大小型层析柱的装填实践介绍

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层析柱原理和使用方法

层析柱原理和使用方法
层析柱原理是一种常用的色谱技术，可以分离复杂混合物中的各个组分。

层析柱是一个长管状结构，内部填充有吸附剂或离子交换树脂等材料。

根据组分在填料中的亲和性差异，不同组分会以不同的速度通过填料，从而实现分离。

层析柱的使用方法如下：
1. 样品预处理：将混合物中的目标组分溶解或悬浮于合适的溶剂中，并进行必要的样品处理（如pH调整、过滤等）。

2. 建立实验条件：选择合适的填料材料、填料粒径和填充方法，并确定适当的溶剂体系和流动相条件。

3. 装填填料：将选择好的填料装入柱中。

填料的打包密度和均匀性对色谱分离效果有重要影响，因此要确保填料的均匀性和紧密度。

4. 平衡柱：用流动相预浸柱，使填料均匀吸附流动相，并达到平衡状态。

平衡时间根据填料种类和样品性质而定。

5. 注射样品：将样品以适当的体积注射到柱中，并控制注射速度和压力。

6. 运行分析：启动流动相，控制流动相速度和温度，使样品组分逐渐分离，并记录结果。

7. 数据分析：根据检测器的信号，对分离出的目标组分进行定性和定量分析。

层析柱的使用注意事项：
1. 填料选择：根据被分离组分的性质选择合适的填料。

2. 流动相选择：要确保流动相对目标组分具有足够的分离能力。

3. 注射量控制：注射量应根据柱容量和检测器灵敏度进行合理
控制。

4. 柱温控制：柱温对于某些温度敏感性样品的分离效果有重要影响，可以根据需要进行柱温控制。

5. 柱保养：正确使用和保养层析柱，避免杂质吸附和填料破碎等情况的发生。

6. 数据分析：及时记录和分析实验结果，确保实验数据的准确性和可靠性。

大小型层析柱的装填实践介绍中文优质课件

– 这一操作能够将填料装得最为紧密，而且能够预防死体积旳发生或胶体内沟槽旳出现。
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TOYOPEARL-经典旳装填缓冲溶液
SEC HW-40, HW-50, HW-55, HW-65 and HW-75
IEC DEAE-650, QAE-550C, Super-Q-650, CM-650, SP-550C, MegaCap II SP-550EC and SP-650
0.1M Na2SO4, NaNO3, or NaCL in 50mM phosphate or Tris buffer. Organic solvents may be applied to HW-40 as adsorption chromatography like Sephadex LH-20.
Flow Packed Columns (Millipore-QuikScale+Moduline, GE Healthcare-BPG, Götec-Superformance, BioRad-
Geltec, etc.)
措施简介:
– 将柱底筛板用装填缓冲液润湿（赶走气泡）
– 任何时候，均需确保浆液在注入层析柱迈进行过匀浆操作
o Thin frit keeps the resin together – it is not used as flow distributor –> a barrier of only ~60um – negligible influence on pressure generation
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒压装填措施
Radial Flow - “Self Packer” - preset column volume (Proxcys-CRIO)

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析基础知识

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析基础知识一、实验目的和内容目的：1. 掌握凝胶过滤层析的原理，掌握凝胶柱柱效测定方法；2. 熟悉凝胶层析的一般过程；3. 了解凝胶介质的选择原则和应用领域。

