蔗糖含量的测定方法二

蔗糖含量测定（方案一）：

果实中蔗糖含量测定可参考（薛应龙等.植物生理学实验手册〔M].上海:上海科学技术出版社，1985.135~138）

1实验原理：先用碱性溶液同植物材料的可溶性糖提取液一起加热，破坏其中的还原糖。然后用蒽酮法在较低的温度下，测定蔗糖中的果糖部分。不含果糖苷的其他糖类在较低的温度下不与蒽酮显色，材料中如含有其他带有果糖苷的非还原糖（如：棉子糖、松三糖和土木香粉）对测定会有干扰，但是在有蔗糖存在的生物材料中这些糖几乎是不存在的。一般的说此方法的精确性是很高的。

2实验仪器：衡温水浴，分光光度计、

3实验材料：植物的根、茎、叶。

4实验试剂：30%KOH的水溶液；蒽酮试剂【150mg 蒽酮溶于100ml 稀硫酸（76ml 浓硫酸溶于30ml 水中）】；标准蔗糖溶液（1 mg/ml）；转化酶溶液。

5实验步骤：植物材料在110摄氏度下杀死，经70~80摄氏度烘干研磨，称取50mg加3ml 80%的乙醇，在80摄氏度下提取半小时，离心取上清液，共提取3次。合并上清

液，加少许（约0.1克）活性炭脱色，并定容至10ml。根据蔗糖含量的多少

吸取0.1~1.0ml于试管中，沸水浴中加热浓缩至0.05~0.1ml（不要大于0.1ml，

否则显色时间要延长），加入0.1ml30%的KOH，在沸水浴中放10min，冷却

至室温。加入3ml蒽酮试剂，40摄氏度保温10~15min，在620nm测定吸光度

值。同时取20~100μg蔗糖（在0.1ml体积中）于一系列试管中，加入0.1ml

30%KOH以同法显色，做成标准曲线。据此计算植物材料中蔗糖的含量。如

植物材料中有其他含果糖苷的干扰物质存在，可将糖的提取物去掉酒精后，与

转化酶一起保温。200μg蔗糖水解97~99%。在与转化酶保温前后各测定一次，

两次结果相减，即为蔗糖测定结果。但转化酶也能水解棉子糖，而不水解松三

糖及土木香粉。

蔗糖含量测定（方案二）：

（张志良等编．植物生理学实验指导[M]．高等教育出版社，2009，106．）

1实验仪器：分光光度计，恒温水浴锅，电子天平，烘箱，刻度离心管，带塞试管，漏斗。2实验试剂：2 mol/L NaOH(80 g/L),30% HCl，蔗糖标准液（取100mg 蔗糖用80%乙醇配成500mL溶液，即得200 μg/mL 标准液），间苯二酚溶液（0.1g间苯二酚溶液于

100mL 95%乙醇溶液，棕色瓶内保存）。

3实验材料：各种植物叶片或种子。

4 实验步骤：

（1）制备提取液：植物叶片或种子，在110℃烘箱烘15min，然后调制70℃过夜。干叶片磨碎后，秤取50mg样品倒入10ml刻度离心管内加入4ml 80%乙醇，至于80℃水浴中不断搅拌40min ，离心，收集上清液，其残渣加2ml 80%乙醇重复提2次，合并上清液。在上清液中加入10mg活性炭，80℃脱色30min，80%乙醇定容至10ml，过滤后去滤液测定。

（2）标准曲线制作：取蔗糖标准液用80%乙醇稀释成系列（0、10、20、30、40、60、80、100μg/ml）浓度的溶液。分别取0.4ml 溶液，各自加入200μl 2mol/L NaOH，100℃煮沸5min，冷却，加入2.8ml 30%HCl，0.8ml 0.1%间苯二酚，摇匀，80℃水浴反映10min，冷却后再480nm测定OD值，以0浓度管调零。绘制蔗糖浓度-OD值曲线。

（3）测定：取提取液0.4ml，按上述步骤进行蔗糖含量的测定，读取OD值，并从标准曲线得到提取液中的糖含量，然后再进行计算样品中的蔗糖含量。

（4）注意：色素对本实验影响较大。