还原糖的测定
还原糖检测的操作步骤
还原糖检测的操作步骤还原糖检测的操作步骤1. 引言还原糖是指具有还原性的单糖和部分还原性的多糖，其检测是一种常用的分析方法，用于确定食品、饮料等样品中的糖含量。
本文将详细介绍还原糖检测的操作步骤，希望能帮助读者更全面地理解和掌握这个过程。
2. 实验所需材料在进行还原糖检测前，我们需要准备以下实验所需材料：- 还原糖检测试剂盒- 待测样品- 蒸馏水- 试管- 移液器- 离心管- 离心机- 恒温水浴器- 显色板3. 操作步骤3.1 样品制备将待测样品称取适量，加入适量的蒸馏水，充分混合均匀。
如需测定饮料或其他高浓度的样品，可以适当稀释，确保待测溶液的浓度在检测范围内。
3.2 样品处理将制备好的样品离心10分钟，以除去悬浮物。
借助移液器，小心地取出上清液转移至试管中。
3.3 加标处理在处理前期，可以加入一定浓度的加标溶液作为内标，以提高结果的准确度和可靠性。
3.4 消解处理将取自样品的上清液放入恒温水浴器中，使其保持在指定温度下。
加入相应的还原糖检测试剂盒中的消解剂，并严格按照试剂盒说明书的操作方法进行消解处理。
消解时间和温度会根据不同的试剂盒和样品要求而有所不同。
3.5 检测操作将消解后的样品均匀摇匀，并按照试剂盒的要求加入相应的试剂，一般是加入试剂A和试剂B。
摇匀后，放入恒温水浴器中反应一段时间。
3.6 显色反应将反应后的溶液转移到显色板上，并将显色板放入离心机中离心。
根据试剂盒的要求进行离心转速和离心时间的设置。
3.7 光度测定将离心后的显色板放入光度计中，选择合适的波长进行测定。
根据试剂盒的说明，可以设定合适的样品数量来进行测定。
3.8 结果分析根据光度计测得的吸光度值，结合试剂盒提供的标准曲线，计算出样品中还原糖的含量。
4. 本文观点和理解作为一种常见的定量分析方法，还原糖检测在食品、医药等领域具有广泛的应用。
在具体操作时，需要严格按照试剂盒的要求进行操作，并注意样品的制备、处理和消解等步骤。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，通常用来测定葡萄糖、果糖、麦芽糖等在食品和生物样品中的含量。
测定还原糖的方法有很多种，其中包括费林试剂法、硫酸铜比色法、硼酸硫酸铜比色法等。
本文将介绍硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法两种测定还原糖的方法。
硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硫酸铜溶液，取一定容量的硫酸铜溶液，通常浓度为0.1mol/L。
3. 反应，将样品溶液与硫酸铜溶液混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成红色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
硼酸硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硼酸硫酸铜试剂，将一定量的硼酸溶液与硫酸铜溶液混合制备硼酸硫酸铜试剂。
3. 反应，将样品溶液与硼酸硫酸铜试剂混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成蓝色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
以上两种方法均是通过还原糖与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在具体操作时，需要注意样品的处理、试剂的配制、反应条件的控制以及仪器的使用等细节，以确保测定结果的准确性和可靠性。
总结，硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法是常用的测定还原糖的方法，通过与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在实际操作中，需要严格按照方法步骤进行操作，以获得准确可靠的测定结果。
还原糖的测定
3.样品测定
样品预滴定： 样品溶液预测：吸取5.0ml碱性酒石酸铜 甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中， 加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min内 加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴 定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状 态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速 度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点， 记录样液消耗体积。
直接滴定法（斐林氏溶液法）
还原糖的测定
实验目的
掌握直接法测定还原糖的原理和方法
一、原理
样品经过处理除去蛋白质等杂质后，加入盐酸， 在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，用直接 滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。 本方法测定的是一大类具有还原性的糖，包括葡 萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等。只是结果用葡萄 糖或转化糖表示而已。 本法是国标分析法，适合于各类食品中还原糖的 快速测定。检出限为0.1mg。
3.样品测定
正式滴定： 样品溶液测定：吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲 液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加 水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比 预测体积少1ml的样品溶液，使在2min内加 热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定， 直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗 体积，同法平行操作三份，得出平均消耗 体积。
六、注意事项