内容：1. Sephadex G-50凝胶柱的装填；2. 凝胶柱柱效测定；3．凝胶再生的方法。

二、实验仪器和试剂1. 实验仪器层析柱（1×40 cm），砝码天平，玻璃棒，分部收集器，核酸蛋白质检测仪，记录仪，滴头吸管2. 实验材料和试剂Sephadex G-50，0.02mol/L pH8.0的PBS缓冲液，5％丙酮（PBS缓冲液作为溶剂）三、实验步骤清洗层析柱测定层析柱的内径、高度，计算所需凝胶的体积根据Sephadex G-50的膨胀体积，计算所需干凝胶的质量称取相应质量的干凝胶，加入其总吸液量10倍的0.02 mol/L PBS在100℃水浴中加热溶胀1小时以上，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去用真空干燥器抽尽凝胶中空气，并将凝胶上面过多的溶液倾出关闭层析柱出水口，向柱管内加入约1/4柱容积的洗脱液（重复使用的填料，从此步开始）边搅拌，边将薄浆状的凝胶液连续倾入柱中，使其自然沉降等凝胶沉降约2-3cm后，打开柱的出口，调节合适的流速，使凝胶继续沉积待沉积的胶面上升到离柱的顶端约5cm处时停止装柱，关闭出水口通过2-3倍柱床体积的洗脱液使柱床稳定(流速0.5～1 mL/min)始终保护凝胶上端有一段液体准备好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白检测仪及记录仪打开柱上端的螺丝帽塞子，吸出层析柱中多余液体直至与胶面相切沿管壁将5%丙酮溶液0.6 mL小心加到凝胶床面上，应避免将床面凝胶冲起（参考完成时间11：30）打开下口夹子，使样品溶液流入柱内，同时收集流出液，当样品溶液流至与胶面相切时，夹紧下口夹子按加样操作，用1 mL洗脱液冲洗管壁2次加入3－4 mL洗脱液于凝胶上，旋紧上口螺丝帽将层析柱进水口连通恒流泵，柱出水口与核酸蛋白质检测仪比色池进液口相连，比色池出液口再与自动部分收集器相连，用两根导线将检测仪与记录仪连接起来，设置好基线的位置洗脱时，打开上、下进出口夹子，用0.02mol/LpH8.0的PBS，以0.5～1 mL/min流速洗脱，记录t r(记录仪纸速设为12cm/h，电压200mv；核酸蛋白监测仪检测波长254nm，灵敏度为0.1A)，计算单位高度的柱效（参考完成时间16：00）柱效计算公式：N = 5.54•［θr/( W 1/2)］2其中，θr为平均洗脱时间，W 1/2为半峰宽。

