现代色谱技术
现代色谱
现代色谱分析1、色谱流出曲线图能说明哪些问题?①根据色谱峰的个数，可判断样品中所含组分的最少个数。
②根据色谱峰的保留值（峰位），可进行定性分析。
③根据色谱峰的面积或峰高，可进行定量分析。
④色谱峰的区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据。
⑤色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。
2.根据Van Deemter议程式, HPLC提高柱效的方法有哪些?或 HPLC法降低板高的主要途径有哪些？①采用粒径小、窄粒度分布的球形固定相，首选化学键合相，用匀浆法装柱。
②采用低粘度流动相，低流速（1mL／min）③柱温一般以25~30℃为宜。
太低，则使流动相的黏度增加，温度高易产生气泡。
用不含有机溶剂的水溶液为流动相的色谱法（如IEC、IC）可按需升温。
3.什么是正相色谱?什么是反相色谱?HPLC常用反相色谱,它最常用的固定相和流动相是什么? 各适用于分离哪些化合物？①正相色谱：流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法。
反相色谱：流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法。
②反相固定相：C18、C8 流动相：甲醇、乙腈、水③适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
4. 一个好的检测器应具备什么条件?HPLC中可使用的检测器有哪些?你在实验中用过哪些检测器,它们有何特点(包括使用中应注意的问题, 适用于何种物质的检测)?属于哪种类型? 灵敏度高、噪音低、线性范围宽、重复性好、适用化合物的种类广泛等性能。
HPLC中可使用的检测器:紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、化学发光检测器。
紫外检测器特点：①灵敏度高，噪声低。
②不破坏样品，能与其他检测器串联，可用于制备色谱。
③对温度及流动相流速波动不敏感，可用于梯度淋洗。
④属浓度型检测器。
紫外检测器的应用范围：主要用于检测具有π-π或p-π共轭结构的化合物。
如芳烃与稠环芳烃、芳香基取代物、芳香氨基酸、核酸、甾体激素、羧酸与羰基化合物等。
5.流动相和分析液都不能有气泡,为什么?常用的除气方法有哪些? 流动相和分析液都不能有不溶物,为什么?如何处理?⑴因为溶解在溶剂中的气体会在管道、输液泵或检测池中以气泡形式逸出，影响正常操作的进行。
现代色谱技术在药物分析中的应用
现代色谱技术在药物分析中的应用色谱法是一种高效能的物理分离技术，它利用混合物中的各组分在互不相容的两相（固定相和流动相）之间的分配差异而使混合物得到分离的一种方法。
从1903年Tswet发表了吸附色谱分离植物色素的论文至今，色谱技术已近百年的发展历史。
特别是60年度现代液相色谱技术的问世，使其在生命科学、药物化学、食品卫生、环境化学等诸多领域得到了广泛的应用。
经过30多年的发展，现代高效液相色谱技术得到了不断的完善和改进，在输液泵、检测器、色谱柱及数据控制和处理系统等方面采用了许多专利技术，使泵的稳定性和重复性、检测器的灵敏度和检出能力、色谱柱的分离效能和应用范围及数据处理软件的智能化得到了很大的提高。
近年来多种高新技术的引用，各类色谱仪器在性能、结构和技术参数等各方面都有了极大的提高。
目前比较成熟的色谱仪器主要是气相色谱和高效液相色谱两大类。
下面将对应用于药物分析中的几种液相色谱进行逐一的介绍。
1.高效液相色谱高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，简称HPLC)是在20世纪70年代在经典液相柱色谱的基础上结合气相色谱的理论与技术而发展起来的一种重要的分离分析方法。
它具有高效、快速、高灵敏度、色谱柱可以反复使用、分离出的组分易收集、适用范围广等优点，在药物的分析中发挥着重要的作用。
HPLC在药物的分析中的应用主要是鉴别、有关物质的检查、有效成分及含量的测定。
在HPLC法中，药物组分的保留时间与其结构和性质有着直接的关系，不同的药物由于结构和性质的差异在色谱图上的出峰顺序不同，是定性的重要参数，可用于药物的鉴别。
如在中国药典收载的药物利福平的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致由于HPLC分离效能及灵敏度高，在药物的杂质检查中被广泛应用，主要用于药物中有关物质的检查。
“有关物质”是指药物中存在的合成原料，中间体，副产物，降解产物等物质，这些物质的结构和性质与药物相似，含量很低，只有采用色谱的方法才能将其分离并检测。
色谱分析(中国药科大学)第5章现代色谱技术简介
第五章现代色谱技术简介第一节高效毛细管电泳分析法（high performance capillary electrophoresis, HPCE）一、概述1、发展1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳——第一次的自由溶液电泳。
1981年，Jorgenson和Luckas，用75m内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳分析法。
2、特点①仪器简单、易自动化②分析速度快、分离效率高③操作方便、消耗少④应用范围极广二、高效毛细管电泳理论基础1、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理电泳：带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度。
