小鼠附睾脂肪干细胞的分离培养及鉴定
脂肪干细胞的提取及鉴定
一、脂肪干细胞（ASCs）的提取及鉴定1、实验技术及原理：运用细胞培养技术、流式细胞术（体外扩增后A C Ss的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化），差异离心术（可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除AS Cs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态）。
取C57BL／6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液，0.075%II型胶原酶消化（37℃，30分钟）以去除外基质，生理盐水终止胶原酶的消化，离心（1200g,10分钟），去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DM EM重悬细胞沉淀，0.16mol/L氯化氨溶解剩余红细胞，离心洗涤，过200目铜网，得到单个核细胞。
镜下计数，按10⒋个细胞/ml种植在培养瓶中，37℃5%CO2孵箱培养，24小时后第一次换液，以后3天换液一次，80%融合后0.25% Trypsi n,0.02%EDTA消化传代。
细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型（C D29/CD44）的鉴定。
2、实验用品：2.1 材料：C57BL／6 WT小鼠2.2 试剂：PBS液，0.075%II型胶原酶消化，10%FBS，低糖DMEM2.3 仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、普通显微镜、倒置显微镜、离心机、离心管、解剖剪、眼科剪、镊子（尖头、平头和有沟镊）、小烧杯，200目铜网过滤器，低糖DMEM、血球计数板、橡皮瓶塞、酒精灯、换药碗3、细胞培养的方法与步骤：3.1无菌操作的要领和要求。
脂肪干细胞实验报告
一、实验背景随着生物科技的发展，干细胞研究已成为医学领域的前沿课题。
脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells，ASCs）作为一种易于获取、增殖能力强、多能性的干细胞，在组织工程、再生医学等领域具有广阔的应用前景。
本研究旨在探讨脂肪干细胞的分离、培养、鉴定及其在组织工程中的应用。
二、实验目的1. 探讨脂肪干细胞的分离、培养及鉴定方法。
2. 研究脂肪干细胞在组织工程中的应用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：脂肪组织、DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、青霉素、链霉素、抗生素、鼠抗人CD105抗体、鼠抗人CD34抗体、鼠抗人CD29抗体、鼠抗人CD44抗体、鼠抗人CD45抗体等。
2. 实验仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、酶标仪、流式细胞仪等。
四、实验方法1. 脂肪干细胞的分离与培养（1）将脂肪组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，用DMEM/F12培养基清洗3次，去除多余脂肪。
（2）加入0.25%胰蛋白酶消化脂肪组织，37℃水浴消化30分钟，1000r/min离心5分钟，弃上清。
（3）加入DMEM/F12培养基重悬细胞，吹打均匀，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 脂肪干细胞的鉴定（1）采用免疫荧光染色法检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。
（2）采用流式细胞术检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。
3. 脂肪干细胞在组织工程中的应用（1）将脂肪干细胞接种于生物降解支架材料上，构建组织工程化脂肪组织。
（2）将组织工程化脂肪组织植入小鼠皮下，观察其成活情况。
五、实验结果1. 脂肪干细胞的分离与培养成功分离出脂肪干细胞，细胞呈梭形，生长旺盛。
2. 脂肪干细胞的鉴定免疫荧光染色和流式细胞术结果显示，脂肪干细胞表达CD105、CD34、CD29、CD44，不表达CD45。
人脂肪干细胞的分离、培养及鉴定
人脂肪干细胞的分离、培养及鉴定李玉秋;张雷雷;黄飞【摘要】目的:探讨胶原酶消化法从人脂肪组织中提取脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的可行性.方法:采用胶原酶消化法将真空抽脂术抽取的新鲜脂肪组织进行消化分离,获取ADSCs并进行培养,用流式细胞术鉴定ADSCs的表面特异性标志物CD34、CD44、CD45、CD105的表达.结果:利用胶原酶消化法可成功提取ADSCs,其标志物CD44和CD105表达阳性,CD34为低表达,CD45表达为阴性.结论:通过胶原酶法可成功提取人ADSCs.【期刊名称】《沈阳医学院学报》【年(卷),期】2018(020)006【总页数】4页(P495-498)【关键词】人脂肪干细胞;细胞分离;细胞培养;细胞鉴定【作者】李玉秋;张雷雷;黄飞【作者单位】山东华思生物科技有限公司,山东烟台 264003;山东华思生物科技有限公司,山东烟台 264003;山东华思生物科技有限公司,山东烟台 264003【正文语种】中文【中图分类】R329.2脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）是2001年Zuk等［1］从真空吸脂术抽出的脂肪中发现的一种间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs），其含量约占脂肪组织的10%～20%［2］。