层析柱直径10mm和16mm

层析柱直径10mm和16mm
层析柱直径的选择会影响到层析柱的性能和应用。

下面分别介绍直径为10mm和16mm的层析柱的特点和应用：
1. 直径为10mm的层析柱：
优点：
- 直径较小，有利于填料的均匀装填，提高分离效果。

- 柱体积较小，实验操作较方便，适合实验室研究。

缺点：
- 柱体积有限，可能不适合大规模样品分离。

- 直径较小，可能对流动相的流速和分布产生影响。

应用：
- 适用于分子筛、离子交换、凝胶渗透与亲和层析等实验。

- 常用于研究实验室，进行小规模样品分离。

2. 直径为16mm的层析柱：
优点：
- 直径较大，有利于提高分离效率，适用于大规模样品分离。

- 柱体积较大，适合工业化生产和高通量实验。

缺点：
- 直径较大，填料装填难度相对较高。

- 设备成本较高，占用空间较大。

应用：
- 适用于大规模样品分离，如蛋白质分离、天然产物提取等。

- 应用于工业化生产，如生物制药、食品工业等。

- 适用于高通量实验，如筛选抗生素、酶等。

总之，直径为10mm和16mm的层析柱各有优缺点，具体选择应根据实验需求、样品规模、分离目标和预算等因素来决定。

如果您需要进一步了解这两种层析柱的详细信息，欢迎随时联系我们。

层析柱装填高度

层析柱装填高度1. 简介层析柱是一种常用的分离技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。

层析柱的分离效果受到装填高度的影响，装填高度的选择对于分离效果和分离速度都有重要影响。

本文将介绍层析柱装填高度的意义、影响因素以及装填高度的选择方法。

2. 层析柱装填高度的意义层析柱的装填高度决定了样品在柱内的停留时间，从而影响分离效果和分离速度。

合理的装填高度可以提高分离效果，缩短分离时间，提高分离效率。

因此，装填高度的选择对于层析柱的分离性能至关重要。

3. 影响层析柱装填高度的因素3.1 层析柱尺寸层析柱的尺寸包括内径和长度，尺寸的选择会直接影响装填高度的确定。

一般情况下，较大的层析柱可以使用更高的装填高度，从而提高分离效果和速度。

3.2 样品性质样品的性质也会对装填高度产生影响。

如果样品分子较大，分离速度较慢，那么可以适当增加装填高度以提高分离效果。

相反，如果样品分子较小，分离速度较快，可以适当降低装填高度。

3.3 目标分离效果目标分离效果是决定装填高度的重要因素之一。

如果需要较好的分离效果，则装填高度应适当增加，以增加样品在柱内的停留时间。

如果只需要简单的分离，可以适当降低装填高度。

3.4 柱床颗粒大小柱床颗粒的大小也会对装填高度产生影响。

较大的颗粒可以使用较高的装填高度，从而提高分离效果。

而较小的颗粒则需要较低的装填高度，以保证分离效果。

4. 层析柱装填高度的选择方法4.1 初步选择装填高度根据样品性质、目标分离效果和柱床颗粒大小等因素，初步选择一个合适的装填高度范围。

可以参考已有的文献和经验值进行选择。

4.2 实验验证选择结果在初步选择装填高度之后，进行实验验证以确定最终的装填高度。

可以选择不同的装填高度进行实验，比较分离效果和分离速度。

根据实验结果选择最佳的装填高度。

4.3 装填高度的调整在实际使用中，可以根据需要调整装填高度。

如果需要更好的分离效果，可以适当增加装填高度。

如果需要更快的分离速度，可以适当降低装填高度。

层析柱装柱流程范文

层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。

它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。

层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。

下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。

填料的选择取决于分离目标和样品特性。

常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。

填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。

2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。

柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。

3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。

浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。

可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。

4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。

烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。

5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。

填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。

6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。

压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。

压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。

7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。

洗涤的选择取决于填料和实验要求。

洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。

8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。

柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。

层析柱的干法湿法填充和相关知识

层析柱装填及相关常识常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。

我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。

由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。

1、柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。

所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。

减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。

以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。

加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。

压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。

特别是在容易分解的样品的分离中适用。

压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。

个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。

2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好柱子长了，相应的塔板数就高。

柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。

试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。

而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。

当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。

现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。

如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。

层析柱使用方法

层析柱使用方法
哇塞，层析柱可是个很重要的实验工具呢！它在很多领域都有着广泛的应用。

那咱就来好好说说层析柱的使用方法哈。

首先得准备好层析柱，检查是否完好无损。

然后就是装柱啦，这可是关键步骤哦！要将填料慢慢倒入柱中，同时用适当的溶剂冲洗，注意不能有气泡产生呀，这就好比盖房子得根基牢固一样重要呢！接着就是上样啦，把样品小心地加到柱子上，可别弄撒了哦。

