豆粕替代鱼粉饲料中添加DL-蛋氨酸对卵形鲳鲮幼鱼生长性能和体组成的影响
鸡肉粉替代鱼粉对金鲳鱼生长、体成分及血清指标的影响
Effects of Poultry by-Product Meal as the Replacement of Fish Meal in the Diets on the Growth Performance,BodyComposition,Serum Biochemical Indexes ofOvate Pompano (Trachinotus ovatus )ZHANG Xinjie 1,WANG Xiaocheng 1,CHI Shuyan 2（1.Zhanjiang Guolian Feed Co.,Ltd.,Zhanjiang 524000,Guangdong China;2.Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524000,Guangdong China ）Abstract:This study was conducted to evaluate the effects of poultry by-product meal (PBM)as the replacementof fish meal (FM)in the diets on the growth performance,body composition,serum biochemical indexes of Ovate Pom⁃pano (Trachinotus ovatus ).Five iso-nitrogenous and iso-lipid diets were formulated with different levels of PBM,which were supplemented 0,10.5%,21%,28%,and 35%PBM to replace 0,30%,60%,80%and 100%FM,respec⁃tive.Each diet was randomly assigned to triplicate treatments of 40fish (initial body weight was 32.62±0.60g)for eight鸡肉粉替代鱼粉对金鲳鱼生长、体成分及血清指标的影响张新节1，王小城1，迟淑艳2（1.湛江国联饲料有限公司，广东湛江524000；2.广东海洋大学，广东湛江524000）收稿日期：2019-08-03基金项目：湛江市科技计划项目（2016A02003）作者简介：张新节（1983-），女，广东湛江人，硕士，主要从事水动物营养与饲料研究。
低鱼粉幼鲤饲料中添加DL-蛋氨酸及其羟基类似物的效果比较
在幼鲤低鱼粉饲料中添加蛋氨酸及其羟基类似物试 验中，幼鲤饲料中减少鱼粉的用量，用大豆粕来代替 ， 并添加合成蛋氨酸来补充饲料 中蛋氨酸的不足 ，结果表 明幼鲤的增重率均有所提高，蛋氨酸羟基类似物添加量 为０ ６ ４ 时幼鲤增重率最大 ，差异性显著 （＜Ｏ ０ ） ． １％ Ｐ ．５ 。 因此 ，在幼鲤配合饲料中，适 当降低鱼粉的添加量 ，用 大豆粕等植物性蛋白来代替，并用合成蛋氨酸来补充植 物性蛋 白中蛋氨酸的不足 ，这对幼鲤 的生长无不 良影 响。这与金光明等的试验结论一致 ，也说 明幼鲤能有效 利用合成蛋氨酸 。添加Ｄ 一 Ｌ 蛋氨酸时幼鲤的饲料系数升 高，蛋 白效率降低 ，而添加蛋氨酸羟基类似物时幼鲤的 饲料系数降低 ，蛋白效率升高，由此看出幼鲤低鱼粉饲 料中添加蛋氨酸羟基类似物的效果要明显优于Ｄ 一 Ｌ 蛋氨
酸。这可能是因为蛋氨酸羟基类似物在消化过程中有利 于消化道有益微生物的生长，使幼鲤消化道微生态环境
的Ｄ 降低，改善了幼鲤消化道的微生态环境 ，有利于乳 Ｈ 酸菌等有益微生物增殖 ，抑制病原微生物繁殖，使肠道 健康，更加充分地利用饲料中的营养成分。
表２ 幼鲤 试验 阶段 各组 初始体 重 、结束体 重 、体增 重及增 重 率
鱼种 选 择 浮 性颗 粒 饲 料 较 好 。
１投喂冰鲜鱼饲料的鱼种生长速度比投喂颗粒饲料 ．
的鱼种快，但 由于投喂冰鲜鱼容易导致水质恶化 ，造成 鱼类病害多发，成活率相对于投喂颗粒饲料的要低，导 致投入产 出比较低 ，因此 ，投喂颗粒饲料经济效益好 ， 应大力推广颗粒饲料在乌鳢养殖中的应用。 ２ 投喂冰鲜鱼饲料的鱼种肌 肉紧实，口感好，而投 ． 喂颗粒饲料的鱼种肌肉较松散 ，口感差 ，今后应注重在
豆粕替代鱼粉对日本黄姑鱼生长、饲料利用及体成分影响的研究
Ｔｈ ｎ ｕ ｎ ｅ ｏ ｐ ａ ｉ ｇ Ｆ ｓ ｅ ｌ ｒ ｉ ｌ ｎ ｔ ｅ Ｄｉｔｗｉｈ ｅ Ｉ ｆ ｅ ｃ ｆＲｅ ｌ ｃ ｎ ｉｈ Ｍ ａ ｌ Ｐａ ｔａ ｌ ｉ ｈ ｅ ｔ ｙ Ｓ ｙ ｅ ｎ Ｍ ｅ ｌｏ ｏ ｈ Ｂｏ ｙ Ｃｏ ｐ ｓｔ ｎ ａ ｄ Ｆ ｅ ｉ ｚ ｔ ｎ ｏ ｏ ｂ ａ ａ ｎ Ｇｒ ｗｔ ， ｄ ｍ ｏ ｉｉ ｎ ｅ ｄ Ｕｔ ｉ ａ ｉ ｆ ｏ ｌ ｏ
ｈ ｄｓ ｎｆ ａ ｔ Ｐ ００ ） ｏ ｅ Ｃ （． ｎ ｉｈ ｒＰ Ｒ （． ） ｈ ｎ ｆ ｈｆｄｗ ｔ ｔｅｏ ｅ ｉ ｓ Ｆｓ ｄ ａ ｉ ｉｃｎｌ ＜ ． ｌｗ ｒＦ Ｒ ０７ ｇ ｉ ｙ（ ５ ）ａ ｄｈｇ ｅ Ｅ ３１ ｔａ ｉ ｅ ｉ ｈ ｔ ｒｄｅ ． ｉ ｆ ３ ｓ ｈ ｈ ｔ ｈｅ
（Ｍ） ｉ ｏ ｂ ａ ａ （Ｂ ｏ ｒｗｈ ｆｅ ｆ ｃ ｎ ｙａ ｄｂ ｄ ｏ ｐ ｓ ｉｎｏ ｇ ｎ ｒａ ｅ Ｎ ｂ ａ ａ ｏ ｉ Ｆ ｗｔ ｓｙ ｅｎｍｅｌ Ｓ Ｍ） ｎｇｏ ｔ，ｅｄｅ ｉ ｃ ｎ ｏ ｙｃ ｍ ｏｉｏ ｆ ｉ ｔ ｏｋ ｒ（ｉｅ ｐ ｎ— ｈ ｉ ｅ ｔ ａ ｃ ｊ
组成没有显著性影 响（ ＞ ．５ ｏ总之 ， 尸 ００ 在本实验条件下 ， 豆粕可以替代 ４ ％的饲料鱼粉蛋 白而没有引起 日本黄姑鱼生长的下 ０
降。
关键 词 ：日本 黄姑鱼 ； 鱼粉替代 ； 豆粕 ； 生长 ；饲料利用 ； 体成分 中图分类号 ： ９ ５３ ５ ￥６． ２ 文献标识码 ： Ａ
２ Ｆｓｅ ｅ ｃ ｏ ｌ ｆ ｈｊ ｎ ｃａ ｎｖｒｉ ， ｈ ｕ ｈ ｎ ３ ６ ０ ， ｈｎ） ． ｉ ｒ ｓ ｈ ｏ ｏ ｅｉ ｇＯ ｅ ｎＵ ｉｅｓ ｙ Ｚ ｏ ｓａ ０ ４ Ｃ ｉａ ｈｉ Ｓ Ｚ ａ ｔ １
蛋氨酸螯合铬对肉仔鸡生长、屠宰性能和血清生化指标的影响
０ ３ｍｇ ｋ 的铬 （ ． ／ ｇ 由吡 啶 羟 酸 铬 提 供 ） ，工组 、 Ⅱ组 、 Ⅲ组 和 Ⅳ组 在 基 础 日粮 中分 别 添 加 ０ ０ ２ ０ ３和 、． 、．
０ ４ｍｇ ｋ ． ／ ｇ的铬 （ 自制 的蛋 氨酸 螯合 铬提 供 ） 由 。
■
２１ ．￡ＬＥｉＳ ０．７ 建 ＆０工Ｙ １ ｏ 搏铷 料 Ｔ ｅＡ饲 Ｎ Ｅ ＥＤＲ Ｎ Ｕ
蛋 氨 酸 螯 合 铬 对 肉仔 鸡 生 长 、 宰 性 能 屠 和 血 清 生化 指 标 的 影 响
张 怡 ， 王春 维 ， 张 昆 ， 刘 翼
（ 汉 工 业 学 院 动 物 科 学 与 营 养 工 程 学 院 ， 北 武汉 武 湖 ４０２ ） ３ ０ ３
ｔ ｉｎｎ ｈ ｌｔｄｃ ｒ ｍｉｍｏ ｒ ｏ ｈ ｉ ｒ ｖ ｄ， ｎ ｈ ｓ ｆｔ ｅ ｇ ｏ ｐ ａ ｄｎ ． ／ ｇ ｍｅｈｏ ｉｅ ｃ ｅａｅ ｈ ｏ ｕ ｈｏ ｉｅｃ ｅａｅ ｈ ｏ ｕ ｎ ｗｅｅ ｂ ｔ ｍｐ ｏ ｅ ａ ｄ ｔ ｏ ｅｏ ｈ ｒ ｕ ｄ ｉｇ ０ ３ ｍｇ ｋ ｔ ｉｎｎ ｈ ｌｔｄ ｃ ｒ ｍｉｍ
文献标志码 ： Ａ
文 章 编 号 ：０ ３ ６ ０ （ ０ １ ０ —０ ５ —０ １０ — ２ ２ ２ １ ）７ ０ ０ ４
Ｅｆ ｅ ｔ ｆ ｍｅ ｈ ｏ ｉ ｅ ｃ ｅ ａ ｅ ｈ ｏ ｉ ｍ ｏ ｎ ｇ ｏ ｈ ｐ ｒ ｏ ｍ ａ ｃ ｆ ｃｓｏ ｔ ｉｎ ｎ ｈ ｌ ｔｄ ｃ ｒ ｍ ｕ ｎ ｏ ｒ ｗｔ ｅ ｆ ｒ ｎ ｅ，ｓ ａ ｇ ｅ ｅ ｆ ｒ ａ ｃ ｎ ｅ ｕ ｂ ｏ ｈ ｍ ｉ ａ ｎ ｌ ｕ ｈｔ ｒ ｐ ｒ ｏ ｍ ｎ ｅ ａ ｄ ｓ ｒ ｍ ｉ ｃ ｅ ｃ ｌｉ — ｄ ｃ ｔ ｒ ｆｂ ｏ ｌｒ ｉａ ｏ ｓｏ ｒ ｉ ｓ ｅ
浅析蛋氨酸对动物生产性能的影响
效率 。Ｄ ｖｄｏ 和Ｓ ｒａｂ ｒ（９ ５研 究表 明 ，由花生 壳 ａ ｉｓｎ ｐｅｄ ｕｙ １７ ）
组成的 日粮 单独提供 赖氨酸（ｙ） Ｌ ｓ时，对 肉兔的生长率 没 有显著 影响 ，然 而 ，当 同时添加赖氨 酸和 蛋氨酸 时能提 高生长率 ，这表 明蛋氨酸是限制性氨基酸 。Ｂ ｕｈ １７ ） ｏ ｓｙ（９ ８ 报道 ，在 １％粗蛋 白水平 的 日粮 中适量添加蛋氨酸和赖 氨 ９ 酸 比２ ％粗蛋 白水平处理组 的日增重、饲料转化效率高。 ３ Ｋｏｅ ｓｉ１７） ｒｌ ｋ（９ ９等研究发现低 蛋 白水平（４ ％） 日粮添 加 ｅ １． 的 ４ 赖氨酸０ ％， ． 蛋氨酸０２ ４ ． ％后 日增重较对照组（ 粗蛋 白１ ． ） ９ ７％ 显 著 提 高 。当 其 他 的 必需 氨 基 酸 充 足 时 ，提 供 Ｍｅ和 ｔ Ｌ ｓ 生长 肉仔 鸡 的 日粮 蛋 白质 水平 可 以由２ ％降 低到 ｙ， １ １％ｆｕ ｃａａ ，１９ ） ａｂｅ等（９ ０指 出，添加ＤＬ一 ７ Ｂ ｎ ｈｓｋ ９ ７。Ｌ ｒｉ ｒ １８ ） 广 蛋氨酸 显著提 高 了鸡 的体重 ，改善 了饲 料报酬 。同时 ， 蛋氨 酸添加剂还 大大减 少或完全 消除 肉鸡 脂肪 的增 加 。 肉鸡 日粮中添加蛋氨酸０ ６ ０ ０ ． ％～ ． ％，肉鸡胴体脂肪含量 ５ ６
的 含 量 恢 复 （ａｔｒ 和 Ｓａ ｅ ， １８ ； Ｒ ｓｂｏ ｇ 等 ， Ｌ ｕｅｉ ｏ ｃｎ ｓ ９ ８ ｏｅｒｕ ｈ
１ ８ ； Ｒ ｓｂｏ ｇ 和 Ｍｃ ｒｙ １９） ９９ ｏｅｒｕ ｈ Ｍｕｔ ， ９ ３ 。然 而 ，饲 喂 低 蛋 ｒ
低蛋白饲料对三龄草鱼生长、血清指标和肝脏抗氧化能力的影响
低蛋白饲料对三龄草鱼生长、血清指标和肝脏抗氧化能力的影响■苏宝辉高启平*曾娟任秀芳（通威股份有限公司技术中心水产研究所，水产健康养殖四川省重点实验室，四川成都610041)摘要：为探究低蛋白饲料对三龄草鱼生长、血清指标和肝脏抗氧化能力的影响。
以基础配方（蛋白质水平30%）作为对照组（H1），面粉作为主要糖源，用面粉分别替代对照组（H1）饲料中的豆粕、菜粕、玉米蛋白粉及DDGS ，配置三种等氮等能[粗蛋白（26.4±0.12）%，总能（15.53±0.15）MJ/kg]的低蛋白饲料，分别记作H2、H3、H4，投喂初始规格为（1209±24.6）g/尾的三龄草鱼，网箱养殖120d 。
结果表明：与对照组（H1）相比，低蛋白饲料对三龄草鱼的特定生长率、成活率、饲料系数、肝体指数、脏体指数、肠体指数、肥满度及鱼体肌肉成分等均无显著影响（P >0.05），蛋白质效率显著升高（P <0.05）；其中面粉替代菜粕组（H2）肝脏粗脂肪含量有所升高（P <0.05）；投喂低蛋白饲料草鱼血清中总蛋白（TP ）含量显著降低（P <0.05），三酰甘油（TG ）含量均存在不同程度降低，H3、H4达到显著水平（P <0.05），而总胆固醇（CHO ）和葡萄糖（GLU ）含量无显著影响（P >0.05）。
各低蛋白组相比，面粉替代不同蛋白(豆粕、菜粕、玉米蛋白粉和DDGS)对草鱼血清的TP 、TG 、GLU 影响不显著（P >0.05）。
低蛋白饲料对草鱼肝脏中的超氧化物歧化酶（T-SOD ）、总抗氧化能力（T-AOC ）、丙二醛（MDA ）无显著影响（P >0.05），面粉替代豆粕组（H3）过氧化氢酶（CAT ）含量显著高于对照组（H1）（P <0.05）。
在本试验条件下，用面粉替代不同饲料蛋白，把饲料蛋白水平降低到26%时对三龄草鱼生长和饲料利用没有影响，但会降低血清中TP 含量，H3肝脏的CAT 含量升高，对肝脏抗氧化能力有一定胁迫作用。
复合动植物蛋白质源替代鱼粉对青鱼幼鱼形体指标、组织脂肪酸组成、血清生化指标及肝脏组织形态的影响
减少，且各试验组与对照组相比差异显著（ P＜0．05） ； 同时全鱼中 n-3 多不饱和脂肪酸（ PUFA） 含
量也逐渐下降。4） 随着饲料中鱼粉被替代比例的增加，肌肉中饱和脂肪酸（ SFA ） 含量逐渐减
少，各试验组肌肉中 C22∶6n-3、PUFA 和 n-3PUFA 含量与对照组相比无显著差异（ P＞ 0．05） 。5）
D0、D20、D40、D60、D80 和 D100） 。选取平均体重为（ 8．50±0．11） g 的青鱼幼鱼 720 尾，随机分
成 6 组，每组 4 个重复，每个重复 30 尾鱼。每组分别投喂以上 6 种试验饲料，并在室内循环水系
统中进行 60 d 的养殖试验。结果表明： 1） 各试验组肥满度与对照组相比无显著差异（ P＞0．05） 。
ceus） 幼鱼形体指标、全鱼和肌肉常规营养组成、脂肪酸组成、血清生化指标和肝脏组织形态的影
响。将肉骨粉和酵母发酵 豆 粕 按 重 量 1 ∶ 1 的 比 例 组 成 复 合 蛋 白 质 源，分 别 替 代 0 （ 对 照 组） 、
20%、40%、60%、80%和 100%的鱼粉蛋白质，并配制成 6 种等氮等能的试验饲料（ 各组分别记为