当带电离子以速度v在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。
电场力：E F qE = 阻力：F fv = 故：qE fv =q -离子所带的有效电荷；E -电场强度；v -离子在电场中的迁移速度；f -平动摩擦系数 ( 对于球形离子：6f πηγ=,γ-离子的表观液态动力学半径；η-介质的粘度)。
所以，迁移速度：6πqE qv E f γη== 淌度（mobility ）μ ：单位电场强度下的平均电泳速度。
6πv q E μγη== 淌度不同是电泳分离的基础。
2、 电渗现象与电渗流(1) 电渗流现象当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。
电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF ）。
(2)HPCE中电渗流的大小与方向电渗流的大小用电渗流速度V表示，取决于电渗淌度 和电场强度E。
电渗流电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质：①内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极；②内表面带正负电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极；③石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极；(3)HPCE中电渗流的流形电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）；液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。
现代仪器分析色谱分析
进样系统
载气系统
色谱柱
检测器
记录、数据 处理系统
第15页，共35页。
气相色谱仪的流程图
第16页，共35页。
1)载气系统
气源、气体净化、气体流速控制和测量
1. 常用的载气有： 氢气、氮气、氦气、氩气 2. 净化干燥管: 活性炭、硅胶、分子筛等（除去载气中的 水分、氧等杂质） 3. 减压阀、稳流阀：载气压力和流速控制（载气流要稳定 ）
死时间t0 (tM)
：空气、甲烷等不被固定相吸附或溶解的惰性物质流经柱的时间 。
调整保留时间tR’ ：由于溶解或吸附于固定相，比不溶解或不被吸附的组分在色谱中多
t’R= tR-tM
滞留的时间。
第5页，共35页。
保留体积 VR
死体积V0
调整保留体积 VR’
VR tR Fc V0 tM Fc
VR' tR Fc VR V0
相色谱的特点之一。
C、应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定、可调、耐腐蚀等
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2) 梯度淋洗装置
定义：流动相中含有两种（或更多）不同极性的溶剂，在分离过 程中按一定的程序连续改变流动相的配比和极性，以提高分离效 果。
优点：分离时间缩短，分辨能力增加，峰形改善
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高压梯度:
指在一定温度和压力下，组分在色谱柱中达分配平
衡时，在固定相与流动相中的质量比——更易测定.
k ms mM
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二、气相色谱法，GC
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1、概述
气相色谱-----是用气体作为流动相的一种色谱法。
根据固定相状态的不同，可分为：
气固色谱：多孔性固体为固定相，如分子筛、硅胶、活性炭
现代色谱分析讲稿1
此外还有： 亲和色谱法(affinity chromatography)：专属亲和力 手性色谱法(chiral chromatograohy)：手性固定相 毛细管电泳法(capillary electrophoresis)：电泳淌度
3．按固定相的外形分类
固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱，它又可分 为填充柱色谱和毛细管色谱；固定相呈平板状的色谱 法，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。
§1-4 色谱法分析的基本原理
色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完 全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两 相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。但是 两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是 不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为 决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。因此，要从热力学和 动力学两方面来研究色谱行为。
