯一的 易感者)
通过污染食物或水源经口传染 一般情况被胃酸杀灭,胃酸减少时可进入小肠 临床表现:
上吐下泻:剧烈腹泻和呕吐(米泔水样腹泻物), 大量水分和电解质丧失 低容量性休克和肾衰竭(死亡率高达60%)
3 、微生物学检查法
病人粪便,肛拭 (流行病学调查包括水样) 直接镜检 标本 涂片见G-性弧菌,鱼群状排列 悬滴法观察细菌呈穿梭样运动
分离培养
碱性蛋白胨水增菌 选择培养基为TCBS 玻片凝集反应
4 、免疫性
感染霍乱弧菌后,机体可获得牢固免疫力,
再感染少见。
三、防治原则
控制传染源
切断传播途径 提高易感者免疫力 治疗霍乱的关键 隔离治疗、疫区封锁 改善社区环境,加强水源管理 疫苗预防接种 及时补充液体和电解质
运动非常活泼 排列整齐 呈穿梭样 呈鱼群状 液体中 涂片中
2、培养特性
营养要求不高,耐碱不耐酸
在pH 8.8~9.0的碱性蛋白胨水/碱性
琼脂平板上生长良好
无盐环境生长,其他无致
病性
3、抗原构造与分型
O抗原:
现已有155多个血清群 O1群与O139群引起霍乱

《医学微生物学》第十一章弧菌属和第十三章厌氧性细菌复习题及答案

《医学微生物学》第十一章弧菌属和第十三章厌氧性细菌复习题及答案

《医学微生物学》第十一章弧菌属和第十三章厌氧性细菌复习题及答案第十一章弧菌属一、单项选择题1.霍乱弧菌的主要致病物质不包括:A.鞭毛B. 菌毛C. 毒素共调菌毛D. 外毒素E. 内毒素2.关于霍乱弧菌的生物学性状,错误的是:A.碱性蛋白胨水可作为选择增菌培养基B.霍乱弧菌耐碱不耐酸C.在霍乱病人粪便悬滴标本中,可见“鱼群样穿梭”现象D.ELTor 生物型霍乱弧菌抵抗力强,是因为有芽胞形成E.革兰染色阴性3. 关于霍乱肠毒素,错误的是:A. A亚单位是毒性亚单位B. B亚单位是结合亚单位C.由一个A亚单位和4~6个B亚单位组成D. 其受体是糖蛋白E.是霍乱弧菌的主要致病物质4.霍乱肠毒素:A.为耐热外毒素B. 为不耐热内毒素C. B亚单位与肠上皮细胞受体结合后,使毒素分子变构D. A2肽链活化后,使肠上皮细胞ATP转化为cAMP,促进肠粘膜细胞的分泌功能E.A1肽链与B亚单位结合,协助A亚单位进入细胞5.关于霍乱,错误是:A.属于烈性传染病B.人类是霍乱弧菌的唯一易感者C.病愈后,少数病人可长期带菌D.病后的免疫力短暂E.接种霍乱死菌苗可增强人群的特异性免疫力6.与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系的病原菌为:A.空肠弯曲菌B. 幽门螺旋杆菌C.胎儿弯曲菌D.鼠伤寒沙门菌E. 副溶血性弧菌7. 哪种疾病不能由弯曲菌引起:A.食物中毒B.心内膜炎C.婴幼儿急性肠炎D.败血症E.肾小球肾炎8.分离霍乱弧菌常用的培养基是:A.SS培养基B.碱性培养基C.血琼脂培养基D.亚碲酸钾血琼脂培养基E.巧克力色平板9.关于副溶血性弧菌的叙述错误的是:A.呈多形性,革兰阴性B.有鞭毛,运动活泼C.生长最适pH为7.7D.需用无盐或低盐培养基培养E.能产生耐热性溶血毒素10.典型霍乱患者,发病后最先出现的常见症状是:A.畏寒.发热B.声音嘶哑C.剧烈腹泻.呕吐D.腹部绞痛E.腓肠肌痉挛二、多项选择题1.霍乱弧菌所致的霍乱有其特点:A.潜伏期较短B.发病急C.传播迅速D.严重的呕吐和腹泻E.病后获得免疫力不强,并以细胞免疫为主2.霍乱弧菌的生物学特性:A.菌体典型的呈弧状B.单根鞭毛位于菌体一端C.革兰氏阴性D.无菌毛E.兼性厌氧3.霍乱弧菌的感染过程是:A.病菌经口侵入B.病菌在肠粘膜表面生长繁殖C.病菌进一步侵入血流D.病菌在生长繁殖过程中产生肠毒素E.肠毒素进入细胞内发挥毒性作用致病4.副溶血性弧菌是:A.一种嗜盐性弧菌B.呈杆状C.有周鞭毛,运动活泼D.革兰氏阴性E.含15%食盐培养基生长得最好5.关于副溶血性弧菌的致病性,下述正确的是:A.该菌是引起食物中毒的常见病原菌之一B.常因食入未煮熟的海产品而感染C.主要症状为腹痛.腹泻.呕吐.发热D.致病物质有耐热溶血素等E.病后可获得牢固免三、问答题1.请简述霍乱弧菌的致病过程。