1.滴定过程要迅速，使整个过程Байду номын сангаас2-3分 钟内完成，否则滴定终点不明显。 2.费林试剂乙液中加亚铁氰化钾使红色氧 化亚铜沉淀生成可溶性复盐，反应终点更 为明显。 3.醋酸锌和亚铁氰化钾液是蛋白质沉淀剂， 用以除去样品中的蛋白质。 4.费林试剂取量要准确，特别是甲液，因 为起反应的是铜离子，否则引起较大误差。
2.标定费林试剂
吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙 液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加 入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9ml葡萄 糖标准溶液，控制在2min内加热至沸， 趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖 标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终 点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积， 同时平行操作三份，取其平均值，计算 每10ml(甲、乙液各5ml)碱性酒石酸铜溶 液相当于葡萄糖的质量(mg)。
还原性糖的测定
本法适用于谷物及其制品、饲料、果蔬等样品，① 对于蛋白质、淀粉含量高的样品，易形成大量 泡沫．粘度大，过滤困难，使此法应用受到限制。② 不包括水溶性非消化性多糖，这是此法的最 大缺点。
GB/T 5009.10—2003
《植物类食品中粗纤维的测定》 酸碱处理法
○ GB/T 5009.88—2003
单糖及蔗糖等低聚糖。一般须将样品磨碎、浸渍成溶 液（提取液），经过滤后再测定。 （一）提取 1. 常用的提取剂有水及乙醇溶液。
2. 提取液制备的原则 ⑴ 取样量与稀释倍数的确定,使(0.5—3.5mg / ml)。 ⑵ 含脂肪的食品，须经脱脂后再用水提取。
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含有大量淀粉、糊精及 蛋白质的食品，用乙醇 溶液提取。
糖类物质的测定 p69
一．第一节 概述 二．定义和分类
○ 碳水化合物统称为糖类，是由碳、氢、氧三种元素组成的一大类化合物。 ○ 糖+蛋白质→糖蛋白 ○ 糖+脂肪→糖脂
① 碳水化合物存在于各种食品的原料中（特别是植物性原料中）。 ② 作为食品工业的主要原料和辅助材料。
三．在各种食品中存在形式和含量不一。
反应，生成红色的氧化亚铜沉淀； 这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原
糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点； 根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
Cu2+ + 还原糖
Cu+
计算还原糖的量有两种方法：
一．用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方 法。
二．利用通过实验编制出的还原糖检索表来计算。
本法是国家标准分析方法。
澄清剂3.试剂 p68 ①源自碱性酒石酸铜甲液：硫酸铜+次甲基蓝． ② 碱性酒石酸铜乙液：酒石酸钾钠 + NaOH + 亚铁
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法
还原糖是一种重要的碳水化合物，广泛存在于植物和动物体内。
它在食品加工中起着重要作用，也是一种重要的营养物质。
因此，
准确测定还原糖的含量对于食品加工和营养评估具有重要意义。
下
面将介绍几种常用的还原糖测定方法。
首先，最常用的还原糖测定方法是费林试剂法。
该方法利用费
林试剂与还原糖发生化学反应，生成可见的蓝色产物，通过比色法
测定产物的光密度来计算还原糖的含量。
费林试剂法操作简便，结
果准确，广泛应用于食品工业和科研领域。
其次，还原糖的测定方法还包括硫酸铜法。
该方法利用硫酸铜
与还原糖在碱性条件下发生化学反应，产生沉淀物，通过沉淀物的
重量来计算还原糖的含量。
硫酸铜法操作简单，结果准确，适用于
各种类型的食品样品。
此外，还原糖的测定方法还包括酚酞法。
该方法利用酚酞与还
原糖在碱性条件下发生化学反应，产生可见的红色产物，通过比色
法测定产物的光密度来计算还原糖的含量。
酚酞法操作简便，结果
准确，适用于各种类型的食品样品。
最后，还原糖的测定方法还包括高效液相色谱法。
该方法利用高效液相色谱仪对食品样品中的还原糖进行分离和测定，具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，适用于各种类型的食品样品。
综上所述，还原糖的测定方法多种多样，各有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据样品的特点和实验条件选择合适的测定方法，以获得准确的测定结果。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
还原糖的测定方法_国标
还原糖的测定方法（1）食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2）25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
实验报告还原糖测定(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习还原糖的检测原理和方法。
2. 掌握斐林试剂的使用方法。
3. 通过实验了解还原糖在食品、生物样品中的应用。
二、实验原理还原糖是指在水溶液中能将斐林试剂还原成砖红色沉淀的糖类物质。
斐林试剂是一种含有CuSO4和NaOH的混合溶液，在加热条件下，Cu2+被还原成Cu2O，形成砖红色沉淀。
还原糖与斐林试剂反应，生成砖红色沉淀的多少与还原糖的浓度成正比。
三、实验材料1. 试剂：斐林试剂、NaOH溶液、CuSO4溶液、葡萄糖标准溶液、蒸馏水。
2. 仪器：试管、试管架、酒精灯、恒温水浴锅、移液器、滴定管。
四、实验步骤1. 准备斐林试剂：将CuSO4溶液和NaOH溶液按1:9的比例混合，现配现用。
2. 配制葡萄糖标准溶液：准确称取1.0g葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml，配制成10mg/ml的葡萄糖标准溶液。