设流动相在柱内的线速度为u ，组分在柱内线速度为 us，由于固定相 对组分有保留作用，所以us＜u．此两速度之比称为滞留因子R。
us tM R u tR
R若用质量分数表示，则：
R
nm 1 1 nm ns 1 ns 1 k nm
对组分和流动相通过长度为L的色谱柱，其所需时间分别为
色谱法分类
1．按两相状态分类
气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC），根据固定相是固体 吸 附 剂 还 是 固 定 液 （ 附 着 在 惰 性 载 体 上 的 一 薄 层 有 机化合 物 液 体），又可分为气固色谱（GSC）和气液色谱（GLC）．液体为流 动相的色谱称液相色谱（LC）。同理，液相色谱亦可分为液固色谱 （LSC）和液液色谱（LLC）．超临界流体为流动相的色谱称为超 临界流体色谱（SFC）。
现代色谱技术在药物分析中的应用
现代色谱技术在药物分析中的应用近年来，随着药物研发和制造的不断发展，药物分析变得越来越重要。
而现代色谱技术作为一种高效、准确的分析方法，被广泛应用于药物分析领域。
本文将探讨现代色谱技术在药物分析中的应用，并介绍其原理和优势。
一、高效液相色谱（HPLC）高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的色谱技术，它通过将样品溶解在流动相中，在固定相上进行分离和分析。
HPLC在药物分析中的应用非常广泛，可以用于分离和检测药物中的各种成分，如活性成分、杂质和降解产物等。
其高分辨率和高灵敏度使得HPLC成为药物分析中不可或缺的工具。
二、气相色谱（GC）气相色谱（Gas Chromatography，GC）是另一种常见的色谱技术，在药物分析中也得到了广泛应用。
GC通过将样品蒸发成气体，然后在固定相上进行分离和检测。
与HPLC相比，GC在分析挥发性和半挥发性化合物方面具有更好的分离效果。
因此，在药物分析中，GC常被用于分析药物中的挥发性成分、残留溶剂和有机杂质等。
三、超高效液相色谱（UHPLC）超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC）是近年来发展起来的一种新型色谱技术。
与传统的HPLC相比，UHPLC具有更高的分辨率、更短的分析时间和更高的灵敏度。
在药物分析中，UHPLC可以更快速地分离和检测药物中的成分，提高分析效率和准确性。
四、固相微萃取（SPME）固相微萃取（Solid Phase Microextraction，SPME）是一种新兴的样品前处理技术，广泛应用于药物分析中。
SPME通过将固相萃取材料直接暴露在样品中，通过吸附和解吸的过程，实现对样品中目标化合物的富集和分离。
SPME具有操作简便、灵敏度高和样品损失小等优点，被广泛应用于药物代谢动力学和药物残留分析等领域。
现代色谱技术的发展与应用
现代色谱技术的发展与应用色谱技术是一种分离分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等多个领域。
随着科学技术的不断进步，现代色谱技术得到了极大的发展，并在实践应用中发挥着重要的作用。
首先，让我们来了解一下色谱技术的基本原理。
色谱是将混合物分离为不同组分的一种方法，其原理是根据各组分在固定相和移动相之间的差异性进行分离。
在色谱柱中填充有吸附剂或分离剂，被分离物质与柱内的固定相发生相互作用，随着移动相的流动，不同组分在柱中逐渐分离开来。
这种分离方法具有高分辨率、高灵敏度和高选择性的特点。
近年来，随着色谱技术的发展，液相色谱和气相色谱成为了主流技术。
液相色谱是将混合物溶解在流动相中，在柱内涂覆的固定相上进行分离，具有较高的分离效果。
而气相色谱则是将混合物蒸发为气体，在柱内的固定相上进行分离。
它们在不同的应用领域中具有各自的优势，能够满足不同的分离和分析需求。
另外，随着色谱技术的发展，还出现了许多新的色谱方法。
比如，超临界流体色谱（SFC）是一种将超临界流体作为流动相的分析方法，其在化学、食品等领域具有广泛的应用。
离子色谱则是一种将离子交换柱作为固定相的分离技术，可以用于分析无机离子和有机物的离子。
这些新的色谱方法为分析人员提供了更多的选择，能够更好地满足实际应用的需要。
除了在分离和分析领域的应用，色谱技术还广泛应用于质量控制和环境监测等方面。
在药物研发中，色谱技术可以用来检测和分离不同组分，确定纯度和含量，并进行质量评价。
在环境监测中，色谱技术可以用于检测和分析水、空气、土壤等样品中的有害物质，保障环境的安全和健康。
此外，色谱技术还在食品安全方面发挥着重要的作用。
食品中常常存在着农药、重金属等有害物质，通过色谱技术的分析，可以及时检测出这些有害物质的存在，并制定相应的措施进行处理。
这对于保障食品安全和保护消费者的健康是至关重要的。
总的来说，现代色谱技术的发展为科学研究、生产制造、环境保护等领域提供了重要的科学支撑。
现代液相色谱技术导论
现代液相色谱技术导论
现代液相色谱技术是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它可以
用来分离、鉴定和定量分析混合物中的各种成分。
它是一种综合
性的分析技术，可以用来分析复杂的混合物，并且可以在短时间
内完成分析。
现代液相色谱技术的基本原理是将混合物中的各种成分分离出来，然后用检测器测量每个成分的浓度。
液相色谱技术的基本组成部
分包括柱、检测器、泵和计算机。
柱是液相色谱技术的核心部分，它由一种吸附剂组成，可以将混合物中的各种成分分离出来。