再进行洗脱，控制好洗脱液的流速，就像把握好节奏一样重要呢。

在整个过程中，要注意保持操作环境的清洁，不然杂质混入可就麻烦啦！还有呀，使用的溶剂要合适，不然也达不到好的效果呀。

在使用层析柱的过程中，安全性和稳定性那也是相当重要的呀！就像走钢丝一样，稍有不慎可能就前功尽弃啦。

要确保实验装置的稳固，避免倒塌啥的危险情况发生。

同时呢，操作过程要规范，可不能马虎大意，这是对自己和实验结果负责呀！只有这样，才能保证实验的顺利进行，得到可靠的结果呢。

层析柱的应用场景那可多了去了呀！在生物化学、制药、食品等领域都能看到它的身影呢。

它的优势也很明显呀，比如能高效分离混合物，让我们更清楚地看到各种成分呢。

这就好像是在一堆混乱中找出秩序一样神奇呀！而且它还可以重复使用，多经济实惠呀！
给你们讲个实际案例哈。

有一次在一个生物实验中，我们就是用层析柱来分离蛋白质的。

哇，效果那叫一个好呀！很清晰地就把不同的蛋白质分离开了，为后续的研究提供了重要的数据支持呢。

这就充分说明了层析柱在实际应用中的强大呀！
总之呢，层析柱真的是个超棒的实验工具呀，只要我们正确使用它，就能发挥出它巨大的作用呀！。

AKTA--实验室层析柱装柱技术介绍

118.54 0.0 0 20 40 60 80 100 120 ml 0.0 0 20 40 60 80 100 120 ml
每米塔板数：N=1600
No 1 2 Ret ml 36.27 118.24 Area mAU*ml 27.8394 5.1267 Area/Peak area (volume) % 84.45 15.55 Height No mAU 8.218 1 0.649 2
8
Column packing
9
Column packing
装柱注意点
• • • • • • •
选择一根设计良好的柱子仔细混合均匀凝胶浆在生产时使用柱子的温度下装柱用平缓的动作将凝胶浆一次性加入柱子中用恒压或恒流装柱稳定和平衡凝胶柱床检查柱效，必要时重装
10
用空柱子须留意.
• 使用调节器(flow adaptor) - 保护柱床的同时更可提高分辨率，节省凝胶 • 柱子物料须生物兼容，并有优良的化学抗性 • 加上装柱器(packing reservoir)，可一次把凝胶装满柱子，大大提高柱效，尤其是凝胶过滤柱。 • 柱子的过滤网孔径应该是凝胶颗粒的1/3, 一般 10µm孔径就够用，如用SOURCE15介质装C柱和XK柱，须换上5µm的网
5
Column packing
• 检测装柱效果一般用<0.5% (30um介质)或<1% (90um介质) 柱体积的1%丙酮测柱效和峰形 • The linear flow rate should be 30 cm/h for 34 µm and 50 µm media and 20 cm/h for 90 µm media
1000
5% column vol sample

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析基础知识

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析基础知识(总6页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析基础知识一、实验目的和内容目的：1. 掌握凝胶过滤层析的原理，掌握凝胶柱柱效测定方法；2. 熟悉凝胶层析的一般过程；3. 了解凝胶介质的选择原则和应用领域。

内容：1. Sephadex G-50凝胶柱的装填；2. 凝胶柱柱效测定；3．凝胶再生的方法。

二、实验仪器和试剂1. 实验仪器层析柱（1×40 cm），砝码天平，玻璃棒，分部收集器，核酸蛋白质检测仪，记录仪，滴头吸管2. 实验材料和试剂Sephadex G-50，L 的PBS缓冲液，5％丙酮（PBS缓冲液作为溶剂）三、实验步骤清洗层析柱测定层析柱的内径、高度，计算所需凝胶的体积根据Sephadex G-50的膨胀体积，计算所需干凝胶的质量称取相应质量的干凝胶，加入其总吸液量10倍的 mol/L PBS在100℃水浴中加热溶胀1小时以上，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去用真空干燥器抽尽凝胶中空气，并将凝胶上面过多的溶液倾出关闭层析柱出水口，向柱管内加入约1/4柱容积的洗脱液（重复使用的填料，从此步开始）边搅拌，边将薄浆状的凝胶液连续倾入柱中，使其自然沉降等凝胶沉降约2-3cm后，打开柱的出口，调节合适的流速，使凝胶继续沉积待沉积的胶面上升到离柱的顶端约5cm处时停止装柱，关闭出水口通过2-3倍柱床体积的洗脱液使柱床稳定(流速～1 mL/min)始终保护凝胶上端有一段液体准备好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白检测仪及记录仪打开柱上端的螺丝帽塞子，吸出层析柱中多余液体直至与胶面相切沿管壁将5%丙酮溶液 mL小心加到凝胶床面上，应避免将床面凝胶冲起（参考完成时间11：30）打开下口夹子，使样品溶液流入柱内，同时收集流出液，当样品溶液流至与胶面相切时，夹紧下口夹子按加样操作，用1 mL洗脱液冲洗管壁2次加入3－4 mL洗脱液于凝胶上，旋紧上口螺丝帽将层析柱进水口连通恒流泵，柱出水口与核酸蛋白质检测仪比色池进液口相连，比色池出液口再与自动部分收集器相连，用两根导线将检测仪与记录仪连接起来，设置好基线的位置洗脱时，打开上、下进出口夹子，用的PBS，以～1 mL/min流速洗脱，记录tr(记录仪纸速设为12cm/h，电压200mv；核酸蛋白监测仪检测波长254nm，灵敏度为，计算单位高度的柱效（参考完成时间16：00）柱效计算公式：N = •［θr /( W1/2)］2其中，θr为平均洗脱时间，W1/2为半峰宽。