3. 样品处理：准确称取待测样品0.1g，用蒸馏水溶解并定容至10ml，配制成0.01mg/ml的样品溶液。
4. 实验步骤：a. 取一支试管，加入1ml斐林试剂；b. 取另一支试管，加入1ml样品溶液；c. 将两支试管同时放入恒温水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态2分钟；d. 观察颜色变化，记录结果。
5. 结果处理：a. 将实验结果与葡萄糖标准溶液进行对照；b. 计算样品中还原糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 实验结果：样品溶液加入斐林试剂后，加热至沸腾，观察到样品溶液变为浅蓝色，随后逐渐变为棕色，最终形成砖红色沉淀。
2. 结果分析：根据实验结果，样品溶液中加入斐林试剂后，发生了还原反应，生成了砖红色沉淀。
这说明样品中含有还原糖，且其浓度与斐林试剂反应生成的沉淀量成正比。
六、实验讨论1. 实验过程中，样品溶液加热至沸腾时，需保持沸腾状态2分钟，以确保还原糖与斐林试剂充分反应。
2. 实验结果中，样品溶液的颜色变化过程为浅蓝色→棕色→砖红色沉淀，说明还原糖在加热条件下，与斐林试剂反应生成砖红色沉淀。
还原糖 测定实验报告
还原糖测定实验报告还原糖测定实验报告引言：还原糖是一类具有还原性的糖类物质，能够还原某些化学试剂。
测定还原糖的含量在食品工业和生化实验中具有重要意义。
本实验旨在通过还原糖的测定实验，掌握还原糖的测定方法以及实验操作技巧。
实验材料和仪器：1. 实验材料：葡萄糖溶液、蔗糖溶液、还原糖标准溶液、硫酸铜溶液、碱式碘液、硫酸、氢氧化钠溶液等。
2. 仪器：分光光度计、试管、移液管、烧杯、量筒等。
实验步骤：1. 制备还原糖标准溶液：取一定量的葡萄糖溶液，用蒸馏水稀释至一定体积，得到一定浓度的还原糖标准溶液。
2. 实验组的操作：取一定体积的蔗糖溶液，加入硫酸铜溶液和碱式碘液，混合均匀后加入硫酸，使溶液变为无色。
然后加入氢氧化钠溶液，使溶液呈现深蓝色。
最后，用分光光度计测定溶液的吸光度。
3. 对照组的操作：取一定体积的还原糖标准溶液，按照实验组的操作步骤进行操作。
4. 分光光度计测定：将实验组和对照组的溶液分别放入分光光度计中，设置适当的波长，测定吸光度。
结果与分析：根据实验数据，在分光光度计上测得实验组和对照组的吸光度值，通过计算可以得到实验组中还原糖的含量。
通过对比实验组和对照组的含量，可以得出蔗糖溶液中还原糖的含量。
实验误差的分析：1. 实验操作误差：由于实验操作中的仪器使用、试剂的取用等步骤，可能会产生一定的误差。
为减小误差，应严格按照实验步骤进行操作，尽量减少操作上的差异。
2. 仪器误差：分光光度计的测量结果也可能存在一定的误差。
为减小仪器误差，应在测量前校准分光光度计，确保其准确性。
实验结论：通过本实验的测定，可以得出蔗糖溶液中还原糖的含量。
实验结果可用于食品工业中对糖类产品的质量控制和生化实验中对还原糖的研究。
总结：本实验通过测定蔗糖溶液中还原糖的含量，掌握了还原糖的测定方法和实验操作技巧。
同时，还了解了实验误差的来源，并提出了减小误差的方法。
这些知识和技能对于食品工业和生化实验具有重要意义。
通过实验的过程，我们不仅学到了实验操作的技巧，还加深了对还原糖测定原理的理解。
还原糖鉴定步骤
还原糖鉴定的步骤
在生物化学和食品科学中，还原糖鉴定是一个重要的实验过程。
这个过程用于确定样品中是否含有可还原性糖，例如葡萄糖、果糖等。
以下是还原糖鉴定的一般步骤：
1. 准备样本：首先，你需要准备一个包含可能含有还原糖的样本。
这可以是任何你想测试的食物或液体。
2. 配制试剂：还原糖鉴定的主要试剂是本尼迪特试剂，它由硫酸铜和酒石酸钾钠混合而成。
这种试剂会在遇到还原糖时发生颜色变化。
3. 加入样本：将你想要测试的样本加入到配制好的本尼迪特试剂中。
确保样本充分与试剂混合。
4. 加热反应：将混合了样本和试剂的试管放入沸水中加热约5分钟。
在此过程中，如果有还原糖存在，那么它会与本尼迪特试剂发生反应，生成红色的氧化亚铜沉淀。
5. 观察结果：从热水中取出试管，让其冷却至室温。
然后，通过观察试管中的溶液颜色变化来判断是否存在还原糖。
如果溶液变为砖红色，那么就说明样本中含有还原糖。
6. 记录和分析结果：最后一步是记录你的观察结果，并对数据进行分析。
你可以根据颜色变化的程度来大致估计还原糖的含量。
还原糖的测定
1 还原糖的测定(DNS 法)DNS 试剂的配制:称取10g3，5-二硝基水杨酸（DNS ）溶于水中，全部溶解后，加入20gNaOH 、200g 酒石酸钾钠，加入蒸馏水，使总体积至500mL 左右，加热溶解后，加2g 苯酚、0.5g 无水亚硫酸氢钠，加热搅拌至全部溶解，冷却，用水稀释至1000mL ，储于棕色瓶中。
⑴反应原理利用糖的还原性质，将3,5-二硝基水杨酸（DNS ）与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，还原糖的量和棕红色物质颜色的深浅程度成一定的比例关系，可以用分光光度计进行测定。
⑵测定方法①葡萄糖标准曲线的绘制取洁净试管6支进行编号，分别按下表2-3加入各试剂。
表2-3试剂项目表管号 单位 0 1 2 3 4 5 含糖量 mg — 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 标准葡萄糖溶液mL — 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水 mL 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 3,5-二硝基水杨酸mL0.50.50.50.50.50.5沸水浴5min ，然后冷水冷却各加蒸馏水8mL 540nm 测吸光度值将上述各管混匀，然后在540nm 波长下以0号管为对照，测定各管分光光度值。
以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，分光光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
②还原糖含量的测定将样品液经适当稀释后，取0.5mL 稀释液加入0.5mLDNS 试剂，煮沸5min 显色，然后冷水冷却至室温，加8mL 蒸馏水，同时以蒸馏水代替稀释液做空白对照试验，540nm 测定吸光值，根据标准曲线计算还原糖含量。
③计算公式（2-1）：公式（2-1）DNS 测还原糖含量2 总酸的测定(指示剂法)总酸的测定 采用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.05mol/L]以酚酞(10g/L)作指示剂直接滴 定。