检
测器是用来测量每个成分的浓度的，它可以根据每个成分的特性
来测量它们的浓度。
泵是用来将混合物送入柱中的，它可以控制
混合物的流速，从而控制分离的效果。
计算机是用来控制整个液
相色谱系统的，它可以控制柱、检测器和泵的运行，并且可以将
测量的数据进行处理和分析。
现代液相色谱技术的应用非常广泛，它可以用来分析各种混合物，如药物、食品、环境样品等。
它可以用来分离、鉴定和定量分析
混合物中的各种成分，并且可以在短时间内完成分析。
此外，它
还可以用来检测混合物中的有毒物质，从而为食品安全提供可靠
的保障。
现代液相色谱技术的发展也受到了许多因素的影响，如柱材料、
检测器、软件等。
柱材料的发展使得液相色谱技术可以分离更复
杂的混合物，检测器的发展使得液相色谱技术可以检测更灵敏的
成分，软件的发展使得液相色谱技术可以更快地完成分析。
综上所述，现代液相色谱技术是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它可以用来分离、鉴定和定量分析混合物中的各种成分，并且可以在短时间内完成分析。
现代色谱分析ppt素材
Journal of Chromatography Science
Journal of High Resolution Chromatography
LC·GC
Analyst
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2
第二节 GC与HPLC的比较
色谱的定义：利用不同物质在不同相（流动相，固定
相）中的不同分配系数进行分离的方法叫色谱法. 按两相状态分：
气相色谱 GC
液相色谱 LC
流动相 气体
液体
固定相 固体
液体
固体
液体
色谱 名称
气固GSC
气固吸附色 谱
气液GLC 气 液固LSC 液分配色谱 液固吸附色
谱
液液色LLC 液液分配色谱
3
第三节 色谱色谱文献
发表GC文献的主要期刊
Journal of Chromatography .A
色谱
Journal of Chromatography .B
分析测试通报
The Journal of Microcolumn Separation 分析科学学报
Chromatographia
分析仪器
现代色谱分析
1
第一章 概论
第一节 色谱发展概况 色谱法简介
1906年正式命名色谱法Chromatography) Tswett应用吸附原理分离植物色素的新方法碳酸 钙作固定相,把植物根茎叶的石油醚提取液从柱顶端 倒入，然后用纯净的石油醚冲洗，结果出现不同颜 色的谱带，Tswett把这种分离方法命名为“色谱”。
现代色谱分析技术发展及应用
现代色谱分析技术发展及应用色谱分析技术是一种重要的分离和分析方法，在各个领域具有广泛的应用。
随着科学技术的发展，色谱分析技术也不断地得到改进和完善。
本文将就现代色谱分析技术的发展历程以及应用领域进行探讨。
一、色谱分析技术的发展历程色谱分析技术起源于20世纪初，最早的色谱法是在液体中通过旋塞柱进行分离的，被称为“旋转色谱法”。
随后，固定相柱的发明推动了色谱分析技术的进一步发展。
20世纪50年代，气相色谱技术的诞生使得色谱分析技术得到了重大突破。
然而，早期的色谱分析技术存在着许多缺点，如分离效率低、分析速度慢等。
为了克服这些问题，人们进行了一系列的改进和创新。
在20世纪60年代，高效液相色谱技术被引入，这种技术在分离效率和分析速度方面较传统的液相色谱技术有了显著的提高。
此外，超临界流体色谱、毛细管电泳等新型色谱分析技术的出现也为色谱分析的研究和应用带来了新的思路和方法。
二、现代色谱分析技术的分类及原理现代色谱分析技术主要可以分为气相色谱、液相色谱和电泳三类。
下面将分别介绍这三种技术的原理和特点。
1. 气相色谱（Gas Chromatography，GC）气相色谱是利用气体作为载气相和样品分子之间的分隔介质，将混合物中的分离成分分开的色谱技术。
它主要包括样品的气相进样、气相传递和色谱柱的分离。
气相色谱具有分离效率高、分析速度快和灵敏度高等优点，被广泛应用于气体组分分析、环境检测、食品安全等领域。
2. 液相色谱（Liquid Chromatography，LC）液相色谱是以液体作为流动相和样品分子之间的分离介质的色谱技术。
常见的液相色谱包括高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）和超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC）。
液相色谱具有高分离度、适用范围广、操作简便等特点，广泛应用于生物医药、食品安全、环境监测等领域。
色谱和光谱技术
色谱和光谱技术色谱和光谱技术是现代分析化学中最重要的工具之一，广泛应用于化学、生物、环境、材料等各个领域。
这些技术可以将复杂的混合物分离成单个组分，并对其进行定性和定量分析，从而为科学研究、工业生产和质量控制提供重要的依据。
1.气相色谱气相色谱是一种基于气体为流动相的色谱技术，具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，适用于挥发性有机物、永久性气体、部分无机化合物等进行分析。
在食品、药品、环保、化工等领域应用广泛。
2.液相色谱液相色谱是一种基于液体为流动相的色谱技术，主要适用于分离有机化合物和高分子化合物等。
该技术具有高分辨率、高灵敏度、高选择性等优点，是生物医药、食品安全、环境监测等领域的重要分析方法之一。
3.离子交换色谱离子交换色谱是一种利用离子交换剂为固定相的色谱技术，主要适用于分离离子化合物和可解离的化合物。