但是单一的植物性蛋白质源替代鱼粉仍然存 在氨基酸不 平 衡 等 不 利 影 响，而 使 用 混 合 蛋 白 质 源可以改善单一植物蛋白质源的不足。肉骨粉因 粗 蛋 白 质 含 量 高 、氨 基 酸 较 平 衡 、磷 和 钙 含 量 丰 富 成 为 了 合 适 的 鱼 粉 替 代 蛋 白 质 源［11］。 目 前 以 肉 骨
2期
林一帆等： 复合动植物蛋白质源替代鱼粉对青鱼幼鱼形体指标、组织脂肪酸组成、血清生化指标及…… 733
益高的青鱼配合饲料。鱼粉因其营养全面成为了 水产饲料中 重 要 的 蛋 白 质 源，是 饲 料 的 主 要 组 成 部分［2］。近年 来 鱼 粉 的 需 求 量 越 来 越 高，但 是 渔 业捕捞量 有 限，这 使 得 鱼 粉 价 格 不 断 上 升［3］。因
鸡肉粉替代鱼粉对大口黑鲈生长性能的影响
文章编号：1673-887X(2023)09-0153-03鸡肉粉替代鱼粉对大口黑鲈生长性能的影响陈长萍，陈斌（贺州市水产畜牧站，广西壮族自治区贺州542800）摘要为研究非粮蛋白质源替代鱼粉对大口黑鲈生长性能的影响。
设计在以鱼粉、豆粕、棉粕等原料为重要蛋白质源，配制成5种试验饲料，并补充晶体氨基酸以满足大口黑鲈对必需氨基酸的需求对生长的影响。
结果显示，各组大口黑鲈的日增质量、肥满度、肝体比、脏体比、全鱼水分、粗蛋白、粗脂肪含量均无显著性差异（P>0.05），随着鸡肉粉替代鱼粉比例的升高，全鱼粗脂肪最佳添加量为10%，在成活率方面替代10%鱼粉的成活率100%，各组在增质量率方面，与第五组的大口黑鲈增质量率差异显著（P<0.05），替代10%鱼粉的增质量率比对照组、第四组及第五组高。
可见饲料中用鸡肉粉替代10%鱼粉对大口黑鲈的机体组成、成分含量及生长速度没有影响。
结论：饲料中用鸡肉粉替代鱼粉对大口黑鲈生长的影响达到较佳效果的添加量是10%。
关键词鱼粉；鸡肉粉；大口黑鲈；生长性能中图分类号S963.2文献标志码A doi:10.3969/j.issn.1673-887X.2023.09.054Effect of Replacing Fish Meal with Chicken Meal on the Growth Performanceand Body Composition of Micropterus salmoidesChen Changping,Chen Bin(Hezhou Aquatic and Animal Husbandry Station,Hezhou542800,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China) Abstract：To study the effect of replacing fish meal with non grain protein sources on the growth performance of Micropterus salmoides.Five experimental feeds were prepared using fish meal,soybean meal,cotton meal and other raw materials as important protein sources,and crystal amino acids were supplemented to meet the growth impact of the demand for essential amino acids in Mi‐cropterus salmoides.The results showed that there were no significant differences in daily gain,fatness,hepatobody ratio,viscero‐body ratio,water content,crude protein and crude fat contents of whole fish among all groups(P>0.05).With the increase of the pro‐portion of chicken meal replacing fish meal,the optimal addition of crude fat in whole fish was10%,and the survival rate of replac‐ing10%fish meal was100%.The mass gain rate of all groups was significantly different from that of group5(P<0.05),and the mass gain rate of10%fish meal was higher than that of control group,group4and group5.It can be seen that the replacement of 10%fish meal with chicken meal has no effect on the body composition,composition content and growth rate of Micropterus salmoi‐des.The best effect of chicken meal instead of fish meal on the growth of Micropterus salmoides is10%.Key words：fish meal,chicken meal,Micropterus salmoides,growth performance鱼粉是水产动物饲料中最关键、最理想的蛋白质源，其适口性好，富含氨基酸，具有蛋白质含量高等特点[1]。
饲料原料疯涨原料替代之进口鱼粉
饲料原料疯涨原料替代之进口鱼粉近段时间以来，氨基酸、鱼粉尤其是进口鱼粉价格疯涨，并且是高价之下也很难拿到货，给配方师、老板们和猪场人员带来极大的困惑和不方便。
特意搜集一些类似替代进口鱼粉饲料原料的资料供大家参考，希望能给大家有所帮助。
1. 膨化大豆膨化大豆是整个大豆经过膨化的饲用产品，保留了大豆本身的营养成分，去除了大豆的抗营养因子，具有浓郁的油香味，营养价值高，适口性好，在畜禽及水产料中得到了广泛的使用。
在众多的大豆饲用类产品加工方法中，从抗营养因子的角度讲，热处理法是大豆产品加工的最佳方法，蛋白质变性，淀粉糊化，脂肪外露富含油脂，氨基酸平衡，且高温高压杀死了病菌，是具有极高营养价值的常用蛋白原料，且对于目前高位运行的鱼粉具有一定替代性。
膨化大豆与豆粕+油脂对比膨化大豆品质检验膨化后的大豆色泽要新鲜一致，具有其固有的气味，无异味、酸味等，无结块、无发霉变质。
大豆脂肪含量高，且多属不饱和脂肪酸，故应注意脂肪变质问题，脂肪劣化后降低适口性，且造成腹泻。
生大豆熟化的目的，就是有效地破坏大豆中的某些抗营养因子，提高其利用率，使畜禽采食后能获得较好的生产性能。
但是如果熟化过度，又会引起一些氨基酸的破坏。
如过度加热时，对赖氨酸、精氨酸和胱氨酸的破坏较大，还会引起蛋氨酸、异亮氨酸和赖氨酸的消化率下降，进食量减低。
如果熟化程度不够，大豆中的一些抗营养因子，如胰蛋白酶抑制因子、脂肪氧化酶、脲酶等，不能得到有效的破坏，严重影响其利用率，所以必须对大豆的熟化程度做出检测。
一般是测定大豆粉中的脲素酶活性来决定其熟化程度。
目前有多种检测方法，较常用的有pH增值法和酚红法。
我国饲料标准规定脲酶活性的pH值法的测定值不得超过0.3，在生产现场，最好用尿素-苯酚红定性法来检测脲酶的活性，此法简便快速易学，适合生产现场使用。
2. 大豆浓缩蛋白大豆浓缩蛋白(Soy protein concentrate，简写SPC)是用高质量的豆粕除去水溶性或醇溶性非蛋白部分后，所制得的含有65%(干基)以上蛋白质(N×6.25)的大豆蛋白产品。
日粮添加蚕豆替代豆粕对肉鸡生长性能、胴体性状和肉质的影响
机选择 8 只体重接近的肉鸡进行屠宰，计算屠宰
率。分离胸肌、腿肌和腹脂，称重后计算其占活体
重的百分比。屠宰后 24 h 用 pH 计测定胸肌 pH，
肉色计分析胸肌肉色，参考靳二辉等（2018）的方
法 分 析 肌 肉 滴 水 损 失 和 系 水 力 ，肌 肉 脂 肪 酸 含 量
参考赵瑞（2011）的方法进行分析。
1.4 数据分析 试验数据按重复在 EXCEL 做均
值处理，用 SPSS 软件的单因素方差分析模型进行
分 析，采 用 T 检 验 进 行 多 重 比 较，P ＜ 0.05 表 示
差异显著。
2 结果与分析
2.1 蚕豆替代豆粕对肉鸡生长性能的影响 由
表 2 可知，日粮添加蚕豆替代豆粕对肉鸡各日龄
的 体 重、阶 段 日 增 重、1 ～ 21 d 和 1 ～ 42 d 采 食
量 及 1 ～ 21 d 料 重 比 的 影 响 均 无 显 著 差 异（P
＞ 0.05）。 蚕 豆 组 22 ～ 42 d 肉 鸡 的 平 均 日 采 食
量 较 豆 粕 组 显 著 降 低 6.61%（P ＜ 0.05），同 时 22 ～ 42 d 和 1 ～ 42 d 的 料 重 比 分 别 显 著 降 低 4.95% 和 3.92%（P ＜ 0.05）。 表 2 日粮添加蚕豆替代豆粕对肉鸡生长性能的影响
1.2 生 长 性 能 分 别 在 试 验 开 始、21 和 42 d 时
按照重复对肉鸡进行称重，每周记录 1 次饲料用
量 ，试 验 结 束 后 用 于 计 算 各 阶 段 肉 鸡 的 平 均 日 增
重、平均日采食量和料重比。
1 . 3 胴 体 性 状 和 肉 质 试 验 结 束 后 ，每 个 重 复 随
在植物性蛋白源中添加赖氨酸代替部分鱼粉对水生动物的影响
科 学 家 把 研 究 减 少 水 污染 和 水 产 品 成 本 作 为 研 究 焦
点 。Ｖ ｏ ｉ ａ和 ｌ ｈ ｖ １９ ） 道 ， 含 ２ ％ 的 粗 蛋 白 ｌ ＿ ａ（ ９ １ 报 ａ 用 ５ 的 日粮 及 ０ ５ ％赖 氨 酸 添 加 剂 组 成 的饲 料 喂普 通 鲤 ． 鱼 ， 用 含 ３ ％的 粗 蛋 白 的 饲 料 相 比 ， 单 位 增 重 同 Ｏ 每
ｔａ １８ ） 现 ， ｈ （９ ２ 发 在添 加 外 旋 氨 基 酸 的 条 件 下 ， 全 脂 用
收 稿 １ ：０４—１ ３期 ２０ ０—１ ４
饲 料 转化 率 。
关 于鱼 的 日粮 中 赖 氨 酸 需 求 量 的 研 究 非 常 重
要 ，ｈｎ 和 Ｈ ｒｙ２０ ） 道 ， 以鱼 粉 为 基 础 的 日 Ｃ ｅｇ ａｄ（０ ３报 在
水生动物营养
毽撞 煌 濂 添 赖 羲 酸代 替 部 分 鱼 求 动 璃
曲 悦 周 铁 忠 辽 宁锦 州 医学 院 畜 牧 兽 医 学 院 大 豆 粉 代 替 基 础 日粮 中 ７ ％的 鲱 鱼 粉 ， 尼 罗 罗 非 ５ 对 鱼 的生 长 和 饲 料 利 用 率 无 影 响 。 １８ ９ ９年 Ｍｕａ 等 人 ｒｉ 在 大 豆 粉 鱼 饲 料 里 添 加 了 限制 因 子 的 晶 体 赖 氨 酸 喂 虹鳟 时 ， 现 小 于 ５ ｇ体 质 量 的 鱼 没 有 反 映 ， 于 发 高 ８ ９ｇ ． 的鱼 有 积 极 的反 映 。 Ｄ ｂｏ ｓ ｉ （ ９ ９ 报 道 ， ａｒｗ ｋ 等 １８ ）
ｌ 水生 动 物 饲料 中 鱼 粉 替代 的 必 要性
低粗蛋白质饲粮中补充限制性氨基酸对大午金凤蛋鸡育雏期生长性能和氮排放量的影响