霍乱的确诊标准

霍乱的确诊标准

霍乱的确诊标准
1、流行病学资料:在发病前一周内,患者曾在疫情区域生活或与患有本病的人及其排泄物有过接触。

2、临床表现:如果患者出现剧烈的“米泔水”样腹泻、呕吐和严重脱水等症状,应考虑到本病的可能性。

此外,在疫情期间,对于没有其他原因解释的腹泻和呕吐患者,应将其视为疑似病例进行处理。

对于离开疫区不足5天即发生腹泻的患者,也应按照上述诊断标准进行考虑。

3、实验室检查:霍乱的确诊有赖于实验室的检查结果。

通过实验室检查,可以检测到患者体内是否存在霍乱弧菌,以及其是否产生毒素等关键指标。

这些指标可以帮助医生确诊患者是否患有霍乱。

医学微生物学PPT课件 霍乱弧菌

医学微生物学PPT课件 霍乱弧菌
*1979-1981年,澳大利亚珀斯皇家医院的 Warren和Marshall首次在胃活检组织中发现 并分离培养出Hp。
2005年诺贝尔生理学或医学奖授予 Hp发现者、澳大利亚临床微生物学 家:
巴里·马歇尔(Barry Marshall) 罗宾·沃伦(Robin Warren)
第一节
幽门螺杆菌
*幽门螺杆菌位于: ε-变形菌纲(Epsilonproteobacteria) 弯曲菌目(Campylobacterales) 螺杆菌科(Helicobacteraceae) 螺杆菌属(Helicobacter)
幽门螺杆菌达国家(成人) 45% *发展中国家(成人) 60%~80% *胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡患者检出
率可高达80%~100%
2. 流行病学:
传染源:人 传播途径:粪-口或口-口传播 自然人群中的感染率随年龄增长而上升 Hp感染自愈率接近零
一、生物学性状
霍乱弧菌
弧菌属简介
弧菌属(Vibrio)细菌是一大群菌体短小,弯 曲成弧形、运动活泼的G(-)菌。
与肠杆菌科细菌不同点:氧化酶试验阳性 和有一根位于菌体一端的单鞭毛。
弧菌属广泛分布,以水表面最多。 弧菌属中至少12个种与人类感染有关,尤
以霍乱弧菌,副溶血性弧菌和创伤弧菌最 为重要。
19世纪初至今已引起7次世界性大流行。
1817~1923年的百余年间,在亚、非、欧、 美、澳等发生的六次世界性霍乱大流行——皆由
古典生物型引起。
1961年开始的第七次世界性霍乱大流行至今 已波及五大洲140个以上的国家和地区,报告病 例数在400万以上,目前尚无停息的迹象。它们
由埃尔托生物型引起。
1992年10月印度和孟加拉相继发生一种 新型霍乱暴发和较大流行,这型霍乱随后 在亚洲传播,至今已有印度、巴基斯坦、 孟加拉、中国、泰国、马来西亚、缅甸、 尼泊尔、新加坡、斯里兰卡、香港等国家 和地区报告发生O139霍乱病例。2003年, W H O 报 告 4 5 个 国 家 111 5 7 5 例 病 例 —— O139群霍乱弧菌引起。