该技术具有高分辨率、高灵敏度、高选择性等优点，是分析化学中常用的方法之一。
4.质谱-质谱联用质谱-质谱联用是一种将质谱仪与色谱技术联用的技术，可以实现复杂混合物的分离和鉴定。
该技术具有高灵敏度、高分辨率、高鉴定能力等优点，是生物医药、食品安全、环境监测等领域的重要分析方法之一。
5.时间飞行质谱时间飞行质谱是一种快速质谱技术，可以在短时间内完成样品的鉴定和分析。
该技术具有高灵敏度、高分辨率、快速分析等优点，适用于生物医药、食品安全、环境监测等领域。
6.电子轰击质谱电子轰击质谱是一种利用电子束为离子源的质谱技术，可以鉴定和分析有机化合物和部分无机化合物。
该技术具有高灵敏度、高分辨率、高鉴定能力等优点，适用于生物医药、食品安全、环境监测等领域。
色谱技术的最新发展
色谱技术的最新发展色谱技术作为一种基础分析技术，在化学、生物和环境等领域有着广泛的应用。
随着科学技术的不断进步，色谱技术也在不断地进行创新和发展，为各种领域的分析提供更为高效、灵敏、准确的方法。
一、毛细管电泳色谱技术的新进展毛细管电泳是一种在细直管道中利用电场对分离物的电荷进行分离的技术，是分子分离与分析的一种重要方法。
目前，毛细管电泳色谱技术已经成为分析生物分子的重要手段之一。
近年来，毛细管电泳色谱技术已经得到了一定的发展，在处理高增益的问题上有了极大的提升。
比如，灵敏的荧光检测器的引入，提供了更高的检测灵敏度和分子选择性，从而使得毛细管电泳色谱技术成为越来越适合生物领域的研究方法。
二、气相色谱质谱联用技术的新进展气相色谱质谱联用技术是通过将气相色谱和质谱联合使用，将两种技术的优点紧密结合在一起，以便实现高分辨率分离和分析化学分子。
最近，气相色谱质谱联用技术在分离和分析复杂物质方面得到了进一步的实践和发展。
利用气相色谱质谱联用技术，可以有效地分离和分析生物、化学和环境研究中的复杂混合物。
同时，由于气相色谱分离和分析具有高速分离和分析能力，因此在分析过程中不需要液相介质，也不易污染和重复分析。
三、液相色谱电喷雾质谱联用技术的新进展液相色谱电喷雾质谱联用技术是将高效液相色谱和电喷雾质谱联合使用，结合了二者的优点，使得它具有了很高的分离和分析能力。
近来，液相色谱电喷雾质谱联用技术得到了更为实际的研究和应用。
针对生物玻璃混合物和高分子化合物的分析，液相色谱电喷雾质谱联用技术已经成为现在最先进和最高效的分析方法之一。
四、离子色谱技术的新进展离子色谱是分析离子材料的一种特殊方法，在分析和检测离子性污染物等领域有广泛的应用。
在过去，离子色谱的使用限于离子物学科学的专家和学者使用，但现在它已经广泛应用于生物、环境和食品等领域。
近年来，离子色谱技术得到了很好的发展。
其新一代离子色谱仪器具有定量高、灵敏度高、速度快和准确性好等特点，从而提供了更广泛的应用前景。
现代薄层色谱(平面色谱)技术
荧光
表一
采用 HPTLC 板能提高分辨率，进行光密度扫描时能降低背景噪音，检测限较普通 TLC 低一个数量级，展开时间和试剂消耗也显著降低，因而 HPTLC 薄层板已逐渐取代普通 TLC 板成为主要应用的固定相。
图二是用 TLC 和 HPTLC 板分离熏衣草油的比较。HPTLC 采用一次展开，耗时 8min， 与 TLC 两次展开，展距 15cm，耗时 35min 的效果相当。
6
AMD 是一项重现性非常好的技术，典型的应用领域包括分析杀虫剂、脂类及生物活性 物质监控等（图八）。
图八 AMD 分离杀虫剂（德国标准方法 DIN 38407 Part 11）
e．衍生、照相和计算 可对一些特殊或非特殊的化学物质非常方便的进行色谱前或色谱后衍生是薄层色谱的 一大优势,有许多衍生试剂可供选择。对于液体衍生试剂可采用喷雾或浸板方式。喷雾具有 快速、方便及试剂消耗少等优点，但同时也会产生烟雾，需要小心排除（可采用喷雾抽气箱）。 采用浸板设备浸渍显色均匀，但试剂消耗大（最多 200mL）。 为了最充分利用薄层色谱的视觉效果，可对薄层板进行照相。现在视频照相和数码照相 广泛应用于此。采用合适的光源，对同一块薄层板在 UV 254nm，UV 366nm 及可见光下（衍 生前和/或后）对此检测可提供更多有用信息，尤其是指纹图谱分析。 为了方便目测，TLC 板上常常含有所谓的 UV-指示剂（F254），在 UV 254nm 激发下产 生绿色或蓝色荧光。对 UV 254nm 有吸收的物质存在于斑点上时发射的荧光会减弱。HPTLC 通常采用光密度法（扫描）定量计算，板上分离后的斑点用一束长宽可选的光条扫描，仪器 内的光敏感应器检测反射光。样品区域（片段）和无样品区域的光信号差异和同一块板上已 知量的标准品斑点比较。光密度测定可采用吸收法或荧光法，光谱带宽为 190-800nm。吸收 法测定通常给出的数据更符合非线性方程，只有在非常小的浓度范围内可采用线性方程计算 （图九），而荧光法能较好地符合线性方程。
现代实用气相色谱法
现代实用气相色谱法是一种分离技术，它将物质从各自的基础流体混
合物中分离出来，然后进行分析测定。
气相色谱将分析的对象物质浮
动在一个热冷屏区间上，混合气体内的物质成份随着温度的变化，其
分离程度不同。
气相色谱法把物质高速运动分离成一系列带有不同气
体构成的带基，然后通过检测器测出分离出来的成份，实现目标物质
的定性和定量分析。
一般来说，实用气相色谱法非常有效，可以使用简单的快速分离方法，即使在较低的温度和压力条件下，也能得到准确的分析结果。
它与其
他分析测试方法相比，具有低成本，高通量，操作简单的优点。
它的
应用非常广泛，可以用于特定的有机物质的测试和评估，也可以用于
特定的药物，气体，石油和化学分子的测定，还可以用于监测污染物
的测定量。