吸取样品2ml —5ml[液温20℃；取样量可根据酒的颜色深浅而增减]，置于250ml 三角瓶中，加入50ml 水，同时加入2滴酚酞指示液，摇匀后，立即用氢氧化钠标准溶液滴定至终点，并保持30s 内不变色，记下消耗氢氧化钠标准溶液的体积(V1)。
还原糖的测定
理工学系 食品科学与工程
食品分析
（3）蔗糖的测定和计算 ㈠、转化前转化糖的计算
F1 L1 × 2 .5 L1 = × 100 ， w1 = × 100 V m × 1000
利用测定乳糖时的 滴定量，从附录5 利用测定 乳糖时的滴定量 ， 从附录 5 中找到对应 乳糖 时的滴定量 的转化糖因子，即可换算成转化前转化糖的量。 转化糖因子，即可换算成转化前转化糖的量。 转化前转化糖的量
C 12 H 22 O11 + H 2 O = C 6 H 12 O 6 + C 6 H 12 O 6
M=343） 蔗糖 （M=343） M=180+180） 转化糖 （M=180+180）
理工学系 食品科学与工程
食品分析
8.3.2 转化方法的选择 酶转化 蔗糖可用转化酶进行水解，这种方法 选择性强，不受其他物质的干扰，但酶的制备和 操作过程复杂，一般不采用。 酸转化 用盐酸溶液水解蔗糖是目前应用最广 泛的一种方法，这种方法选择性差，但操作简便， 准确度也能够满足一般分析的要求。
理工学系 食品科学与工程
食品分析
（四）肖氏法
不需要在沸腾的条件下进行滴定 该方法不需要在沸腾的条件下进行滴定，所以操作比较容易。 该方法不需要在沸腾的条件下进行滴定，所以操作比较容易。
1、 原理 ： 以 过量 的 费林试液 氧化还原后 ， 剩余的费 、 原理： 过量的费林试液氧化还原后 氧化还原后， 林试液中的Cu 还原， 林试液中的 2+ 用 KI还原 ， 然后用 2S2O3 标准溶 还原 然后用Na 试样与 液滴定析出的I 根据试样 空白消耗的标准溶液 液滴定析出的 2， 根据 试样 与 空白消耗 的标准溶液 铜的质量， 的体积可计算出铜的质量 的体积可计算出铜的质量，再查表求的还原性糖的 含量。 含量。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。
产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。
通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。
2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。
先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。
水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。
2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。
（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。
（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。
（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。
（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。
（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
食品中还原糖的测定实验报告
食品中还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在掌握食品中还原糖含量的测定方法，了解还原糖在食品中的重要性，并通过实际操作提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理还原糖是指具有还原性的糖类，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀。
斐林试剂由甲液（硫酸铜溶液）和乙液（氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液）组成，使用时将甲液和乙液等量混合。
反应式如下：2Cu(OH)₂＋RCHO → RCOOH ＋ Cu₂O↓ ＋ 2H₂O生成的氧化亚铜沉淀呈砖红色，通过比色法或重量法可以测定还原糖的含量。
三、实验材料与仪器（一）实验材料1、葡萄糖标准溶液：准确称取 1000g 经过 98 100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后定容至 1000mL，浓度为 1mg/mL。
2、待测食品样品：苹果汁、橙汁、蜂蜜等。
（二）实验仪器1、电子天平：精度为 0001g。
2、容量瓶：100mL、500mL。
3、移液管：1mL、5mL、10mL。
4、锥形瓶：250mL。
5、电炉。
6、石棉网。
7、酸式滴定管：50mL。
8、比色皿。
9、分光光度计。
四、实验步骤（一）样品处理1、液体样品（如苹果汁、橙汁）：准确吸取 1000mL 样品于100mL 容量瓶中，加 5mL 乙酸锌溶液和 5mL 亚铁氰化钾溶液，定容至刻度，摇匀，静置 30 分钟，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，收集滤液备用。
2、粘稠液体样品（如蜂蜜）：称取 500 1000g 样品于 100mL 容量瓶中，加水约 50mL 溶解，慢慢加入 5mL 乙酸锌溶液和 5mL 亚铁氰化钾溶液，定容至刻度，摇匀，静置 30 分钟，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，收集滤液备用。
（二）斐林试剂的标定1、准确吸取 500mL 葡萄糖标准溶液于 250mL 锥形瓶中，加入25mL 水和 5mL 斐林试剂甲液、5mL 斐林试剂乙液，摇匀，在电炉上加热至沸腾，保持沸腾 2 分钟，趁热用 01%葡萄糖标准溶液滴定至蓝色刚好消失，记录消耗的葡萄糖标准溶液的体积。
《还原糖的测定方法_国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖是利用还原性固体物质与硫酸酸作用而形成的糖类物质，是各种天然糖和蔗糖等碳水化合物的主要成分。