医学微生物学习题+答案

医学微生物学习题+答案

医学微生物学习题第1、2章细菌的形态结构与生理测试题一、名词解释1.微生物2.微生物学3.医学微生物学4.代时5.细胞壁6.肽聚糖或粘肽7.脂多糖8.质粒9.荚膜10.鞭毛11.菌毛12.芽胞13.细菌L型14.磷壁酸15.细菌素16.专性需氧菌 17.热原质18.专性厌氧菌19.抗生素20.兼性厌氧菌 21.菌落二、填空题:1.医学微生物包括、和三大部分2.原核细胞型微生物包括、、、、、,共六类微生物。

3.病毒必须在内才能增殖,为型微生物。

4.正常菌群对人体具有、、和等作用.5.测量细菌大小的单位是。

6.细菌的基本形态有、和。

7.细菌细胞内的遗传物质有和两种,其中不是细菌生命活动所必需的。

8.细菌的菌毛有和两种,前者与有关,后者具有作用。

9.经革兰染液染色后,被染成紫色的是菌,被染成红色的是菌。

10.细菌的特殊结构有、、和。

11.革兰阴性菌细胞壁的脂多糖包括、和3种成分。

12.革兰阴性菌细胞壁的肽聚糖是由、构成。

13. 革兰阳性菌细胞壁的主要结构肽聚糖,是由、和构成。

14. 固体培养基是在液体培养基中加入,加热溶化经冷却凝固后即成;当加入时,即成半固体培养基。

15.细菌的繁殖方式是。

绝大多数细菌繁殖一代用时为,而结核杆菌繁殖一代用时为。

16.半固体培养基多用于检测细菌。

17.根据菌落的特点可将菌落分为光滑型菌落、和。

18.SS琼脂培养基含有胆盐、枸橼酸、煌绿,可抑制革兰阳性菌和的生长,常用于的分离和培养。

19.细菌色素分为和两种。

20.以简单的无机物为原料合成复杂的菌体成分的细菌称为,只能以有机物为原料合成菌体成分及获得能量的细菌称为。

21.细菌生长繁殖的条件包括充足的、适宜的、合适的酸碱度和必需的气体环境。

22.大多数致病菌生长的最适PH值为,最适温度为,而结核杆菌生长的最适PH值为,霍乱弧菌生长的最适PH值为。

23.细菌群体生长的生长曲线可分为、、和四个时期,细菌的形态、染色、生理等性状均较典型的是期。

霍乱弧菌

霍乱弧菌

3.抗原构造与分型 霍乱弧菌有耐热的O抗原和不耐热的H抗原。根据O抗原不同,可分为155个血清群,
其中OI群、O139群可引起霍乱,O139群与O1群之间在抗原性方面无交叉。其它血清群 分布于水源中,可引起人类胃肠炎等疾病。
O1群霍乱弧菌根据其菌体抗原所含3种抗原因子A、B、C的不同,又可分为3个血清
霍乱病人
3.免疫性 机体感染霍乱弧菌后可获得牢固免疫力,主要是体液免疫,包括肠毒素抗体、抗 菌抗体、肠道黏膜表面的SlgA,再感染少见,但抗O1群霍乱弧菌的免疫力对 O139群霍乱弧菌无交叉保护作用。
(三)微生物学检查
霍乱是烈性传染病,对首例 患者应尽快确诊,并及时上 报疫情。 取病人粪便或呕吐物,涂片 染色镜检见革兰阴性弧菌, 用悬滴法观察细菌呈穿梭样 运动,加入霍乱抗血清后运 动消失,即为制动实验阳性, 可做出初步诊断。进一步检 测可做细菌的分离培养和鉴 定。荧光抗体法、协同凝集 试验、PCR等可用于霍乱的 快速诊断。
(二)致病性与免疫性
1.致病物质 (1)霍乱肠毒素
是目前已知毒性最强的 致泄毒素,不耐热,由一个A 亚单位和5个相同的B亚单位 构成。A亚单位为CT的毒性 活性部分。B亚单位可与小肠 粘膜上皮GMI神经节苷脂受体 结合,介导A亚单位进入细胞, 使腺苷酸环化酶活性增加, 导致细胞内cAMP水平升高, 肠黏膜上皮细胞主动分泌钠 离子、钾离子、碳酸氢根离 子和水,导致肠液大量分泌, 出现严重的腹泻与呕吐。
微米*(1.5~3)微米,呈弧形或逗 点状,革兰染色阴性。有菌毛,无 芽孢,有些菌株(如O139)有荚膜。 菌体一端有单鞭毛,运动活泼。取 患者米泔水样粪便做悬滴观察,可 见细菌呈穿梭或流星样运动,涂片 染色镜检呈“鱼群”状排列。
2.培养特性与生化反应 兼性厌氧,营养要求不高,
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霍乱弧菌的微生物学诊断检查方法
微生物学诊断
由于霍乱流行迅速,且在流行期间发病率及死亡率均高,危害极大,因此早期迅速和正确的诊断,对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。