实用气相色谱法的基本流程是先将样品分离，然后对每一组固有成分
分别进行分析，当每个成分满足分析要求时，它们就可以准确地被识别。
整个实验过程中，物质温度和压力可以实时调节，以达到最佳的
分离效果，而且在实验过程中不会发生任何化学反应，因此可以得到
较为可靠的测试结果。
现代实用气相色谱法在各行各业中应用广泛，可以用来测定和评估物
质组成，用于制药，石油，化工等领域，还可以用于污染物的监控，
方便快捷，耗时短，几乎可以立即得到测试结果。
它与传统色谱分析
测定方法相比，在分离分析过程中更灵活，更为精确，具有更快的数
据处理速度，可以实现定性和定量的分析，从而得到准确的测试结果。
色谱分析技术的应用和发展趋势
色谱分析技术的应用和发展趋势在日常生活和工业生产中，有许多种类的物质需要进行分析和检测。
色谱分析技术就是一种用于分离和检测化合物的重要方法。
这种方法具有灵敏、快速和经济的特点，被广泛应用于医药、食品、化学、环境等各个领域。
本文将介绍色谱分析技术的应用和发展趋势。
一、色谱技术的分类根据色谱柱填充材料不同可以将色谱技术分为气相色谱和液相色谱。
其中气相色谱是利用气体作为载体，将物质分离出来。
液相色谱则是利用溶液作为移动相，将物质分离出来。
此外，还有许多基于色谱技术的方法，如超高效液相色谱（UHPLC）、毛细管电泳等。
这些方法各有优点，可以根据具体的分析需求选择不同的技术。
二、应用领域1. 医药行业在医药药物研究中，利用高效液相色谱法、气相色谱法等技术，对药物进行检测，评价其纯度、活性和质量等方面。
此外，在药物代谢动力学研究中也需要用到色谱技术。
2. 食品行业在食品检测方面，通过色谱技术可以检测出各种化学污染物和添加剂。
比如在奶制品中检测出过氧化值，或者检测出食品中的苯并芘等有害成分。
3. 化学行业在化工生产过程中，需要对原材料和产品进行分析和检测。
比如可以利用色谱技术来检测污染物的含量和纯度等方面。
此外，还可以将液相色谱和质谱联用，实现化合物的鉴定和结构解析等方面。
4. 环境行业环境污染对生态系统和人类健康都有很大的影响。
利用色谱技术可以对各种污染物进行检测和定量分析。
例如空气中的苯系物质含量、水中的重金属含量等等。
三、色谱技术的发展趋势1. 自动化随着科技的发展，越来越多的实验室开始使用自动化技术。
针对色谱技术，也开始使用自动化设备来实现样品处理、数据分析等步骤。
2. 高灵敏度和高分辨率现代色谱技术的发展方向是追求高灵敏度和高分辨率。
为了实现这一目标，发展了诸如UHPLC、二维色谱等新技术，提高了色谱技术在分析中的地位。
3. 综合技术将液质联用、气质联用、毛细管电泳等不同的分析技术进行综合，可以在分析能力和检测效率等方面实现更进一步的提升。
色谱技术发展现状
色谱技术发展现状色谱技术是一种将混合物中化学物质进行分离和分析的重要方法。
随着科学技术的不断进步，色谱技术在分析化学、生物化学、环境监测等领域得到了广泛的应用。
下面将从液相色谱和气相色谱两个方面，对色谱技术的发展现状进行详细的介绍。
液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种将样品溶解在流动相中，通过固定相与流动相之间的相互作用进行分离的技术。
随着色谱柱固定相和检测器的不断改进，液相色谱（仅指高效液相色谱，HPLC）已经成为目前最常用的色谱技术之一首先，色谱柱的发展是液相色谱技术发展的重要方向。
过去，色谱柱是手工制备的，制备周期长，质量难以控制。
但是，随着硅胶和化学合成固定相的出现，色谱柱制备工艺得到了极大的改进。
现在，化工技术使得色谱柱的制备工艺变得更加规范，质量更为可靠。
此外，新型的液相色谱柱固定相材料的出现也推动了液相色谱技术的发展。
例如，疏水相反相色谱柱、亲水相正相色谱柱、离子交换色谱柱等不同类型的液相色谱柱固定相材料的不断涌现，使得我们可以更好地选择适合不同分析需求的色谱柱。
在液相色谱技术的检测方面，随着检测器的更新换代，液相色谱分析的灵敏度和分辨能力大大提高。
以紫外吸收检测器为例，从传统的单波长检测器发展到多波长检测器、二极管阵列检测器和矩阵辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）等多种检测器，使得液相色谱技术在分析研究中有了更多的应用选择。
气相色谱（Gas Chromatography，GC）是一种将样品挥发成气相，通过固定相与气相之间的相互作用进行分离的技术。
随着气相色谱技术的发展，气相色谱在环境监测、食品安全、毒理学等领域得到了广泛的应用。
与液相色谱类似，气相色谱技术的发展也需要有更好的色谱柱和检测器。
在色谱柱方面，随着毛细管柱和开放管柱的出现，气相色谱的分辨能力得到了极大的提高。
相比之下，毛细管柱的内径更小，分离效果更好，但是样品处理要求更高。
现代色谱分离技术
洗脱 再生
一般先用水洗，再用梯度递增的乙醇溶液进行洗脱，并控制洗 脱液的用量与流速，使提取液由上而下通过树脂柱。收集、合 并洗脱液，减压蒸馏，回收溶剂至干，低温真空干燥，得精制 产品。
95%乙醇洗脱至无色，再用2%盐酸浸泡，用水洗至中性， 再用2%NaOH浸泡，再用水洗至中性。
(四) ODS反相柱层析
123456 7
小极性的组分先被洗脱下来 大极性组分后被洗脱下来
（二）凝胶柱层析
1 原理
2 凝胶层析中常用的凝胶
葡聚糖凝胶 （Sephadex）
聚丙烯酰胺凝胶
琼脂糖凝胶
3 凝胶柱的使用
溶胀
装柱
上样
洗脱