还原糖的测定方法主要包括酚酞法和锁紫法两种。
一、酚酞法1.原理还原糖在酸性溶液中能够与酚酞形成红色络合物，按照这个特性可以利用测定还原糖的含量。
酚酞法是将酚酞加入葡萄糖溶液，并加入硫酸，使葡萄糖反应生成邻磺酸基苯甲醛，酚酞与邻磺酸基苯甲醛产生红色络合物，根据颜色变化来测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品处理：将样品取适量加入标准瓶中，加入适量蒸馏水稀释。
（2）试剂溶液制备①酚酞指示剂：0.1%酚酞水溶液，加入适量氢氧化钠溶液调节其pH值到8左右；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）测定操作①在滴定管中加入5ml淀粉指示液；②将50ml试剂用热水浴加热至60℃，在加热的过程中不断振荡，直到试剂完全溶解；③加入3ml样品，再加入1.5ml的硫酸；④加入恰好的量的还原剂，至混合溶液变成淡绿色，继续振荡至反应彻底；⑤从头部滴入酚酞指示液，直至溶液变为粉色，记录滴定管体积。
（4）计算还原糖的质量浓度二、锁紫法1.原理锁紫法是一种定量测定还原糖的方法，其原理是利用还原性糖在酸性条件下氧化生成醛酸物质，再与锁紫剂作用形成深紫色络合物，根据反应色深与被测样品中还原糖含量成正比关系的特点，来定量测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品前处理：将样品取适量加入到锥形瓶中加入适量蒸馏水稀释，搅拌溶解。
（2）试剂溶液制备①锁紫试剂：将0.2g锁紫用少量水样吸湿后加入10mL浓氢氧化钠（4mol/L），用水稀释到100ml，在加入5ml浓硫酸搅拌，备用；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）操作流程①在锥形瓶中加入1ml锁紫试剂和30ml蒸馏水；②加入3ml样品后加入2ml还原剂，充分搅拌均匀；③经过10分钟左右，样品溶液颜色变为紫色，放置待沉淀，用滤纸滤掉沉淀；④将过滤后的溶液转移到光度计试样池，用蒸馏水稀释至标线；⑤根据光度计读数计算样品中还原糖的质量浓度。
还原糖测定
1.2 费林氏液法1.2.1 仪器和用具1.2.1.1 古氏坩埚：25 ml；1.2.1.2 抽滤瓶：500 ml；1.2.1.3 真空泵或水泵等。
1.2.2 试剂1.2.2.1 费林氏溶液；a．碱性酒石酸铜甲液：取硫酸铜结晶34.639 g，加适量水溶解，加硫酸0.5 ml，再加水至 500 ml，用精制石棉过滤；b．碱性酒石酸铜乙液：取酒石酸钾钠173 g与氢氧化钠50 g，加适量水溶解，稀释至500 ml，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内。
1.2.2.2 精制石棉：先用3 N盐酸将石棉浸泡2～3日后，用水洗净。
再加10％氢氧化钠溶液浸泡2～3日，倾去溶液，用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 N盐酸浸泡数小时，用水洗至不呈酸性，使之成为微细的软纤维，用水浸泡贮存于玻璃瓶内，作填充古氏坩埚用。
1.2.2.3 0.1 N高锰酸钾标准溶液。
1.2.2.4 1 N氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4 g，加水溶解至100 ml。
1.2.2.5 硫酸铁溶液：取硫酸铁50 g，加水200 ml溶解后，慢慢加入硫酸100 ml，冷后加水至1000 ml。
1.2.2.6 3 N盐酸：取盐酸25 ml，加水至100 ml。
1.2.3 操作方法表 11.2.3.1 试样处理：准确称取试样10～20 g放入250 ml容量瓶中，加水200 ml，在45℃水浴中加热1 h，并时时振摇，到时待冷后加水至刻度，静置后，吸取澄清液200 ml于另一250 ml容量瓶中，加碱性酒石酸铜甲液10 ml和1 N氢氧化钠溶液4 ml，摇匀，加水至刻度，静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，其余滤液供测定还原糖和非还原糖用。
1.2.3.2 滴定：精密吸取制备的试样溶液50 ml于400 ml烧杯中，加入碱性酒石酸铜甲、乙液各25 ml，盖一表面皿，置电炉上加热，在4 min内沸腾，再煮沸2 min，趁热用铺有石棉的古氏坩埚（或垂融坩埚）抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯和沉淀，至洗液不呈碱性为止。
还原糖的测定
还原糖的测定
还原糖是指能够被还原剂还原成糖醇的单糖、二糖和少量寡糖。
常见的还原糖有葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖等。
测定还原糖含量是分析食品中糖类成分的重要手段之一。
还原糖的测定方法有许多种，下面介绍两种常用的方法。
一、费林试剂法
费林试剂法是将含还原糖的样品与费林试剂反应生成蓝色化合物，根据颜色深浅来测
定还原糖的含量。
试剂：1%费林试剂（若干费林试剂在50ml蒸馏水中搅拌，过滤后可得到1%的费林试剂），硫酸（浓度为98%），蒸馏水。
步骤：
1. 取适量样品，加入50ml蒸馏水搅拌均匀。
2. 取5ml上述混合液，加入试管中。
3. 加入2ml的费林试剂并摇匀。
4. 加入10ml的浓硫酸，容器要远离自己，慢慢倾倒并摇匀。
5. 用减色比色法，将混合液的吸光度在相应波长下读取。
6. 根据标准曲线计算还原糖的含量。
二、改良罗伯逊-梅利试剂法
试剂：改良罗伯逊-梅利试剂（一定量的酚水和氨水混合制成），硫酸（浓度为98%），蒸馏水。
无论使用哪种方法来测定还原糖的含量，都需要按照操作规范，严格控制试剂和样品
的量，避免误差的产生。
还原糖的测定方法_国标
还原糖得测定方法(1)食物中还原糖得测定方法：高锰酸钾滴定法与直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法ﻫ1、原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜,加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐,以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成得亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量. ﻫ2、适用范围ﻫＧB5009、７－8５,本法适用于所有食品中还原糖得测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖得非还原性糖类物质得测定。