柱层析实验报告【范本模板】

柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理.2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。

二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。

从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。

利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95％乙醇或无水乙醇提取。

分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。

柱层析法是色谱法中的一种,它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂(即移动相）的溶解度不同将各组分分离。

常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。

吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶)，当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端,然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂)洗脱。

由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同,在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带.继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。

用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。

本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中(压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。

由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素)的分离。

三、【实验材料】原料:新鲜的菠菜叶试剂 :1．无水乙醇或95％乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7。

水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮:石油醚＝1：9 器材 : 层析柱(1×30cm)，研钵，蒸馏装置,脱脂棉, 天平，烧杯, 过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶, 分液漏斗, 试管 ,铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂,再加20毫升无水乙醇研磨成浆,脱脂棉过滤，保存滤液,滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡,弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次,直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用。

层析柱装柱流程

层析柱装柱流程层析柱是一种广泛应用于分离、纯化和分析分子的技术。

输出层析柱装柱流程是输出样品时的关键步骤，以下将详细描述该流程的整体流程及每个环节的详细步骤。

整体流程：1. 准备样品：样品可以是固体、液体或气体，需要根据实际情况选择适当的提取方法和溶解方法。

2. 选择合适的层析剂：根据样品的物理化学性质和所需分离纯化的目标分子，选择合适的层析剂。