ADSCs同其他MSCs一样，具有自我更新和多向分化的潜能，是成体干细胞的一种，在疾病治疗领域有巨大的潜力。
但ADSCs较骨髓干细胞有更高的提取率，其提取率可高达1%～2%，是骨髓干细胞的1 000倍［3］。
ADSCs已成为研究者们青睐的种子细胞，本文就ADSCs的提取、培养和鉴定进行研究。
1 材料与方法1．1 材料1．1．1 脂肪组织选取滨州医学院附属医院产科剖宫产产妇皮下脂肪组织，产妇无其他基础疾病，未经过特殊药物治疗，取材前均获得医院伦理委员会批准和产妇知情同意。
脂肪干细胞的提取及鉴定
脂肪干细胞的提取及鉴定一、脂肪干细胞(ASCs)的提取及鉴定1、实验技术及原理:运用细胞培养技术、流式细胞术(体外扩增后ACSs的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化)，差异离心术(可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除ASCs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态)。
取C57BL,6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液，0.075%II型胶原酶消化(37?，30分钟)以去除外基质，生理盐水终止胶原酶的消化，离心(1200g,10分钟)，去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DMEM重悬细胞沉淀，0.16mol/L氯化氨溶解剩余红细胞，离心洗涤，过200目铜网，得到单个核细胞。
?镜下计数，按10个细胞/ml种植在培养瓶中，37?5%CO2孵箱培养，24小时后第一次换液，以后3天换液一次，80%融合后0.25% Trypsin,0.02%EDTA消化传代。
细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型(CD29/CD44)的鉴定。
2、实验用品:2.1 材料:C57BL,6 WT小鼠2.2 试剂:PBS液，0.075%II型胶原酶消化，10%FBS，低糖DME M2.3 仪器设备:超净工作台、恒温培养箱、普通显微镜、倒置显微镜、离心机、离心管、解剖剪、眼科剪、镊子(尖头、平头和有沟镊)、小烧杯，200目铜网过滤器，低糖DMEM、血球计数板、橡皮瓶塞、酒精灯、换药碗3、细胞培养的方法与步骤:3.1无菌操作的要领和要求。
3.2细胞原代培养:3.2.1操作步骤a(培养用品消毒后，安放在超净工作台内，紫外线消毒，做好洗手等准备工作。
b. 取材:取C57BL,6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液。
脂肪干细胞的提取及鉴定
一、脂肪干细胞（ASCs）的提取及鉴定1、实验技术及原理：运用细胞培养技术、流式细胞术（体外扩增后ACSs的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化），差异离心术（可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除ASCs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态）。
取C57BL／6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液，0.075%II型胶原酶消化（37℃，30分钟）以去除外基质，生理盐水终止胶原酶的消化，离心（1200g,10分钟），去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DMEM重悬细胞沉淀，0.16mol/L 氯化氨溶解剩余红细胞，离心洗涤，过200目铜网，得到单个核细胞。
镜下计数，孵箱培养，24小时后第一次换液，按10⒋个细胞/ml种植在培养瓶中，37℃5%CO2以后3天换液一次，80%融合后0.25% Trypsin,0.02%EDTA消化传代。
细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型（CD29/CD44）的鉴定。
2、实验用品：2.1 材料：C57BL／6 WT小鼠2.2 试剂：PBS液，0.075%II型胶原酶消化，10%FBS，低糖DMEM2.3 仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、普通显微镜、倒置显微镜、离心机、离心管、解剖剪、眼科剪、镊子（尖头、平头和有沟镊）、小烧杯，200目铜网过滤器，低糖DMEM、血球计数板、橡皮瓶塞、酒精灯、换药碗3、细胞培养的方法与步骤：3.1无菌操作的要领和要求。