3、仪器（1）滴定管ﻫ(2）2５ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（３）真空泵ﻫ(4）水浴锅４、试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
４、1 ６ｍｏl／Ｌ盐酸：量取５0ml盐酸加水稀释至100 ｍl。
４、2 甲基红指示剂：称取1０mｇ甲基红,用100ml乙醇溶解. ﻫ4、3５mｏl／L氢氧化钠溶液:称取2０g氢氧化钠加水溶解并稀释至１00ml。
4、4 碱性酒石酸铜甲液：称取３４、６39g 硫酸铜(CuＳＯ４·５H2Ｏ），加适量水溶解,加０、5ml硫酸,再加水稀释至5００ml，用精制石棉过滤。
ﻫ4、5 碱性酒石酸铜乙液：称取１73g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠,加适量水溶解，并稀释至5００ｍl，用精制石棉过滤,贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
ﻫ４、６精制石棉：取石棉先用3mol/Ｌ盐酸浸泡2～3天，用水洗净,再加2、5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液,再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时,用水洗净。
再以３mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细得浆状软县委,用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用做填充古氏坩埚用. ﻫ４、7 0、1000 mｏl/L高锰酸钾标准溶液。
4、8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠,加水溶解并稀释至１00mｌ。
ﻫ４、９硫酸铁溶液：称取５0ｇ硫酸铁,加入2０0mｌ水溶解后，慢慢加入1０0ml硫酸,冷却后加水稀释至1L。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法还原糖是一种重要的碳水化合物，在食品工业以及生物化学领域具有广泛的应用。
测定还原糖的含量对于食品质量的控制以及生物化学实验的进行具有重要意义。
本文将介绍几种常用的还原糖测定方法，希望能够为相关领域的研究工作提供一些参考。
一、费林法测定法。
费林法是一种经典的还原糖测定方法，其原理是将还原糖与铜离子在碱性条件下发生氧化还原反应，生成红色沉淀。
通过测定沉淀的重量或者颜色深浅来确定还原糖的含量。
这种方法操作简单，结果准确，被广泛应用于食品工业中。
二、硫氰化铁法测定法。
硫氰化铁法是一种比较快速的还原糖测定方法，其原理是将还原糖与硫氰化铁在酸性条件下反应生成蓝色络合物，通过测定络合物的吸光度来确定还原糖的含量。
这种方法具有操作简便、结果快速的特点，适用于实验室中大批量样品的测定。
三、酶法测定法。
酶法是一种高灵敏度、高特异性的还原糖测定方法，其原理是利用还原糖酶将还原糖催化转化成葡萄糖，再利用葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化生成过氧化物，通过测定过氧化物的吸光度来确定还原糖的含量。
这种方法适用于对还原糖含量要求较高的实验，如生物化学实验和医学检测。
四、色谱法测定法。
色谱法是一种高分辨率、高灵敏度的还原糖测定方法，其原理是利用色谱柱将混合物中的还原糖分离出来，再通过检测器检测还原糖的峰值面积或者浓度来确定其含量。
这种方法操作复杂，但具有高分辨率、高灵敏度的特点，适用于对还原糖含量要求非常严格的实验。
五、红外光谱法测定法。
红外光谱法是一种非破坏性的还原糖测定方法，其原理是利用还原糖分子的振动和转动引起的红外吸收来确定其含量。
这种方法操作简单，无需样品的处理，适用于对还原糖含量要求不是很严格的实验。
六、电化学法测定法。
电化学法是一种高灵敏度、高精度的还原糖测定方法，其原理是利用还原糖在电极上的氧化还原反应来确定其含量。
这种方法操作简单，结果准确，适用于对还原糖含量要求非常严格的实验。
总结。
以上介绍了几种常用的还原糖测定方法，每种方法都有其特点和适用范围。
还原糖含量测定方法
还原糖含量测定方法嘿，你问还原糖含量测定方法啊？那咱就来唠唠。
要说测定还原糖含量呢，有几种常见的办法。
一种是斐林试剂法。
这斐林试剂就像是个小侦探，能把还原糖给找出来。
先把要测的东西弄成溶液，然后把斐林试剂加进去。
接着放在热水里煮一煮，这时候要是有还原糖，就会和斐林试剂发生反应，产生红色的沉淀。
根据沉淀的多少，就能大概知道还原糖的含量啦。
还有一种方法是班氏试剂法。
这个和斐林试剂法有点像。
也是把溶液和班氏试剂混合，然后加热。
如果有还原糖，就会出现颜色变化，从蓝色变成砖红色啥的。
通过观察颜色的变化程度，就能判断还原糖有多少。
另外呢，还有一种比较简单的方法，就是用血糖仪。
不过这个一般是用来测血糖的，但也能测一些含有还原糖的溶液。
把溶液滴在血糖仪的试纸上，就能读出一个数值。
不过这个方法不是很准确，只能大概知道个范围。
我给你讲个事儿吧。
有一次我在实验室里做实验，就是测定一种水果里的还原糖含量。
我们先用斐林试剂法试了试，把水果榨成汁，然后加入斐林试剂，放在热水里煮。
哇，果然出现了红色的沉淀。
我们根据沉淀的多少，估算出了还原糖的含量。
然后我们又用班氏试剂法做了一遍，结果差不多。
最后我们还用血糖仪测了一下，虽然数值不太准确，但是也能给我们一个参考。
通过这次实验，我们对还原糖含量的测定方法有了更深刻的理解。
总之呢，测定还原糖含量的方法有斐林试剂法、班氏试剂法和血糖仪法等。
不同的方法有不同的优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法。
只要你认真去做，就能准确地测出还原糖的含量。
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(1) 提取液的制备常用的提取剂有水和乙醇溶液，提取液的制备方法要根据样的性状而定，但应遵循以下原则：①取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的分析方法的检测范围。