3. 选择合适的层析柱：根据样品的性质和目标分子的大小、形状、极性等特性，选择合适的层析柱。

4. 装柱：将合适的层析剂和样品混合并注入层析柱，按一定流速进行柱层析过程。

5. 收集分离物：根据样品的物理化学性质，选择适当的收集方法，如平衡、排洗等方式，收集所需的分离物。

详细步骤：1. 准备样品样品的准备是整个流程的第一步，其重要性不言而喻。

根据样品的不同来源和性质，选择适当的提取方法和溶解方法。

对于固体样品可以采用机械法或化学法进行研磨和提取；对于液体样品可以直接进行提取或进行凝固分离等；对于气体样品可以进行气相色谱前处理等。

2. 选择合适的层析剂层析剂是层析柱分离分子的重要物质，其种类和性质直接影响到层析柱的分离效果和速度。

通常选择的层析剂包括氨基酸、糖类、角蛋白等，这些分子性质不同，可以针对不同的目标分子进行选择，以达到高效分离的目的。

3. 选择合适的层析柱层析柱具有不同的分子尺寸和极性，可以针对不同样品和分子的特性进行选择。

一般分为吸附层析柱、离子交换层析柱、凝胶层析柱、分子筛层析柱、亲和层析柱等。

在选择层析柱之前，还需确定流动相的组成和流速，以及层析柱的尺寸和填充物的质量，一般需要根据样品特性进行综合考虑，以提高分离效果和速度。

4. 装柱层析柱装柱是输出样品时的关键步骤。

将提取得到的样品与适当的流动相混合，并加入适当量的层析剂。

然后通过注射泵或手动喷射的方式，将混合物缓慢注入层析柱中，确保柱中填充物充分分散。

柱中填充物经过一段时间的淋洗和平衡后，将流动相依次加入，形成流动相梯度，实现目标分子的分离。

大小型层析柱的装填实践介绍

大小型层析柱的装填实践介绍层析柱是一种常用的分离技术仪器，广泛应用于生化、药学、环境分析等领域。

其原理是利用样品在固定相和移动相间的相互作用下，通过各自不同的迁移速率，从而实现混合物各组分的分离。

一般情况下，层析柱包括大型和小型两种。

下面将讨论这两种层析柱的装填实践介绍。

首先是大型层析柱的装填实践。

大型层析柱一般适用于样品量较大的情况，例如工业生产中的在线层析分离。

其装填实践主要包括以下几个步骤。

第一步是选择合适的填料。

选择填料是大型层析柱装填实践中的关键步骤。

一般情况下，需要根据样品的性质和分离要求来选择合适的填料。

常见的填料有硅胶、Sephadex、糖果胶等。

填料的选择应该考虑到颗粒大小、比表面积、孔隙结构等因素。

第二步是准备填料。

填料在装填前一般需要经过一系列处理，以提高其分离效果。

常见的处理方法包括洗涤、干燥和激活等。

洗涤可以去除填料表面的杂质，干燥可以除去填料中的水分，而激活可以增加填料的活性。

第三步是装填填料。

在装填填料之前，需要将填料与层析柱的内壁润湿。

一般使用的方法是将填料悬浮在适量的移动相中，然后缓慢注入到层析柱中。

装填填料时应注意层析柱的填料层高度和均匀度，以保证分离效果。

第四步是压实填料。

压实填料是装填实践中的重要步骤，可以提高填料层的均一性和稳定性。

压实填料时，可以利用酒精、氮气或专用的装填仪器进行。

压实填料时应注意避免填料的堵塞和破碎。

第五步是检查填料层的质量。

填料层质量的检查可以通过观察填料层的均匀性、密实度和干燥程度来进行。

如果发现填料层存在问题，可以进行调整或更换。

以上是大型层析柱的装填实践介绍，下面我们将介绍小型层析柱的装填实践。

小型层析柱一般适用于实验室规模的研究或分析。

其装填实践与大型层析柱的装填实践相似，但由于样品量较小，操作上相对简单。

其装填实践主要包括以下几个步骤。

第一步是选择合适的填料。

填料的选择原则与大型层析柱相同，根据样品的性质和分离要求来选择合适的填料。

层析柱原理和使用方法

层析柱原理和使用方法层析柱是一种常见的分离技术，它通过物质在固定相和移动相之间的分配来实现分离和提纯。

层析柱广泛应用于化学、生物化学、制药等领域，是一种非常重要的实验技术。

本文将介绍层析柱的原理和使用方法，帮助读者更好地理解和应用这一技术。

首先，让我们来了解一下层析柱的原理。

层析柱的分离原理基于不同物质在固定相和移动相之间的分配系数不同。