羟 将 湿丙层法基析上葡 柱 样聚垂：糖直凝固胶定（在铁Se架ph上ad，ex打L开H-柱20下）口为开干关粉。，将装溶柱胀前好 量 的好凝打柱胶开体 放层积在析，烧柱再杯的根中下据，口凝使开胶凝关的胶，吸表放水面出量的凝计水胶算层柱干与面重凝上，胶的体称多积重余相后溶等足液。， 量 用 使 •控用玻液制有璃面流机 棒 与速溶搅凝，剂匀胶过（凝表快常胶面或用液相过氯，平慢仿顺齐影：玻。响甲璃分醇棒离灌=效1入：果柱1。）内溶。胀此。时柱下口一 边 沉 品 •流排降慢出水，慢将液， 逐 渗样分上步入品步口形凝加收一成胶在集边凝内凝，加胶。胶分入柱当表析搅。慢面、匀当慢，合的到渗打并凝达入开。胶所凝下，需胶口可凝的开见胶样关凝高品，胶度溶控连时液制续，面流均立与速匀即凝，地关胶使柱样 闭 面下相口平， 齐使时凝，胶关完闭全下沉口降，。完成上样。然后在凝胶柱面上加一 层（3—5cm）洗脱液，接上洗脱瓶准备洗脱。
•打开色谱柱下端活塞，控制流速， 等份收集洗脱液，也可用自动收 集器收集。
•通过上端加压或者下端减压可以 提高洗脱速度，但是可能会降低 塔板数影响分离效果。
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一．论文撰写要求1.论文摘要部分应包括：目的、方法、结果和结论四个发明，大约200字左右，正文部分约3000字。
2. 3-6个关键词3.参考文献不少于10篇。
二．参考题目1.手性固定相研究进展2.气相色谱法在有机农药残留物分析中的应用研究3.液相色谱在中药分析中的应用4.超临界流体色谱在中药有效成分提取中的应用研究5.薄层色谱在杂质检查中的应用6.反相液相色谱在药物质量控制中的应用研究7.正相高效液相色谱的应用研究8.环糊精类固定相拆分手性药物的研究进展9.毛细管电泳法在生物大分子中的研究进展10.手性药物的毛细管电泳法拆分方法研究超临界流体色谱法在中药有效成分提取中的应用研究摘要: 综述了近年来超临界流体色谱法在中药有效成分提取中的应用, 以及该法和其它分析技术联用测定中药材有效成分含量的概况。
目的:探讨超临界流体色谱法以及该法和其它分析技术联用,在中药有效成分提取中应用，并对其含量进行测定。
方法：在SFC中, 采用的流动相是CO?, 由于CO?极性的关系, 使SFC 的分析范围受到了限制, 为了改变其溶剂化能力, 通常是改变压力或流动相中添加改性剂, 最为常用的改性剂是甲醇和异丙醇,提取分析盐酸麻黄碱、黄酮类等有效成分。
在SFC与其它色谱技术的联用中，采用SF E - H PL C 法测定银杏叶提物中总黄酮苷的含量以及在延胡索中含量的测定。
结果：超临界流体色谱在中药有效成分的分析中起着重要的作用,是气相色谱和液相色谱技术的重要补充。
我国学者对该领域也作了大量的研究, 并取得了一定的成果。
结论:随着超临界流体理论和技术的发展, 相信超临界流体色谱在中药的提取和有效成分的分析中会起着越来越大的作用。
关键词: 超临界流体色谱中药有效成分提取分析超临界流体(Sup e rcr it ica l F lu id, 简称SC F ) 是指温度和压力均在其临界点之上的流体, 现研究最多的流体是CO?, 临界条件较温和(T c= 31℃, P c= 7. 48M P a) , 且无毒、不易燃。
超临界流体具有非凝缩性特征, 超临界流体相对接近液体的密度使它具有较高的溶解度, 而相对接近气体的粘度使得具有较好的流动性能, 扩散系数介于液体与气体之间, 因此超临界流体对所有萃取的物质组织具有较好的渗透性。
在临界点附近压力的很小变化都会使流体密度产生急剧变化, 从而引起溶解度的改变。
中药的化学成分, 尤其是有效成分是中药发挥药效的物质基础, 因而有效成分含量测定就成为评价中药品质的重要标志。
中药的质量研究, 是保证中药的安全、有效、可控、稳定的重要环节。
为了提高中药材质量, 有关部门在“七五”“八五”期间将, “常用中药材品种整理和质量研究”列为国家重点攻关课题, 在此基础上,“九五”期间又继续立项对中药材进行质量标准的规范化研究, 其目的是逐渐建立起我国中药的标准化、规范化质量标准, 争取使其成为国际上参照执行的标准, 从而为中药持续进入国际市场创造条件。
1、超临界流体色谱( Sup e rcr it ica l f lu id ch rom a to g rap hy, 简称SFC )超临界流体色谱是采用超临界流体作为流动相的一种新型分析方法, 由于超临界流体具有溶解能力强、流动性好、传质速率快等特点, 因而它比气相色谱(GC ) 和高效液相色谱(H PL C ) 具有更多的优点。
气相色谱主要适用于热稳定性好、沸点不高、分子量小于400的化合物分析, 液相色谱则可在室温下分析高沸点、热不稳定、分子量大的化合物, 但由于其检测器的缺陷, 也使其应用范围受到了一定的限制。
而超临界流体色谱恰好既具备了气相色谱的高速、高效分析性能和液相色谱的高选择性, 且克服了上述缺陷, 它可与多种检测器兼容, 如氢火焰离子检测器(F ID )、紫外光度检测器(U V )、蒸发光散射检测器(EL SD )、氧化还原电流检测器、化学发光氮气检测器(CLN D )等, 还可以与质谱(M S)、红外光谱( IR ) 等技术连用。
因此SFC 是GC 和H PLC 的有效补充, 成为分析大分子量、难挥发、遇热易分解物质的有效方法, 如脂肪酸、磷脂、甘油脂、甾类、类胡萝卜素等。
SFC 中, 常用的流动相是CO?, 由于CO?极性的关系, 使SFC 的分析范围受到了限制, 为了改变其溶剂化能力, 通常是改变压力或流动相中添加改性剂, 最为常用的改性剂是甲醇和异丙醇。
如郭亚东等人研究了茶叶中咖啡因的超临界流体色谱分析, 用超临界流体色谱法(SFC ) 测定茶叶中的咖啡因, 在二氧化碳流动相中加入体积分数为5% 的甲醇后, 得到了良好的分离效果, 该方法具有样品前处理简单, 共存组分不干扰测定, 分析速度快等优点, 可以用于茶叶中咖啡因的快速分析。