低粗蛋白质饲粮中补充限制性氨基酸对大午金凤蛋鸡育雏期生长性能和氮排放量的影响耿顺菊;张晓怡;张建云;赵丽红;计成;马秋刚【摘要】The purpose of this study was to investigate the effects of supplementing limiting amino acids in low crude protein diets on growth performance and nitrogen emission of Dawu Golden Phoenix laying hens during the incubation period.A total of 384 one-day-old Dawu Golden Phoenix laying hens were randomly divided into4 groups with 6 replicates in each group and 16 hens in each replicate.Based on the limiting amino acid content in control group, dietary crude protein levels in other groups were decreased, and added limiting amino acids (methionine, lysine and threonine) to achieve crude protein levels of 20.02％, 19.39％, 18.44％and17.36％ (measured value) .The other nutrition levels in the diets meet the requirements of NY/T 33-2004.The trial lasted for 6 weeks (1 to 6 weeks of age) , and from the end of 6 weeks of age, an observation period lasted until 20 weeks of age.The results showed as follows:1) the average daily feed intake, average daily gain and final body weight of 18.44％ and 17.36％ crude protein groups had no significant difference (P>0.05) , but were significantly higher than those of 20.02％ crude protein group(P<0.05) except for average daily feed intake of 18.44％ crude protein group.As dietary crude protein levels decreased, supplementing limiting amino acids linearly increased the average daily feed intake, average daily gain and final body weight (P<0.05) , but there was no significantdifference between the 20.02％ and 19.36％ crude protein groups(P>0.05) .The 18.44％ crude protein group had the best body weight uniformity.During the observation period, the body weight of 18.44％crude protein group had been at the top of the list.2) The length of the jejunum and ileum of 18.44％ crude protein group was significantly higher than that of 20.02％ crude protein group, but there was no significant difference of 17.36％ crude protein group (P>0.05) .3) The apparent retention rate of crude protein in 18.44％ crude protein group was significantly higher than that of 20.02％ and 19.39％ crude protein groups (P< 0.05) .The nitrogen emission rate and nitrogen emission of 18.44％crude protein group were significantly lower than those of 20.02％ crude protein group (P<0.05) .Considering the growth performance and nitrogen emission, reducing dietary crude protein levels and supplementing limiting amino acids not only facilitate the growth but also improve nitrogen utilization.%本试验旨在研究低粗蛋白质饲粮中补充限制性氨基酸对大午金凤蛋鸡育雏期生长性能和氮排放量的影响.试验选取1日龄大午金凤蛋鸡384只, 随机分为4组, 每组6个重复, 每个重复16只鸡.以对照组中限制性氨基酸含量为标准, 降低另外3组饲粮粗蛋白质水平, 补充限制性氨基酸 (蛋氨酸、赖氨酸、苏氨酸) , 使其粗蛋白质水平分别达到20.02％、19.39％、18.44％、17.36％ (实测值) , 饲粮其他营养水平均满足NY/T 33-2004的要求.1～6周龄进行6周试验, 6周龄末继续观察, 持续观察至20周龄.结果表明:1) 18.44％和17.36％粗蛋白质组平均日采食量、平均日增重和末体重差异不显著 (P>0.05) , 但除18.44％粗蛋白质组平均日采食量外, 均显著高于20.02％粗蛋白质组 (P<0.05) ;随着饲粮中粗蛋白质水平的降低, 补充限制性氨基酸使蛋鸡平均日采食量、平均日增重和末体重呈线性显著增长 (P<0.05) ; 20.02％和19.36％粗蛋白质组各生长性能指标差异不显著(P>0.05) .18.44％粗蛋白质组6周龄末体重均匀度最佳.观察期间, 18.44％粗蛋白质组蛋鸡体重数值均高于其他各组.2) 18.44％粗蛋白质组空肠和回肠长度显著高于20.02％粗蛋白质组 (P<0.05) , 但与17.36％粗蛋白质组差异不显著(P>0.05) .3) 18.44％粗蛋白质组粗蛋白质表观存留率显著高于20.02％和19.39％粗蛋白质组 (P<0.05) , 氮排放率和氮排放量显著低于20.02％粗蛋白质组(P<0.05) .综合大午金凤蛋鸡生长性能和氮排泄量可知, 降低饲粮粗蛋白质水平并补充限制性氨基酸不仅有利于大午金凤育雏期蛋鸡的生长发育, 还可提高氮利用率.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2019(031)001【总页数】8页(P159-166)【关键词】低粗蛋白质饲粮;大午金凤蛋鸡;限制性氨基酸;生长性能;氮排放【作者】耿顺菊;张晓怡;张建云;赵丽红;计成;马秋刚【作者单位】中国农业大学动物科技学院,动物营养国家重点试验室,北京 100193;中国农业大学动物科技学院,动物营养国家重点试验室,北京 100193;中国农业大学动物科技学院,动物营养国家重点试验室,北京 100193;中国农业大学动物科技学院,动物营养国家重点试验室,北京 100193;中国农业大学动物科技学院,动物营养国家重点试验室,北京 100193;中国农业大学动物科技学院,动物营养国家重点试验室,北京 100193【正文语种】中文【中图分类】S831随着我国养殖业规模的扩大，动物排泄物造成的环境污染问题日趋严重。
低鱼粉饲料中补充蛋氨酸、胆汁酸、牛磺酸对中华绒螯蟹幼蟹生长、饲料利用及抗氧化能力的影响
低鱼粉饲料中补充蛋氨酸、胆汁酸、牛磺酸对中华绒螯蟹幼蟹生长、饲料利用及抗氧化能力的影响陈晴;马倩倩;沈振华;李二超;陈立侨【摘要】在低鱼粉(15％鱼粉,LFM)饲料中,分别添加0.5％蛋氨酸、0.5％或1.0％胆汁酸盐、0.5％或1.0％牛磺酸(记为0.5％ Met、0.5％ Bile、1.0％ Bile、0.5％Tau、1.0％ Tau)配制5种等氮等能的饲料为5个实验处理组,以全鱼粉组(64.4％鱼粉,FM)和低鱼粉组(15％鱼粉,LFM)为对照,投喂中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)幼蟹[(0.26±0.02)g]8周.结果表明:1)与LFM相比,0.5％ Met组增重率和特定生长率显著提高,且各处理组的饲料系数显著降低;FM组蛋白质效率最高,与0.5％ Met 组、1.0％ Bile组、0.5％ Tau组、1.0％ Tau组均无显著性差异.各组的全蟹体组成差异不明显,仅0.5％ Met组的脂肪含量显著高于1.0％ Bile和1.0％ Tau组.2) LFM组肝胰腺和肠道中的淀粉酶活性最高,FM组最低;肝胰腺总蛋白酶的活性FM 组最高,其次是0.5％Met组,两者均显著高于其它各组;FM组和0.5％ Met组的肠总蛋白酶活性最高,0.5％ Bile组次之;0.5％ Met组的肝胰腺和肠道脂肪酶活性最高,1.0％ Tau组的肝胰腺、LFM组的肠道脂肪酶活性最低.3)LFM组丙二醛(MDA)含量显著高于FM组和各处理组;FM组的超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢(CAT)酶活性均显著高于其它组,其中LFM组活性最低.结果显示,补充0.5％ Met促进了幼蟹的肝胰腺和肠道总蛋白酶和脂肪酶的分泌,显著提高幼蟹的生长和抗氧化性能;添加0.5％、1.0％ Bile可有效提高幼蟹肝胰腺、肠道的总蛋白酶和脂肪酶活力,降低饲料系数;而补充0.5％、1.0％ Tau均能显著提高幼蟹肝胰腺和肠道消化酶活力和抗氧化能力.补充胆汁酸和牛磺酸未能有效促进生长可能与饲料中的限制性氨基酸不足有关.%Experiments were conducted to evaluate the effects of dietary bile acid,taurine and methionine supplementation in low fishmealbased diets on the growth performance,feed utilization and antioxidant ability of juvenile Chinese mitten crab,Eriocheir sinensis.Five diets were formulated using a basic diet,in which 15％ fishmeal wasincluded,supplemented with 0.5％ methionine,0.5％ or 1.0％ bile acid,0.5％or 1.0％ taurine,respectively.Diets of either full fishmeal-based (fish meal accounting for 64.4％) or low fishmealbased (fish meal accounting for 15％) served as the controls.Each diet was fed to juvenile Eriocheir sinensis [(0.26 ± 0.02) g] with five replicates for 8 weeks.The results showed:compared with LFM diet,weight gain rate,specific growth rate of crabs fed with FM and 0.5％ Met diets were significantly higher (P ＜0.05),while the feed coefficient of crabs fed with FM and all treatment groups exhibited significantly lower values (P ＜ 0.05).Crabs fed with FM had the highest protein efficiency,and no significant difference was found among this group and the groups of 0.5％ Met,1.0％ Bile,0.5％ Tau and 1.0％Tau.Whole body proximate composition of E.sinensis fed with different experimental diets showed no significant difference,only the lipid content of crabs fed with 0.5％ Met was higher than those in group of 1.0％ Bile and 1.0％Tau.Crabs fed with LFM had the highest amylase activities in the intestine and hepatopancreas,and in contrast crabs fed with FM obtained the lowest values.Crabs fed with FM and 0.5％ Met exhibited the highest total protease activity in crab intestine followed by crabs fed with 0.5％ Bile diet.Both in intestinal tractand hepatopancreas,crabs fed