直接镜检
采取病人“米泔水样”大便或呕吐物。

镜检(涂片染色及悬滴法检查)观察细菌形态,动力特征。

细菌分离培养
可将材料接种至碱性蛋白胨水37℃培养6~8小时后,取生长物作形态观察,并转种于碱性平板作分离培养,取可疑菌落作玻片凝集,阳性者再作生化反应及生物型别鉴定试验。

特异性制动试验
取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴,置于载玻片上,再加霍乱弧
菌多价诊断血清,加盖玻片,用暗视野镜观察,3分钟内运动被抑制的即为阳性,此法优点是快速而特异操作简便,但必须有数量较多的弧菌才检出。

免疫荧光试验
除一般免疫荧光法外,还可用荧光菌球法检查。

1.标本采集和运送:霍乱是烈性传染病,凡在流行季节和地区有腹泻症状的
患者均应快速准确作出病原学诊断.在发病早期,尽量在使用抗菌药物之前采集标本.可取患者”米泔水”样便,也可采取呕吐物或尸体肠内容物,或采取肛门试子.标本应避免接触消毒液,采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌,不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门试子直接插入卡-布运送培养基中.送检标本装在密封,不易破碎的容器中,置室温由专人输送.甘油盐水保存液不适合于弧菌的运送.
2.标本直接检查:
荚膜肿胀试验:特异性抗血清与相应细菌的荚膜抗原特异性结合形成复合物时,可使细菌荚膜显著增大出现肿胀的试验常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等的检测
革兰染色:革兰染色过程所用四种不同溶液和作用:
1、碱性染料
这在简单染色中已讨论过,此处用结晶紫。

2、媒染剂
其作用是增强染料与细菌的亲和力,更好地加强染料与细胞的结合。

常用的媒染剂是碘液。

3、脱色剂
帮助染料从被染色的细胞中脱色。

利用细菌对染料脱色的难易程度不同,而将细菌加以区分。

革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色,而革兰阴性细菌则易被脱色。

常用的脱色剂是丙酮或乙醇,这里所用的是95%的乙醇。

4、复染液
也是一种碱性染料,目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色,以便与未脱色菌进行比较。

这里用的是蕃红花红溶液。

编辑本段
革兰染色的实验步骤
1。

涂片:左手持菌液试管,右手持接种环,用接种环从试管培养液中取一环菌,于载玻片中央涂成薄层(事先在背面做好标记圆圈)即可,或先滴一小滴无菌水于载玻片中央,用接种环从斜面上挑出少许,与载玻片上的水滴混合均匀,涂成一薄层。

拔或塞试管塞时,应将试管口通过火焰略加烧灼,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

2。

干燥:涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥,但勿靠近火焰。

3。

固定:常用高温进行固定。

即手持载玻片一端,标本面朝上,在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次,共约3~4秒。

要求玻片温度不超过60℃,以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜,放置待冷后染色。

编辑本段
固定的目的是:
① 杀死微生物,固定其细胞结构;
② 保证菌体能牢固地粘附在载玻片上,以免水洗时被水冲掉;
③ 改变菌体对染料的通透性,一般死细胞原生质容易着色。