固定相通常是一种多孔的固体材料，如硅胶、纤维素等，而移动相则是一种液体溶剂，如甲醇、乙醇等。

当混合物通过层析柱时，不同成分会根据其在固定相和移动相中的分配系数而被分离开来。

这样，我们就可以通过适当选择固定相和移动相的性质，来实现对混合物中目标成分的选择性提取和纯化。

接下来，我们将介绍层析柱的使用方法。

首先，选择合适的层析柱和填料。

根据待分离物质的性质和分离要求，选择合适的层析柱规格和固定相填料。

其次，装填层析柱。

将固定相填料均匀地装填到层析柱中，并确保填充密实，避免出现空隙。

然后，平衡层析柱。

用适当的移动相预先平衡层析柱，使固定相充分吸附移动相。

接着，样品进样。

将待分离的混合物样品缓慢地加入层析柱顶部，并逐步加入移动相。

最后，收集分离物。

根据不同成分在层析柱中的分配情况，逐步收集分离出的目标成分。

在使用层析柱的过程中，需要注意一些常见的问题和注意事项。

首先，要注意层析柱的操作流程和条件，避免操作失误导致分离效果不佳。

其次，要选择合适的移动相和流速，以确保分离效果和纯度。

另外，要注意层析柱的维护和保养，定期清洗和更换固定相填料，确保层析柱的分离效果和使用寿命。

总之，层析柱作为一种重要的分离技术，在化学、生物化学和制药等领域有着广泛的应用。

通过本文的介绍，相信读者对层析柱的原理和使用方法有了更清晰的认识，希望能够帮助读者更好地应用这一技术，提高实验效率和成果质量。

层析填料的选择及其装柱技术介绍幻灯片

一、基质的选择
理想的基质应符合下面的要求： 1．极低的非特异性吸附。 2．高度的亲水性。 3．较好的理化稳定性。 4．大量的化学基团能被有效地活化，而且容易和配体结合。 5．适当的多孔性。
一般亲和吸附剂采用的基质有纤维素、聚丙烯酰胺凝胶、交联葡聚糖、琼脂糖、交联琼脂糖、多孔玻璃珠等。
常用亲和吸附剂采用的基质
反相层析填料的选择原则
考虑样品组分的种类和性质、分离的规模及对分辨率的要求、流动相条件：
待分离物分子量，对介质孔径的选择提供指导；样品组分的疏水性质决定采用何种配基；分离的规模及对分辨率的要求也是须考虑的因素，通
常分离规模和分辨率的关系是负相关的；反相层析时的流动相条件很大程度上影响反相介质基
层析填料的选择及装柱技术介绍
佳辰公司生物中心陈阶
2012-04-18
如何选择填料？
一、依据所纯化的对象的各物理和化学特性。
（一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等）
二、纯化所要达到的目的（粗提？中度纯化？精细纯化？）。
三、所要选择的层析方法

1. 凝胶过滤 ( Gf)
易脱落。 4) 配体自身应具有较好的稳定性。
根据配体对待分离物质的亲和性的不同，可以将其分为两类：特异性配体（specific ligand）和通用性配体（general ligand）
亲和吸附介质的配基
（1）酶的抑制剂（2）抗体（3）A蛋白 A蛋白（protein A）为分子量约42KD的蛋白质，
Sephadex LH-20 同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。
Pharmadex LH-20同时适用于分子类别非常相似的物质的分离和工业规模的制备，既可用于初步纯化步骤，也可用于最终精制步骤，如非对映同分异构体的分离。

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析基础知识

内容：1. Sephadex G-50凝胶柱的装填；2. 凝胶柱柱效测定；3．凝胶再生的方法。

BPG 层析柱实用标准装柱流程的要求规范

操作标准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。

范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。

责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min表示；2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。