with 0.5％ Met diet obtained the highest intestine and hepatopancreas lipase activities.Crabs fed with 1.0％ Tau exhibited the lowest lipase activity inhepatopancreas.Crabs fed with LFM had the lowest lipase activity in intestine.Malondialdehyde (MDA) content in crabs fed with LFM was significantly higher than crabs fed with FM and other diets.Crabs fed with FM diet had significantly higher activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) than fed with other diets.The crude lipid content of carbs fed with 0.5 ％ Met was the highest and significantly higher than those of group 0.1％ Bile and 1.0％ Tau.All these results suggest that supplementation of appropriate levels of bile acid and taurine could effectively reduce feed coefficient,and dietary 0.5％ Met supplementation could effectively improve the growth performance,activities of total hepatopancreas or intestine protease and lipase,and oxidation resistance.Dietary 0.5％,1.0％ bile acid supplementation could also effectively improve the activities of total protease and lipase,but no difference is found in accelerating the growth performance.Besides,dietary 0.5％,1.0％ taurine supplementation could effectively improve activities of total hepatopancreas or intestinal protease and lipase and oxidation resistance,but cannot accelerate the growth performance of E.sinensis 【期刊名称】《海洋渔业》【年(卷),期】2018(040)001【总页数】11页(P65-75)【关键词】中华绒螯蟹;胆汁酸;牛磺酸;蛋氨酸;生长性能【作者】陈晴;马倩倩;沈振华;李二超;陈立侨【作者单位】华东师范大学生命科学学院,上海200241;华东师范大学生命科学学院,上海200241;华东师范大学生命科学学院,上海200241;华东师范大学生命科学学院,上海200241;华东师范大学生命科学学院,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S963.3鱼粉作为水产饲料中至关重要的蛋白源，具有蛋白含量高、氨基酸平衡等优点。
饲料级dl-蛋氨酸 环评-概述说明以及解释
饲料级dl-蛋氨酸环评-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以是关于饲料级DL-蛋氨酸的简介和背景信息。
下面是一个可能的概述内容：饲料级DL-蛋氨酸是一种重要的饲料添加剂，被广泛应用于畜禽养殖业中。
蛋氨酸是一种必需氨基酸，对于动物的生长发育和健康具有重要作用。
饲料级DL-蛋氨酸在动物饲料中的添加能够提高饲料的全面性和生物利用率，进而提高动物的生长速度、饲料转化效率和健康状态。
然而，饲料级DL-蛋氨酸的广泛使用也引起了人们对其环境影响和可持续性的关注。
在生产和使用过程中，饲料级DL-蛋氨酸可能会对水体、土壤和空气等环境介质造成一定程度的污染。
因此，评估饲料级DL-蛋氨酸的环境影响，确定其可持续性，具有重要的理论和实践意义。
本文将就饲料级DL-蛋氨酸的定义和特点、应用和效果进行探讨，并进行对其环境影响的评估和可持续性的评价。
通过全面分析，旨在提供科学和可行的建议，促进饲料级DL-蛋氨酸在畜禽养殖业中的可持续发展，为环境保护和养殖业的可持续发展提供支持。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以通过以下方式编写：文章结构部分是为了介绍整篇文章的组织结构和内容安排，帮助读者了解文章的框架和逻辑。
本文的结构如下：2. 正文2.1 饲料级dl-蛋氨酸的定义和特点2.2 饲料级dl-蛋氨酸的应用和效果文章结构的设立可以使读者对文章的内容有一个整体的把握，明确每个部分的目的和重点。
接下来，将详细介绍文章的每个部分内容。
在正文部分，首先会介绍饲料级dl-蛋氨酸的定义和特点（2.1节）。
该节将对饲料级dl-蛋氨酸的概念进行解释，并探讨其特点，如化学性质、生物活性以及与其他形式的蛋氨酸的异同等。
接着，在2.2节中，将详细介绍饲料级dl-蛋氨酸的应用和效果。
包括饲料级dl-蛋氨酸在畜牧业中的广泛应用，以及它对饲料生产和动物生长的影响。
该节将通过研究结果和实际案例，探讨饲料级dl-蛋氨酸在提高动物饲料利用率、促进生长发育、改善养殖效益等方面的效果。
低蛋白饲料添加亮氨酸、精氨酸对大菱鲆幼鱼生长、消化、免疫及mTOR信号通路的影响
第54卷 第5期 2024年5月中国海洋大学学报P E R I O D I C A L O F O C E A N U N I V E R S I T Y O F C H I N A54(5):033~043M a y,2024低蛋白饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆幼鱼生长㊁消化㊁免疫及m T O R 信号通路的影响❋田 原,刘成栋,王 旋,周慧慧,麦康森,何 艮❋❋(海水养殖教育部重点实验室(中国海洋大学),山东青岛266003)摘 要: 为探究亮氨酸和精氨酸作为信号分子参与调控m T O R 信号通路对大菱鲆(S c o ph t h a l m u s m a x i m u s )生长的作用,本研究以大菱鲆幼鱼(初始体质量(13.50ʃ0.19)g)为实验对象,设置50%蛋白水平饲料作为阳性对照组,45%蛋白水平饲料作为阴性对照组,设置两个实验组,分别为在阴性对照组中添加1%亮氨酸的实验组和添加1%精氨酸的实验组,饲养周期为56d,测量大菱鲆的生长性能和饲料利用水平㊂研究表明,添加亮氨酸㊁精氨酸均能一定程度提高因饲料蛋白水平不足导致的大菱鲆的特定生长率㊁蛋白质效率和增重率下降㊂添加1%亮氨酸和1%精氨酸均能在摄食后有效增强大菱鲆肌肉与肝脏m T O R 信号通路中的雷帕霉素靶蛋白(m T O R )㊁核糖体蛋白S 6和真核起始因子4E 结合蛋白1(4E -B P 1)的磷酸化㊂添加1%精氨酸还能够提高大菱鲆肠道淀粉酶和脂肪酶活性,显著提高血清过氧化氢酶和溶菌酶水平并增加血清总抗氧化能力㊂研究结果表明,在低蛋白饲料中添加1%亮氨酸㊁1%精氨酸能够激活大菱鲆m T O R 信号通路,有效提高其生长性能和蛋白质效率;此外,添加1%精氨酸还能够提高大菱鲆的消化酶活性㊁增强非特异性免疫反应㊂关键词: 大菱鲆;亮氨酸;精氨酸;m T O R 信号通路;低蛋白饲料中图法分类号: S 963.32 文献标志码: A 文章编号: 1672-5174(2024)05-033-11D O I : 10.16441/j .c n k i .h d x b .20220157引用格式: 田原,刘成栋,王旋,等.低蛋白饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆幼鱼生长㊁消化㊁免疫及m T O R 信号通路的影响[J ].中国海洋大学学报(自然科学版),2024,54(5):33-43.T i a n Y u a n ,L i u C h e n g d o n g ,W a n g X u a n ,e t a l .E f f e c t s o f l e u c i n e a n d a r g i n i n e s u p p l e m e n t s o f l o w -pr o t e i n d i e t s o n g r o w t h ,d i g e s t i o n ,i m m u n i t y a n d t a r g e t o f r a p a m y c i n s i g n a l i n g p a t h w a y o f j u v e n i l e t u r b o t [J ].P e r i o d i c a l o f O c e a n U n i v e r s i t y o f C h i -n a ,2024,54(5):33-43.❋ 基金项目:国家重点研究发展计划项目(2018Y F D 0900400);国家自然科学基金项目(31772860)资助S u p p o r t e d b y t h e N a t i o n a l K e y R e s e a r c h a n d D e v e l o p m e n t P r o gr a m o f C h i n a (2018Y F D 0900400);t h e N a t i o n a l N a t u r a l S c i e n c e F o u n -d a t i o n o f C h i n a (31772860)收稿日期:2022-03-15;修订日期:2024-01-24作者简介:田 原(1997 ),女,硕士生㊂E -m a i l :t i a n yu a n o u c @126.c o m ❋❋ 通信作者:何 艮(1975 ),男,教授,主要研究方向为水产动物营养与饲料㊂E -m a i l :h e ge n @o u c .e d u .c n 蛋白质含量和饲料氨基酸水平是影响鱼类生长㊁繁殖㊁健康和饲料成本的主要因素㊂饲料中蛋白质不足时,鱼类势必会消耗非必要组织中的蛋白质,用以维持更重要组织的正常功能,从而导致生长受阻和体质量降低[1]㊂氨基酸不仅是组成蛋白质的基本构件,还能够作为信号分子,发挥调节关键代谢途径的具体作用[2-3]㊂在多种鱼类中已经证实,一些功能性氨基酸在促进生长和增强新陈代谢功能方面发挥关键作用[4-7]㊂亮氨酸作为一种支链氨基酸,它既能作为蛋白质合成的底物,也是激活蛋白质合成的 触发按钮 ,在促进蛋白质合成和抑制蛋白质降解方面发挥着重要作用[8]㊂同时亮氨酸缺乏将导致一系列不良生长效应,例如能量代谢失衡㊁淋巴组织受损㊁动物胸腺和脾萎缩[9-10],因此在饲料中适量添加亮氨酸能够有效调节动物机体免疫能力㊂更重要的是,亮氨酸能够通过特殊的信号网络,尤其是磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B -哺乳动物雷帕霉素靶标(P I 3K -A K T -m T O R )信号通路,调节葡萄糖㊁脂肪和蛋白质的代谢,调节肠道健康和免疫,从而促进氮储留和蛋白质合成[11-12]㊂本实验在低蛋白饲料中添加1%饲料干物质的晶体亮氨酸,添加量参考已报道的大菱鲆研究[13]㊂精氨酸是大菱鲆的必需氨基酸,除了作为蛋白质的重要组分外,它还是一种功能性氨基酸,可以通过多条途径调节动物体内的营养代谢:包括激活m T O R C 1促进蛋白质和脂质合成[14-15];结合N O 通过N O -c -G M P 通路促进脂质氧化和糖酵解作用[16];以不依赖于血糖的方式促进胰岛素的释放,从而促进葡萄糖的利用[17]㊂大菱鲆(S c o ph t h a l m u s m a x i m u s )的精氨酸需求量为饲料干物质的3.17%[18],因此本实验中低蛋白饲料中添加1%饲料干物质的晶体精氨酸,以求达到大中国海洋大学学报2024年菱鲆精氨酸需求量㊂大菱鲆(S c o p h t h a l m u s m a x i m u s)俗称 多宝鱼 ,是一种经济养殖鱼类,具有生长速度快㊁营养丰富和味道鲜美等特点㊂为了降低饲料蛋白含量,我们将目光聚焦到氨基酸上,氨基酸除了做为蛋白合成的底物,氨基酸还拥有许多功能,其中晶体氨基酸作为信号分子的功能最受到关注㊂精氨酸和亮氨酸作为能激活内源性信号通路的经典氨基酸,本课题探究其是否可以作为一种刺激蛋白合成的添加剂而非蛋白合成底物对大菱鲆的生长产生积极影响㊂进一步探究影响鱼体蛋白质沉积的内在因素,为提高饲料蛋白质利用率提供新思路㊂1材料与方法1.1实验饲料以白鱼粉为主要蛋白质来源,以鱼油和大豆卵磷脂为主要脂肪来源,制作两种脂肪相同(125g/k g)㊁蛋白含量分别为45%和50%的饲料㊂以50%蛋白日粮为阳性对照组(H i g h p r o t e i n,H P),以45%蛋白日粮为阴性对照组(L o w p r o t e i n,L P),在45%蛋白日粮中分别添加1%(10g/k g饲料)的晶体L-亮氨酸(S i g m a-A l d r i c h,美国)为亮氨酸实验组(L o w p r o t e i n+L e u, L P+L),添加1%的晶体L-精氨酸(S i g m a-A l d r i c h,美国)为精氨酸实验组(L o w p r o t e i n+A r g,L P+R)(见表1)㊂L-丙氨酸(S i g m a-A l d r i c h,美国)作为非必需氨基酸适量添加至45%蛋白日粮中,以保持这3组低蛋表1实验饲料配方及成分分析(干物质)T a b l e1F o r m u l a t i o n a n d a n a l y t i c a l c o m p o s i t i o n o f d i e t s(d r y m a t t e r)%项目I t e m s组别G r o u pL P H P L P+L L P+R原料I n g r e d i e n t鱼粉F i s h m e a l150.4460.8850.4450.44小麦粉W h o l e w h e a t m e a l36.6228.0536.6236.62鱼油F i s h o i l4.954.104.954.95大豆卵磷脂S o y a b e a n l e c i t h i n2.502.502.502.50精氨酸A r g i n i n e0001.00亮氨酸L e u c i n e001.000丙氨酸A l a n i n e1.00000多维V i t a m i n p r e m i x21.001.001.001.00多矿M i n e r a l p r e m i x30.500.500.500.50诱食剂A t t r a c t a n t s41.001.001.001.00黏合剂(海藻酸钠)B i n d e r(N a a l g i n a t e)0.500.500.500.50氯化胆碱C h o l i n e c h l o r i d e0.300.300.300.30磷酸二氢钙C o n o c a l c i u m p h o s p h a t e1.001.001.001.00三氧化二钇Y t t r i u m o x i d e0.100.100.100.10丙酸钙C a l c i u m p r o p i o n a t e0.050.050.050.05乙氧基喹啉E t h o x y q u i n o l i n e0.050.050.050.05总计T o t a l100.00100.00100.00100.00成分分析(干物质基础)A n a l y t i c a l c o m p o s i t i o n(d r y m a t t e r b a s i s)粗蛋白C r u d e p r o t e i n45.8751.6245.9645.74粗脂肪C r u d e f a t11.5611.8712.0911.95灰分A s h12.8413.8511.7012.20注:1.鱼粉:蒸干鱼粉,粗蛋白质:70.10%,粗脂肪:7.58%,由秘鲁利马C O P E N C A公司提供㊂2.多维(m g/k g):维生素A,32;维生素D,5;维生素E,240;维生素K,10;维生素C,2000;维生素B12,10;生物素,60;叶酸,20;肌醇,800;烟酸,200;D泛酸钙,60;盐酸吡哆醇,20;维生素B2,45;维生素B1,25;微晶纤维素,16473㊂3.多矿(m g/k g):硫酸镁,1200;硫酸铜,10;硫酸铁,80;硫酸锌,50;硫酸锰,45;氯化钴,5;亚硒酸钠,20;碘化钙,60;沸石粉,8485㊂4.诱食剂(g/k g):甜菜碱,4;二甲基-丙酸噻亭,2;甘氨酸,2;丙氨酸,1;5-磷酸肌苷,1㊂L P:阴性对照组;H P:阳性对照组;L P+L:亮氨酸实验组;L P+R:精氨酸实验组;下表同㊂1.F i s h m e a l:s t e a m d r i e d f i s h m e a l,w i t h c r u d e p r o t e i n:70.10%,c r u d e l i p i d:7.58%,s u p p l i e d b y C O P E N C A G r o u p(L i m a,P e r u).2.V a t a m i n p r e m i x(m g/k g):r e t i n y l a c e t a t e,32;c h o l e c a l c i f e r o l,5;a l l-r a c-a-t o c o p h e r y l a c e t a t e,240;m e n a d i o n e s o d i u m b i s u l-p h i t e,10;a s c o r b i c a c i d,2000;c y a n o c o b a l a m i n,10;b i o t i n,60;f o l i c a c i d,20;i n o s i t o l,800;n i a c i n,200;D-C a-p a n t o t h e n a t e,60;p y r i d o x i n e H C l,20;r i b o f l a v i n,45;t h i a m i n H C l,25,m i c r o c r y s t a l l i n e c e l l u l o s e,16473.3.M i n e r a l p r e m i x(m g/k g):M g S O4㊃7H2O,1200;C u S O4㊃7H2O,10;F e S O4㊃7H2O,80;Z n S O4㊃H2O,50;M n S O4㊃H2O,45;C o C l2,5;N a2S e O3,20;c a l c i u m i o d a t e,60;z e o l i t e p o w d e r,8485.4.A t t r a c t a n t s(g/k g):b e t a i n e,4;D M P T,2;g l y c i n e,2;a l a n i n e,1;i n o s i n e-5'-d i p h o s p h a t e t r i s o d i u m s a l t,1.L P:L o w p r o t e i n;H P: H i g h p r o t e i n;L P+L:L o w p r o t e i n+L e u;L P+R:L o w p r o t e i n+A r g;t h e f o l l o w i n g t a b l e i s t h e s a m e.435期田原,等:低蛋白饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆幼鱼生长㊁消化㊁免疫及m T O R信号通路的影响白日粮的氮含量相等(见表1)㊂将所有原料研磨成细粉,与鱼油和大豆卵磷脂充分混匀,用饲料制粒机挤压成粒(直径5.0m m)㊂饲料在45ħ烘箱中干燥18h,保存于-20ħ㊂不同的日粮在物理性质和下沉速度方面没有发现差异㊂1.2养殖实验养殖实验在青岛市胶南大场镇营南头村养殖区的室内常流水养殖系统中进行,实验大菱鲆购自威海大菱鲆育苗场㊂在实验正式开始前,暂养2周,所有大菱鲆用所制4种饲料混合暂养使其适应养殖系统和制备饲料的粒径㊂暂养结束后禁食24h,挑选出规格一致㊁体格健壮的大菱鲆(初始体质量(13.50ʃ0.19)g)随机分配于养殖桶中(300L),本实验有4个处理组,每个处理组3个重复,每个养殖桶内30尾鱼㊂养殖周期为56d,每天7:00和19:00手动投喂饲料2次,确认大菱鲆达到饱食状态㊂餐后收集残饵,在42ħ下烘干至恒重并称重,从摄食量计算中减去残饵质量㊂为保持水清洁,每餐后换水㊂实验期间每隔3d测量一次水质参数值,用温度计和盐度计测量水温和盐度㊂试验期间,水温保持在13.6~15.8ħ,盐度为29~32,氨氮小于0.1m g㊃L-1,亚硝酸盐小于0.1m g㊃L-1,溶解氧含量大于7m g㊃L-1㊂1.3样品采集在饲养试验结束时,将鱼禁食48h,使鱼体达到机体代谢基础水平㊂①禁食24h后,每桶鱼称量总质量并计算总数,每桶随机抽取4条鱼储存在-20ħ用于全鱼体成分分析㊂②在48h禁食周期结束时从每个处理组随机抽取6条鱼(每桶2条鱼),此时取样的鱼被指定为0h样品(禁食鱼)㊂随后将其余大菱鲆喂至饱食,每隔2㊁8和24h采集样本㊂在每个间隔中,从各处理组随机抽取6条鱼(每桶2条鱼)㊂③将大菱鲆用丁香酚(1ʒ10000,纯度99%,上海试剂,中国)麻醉后检查每条鱼的胃和肠道内是否有内容物,确保其有效地摄入了食物,随后立即解剖肝㊁肠和背外侧白肌,冷冻于液氮中,保存在-80ħ㊂④从鱼尾静脉采血到肝素抗凝管中,全血在4ħ条件下3000g离心15m i n,用以收集血清,随后储存于-80ħ用于后续分析㊂1.4饲料和鱼体组成分析将样品置于105ħ烘干至质量恒定并采用差量法测得水分含量;运用凯氏定氮法测定样品粗蛋白含量,干燥后的样品在催化剂的作用下用浓硫酸高温消化,然后采用全自动凯氏定氮仪(K j e l t e c T M8400, F O S S,瑞士)进行测定;采用索氏抽提法测定样品粗脂肪含量,干燥后的样品运用全自动索氏抽提仪(B u c h i 36680,瑞士)抽掉脂肪并采用差量法测得粗脂肪含量㊂将样品置于电炉烧至无烟,然后转移至马弗炉550ħ烧至质量恒定并采用差量法测得灰分含量㊂总能量采用全自动氧弹仪(P a r r,M o l i n e,I L,美国)测定㊂按国家标准(G B/T5009.124 2003)对样品进行氨基酸分析㊂将样品冷冻干燥(A L P H A1-2L D p l u s,C h r i s t c o,L t d,德国) 48h至质量恒定,称取30m g,加入6m o l㊃L-1盐酸15m L,充入氮气并在110ħ烘箱内水解22h,最后用全自动氨基酸分析仪(L-8900,H I T A C H I,日本)进行分析得到饲料氨基酸组成(见表2)㊂1.5肠道消化酶活性检测称取1g左右肠道样品,按质量(g)ʒ体积(m L)= 1ʒ9的比例加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下充分匀浆,将匀浆液2500g4ħ离心10m i n,将上清液分装于离心管中,迅速进行后续检测㊂样品T P(货号: A045-2)㊁α-淀粉酶(货号:C016-1-1)㊁脂肪酶(货号: A054-2-1)㊁胰蛋白酶(货号:A080-2-2)㊁测定所使用的试剂盒均购自南京建成生物工程研究所㊂所有指标均严格按照说明书规定的方法操作㊁计算㊂1.6血清抗氧化能力与非特异性免疫指标检测大菱鲆血浆总抗氧化力(T-A O C)(货号:A015-1-2)㊁超氧化物歧化酶(S O D)(货号:A001-3-2)㊁过氧化氢酶(C A T)(货号:A007-1-1)及溶菌酶(L S Z)(货号: A050-1-1)活性均采用南京建成生物工程研究所的试剂盒,严格按照说明书上的步骤进行检测㊂1.7蛋白质提取及W e s t e r n b l o t分析称取50m g肝脏或肌肉样品(保持冰冻状态),加入含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂(R o c h e,德国)的R I P A 裂解液(50m m o l/L T r i s㊃H C l,150m m o l/L N a C l, 0.5%N P-40,0.1%S D S,1m m o l/L E D T A,p H= 7.5)匀浆旋转裂解30m i n,之后12000g离心15m i n 取上清液㊂使用B C A蛋白浓度测定试剂盒(B e y o t i m e B i o t e c h n o l o g y,中国)测定上清液蛋白质含量㊂将组织蛋白提取液用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,通过转膜移至0.45μm P V D F膜上(M i l l i p o r e,美国)㊂转膜结束后将膜浸泡于5%脱脂奶粉T B S T缓冲液(20m m o l/L T r i s㊃H C l,500m m o l/L N a C l,0.1%T