4。

染色:将固定好的涂片放于报纸上,每次滴加一滴染液进行染色。

注意:乙醇脱色时滴加乙醇至流出液为无色立即进行水洗;
蕃红复染由于时间较长,应在染液干燥前补加染液;
镜检时吸水注意不要擦标本。

编辑本段
革兰染色的实验现象
如果将细菌做革兰染色,凡染后菌体呈蓝紫色的,称为“革兰阳性菌”;菌体是伊红色,称“革兰阴性菌”。

无论阳性菌还是阴性菌,都有杆菌和球菌。

葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌是临床最为常见的病原菌,葡萄球菌属于革兰阳性菌,大肠杆菌属于革兰阴性菌中的肠杆菌科,除大肠杆菌以外,临床较常见的肠杆菌科细菌还有变形杆菌属,沙门菌属、克霉白菌属;铜绿假单胞菌是临床常见的较耐药革兰阴性杆菌。

革兰染色的实验原理
细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异,主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。

经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物,乙醇能使它溶解,所以染色的前二步结果是一样的,但在G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水,导致孔隙变小,由于结晶紫和碘的复合物分子太大,不能通
过细胞壁,保持着紫色。

在G—细胞中,乙醇处理不但破坏了胞壁外膜,还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜,于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来,当再用衬托的染色液复染时,显现红色。

红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞,但被紫色盖没,红色显示不出来。

①革兰氏阳性细菌的细胞壁
G+细菌细胞壁具有较厚(20-80nm)而致密的肽聚糖层,多达20层,占细胞壁成分的60%~90%,它同细胞膜的外层紧密相连(图2-9)。

有的G +细菌细胞壁中含有磷壁酸(teichoic-acid),也称胞壁质(murein),它是甘油和核糖醇的聚合物,磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在。

由于磷壁酸带负电荷,它在细胞表面能调节阳离子浓度。

磷壁酸与细胞生长有关,细胞生长中有自溶素(autolysins)酶类起作用,磷壁酸对自溶素有调节功能,阻止胞壁过度降解和壁溶。

如果细胞壁的肽聚糖层被消溶,G+细胞成为原生质体(protoplasts),细胞壁不复存在,而只存留细胞膜。

除链球菌外,大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白质。

②革兰氏阴性细菌的细胞壁G—细菌细胞壁比G+细菌细胞壁薄(15~20nm)而结构较复杂,分外膜(outer membrane)和肽聚糖层(2~3nm)。

在细胞壁和细胞质膜之间有一个明显的空间,称为壁膜间隙(periplasmic space)。

外膜G—细菌细胞壁外膜的基本成分是脂多糖
(lipopolysaccharide,LPS),它同细胞质膜相同之处也是双层类脂,但除磷脂外还含有多糖和蛋白质。

LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特异多糖。

O-特异多糖由重复分支的碳水化合物分子组成,含有已糖(葡萄糖、半乳糖和鼠李糖)和二脱氧已糖。

由于糖的种类不同,使各种G—细胞具有不同特性的LPS。

核心多糖(core polysaccharide)的主要组分是酮脱氧辛酸(ketodeoxyoctonate, KDO)。

外膜中还含有几种蛋白,如脂蛋白、通透蛋白。

有些蛋白具有通孔作用(porin),调控外界分子进入细胞;有的蛋白分子可以作为噬菌体的受体;许多G—细菌对高等生物有致病性是由LPS的成分决定的,它的毒性组分常称为内毒素(endotoxins)。

肽聚糖层 G—细菌细胞壁的肽聚糖层很薄,在大肠杆菌和其它细菌中仅有单
层。

肽聚糖层和外膜的内层之间通过脂蛋白连接起来。

壁膜间隙 G—细菌细胞壁的外膜与细胞质膜之间存在明显的壁膜间隙,一层薄的肽聚糖处于其间,肽聚糖层和细胞质膜之间的间隙较宽,肽聚糖层至外膜之间的间隙较窄。

大肠杆菌的壁膜间隙宽度为12~15nm,呈胶胨态。

其间含有三类蛋白质:水解酶,催化食物的初步降解;结合蛋白,启动物质转运过程;化学受体(chemoreceptors),在趋化性中起作用的蛋白。

革兰染色的医学意义:
1、可以协助鉴定细菌
2、为临床使用抗生素提供依据
3、有助于了解分析细菌的致病性
破伤风梭菌:破伤风梭菌(clostridium tetani)是引导起破伤风的病原菌,大量存在于人和动物肠道中,由粪便污染土壤,经伤口感染引起疾病。

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