一般提取经净化和可能的转化后，每毫升含糖量应在0.5~3.5mg之间，提取10克含糖2%的样品可在100毫升容量瓶中进行；而对于含糖较高的食品，可取5~10克样品于250毫升容量瓶中进行提取。
②含脂肪的食品，如乳酪，巧克力，蛋黄酱及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行提取。
一般以石油醚处理一次或几次，必要时可以加热。
每次处理后，倾去石油醚层（如分层不好，可以进行离心分离），然后用水提取。
③含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉，糊精溶出，影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶液提取。
乙醇溶液的浓度应高到足以使淀粉和糊精沉淀，通常用70~75%的乙醇溶液。
若样品含水量较高，混合后的最终浓度应控制在上述范围内。
提取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液，如此提取2~3次，合并提取液，蒸发除去乙醇。
用乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为蛋白质不会溶解出来。
④含酒精和二氧化碳的液体样品，通常蒸发至原体积1/3~1/4，以除去酒精和二氧化碳。
但酸性食，在加热前应预先用氢氧化钠调节样品溶液至中性，以防止低聚糖被部分水解。
●⑤提取固体样品时，为提高提取效果，有时需加热，加热温度一般控制在。
40~50℃，一般不超过80℃，温度过高时右溶性多糖溶出，增加下步澄清工作的负担，用乙醇做提取剂，加热时应安装回流装置。
（2）提取液的澄清作为澄清剂必需具备以下几点要求：①能较完全地除去干扰物质②不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质③过剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作，易于除掉。
常用三种澄清剂：中性醋酸铅[Pb（CHCOO)2•3H2O]乙酸锌和亚铁氰化钾溶液硫酸铜和氢氧化钠溶液澄清剂的用量样液除铅2食品中还原糖的测定直接滴定法、3高锰酸钾法、4萨氏法、5碘量法● 2.1 直接滴定法●(1) 原理●(2) 适用范围●(3) 试剂●(4) 测定方法●(5) 结果计算●(6) 说明与讨论(1) 原理将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。
根据样液消耗量可计算还原糖含量。
(2) 适用范围及特点本法又称快速法，它是在蓝-爱农容量法基础上发展起来的，其特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。
适用于各类食品中还原糖的测定。
但测定酱油、深色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。
本法是国家标准分析方法(3) 试剂●①碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜及0.05g四甲基蓝，溶于水中并稀释到1000ml●②碱性酒石酸铜乙液:取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，在加4g亚铁氰化钾，完全溶解后，再用水稀到1000 ml，储存于橡胶塞玻璃瓶内。
●③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3 ml冰醋酸，加水溶解并稀释1000 ml。
●④106g/L亚铁氰化钾溶液。
●⑤盐酸。
●⑥葡萄糖标准液：准确称取1.000 g干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5 ml盐酸，并以水稀释至1000 ml。
(4) 测定方法样品处理碱性酒石酸铜溶液的标定样品溶液预测样品溶液测定①样品处理取适量样品，按第二节中的原则对样品进行提取，提取液移入250 ml容量瓶中，慢慢加入5 ml乙酸锌的溶液和5ml亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，摇匀后静至30分钟。
用干燥滤纸过滤，弃初滤液，收集滤液备用。
②碱性酒石酸铜溶液的标定准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒。
②碱性酒石酸铜溶液的标定●准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒。
从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2分钟内沸腾，准确沸腾30秒，趁热以每2秒一滴的速度滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好图褪去为终点。
记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。
平行操作3次，取其平均值。
F = c • V式中：F--------10mg 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg;C-------葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml ；V---------标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，ml 。
③ 样品溶液预测吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各 5 ml ，置于250ml 锥形瓶中，加水10ml ，加玻璃珠3粒。
加热使其在2分钟内沸腾，准确沸腾30秒钟，趁沸以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品液，须始终保持溶液的沸腾状态，待溶液蓝色变浅时，趁热以每2秒一滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗溶液的体积。
④ 样品溶液测定吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml ，置于250ml 锥形瓶中，加水10ml ，加玻璃珠3粒。