w e e n-20)中室温封闭1h,然后于4ħ下一抗孵育过夜㊂二抗为辣根过氧化物酶(H R P)标记山羊抗兔I g G(H+L)(B e y o-t i m e B i o t e c h n o l o g y,中国),室温孵育1h,用E C L试剂(B e y o t i m e B i o t e c h n o l o g y,中国)进行显影得到相应条带㊂本实验所使用的抗体如下:m T O R(货号2972), p-m T O R S e r2448(货号2971),S6(货号2217),p-S6 S e r235/236(货号4856),4E-B P1(货号9644),p-4E-B P1T h r37/46(货号2855),β-T u b u l i n(货号5568);以上抗体均购买于C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y I n c;所有抗体均已在大菱鲆上得到验证并已发表相关论文[19]㊂53中 国 海 洋 大 学 学 报2024年表2 日粮氨基酸组成(干物质)T a b l e 2 A m i n o a c i d s c o m p o s i t i o n o f t h e d i e t s (d r y ma t t e r )%必需氨基酸E A A 组别G r o u pL PH PL P +L L P +R 亮氨酸L e u c i n e 2.983.393.752.89精氨酸A r g i n i n e 2.302.642.323.12赖氨酸L ys i n e 2.823.302.812.78甲硫氨酸M e t h i o n i n e 0.901.080.900.9苏氨酸T h r e o n i n e1.731.981.691.71组氨酸H i s t i d i n e1.251.431.211.25苯丙氨酸P h e n y l a l a n i n e 1.701.911.811.71异亮氨酸I s o l e u c i n e 1.641.631.631.53缬氨酸V a l i n e1.942.191.831.93甘氨酸G l y c i n e 2.482.862.492.46天冬氨酸A s pa r t i c a c i d 3.464.013.473.5丝氨酸S e r i n e1.741.941.701.73脯氨酸P r o l i n e2.222.312.292.25半胱氨酸C y s t e i n e 0.790.850.790.81酪氨酸T y r o s i n e 1.281.451.271.24丙氨酸A l a n i n e3.332.942.532.53谷氨酸G l u t a m i c a c i d6.677.006.726.741.8数据分析计算公式如下:增重率(W e i g h t ga i n r a t e ,W G R ,%)=100ˑ(终末体质量-初始体质量)/初始体质量;特定生长率(S pe c if i cg r o w th r a t e ,S G R ,%/d )=100ˑ(l n 终末体质量-l n 初始体质量)/养殖天数;日摄食率(D a yf e e d i n t a k e r a t e ,D F I ,%)=100ˑ总摄食量/(养殖天数ˑ(终末体质量+初始体质量)/2);饲料效率(F e e d e f f i c i e n c y,F E ,%)=100ˑ鱼体湿增质量/总摄食量;蛋白质效率(P r o t e i n e f f i c i e n c y ra t i o ,P E R )=鱼体湿增质量/蛋白质摄入量;存活率(S u r v i v a l r a t e ,S R ,%)=100ˑ(终末尾数/初始尾数);肥满度(C o n d i t i o n f a c t o r ,C F ,g/c m 3)=100ˑ体质量/体长3;肝体比(H e p a t o s o m a t i c i n d e x ,H I S ,%)=100ˑ肝质量/体质量;脏体比(V i s c e r o s o m a t i c i n d e x ,V S I ,%)=100ˑ内脏质量/体质量㊂实验数据用平均值ʃ标准误(M e a n ʃS E )表示,采用S P S S 19.0版软件对所得数据进行数据分析和统计,先对数据作单因子方差分析(A N O V A ),若处理间有显著差异,再作T u k e y's 检验进行多重比较,P <0.05表示差异性显著㊂2 实验结果2.1生长性能和饲料利用率实验表明,低蛋白日粮饲喂下L P 组大菱鲆的特定生长率(S G R )和增重率(W G R )显著低于H P 组,当饲料分别添加1%的亮氨酸和精氨酸后能够有效缓解这种不良生长状态(P <0.05)㊂与L P 组日粮相比,分别添加亮氨酸和精氨酸的L P +L 组㊁L P +R 组日粮显著提高了大菱鲆的饲料效率(F E R )与蛋白质效率(P E R )(P <0.05),不过仍与H P 组日粮存在差距㊂此外,大菱鲆日采食量(D F I )受到日粮蛋白质含量的影响,H P组显著低于其他3个低蛋白实验组(P <0.05)㊂C F ㊁H S I 和V S I 在不同饮食处理之间无显著差异(P >0.05)(见表3)㊂635期田 原,等:低蛋白饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆幼鱼生长㊁消化㊁免疫及m T O R 信号通路的影响表3 饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆生长和饲料利用的影响T a b l e 3 G r o w t h p e r f o r m a n c e a n d f e e d u t i l i z a t i o n o f S .m a x i m u s f e d d i e t s w i t h L e u c i n e a n d A r gi n i n e 指标I n d e x e s组别G r o u pL PH PL P +LL P +RP *初始体质量I n i t i a l b o d y w e i g h t /g13.50ʃ0.1913.50ʃ0.1913.50ʃ0.1913.50ʃ0.19终末体质量F i n a l b o d y w e i g h t /g39.81ʃ0.33a 45.30ʃ0.88b 43.96ʃ0.91b 43.74ʃ0.31b 0.02增重率W e i g h t ga i n r a t e /%194.90ʃ2.42a 235.56ʃ6.54b 225.60ʃ6.74b 224.03ʃ2.32b 0.02特定生长率S pe c if i cg r o w th r a t e /(%㊃d -1)2.04ʃ0.02a2.28ʃ0.04b 2.23ʃ0.04b 2.22ʃ0.01b 0.02日摄食率D a i l yf e e d i n t a k e r a t e /(%㊃d -1)1.74ʃ0.01b 1.55ʃ0.03a 1.75ʃ0.02b 1.74ʃ0.01b <0.001饲料效率F e e d e f f ic i e n c y/%1.17ʃ0.01a 1.31ʃ0.02c 1.24ʃ0.01b 1.25ʃ0.01b <0.001蛋白质效率P r o t e i n e f f i c i e n c yr a t i o 2.37ʃ0.01a2.63ʃ0.02c2.54ʃ0.01b2.55ʃ0.01b<0.001肥满度C o n d i t i o n f a c t o r /%4.19ʃ0.24 4.51ʃ0.33 4.07ʃ0.27 4.41ʃ0.21 0.193肝体比H e p a t o s o m a t i c i n d e x /%1.39ʃ0.23 1.57ʃ0.49 1.53ʃ0.18 1.48ʃ0.26 0.490脏体比V i s c e r o s o m a t i c i n d e x /%5.84ʃ0.116.09ʃ0.526.02ʃ0.165.81ʃ0.130.750存活率S u r v i v a l r a t e /%100.00ʃ0.00 100.00ʃ0.00 100.00ʃ0.00 100.00ʃ0.00注:同一行内不同上标字母表示存在显著差异(P <0.05),n =3㊂*:P 值对应的数字没有单位㊂V a l u e s i n t h e s a m e r o w l a b e l e d w i t h d i f f e r e n t s u pe r -s c r i p t l e t t e r s a r e s i g n if i c a n t l y di f f e r e n t (P <0.05),n =3.*:T h e n u m b e r s i n t h e P -v a l u e c o l u m n h a v e n o u n i t .2.2体成分如表4所示,相比于H P 组,低蛋白水平饲料喂养下的L P 组表现出鱼体蛋白质和脂肪含量下降㊂与L P组相比之,饲料添加1%亮氨酸㊁精氨酸显著提高了鱼体脂肪水平(P <0.05),且在一定程度上挽救了因饲料蛋白不足造成的鱼体蛋白水平下降(P <0.05)㊂鱼体灰分㊁水分含量不受各组实验日粮影响(P >0.05)㊂2.3 消化酶因各处理组鱼体蛋白㊁脂肪水平存在差异,首先考虑功能性氨基酸是否对消化酶活性产生影响,对肠道中的α-淀粉酶(α-a m yl a s e ,A M S )㊁脂肪酶和胰蛋白酶进行了测定(见表5)㊂与L P 对照组相比,饲料中添加1%精氨酸能够有效提高淀粉酶和脂肪酶活性(P <0.05)㊂此外,各组间胰蛋白酶活性无明显差异(P >0.05)㊂表4 饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆全鱼体组成的影响(湿质量)T a b l e 4 B o d y c o m p o s i t i o n o f S .m a x i m u s f e d d i e t s w i t h L e u c i n e a n d A r g i n i n e (w e t w e i gh t )%体组成B o d y c o m po s i t i o n s 组别G r o u pL PH PL P +LL P +RP *水分M o i s t u r e77.46ʃ0.1176.95ʃ0.3577.11ʃ0.3377.5ʃ0.160.413粗蛋白C r u d e p r o t e i n 14.91ʃ0.02a 15.96ʃ0.16b 15.35ʃ0.23a b15.19ʃ0.26a b 0.014粗脂肪C r u d e l i p i d 3.64ʃ0.21a4.14ʃ0.33b4.12ʃ0.26b4.03ʃ0.08b0.004灰分A s h3.66ʃ0.15 3.28ʃ0.023.23ʃ0.053.27ʃ0.130.060注:同一行内不同上标字母表示存在显著差异(P <0.05),n =3㊂*:P 值对应的数字没有单位㊂V a l u e s i n t h e s a m e r o w l a b e l e d w i t h d i f f e r e n t s u pe r -s c r i p t l e t t e r s a r e s i g n if i c a n t l y di f f e r e n t (P <0.05),n =3.*:T h e n u m b e r s i n t h e P -v a l u e c o l u m n h a v e n o u n i t .表5 饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆肠道消化酶的影响T a b l e 5 T h e i n t e s t i n a l d i g e s t i v e e n z y m e o f S .m a x i m u s f e d d i e t s w i t h L e u c i n e a n d A r gi n i n e U ㊃m g-1消化酶D i g e s t i v e e n z ym e 组别G r o u pL PH PL P +LL P +RP *α-淀粉酶A M S0.86ʃ0.02a 0.96ʃ0.32b0.87aʃ0.01a 1.17ʃ0.02c<0.001脂肪酶L i pa s e 1.36ʃ0.02a1.41ʃ0.12a b1.37ʃ0.06a1.46ʃ0.02b0.004胰蛋白酶T r y p s i n 744.03ʃ5.64745ʃ3.02739ʃ8.12734ʃ9.950.309注:同一行内不同上标字母表示存在显著差异(P <0.05),n =3㊂*:P 值对应的数字没有单位㊂V a l u e s i n t h e s a m e r o w l a b e l e d w i t h d i f f e r e n t s u pe r -s c r i p t l e t t e r s a r e s i g n if i c a n t l y di f f e r e n t (P <0.05),n =3.