近年来, 对固定相的研究也呈上升趋势, 如Su to 等采用氟代烷硅胶填充柱分离盐酸麻黄碱的研究。
刘志敏等利用SFC 成功的分离了黄酮类化合物, 研究了流动相组成、柱条件、压力及温度的影响。
发现流动相组成是影响分离的一个很重要的因素; 其次, 色谱柱条件也是影响分离的一个很重要的因素, 并在合适的色谱条件下进行了银杏叶提取物中黄酮类化合物的分离。
赵锁奇等建立了空白硅胶填料用于SFC 分离强极性物质和生物碱的方法,采用三元流动相(CO?- 携带剂- 酸碱改性剂) 成功的分离了多羟基黄酮化合物的混合物和生物碱混合物, 探索了操作温度、压力、携带剂浓度和流速对目的产物分离纯化的纯度和收率的影响。
由于SFC 对环境污染小、分析范围广, 是一种理想的药物分析手段, 可用于手性对映体的分离, 随着毛细管SFC 的迅速发展, SFC 应用于手性药物的分离研究报道也增多。
在今后SFC 的研究焦点是如何将经典的一些填充柱应用到SFC 中, 添加改性剂CO?的流动相以及各种检测器的应用以及注重一些中等极性化合物的分离。
另外, Depta 等研制了采用超临界CO?作为流动相的逆流色谱, 该制备装置包含了8 个内径30 mm 的高压色谱柱, 可在最高350 ba r、80℃下工作。
该逆流色谱装置在240 ba r、40℃下分离叶绿醇异构体, 均达到了99% 以上的纯度。
2、超临界流体色谱法与其它色谱技术的联用由于超临界流体色谱法(Sup e rcr it ica l f lu id ex t ract io n, 简称SF E ) 具有良好的选择性, 使它在中药有效成分的提取分离过程中发挥了较大的优势, 并有利于中药有效成分的分析。
分析型超临界流体技术与其他分析技术如GC , H PL C , GC ?M S, SFC , TL C , F T IR 等的联用可用于中药有效成分的分析。
SF E 与其它分析技术的联用有离线和在线两种方式。
离线方式较为简单, 应用范围广, 如SF E - GC ?M S 的联用, 由于SF E 技术的高选择性和GC ?M S 技术的方便快捷,SF E - H PL C M a rx 等建立了快速SF E - H PL C 测定Gua rana 中的可可碱、茶碱、儿茶素和表儿茶素的方法。
Ibanez 等研究了从薄荷中提取抗氧化性物质, 并用反相高效液相色谱法测定提取物中的含量。
何首乌为蓼科植物P oly g onum m u lti2 f lorum T hunb 的块根, 具有滋补强壮、解毒消痛、润肠通便等功能。
何首乌含有蒽醌类, 二苯乙烯苷类及磷脂等有效成分, 其中蒽醌类是重要活性成分。
袁海龙等建立了SF E - H PL C 法分离测定何首乌中的蒽醌类成分以及磷脂类成分, 为何首乌及其制剂的质量控制提供了方法性依据。
又如延胡索C ory d a lis y an2 h u su o W. T. w ang 的有效成分为生物碱, 其中以延胡索乙素(d l-te t rahyd rop a lm a t ine) 的止痛、镇静、抗惊作用最强。
原永芳等建立了SF E - H PL C , 应用硅胶柱- 反相洗脱系统的高效液相色谱法测定延胡索及其成方制剂中延胡索乙素的含量, 方法简便、快速、精密度高。
此色谱系统同样适于其他中药及其制剂中生物碱的定量分析。
余佳红等采用SF E - H PL C 法测定银杏叶提物中总黄酮苷的含量, 方法简便、快速, 重现性好。
李迎春等人用超临界CO?流体及共溶剂乙醇萃取丹参中的3种丹参酮, 并用高效液相色谱法(H PL C ) 检测了萃取产物中3种丹参酮的含量。
2.2 SF E - GC ?M S GC ?M S 法分析水蒸气提馏法(SD ) 与超临界流体色谱法(SF E ) 从百里香中提取物的化学成分, SD 法萃取物中有55 个化合物被测定, 含单萜11个, 倍半萜12个; SF E 萃取物中有75 个化合物被测定, 含单萜13个, 倍半萜7个。
百里香为百里香属植物, 它的花煎剂流浸膏可以用于支气管炎或上呼吸道疾病的防治, 也可用于神经炎或脊神经根炎止痛之用。
此外, 临床报道可以治疗急慢性胃病。
所以, 分析其化学成分对研究其药理作用具有重要意义。
陈斌等用超临界流体萃取法联用毛细管气相色谱法(C GC ) 测定了丹参药材中丹参酮IIA 的含量, 结果表明SF E - C GC 法测定丹参药材中丹参酮IIA 简便快速, 结果准确可靠。
2.3 SF E - L C M S Seno ran s 等采用超临界流体萃取技术从薄荷叶中选择性提取具有抗氧化性的活性物质, 并用液质测定提取物中的活性物质。
2. 4 SF E - SFC M . A sh raf- Kho ra ssan i 等采用SF E - SFC联用方法从醉椒根中提取并用超临界流体色谱分析了7 种醉椒根内酯( 7, 8 - D ihyd ro kava in, Kava in, 5, 6 -D ehyd ro kava in, Yango n in, M e thy st icin, 5, 6, 7, 8 - T e t rahy sro yango n in, D ihy d rom e thy st icin )。
醉椒根在南太平洋地区人们的生活中经常使用, 它可以治疗各种疾病。
3、结束语综上所述, 超临界流体色谱以及超临界流体技术与其它分析技术的联用在中药有效成分的分析中起着重要的作用,是气相色谱和液相色谱技术的重要补充。
我国学者对该领域也作了大量的研究, 并取得了一定的成果。