从滴定管加入比预测时样品溶液消耗总体积少1ml 的样品液，使其在2分钟内加热至沸，准确沸腾30秒钟，趁热以每2秒一滴的速度继续滴定，直至蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗样品液的体积。
平行操作3次，取其平均值(5)结果计算 还原糖（以葡萄糖计%） 式中：m-----样品质量, g ； F------10ml 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg ；V------测定时平均消耗样品溶液的体积，ml ；250------样品溶液的总体积,ml 。
(6) 说明与讨论● ① 醋酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白质沉淀剂这两种试剂混合形成白色的氰亚铁酸锌沉淀，能使溶液中的蛋白质共同沉淀下来。
● ② 此法所用的氧化剂碱性酒石酸铜的氧化能力较强，醛糖和酮糖都可被氧化，所以测得的是总还原糖量。
● ③ 本法是根据一定量的碱性酒石酸铜溶液（Cu 2 +量一定）消耗的样液来计算样液中还原糖含量，反应体系中Cu 2 + 的含量是定量的基础，所以在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入Cu 2 + ，得到错误的结果。
④ 次甲基蓝也是一种氧化剂，但在测定条件下氧化能力比Cu 2 +弱，故还原糖先与Cu 2 + 反应， Cu 2 +完全反应后，稍过量的还原糖才与次甲基蓝指示剂反应，使之由蓝色变为无色，指示到达终点。
⑤ 为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O 生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下： Cu2O + K4Fe(CN) +H2O ＝K2Cu2Fe(CN)6 +2KOH⑥ 碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
⑦ 滴定必须在沸腾条件下进行原因：一是可以加快还原糖与的反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。
此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。
保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。
⑦ 滴定必须在沸腾条件下进行原因：一是可以加快还原糖与的反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。
此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。
1001000250⨯⨯⨯=V m F保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。
⑦ 滴定必须在沸腾条件下进行原因：一是可以加快还原糖与的反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。
此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。
保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。
⑧ 滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防空气进入反应液中。
⑨ 样品溶液预测的目的：一是本法对样品溶液中还原糖浓度有一定要求（0.1%左右），测定时样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液时消耗的体积相近，通过预测可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预测时消耗样液量在10ml 左右；二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少1ml 左右的样液，只留下1mL 左右样液在续滴定时加入，以保证在1分钟内完成续滴定工作，提高测定的准确度。
⑩影响测定结果的主要操作因素是反应液碱度、热源强度、煮沸时间和滴定速度。
2.2 高锰酸钾法高锰酸钾法系将还原糖与过理的碱性洒石酸铜溶液反应还原糖使二价铜还原为氧化亚铜。
经过滤取得氧化亚铜，用硫酸铁溶液将其氧化溶解，而三价铁盐被还原为亚铁盐，再用高锰酸钾标准液滴定所产生的亚铁盐。
根据高锰酸钾标准溶液消耗量计算得氧化亚铜量，从检索表中查得与氧化亚铜量相当的还原糖量，每计算样品中的还原糖含量。
此法测定结果准确性、重现性较好，但较费时。
(2) 试剂① 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜(CuSO4。
5H2O)加适量的水溶解，加入0.5mL 硫酸加水稀释至今500mL ，用精制石棉过滤。
②碱性酒石酸铜乙液：称取173g 酒石酸钾钠和50g 氢氧化钠，加适量的水溶解并稀释到500ml ，用精制石棉过滤，贮存在橡皮塞玻璃瓶中。
③ 精制石棉：取石棉，先用3mol/L 盐酸浸泡2~3小时，Y 用水洗净，再用10%氢氧化钠浸泡2～3小时，倾去溶液，再用碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净，再以3mol/L 盐酸浸泡数小时，用水洗至不呈酸性。
加水振荡，使之成为微细的浆状软纤维，用水浸泡并贮存在玻璃瓶中，即可用于填充古氏坩埚。
④0.02mol/L 高锰酸钾标准溶液：称取3.3g 高锰酸钾溶于1050mL 水中，缓缓煮沸20~30分钟，冷却后于暗处密闭保存数日，用垂融漏斗过滤，保存于棕色瓶中。
0.02mol/L 高锰酸钾标准溶液 标定：精确称取150~2000C 干燥1~1.5小时的基准草酸钠约0.2g ，溶于50mL 水中，加80mL 硫酸，用配制的高锰酸钾溶液滴定，接近终点时加热至700C ，继续滴定至溶液呈粉红色30秒不褪为止。
同时作空白试验。
计算：式中：m------草酸质量，g;V-----标定时消耗高锰酸钾溶液的体积，mL ；V0-----空白消耗高锰酸钾溶液的体积，mL;52134)(10000⨯⨯-⨯=V V m cc-----高锰酸钾标准溶液的浓度，mol/L;134-----草酸钠的摩尔质量，g/mol⑤ 1mol/L 氢氧化钠溶液⑥ 硫酸铁溶液：称50g 硫酸铁，加入200mL 水溶解后，慢慢加入100mL 硫酸，冷却后加水稀释至1000mL 。