*:T h e n u m b e r s i n t h e P -v a l u e c o l u m n h a v e n o u n i t .2.4抗氧化指标与非特异性免疫指标如表6所示,精氨酸的添加明显提升了大菱鲆血浆C A T ㊁L Z M 和T -A O C 活性(P <0.05),但血清S O D 活力与日粮精氨酸添加无关(P >0.05)㊂饲料中73中 国 海 洋 大 学 学 报2024年添加1%亮氨酸能够有效提高大菱鲆血清L Z M 活性㊂不同蛋白水平对大菱鲆血清L Z M 活性㊁S O D 活力㊁T -A O C 活性和C A T 活性均无明显影响(P >0.05)㊂2.5T O R 信号应答通路相关蛋白表达量的动态学变化亮氨酸是激活T O R 信号应答通路最有效的氨基酸,本实验通过检测大菱鲆摄食亮氨酸补充剂后肝脏和肌肉中m T O R ㊁S 6和4E -B P 1蛋白的磷酸化水平来监测摄食后T O R 信号应答通路的活性变化㊂研究显示,L P 组大菱鲆肝脏m T O R 在摄食后2h 被激活,并持续至6h ,到12h 开始减弱,受饲料蛋白水平影响,H P 组激活水平明显强于L P 组㊂同L P 组相比,L P +L 组添加亮氨酸显著提高了p -m T O R 活性水平,且激活可持续至12h ㊂大菱鲆肝脏S 6和4E -B P 1蛋白的磷酸化水平在各处理组显示出差异,L P 组大菱鲆肝脏S 6在摄食后2h 有所激活,在6h 达到顶峰,随后蛋白表达量逐渐下降㊂较高的饲料蛋白水平(H P )和饲料添加1%亮氨酸(L P +L e u )都能提高p -S 6㊁p -4E -B P 1的活性水平,且维持至12h(见图1)㊂表6 饲料添加亮氨酸、精氨酸对大菱鲆血清生化指标的影响T a b l e 6 T h e s e r u m b i o c h e m i c a l i n d i c e s o f S .m a x i m u s f e d d i e t s w i t h L e u c i n e a n d A r gi n i n e 血清生化指标S e r u m b i o c h e m i c a l i n d e x组别G r o u pL PH PL P +LL P +RP *L Y Z /(U ㊃m L -1)16.09ʃ0.27a16.58ʃ0.17a b16.26ʃ0.30a b16.77ʃ0.34b0.036S O D /(U ㊃m L -1)33.32ʃ0.8333.22ʃ0.3933.46ʃ0.0734.03ʃ0.210.214T -A O C /(U ㊃m L -1)18.16ʃ0.04a 18.29ʃ0.13a 18.44ʃ0.41a 19.17ʃ0.29b 0.006C A T /(U ㊃m L -1)8.64ʃ0.15a9.19ʃ0.46a b9.41ʃ0.10a b9.91ʃ0.47b0.012注:同一行内不同上标字母表示存在显著差异(P <0.05),n =3㊂L Y Z :溶菌酶;S O D :超氧化物歧化酶;T -A O C :总抗氧化能力;C A T :过氧化氢酶㊂*:P 值对应的数字没有单位㊂V a l u e s i n t h e s a m e r o w l a b e l e d w i t h d i f f e r e n t s u p e r s c r i p t l e t t e r s a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t (P <0.05),n =3.L Y Z :L ys o -z y m e ;S O D :S u p e r o x i d e d i s m u t a s e ;T -A O C :T h e t o t a l a n t i o x i d a n t c a p a c i t y;C A T :C a t a l a s e .*:T h e n u m b e r s i n t h e P -v a l u e c o l u m n h a v e n o u n i t.(蛋白质印迹检测大菱鲆摄食后后不同时间点肝脏中m T O R ㊁S 6和4E -B P 1的总水平和磷酸化形式的水平㊂L P :低蛋白水平饲料;H P:高蛋白水平饲料;L P +L e u :低蛋白水平饲料添加亮氨酸补充剂;m T O R :雷帕霉素靶蛋白;S 6:核糖体蛋白S 6;4E -B P 1:真核起始因子4E 结合蛋白1㊂T h e l e v e l so f t o t a l a n d t h e p h o s p h o r y l a t e d f o r m s o f m T O R ,S 6a n d 4E -B P 1i n l i v e r a t d i f f e r e n t t i m e p o i n t s a f t e r f e e d i n g w e r e e x a m i n e d b y we s t e r n b l o t s .L P :L o w p r o t e i n d i e t ;H P :H i g h p r o t e i n d i e t ;L P +L e u :L o w p r o t e i n d i e t w i t h l e u c i n e s u p p l e m e n t ;m T O R :M e c h a n i s t i c t a r g e t of r a p a m y c i n ;S 6:R i b o s o m a l p r o t e i n S 6;4E -B P 1:4E -b i n d i ng pr o t e i n 1.)图1 饲喂L e u 补充剂对大菱鲆幼鱼肝脏中m T O R 信号通路的影响F i g .1 E f f e c t s o f L e u s u p p l e m e n t a t i o n o f m T O R s i g n a l i n g i n l i v e r o f ju v e n i l e t u r b o t 精氨酸也能够激活哺乳动物的T O R 信号通路㊂本研究显示,同L P 组相比,L P+A r g 组提高了p-m T O R 活性水平㊂大菱鲆肝脏S 6和4E -B P 1蛋白的磷酸化水平受到精氨酸添加的影响,与阴性对照组相比,饲料添加1%精氨酸(L P +A r g )能提高p -S 6㊁p-4E -B P 1的活性水平,且维持至12h(见图2)㊂835期田 原,等:低蛋白饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆幼鱼生长㊁消化㊁免疫及m T O R信号通路的影响(蛋白质印迹检测大菱鲆摄食后后不同时间点肝脏中m T O R ㊁S 6和4E -B P 1的总水平和磷酸化形式的水平㊂L P :低蛋白水平饲料;H P:高蛋白水平饲料;L P +A r g:低蛋白水平饲料添加精氨酸补充剂;m T O R :雷帕霉素靶蛋白;S 6:核糖体蛋白S 6;4E -B P 1:真核起始因子4E 结合蛋白1㊂T h e l e v e l s o f t o t a l a n d t h e p h o s p h o r y l a t e d f o r m s o f m T O R ,S 6a n d 4E -B P 1i n l i v e r a t d i f f e r e n t t i m e p o i n t s a f t e r f e e d i n g w e r e e x a m i n e d b y we s t e r n b l o t s .L P :L o w p r o t e i n d i e t ;H P :H i g h p r o t e i n d i e t ;L P +A r g :L o w p r o t e i n d i e t w i t h a r g i n i n e s u p p l e m e n t ;m T O R :M e c h a n i s t i c t a r g e t of r a p a m yc i n ;S 6:R i b o s o m a l p r o t e i n S 6;4E -B P 1:4E -b i nd i n g pr o t e i n 1.)图2 饲喂A r g 补充剂对大菱鲆幼鱼肝脏中mT O R 信号通路的影响F i g .2 E f f e c t s o f A r g s u p p l e m e n t a t i o n o n m T O R s i g n a l i n g i n l i v e r o f ju v e n i l e t u r b o t 摄食后大菱鲆肌肉中T O R 信号应答通路相关蛋白的表达量变化呈现与肝脏类似模式(见图3)㊂摄食2h 后L P 组大菱鲆肌肉m T O R 被有效激活,持续至6h 时开始减弱,之后逐渐恢复基础水平㊂6h 内L P +L 组大菱鲆肌肉中m T O R 激活程度均显著高于L P 组,且在摄食后12h 饲料添加亮氨酸(L P +L 组)能够维持大菱鲆肌肉m T O R 激活状态㊂大菱鲆肌肉S 6蛋白的磷酸化在摄食后2h 开始激活并在6h 达到顶峰,L P 处理组在摄食后12h 激活程度逐渐下降㊂与L P 组相比,饲料添加1%亮氨酸(L P +L 组)能够有效提高S 6激活峰值,且持续激活至12h ㊂同S 6相似,大菱鲆摄食后肌肉中4E -B P 1也在L P +L 组显示出较强的状态㊂实验显示(见图4),精氨酸在肌肉中也起到了激活T O R 信号通路的作用㊂与L P 组相比,饲料添加1%精氨酸(L P +A r g )能够有效提高磷酸化m T O R 的激活峰值㊂大菱鲆肌肉S 6和4E -B P 1蛋白的磷酸化在摄食后2h 开始激活,L P +A r g 组显示出比LP 组更高的激活水平㊂3 讨论足够的饲料蛋白水平是维持大菱鲆正常生长的必备条件,饲料蛋白不足将导致其生长水平低下㊂亮氨酸和精氨酸都是鱼类的必需氨基酸,对多种鱼类在各生长阶段生长起着重要作用㊂饲料中补充适宜的亮氨酸可以提高鱼类的生长性能,这在大菱鲆[13]㊁银鲫(C a r a s s i u s a u r a t u s g i b e l i o v a r .C A S Ⅲ)[20]㊁牙鲆(P a r a l i c h t h y s o l i v a c e u s )[21]㊁石斑鱼(E p i n e ph e l u s c o -i o i d e s )[22]等硬骨鱼中都已经被证实㊂饲料中添加适量精氨酸能够提升卵形鲳鲹(T r a c h i n o t u s o v a t u s )[23]和团头鲂(M e g a l o b r a m a a m b l y c e ph a l a )[24]等多种水产动物的生长效果㊂在本实验中,L P 饲料抑制了大菱鲆幼鱼的正常生长,而L P 饲料添加1%亮氨酸或1%精氨酸显著提高了大菱鲆的特定生长率㊁饲料效率㊁蛋白质效率和增重率,从而挽救因饲料蛋白不足带来的不利生长情况㊂此外,饲料氨基酸水平未对肥满度㊁肝体比和脏体比产生影响㊂本研究表明,饲料中添加适量功能性氨基酸可以提高大菱鲆幼鱼饲料利用率,同时提高蛋白质效率,这与在杂交鲶鱼(P e l t e o b a gr u s v a c h -e l l i ˑL e i o c a s s i s l o n gi r o s t r i s )[25]和银鲫[20]中的研究结果一致㊂不过,对军曹鱼(R a c h yc e n t r o n c a n ad u m )[26]和卵形鲳鲹[23]的研究表明,饲料中过量的精氨酸水平抑制了它们的生长㊂大菱鲆幼鱼对精氨酸需求量为饲料干物质的3.17%,本实验中L P +R 组精氨酸水平接近需求量,并未造成负面影响㊂过量亮氨酸水平也不利于牙鲆[21]和鲢鱼(M y l o p h a r y n go d o n p i c e u s )的生长[10]㊂93中 国 海 洋 大 学 学 报2024年(通过蛋白质印迹检测大菱鲆摄食后后不同时间点肌肉中m T O R ㊁S 6和4E -B P 1的总水平和磷酸化形式的水平㊂L P :低蛋白水平饲料;H P:高蛋白水平饲料;L P +L e u :低蛋白水平饲料添加亮氨酸补充剂;m T O R :雷帕霉素靶蛋白;S 6:核糖体蛋白S 6;4E -B P 1:真核起始因子4E 结合蛋白1㊂T h el e v e l s o f t o t a l a n d t h e p h o s p h o r y l a t e d f o r m s o f m T O R ,S 6a n d 4E -B P 1i n m u s c l e a t d i f f e r e n t t i m e p o i n t s a f t e r f e e d i n g w e r e e x a m i n e d b y we s t e r n b l o t s .L P :L o w p r o t e i n d i e t ;H P :H i g h p r o t e i n d i e t ;L P +L e u :L o w p r o t e i n d i e t w i t h l e u c i n e s u p p l e m e n t ;m T O R :M e c h a n i s t i c t a r g e t of r a p a m yc i n ;S 6:R i -b o s o m a l p r o t e i n S 6;4E -B P 1:4E -b i nd i n g pr o t e i n 1.)