2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。

2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。

使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。

3ml层析柱尺寸

3ml层析柱尺寸简介层析柱是一种常用的分离和纯化技术，广泛应用于生物技术、制药工业、生物化学等领域。

3ml层析柱是一种常见的层析柱尺寸，其尺寸适中，可满足大部分实验室规模的需求。

本文将详细介绍3ml层析柱的尺寸特点、使用方法以及应用领域。

1. 3ml层析柱的尺寸特点3ml层析柱的尺寸特点如下：•容量适中：3ml层析柱的容量为3毫升，适合小规模的分离和纯化实验。

相比于大容量的层析柱，3ml层析柱可以更好地控制流速和样品浓度，提高分离效果。

•尺寸紧凑：3ml层析柱的尺寸相对较小，便于实验室操作和保存。

它可以方便地安装在常见的层析柱支架上，同时也便于连接其他设备，如泵和检测器。

•材料多样：3ml层析柱通常由不锈钢、玻璃或塑料制成。

不锈钢层析柱具有较好的耐腐蚀性能和机械强度，适合于高压操作；玻璃层析柱透明，便于观察分离过程；塑料层析柱价格较低，适合一次性使用。

2. 3ml层析柱的使用方法使用3ml层析柱进行分离和纯化实验时，需要按照以下步骤进行操作：步骤1：准备工作•检查3ml层析柱是否完好，无损坏和污染。

•根据实验需求选择合适的填料，如离子交换树脂、亲和层析树脂等。

•将填料充分膨胀并洗净，以去除杂质和缓冲剂。

步骤2：连接设备•将3ml层析柱安装在层析柱支架上，并紧固。

•连接流动相泵，用于提供流动相。

•连接检测器，用于监测和记录分离过程。

步骤3：样品加载•将需要分离和纯化的样品溶液注入3ml层析柱。

•控制流速和压力，使样品以适当的速率通过层析柱。

步骤4：洗脱和收集•根据样品的特性和分离要求，选择适当的洗脱缓冲液。

•控制洗脱缓冲液的流速和浓度，使目标物质从层析柱中洗脱出来。

•收集洗脱液，以获取纯化的目标物质。

步骤5：清洗和维护•在使用完毕后，及时清洗3ml层析柱，以去除残留的样品和洗脱缓冲液。

•检查3ml层析柱是否有损坏或污染，如有必要，更换或修复。

3. 3ml层析柱的应用领域3ml层析柱在以下领域得到广泛应用：•蛋白质纯化：3ml层析柱可用于蛋白质的分离和纯化，如亲和层析、离子交换层析等。

层析柱装填高度

层析柱装填高度层析柱装填高度是指在层析柱中装填的固定相材料的高度。

层析柱是一种常用于分离和纯化化学混合物的设备，在许多工业和实验室领域都起到重要的作用。

层析柱装填高度的大小对层析过程的效果产生着重要影响。

层析柱装填高度的选择需要综合考虑实验需求、设备条件和装填材料的特性。

装填材料一般是固定相，可以是硅胶、高分子凝胶、树脂等。

不同的装填材料具有不同的分离性能和吸附能力，因此在选择装填材料时需要根据目标化合物的性质和分离要求进行合理选择。

层析柱装填高度一般在几毫米到几十厘米之间。

较低的装填高度可以加快溶质的通过速度，但可能导致分离度降低。

较高的装填高度可以提高分离度，但也会增加压力损失和分析时间。

因此，在实际操作中需要综合考虑各种因素进行合适的选择。

层析柱装填高度的控制通常通过调整装填材料的质量来实现。

装填材料的质量与体积成正比，因此可以通过增加或减少装填材料的数量来控制装填高度。

一般来说，装填高度越高，则需要更多的装填材料。

在装填层析柱时，需要将装填材料均匀地填充到柱子中，避免出现结块和不均匀现象。

层析柱装填高度的选择还需要考虑到溶质的滞留时间。

有时候需要在较短的时间内完成溶质的分离，这就要求更高的装填高度。

而对于需要较长滞留时间的溶质，可以选择较低的装填高度。

此外，层析柱的进样量也是一个需要考虑的因素，进样量较大时一般要求较高的装填高度。

总之，层析柱装填高度的选择是一个综合考虑多种因素的问题。

需要结合实验需求、设备条件和装填材料的特性进行合理选择。

在实际操作中，需要根据具体情况进行调整和优化，以获得最理想的层析分离效果。

层析柱装填高度的选择还需要考虑到装填材料的粒径。

装填材料的粒径大小对层析过程中的传质速度、分离效果和压力损失都有一定的影响。

较细的粒径装填材料可以提供更大的表面积，增加吸附能力，但可能增加压力损失。

较粗的粒径装填材料则可以减小压力损失，但可能降低分离效果。

因此，在选择装填材料时需要综合考虑粒径的大小，并根据实际需求进行匹配。