图3 饲喂L e u 补充剂对大菱鲆幼鱼肌肉中m T O R 信号通路的影响F i g .3 E f f e c t s o f L e u s u p p l e m e n t a t i o n o n m T O R s i g n a l i n g i n m u s c l e o f ju v e n i l e t u r b ot (蛋白质印迹检测大菱鲆摄食后后不同时间点肌肉中m T O R ㊁S 6和4E -B P 1的总水平和磷酸化形式的水平㊂L P :低蛋白水平饲料;H P:高蛋白水平饲料;L P +A r g:低蛋白水平饲料添加精氨酸补充剂;m T O R :雷帕霉素靶蛋白;S 6:核糖体蛋白S 6;4E -B P 1:真核起始因子4E 结合蛋白1㊂T h e l e v e l s o f t o t a l a n d t h e p h o s p h o r y l a t e d f o r m s o f m T O R ,S 6a n d 4E -B P 1i n m u s c l e a t d i f f e r e n t t i m e p o i n t s a f t e r f e e d i n g w e r e e x a m i n e d b y we s t e r n b l o t s .L P :L o w p r o t e i n d i e t ;H P :H i g h p r o t e i n d i e t ;L P +A r g :L o w p r o t e i n d i e t w i t h a r g i n i n e s u p p l e m e n t ;m T O R :M e c h a n i s t i c t a r g e t of r a p a m yc i n ;S 6:R i b o s o -m a l p r o t e i n S 6;4E -B P 1:4E -b i nd i n g pr o t e i n 1.)图4 饲喂A r g 补充剂对大菱鲆幼鱼肌肉中mT O R 信号通路的影响F i g .4 E f f e c t s o f A r g s u p p l e m e n t a t i o n o n m T O R s i g n a l i n g i n m u s c l e o f ju v e n i l e t u r b o t 045期田原,等:低蛋白饲料添加亮氨酸㊁精氨酸对大菱鲆幼鱼生长㊁消化㊁免疫及m T O R信号通路的影响在幼鱼时期,鱼类消化系统尚未完全发育,消化酶活性常被用作衡量鱼消化系统消化能力的指标㊂适量添加精氨酸能够促进鱼类肠道发育和提高消化能力㊂基于本研究结果,饲料添加1%精氨酸能够有效地提高大菱鲆幼鱼的淀粉酶活性和脂肪酶活性,这与在大黄鱼(L a r i m i c h t h y s c r o c e a)[27]和黑鲷(A c a n t h o p a g r u s s c h l e g e l i i)[28]中的研究结果一致㊂然而,并非所有消化酶在该组中都表现出最佳活性㊂例如,胰蛋白酶活性并未明显高于其他各处理组㊂而在大黄鱼中胰蛋白酶水平随着饲料精氨酸水平同步提高,这种不同可能是因生长阶段和物种差异造成的㊂精氨酸在调节高等脊椎动物的免疫应答和抗病能力效果方面尤为突出,在鱼类中精氨酸作为免疫调节剂受到了极大的关注㊂溶菌酶是鱼类先天免疫系统的重要组成部分,血浆溶菌酶波动能够反映出大菱鲆对应激源的反应㊂过氧化氢酶普遍存在于生物体内,酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理㊂在本研究中发现,饲料添加1%精氨酸能够提高大菱鲆血浆总抗氧化能力和溶菌酶㊁过氧化氢酶活性,这意味着精氨酸能够提高大菱鲆的免疫应答和抗病能力,这与之前在斑鲈(L a t e o l a b r a x m a c u l a t u s)[29]和斑点叉尾鮰(I c t a l u-r u s p u n c t a t u s)[30]中得到的结论一致㊂先前的研究表明,精氨酸缺乏会在不同鱼类中造成一系列免疫问题,包括白细胞数量减少,溶菌酶和补体活性降低,刺激超氧阴离子㊁一氧化氮和免疫球蛋白生成,以及造成血凝反应,对病原体的抵抗力也因此下降㊂然而,饮食中过量的精氨酸似乎适得其反,降低了一些硬骨鱼类的免疫功能和抗病能力,例如鲤鱼(C y p r i n u s c a r p i o)[31]㊂m T O R信号通路能够整合多种信号刺激合成代谢(如蛋白质㊁脂质和核苷酸合成),进而促进细胞生长,同时抑制自噬等分解代谢过程,亮氨酸和精氨酸已经被证明是激活m T O R C1的最重要氨基酸之一[12,32]㊂在本研究中,与L P组相比,投喂晶体亮氨酸㊁精氨酸饲料的大菱鲆拥有更高的体蛋白和体脂肪水平,与H P 组相当㊂这与在许多硬骨鱼中的研究结果一致[33-34]㊂添加亮氨酸后,L P+L组大菱鲆显示出高的饲料蛋白质利用率和m T O R信号通路蛋白激活情况,与H P组相当㊂本研究结果表明,日粮中添加亮氨酸可提高肌肉和肝脏中m T O R㊁4E-B P1和S6的磷酸化水平㊂在哺乳动物中,亮氨酸被证明直接通过m T O R或间接通过P I3K-A K T-m T O R信号通路调节蛋白质合成㊂给限制饮食的成年大鼠口服亮氨酸可通过激活m T O R 信号通路来刺激骨骼肌中蛋白质合成[35]㊂低蛋白配方食物中添加亮氨酸可显著增加新生猪骨骼肌和内脏组织中的蛋白质合成,达到与高蛋白膳食相似的速率[36]㊂此外,L a n g等[37]报道称亮氨酸诱导的T O R磷酸化可能不依赖于P I3K-A K T信号通路㊂这些发现表明,与哺乳动物一样,亮氨酸可以激活硬骨鱼细胞中T O R或P I3K-A K T-T O R信号通路,且有助于鱼类肌肉蛋白质的合成㊂然而,凡纳滨对虾(L i t o p e n a e u s v a n-n a m e i)[38]幼虾的肌肉蛋白质含量不随亮氨酸水平的增加而变化㊂在银鲫[20]的研究中发现,饲料亮氨酸水平对肌肉中4E-B P2和S6K1的m R N A水平没有差异㊂这一点在大菱鲆幼鱼中也被证实,张凯凯等[5]认为大菱鲆幼鱼肌肉中4E-B P1-2和T O R的转录水平不受饲料亮氨酸的影响㊂因此,还需要更多的研究来阐明亮氨酸促进鱼类肌肉蛋白质合成的更详细的机制㊂与亮氨酸类似的,低蛋白饲料中添加精氨酸能够激活大菱鲆肌肉和肝脏中m T O R信号通路㊂这与在哺乳动物研究中得到的结论一致,Y a o等[39]发现日粮补充精氨酸可增加新生猪骨骼肌中的m T O R信号传导活性㊂相应的,在鱼类研究中发现适当的精氨酸还能显著提高草鱼(C t e n o p h a r y n g o d o n i d e l l a)肌肉中t o r和s6k1基因的表达水平[34]㊂从以上研究可以发现,亮氨酸和精氨酸都是能够激活大菱鲆m T O R信号通路的功能性氨基酸,此外,精氨酸还能够提高大菱鲆消化酶活性,这是在L P+L组没有观察到的㊂4结语低蛋白饲料中添加1%亮氨酸或1%精氨酸能够有效提高大菱鲆幼鱼生长性能,亮氨酸和精氨酸作为化学信使能够有效激活m T O R信号途径,进而影响大菱鲆肝脏和肌肉蛋白合成,提高低蛋白水平饲料喂养下大菱鲆的饲料蛋白效率和蛋白质沉积,最终促进了大菱鲆的生长㊂精氨酸作为有代表性的功能性氨基酸,能够影响大菱鲆生长㊁体组成㊁肠道消化吸收能力和特异性免疫㊂这些结果为进一步揭示功能性氨基酸调控鱼类生长的内在机制提供了参考㊂参考文献:[1] W i l s o n R P.A m i n o A c i d s a n d P r o t e i n s.I n:F i s h N u t r i t i o n[M].3r d E d i t i o n.N e t h e r l a n d s:E l s e v i e r,2002.[2] W u G Y.A m i n o a c i d s:M e t a b o l i s m,f u n c t i o n s,a n d n u t r i t i o n[J].A m i n o A c i d s,2009,37(1):1-17.[3] W u G Y.F u n c t i o n a l a m i n o a c i d s i n g r o w t h,r e p r o d u c t i o n,a n dh e a l t h[J].A d v a n c e s i n N u t r i t i o 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饲料中添加浒苔对黄斑蓝子鱼生长性能与生理生化指标的影响
维生素 C vitamin C NSP 酶 enzymes
DL_蛋氨酸 methionine
29
29
29
29
29
29
26
24
22
20
22
20
1.7
1.7
1.7
1.7
1.7
1.7
3.4
பைடு நூலகம்
3.4
3.4
3.4
3.4
3.4
5
5
5
5
5
5
22.8
19.8
16.8
13.8
16.8
13.8
0
5
10
15
10
15
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
9
9
9
9
8.8
8.8
0.08
0.08
0.08
0.08
0.08
0.08
0.02
0.02
0.02
0.02
0.02
0.02
0
0
0
0
0.2
0.2
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
CaHPO4 总计/% total
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
100
100
100
100
100
100
水分 moisture
6.73
6.39
6.81
饲料中补充外源晶体DL-蛋氨酸对鲤科鱼类养殖的效用
基酸可以来 自于原料中结合态蛋 白质或者是外 源 补充的晶体 Ｄ 一 Ｌ 蛋氨酸。 尽管如此 ， 晶体 Ｄ 一 Ｌ 蛋氨
酸 在水产 动物 饲料 中 的应用 还不 是很 广 ， 特别 是鲤 科 鱼类 。为此 ， 文针 对几 种 国 内最 为 常 见鲤 科 鱼 本
２补 充 Ｄ 一蛋氨酸 在鲤 鱼上 的应 用 Ｌ
氨基酸模式 ，添加豆 油来调节 总能含量 。结 果见表 ４ 、表 ５和表 ６ ，池 塘试 验 中 ，摄 食部 分 替 代 鱼粉 （０ 饲 料 的鱼在 补 充 ０１％的 Ｄ ４ ％） ． ５ Ｉ 一蛋氨 酸 和 ５ ％ 油 的情 况下 ， 摄食 对 照饲料 鱼 的生 长没 有显 著差 和 异 。 网箱 及水 族 箱试 验 中 ，豆 粕 的替 代 比例 达 到
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Ｍ ｒｉ （ ８） ｕａ等 １ ６ 在以豆粕替 ９ 代 ７ ％鱼 粉 的饲 料 中补 充 必 ５
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需氨基酸混合 物（ Ａ ， Ｅ ）和未 Ａ
个 处理 ９尾 ／ （０ Ｌ 缸 ） 缸 ３０ ／ 。以豌豆 、 豆蛋 白和小 大
麦淀粉为主要原料配制蛋氨酸缺乏的基础料 ， 然后
在 此基 础 上 补充 外 源 晶体 Ｄ 一蛋 氨 酸 ， 日粮 组成 Ｌ 与 Ｓｈ ａｚ （９８ 使用 的相似 。 ｅｗ ｒ 等 １９ ）
对 蛋 白质 、 蛋氨 酸 和 蛋 ＋胱 的 利 用
表 １鲤鱼摄食粗蛋 白含量 ３ ．％并梯度添加 Ｄ 一蛋氨酸饲料 的生长性能 以及 １４ Ｌ