3.2细胞原代培养：3.2.1操作步骤a．培养用品消毒后，安放在超净工作台内，紫外线消毒，做好洗手等准备工作。
b. 取材：取C57BL／6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液。
小鼠胚胎干细胞的鉴定
小鼠胚胎干细胞的鉴定小鼠ES细胞的鉴定主要围绕ES细胞的形态、核型、分化潜能和特异性染色等方面进行。
一、形态学观察小鼠ES细胞的形态特点为圆形或扁圆形，表面平滑，体积较小，核质比大，有一个或多个凸起的核仁结构。
经培养后紧密聚集，细胞之间界限不清，形成岛状，巢状群体生长状态，集落边缘整齐，与滋养层细胞界限分明且色泽深亮，克隆的边缘可以看到比较清晰的单个细胞。
多次传代消化或改变培养基的成分，如降低血清浓度、去除LIF或碱性FGF等某些生长因子时，悬浮培养形成的细胞团开始出现松散，球形的边缘可以清楚地看到圆而大的细胞，细胞团开始自分化。
二、核型分析正常的二倍体核型特征是ES细胞全能性的基础，因此需要对所建立的ES细胞系的核型进行鉴定分析。
【实验材料】1.材料载玻片、镊子、离心管、移液管、吸管、35mm 培养皿（Corning，430165）。
2.试剂Demecolcine（Sigma，D6165）、Giemsa（Sigma，G4507）、NaH2 PO4（Sigma，S6566）、Na2HPO4（Sigma，S5136）、甲醇、冰醋酸。
配制类试剂：①磷酸缓冲液：0.2mol/L NaH2PO4+0.2mol/L Na2 HPO4；②Giemsa染液：8ml磷酸缓冲液+2ml Giemsa贮存液，吹吸混匀；③固定液：甲醇∶冰醋酸=3∶1（现用现配）。
【实验步骤】1.将需要做核型分析的ES传代，通常用一个35mm皿的细胞做核型，在传代后25～40小时向培养皿中加入0.2µg/ml democolcin，继续培养1～2小时。
2.取出培养皿，用标准传代的消化方法将其消化成单细胞悬液，1200r/min离心10分钟，弃上清，注意：上清要吸得彻底些。
3.加入事先预热至37℃的0.56%KCl低渗液4ml，用滴管吹打成单细胞悬液（较剧烈），37℃低渗处理15～20分钟。
4.配10ml固定液，4℃冰箱预冷。
小鼠脂肪间充质干细胞体外培养时间与细胞衰老关系初探
色检测第 １至第 １ ０代 Ａ Ｄ ＭＳ Ｃ ｓ 以及第 ４代细胞培养第 １ 至第 ８天细胞的衰老情况 ； 流式细胞术检测细胞周期变化 ； 电镜观测 第 ３和第 ８代细胞 的超做结构 。结 果 ： 衰老 Ａ Ｄ ＭＳ Ｃ ｓ 胞浆呈蓝色 ， 随着代次增加细胞衰老 率升高 ， 第 ８代开始高于第 １ 代细胞 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 并且Ｇ Ｏ ／ Ｇ １期 细胞所 占比例 升高 ， Ｓ期和 Ｇ ２ ／ Ｍ 期细胞 所 占比例 明 降低 ， 提示细 胞分裂增 殖速度减 慢 ； 相 同代 次细胞 ．随着培 养天数增加细胞衰 老率呈上升趋 势 ， 第 ４天开始细胞 的衰老 比率明显高 于第 １天 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。随着 细胞代 次 增加 ． 细胞膜 现较 多突起 ， 且胞质 内脂滴增多 ， ｍ现 白噬体 。结论 ： Ａ Ｄ ＭＳ Ｃ ｓ 细胞 衰老率与体外培养时间正相关 。
ｄｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈｙ ｍａ ｉ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ Ｌ Ｉ Ｑ ｉ ｏ ｎ ｇ ， Ｚ Ｕ Ｏ Ｈ ｏ ｎ ｇ — Ｂ ｏ ， Ｚ Ｈ Ａ Ｎ Ｇ Ｍｉ ｎ ， Ｌ １ Ｃ ｉ — Ｘ ｉ ａ ， Ｇ Ｕ Ｏ Ｚ ｈ ｉ — Ｋ ｕ ｎ ．Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｆ ｏ ｒ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ Ｒ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ（ ＡＤＭＳ Ｃ ｓ ）ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｔ ｏ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ ｆ ｎ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｍｏ ｕ ｓ ｅ Ａ ＤＭＳ Ｃ ｓ
脂肪干细胞培养方法 组织块培养法
脂肪干细胞是一种多能干细胞，存在于脂肪组织中，具有较强的自我更新和分化能力，因此在再生医学领域具有广阔的应用前景。
脂肪干细胞的培养方法是进行研究和应用的基础，其中组织块培养法是一种常用的培养方法，其流程和步骤需要严谨操作和控制，以获得高质量的脂肪干细胞。
一、脂肪组织的获得脂肪干细胞的来源是脂肪组织，脂肪组织的获得需要经过以下步骤：1. 临床患者手术采集：通过手术方式从患者身体的特定位置（如腹部、臀部等）采集脂肪组织。
2. 动物实验材料采集：通过特定的实验动物模型，在实验室条件下从动物体内获取脂肪组织。
脂肪组织的来源直接关系到后续脂肪干细胞的培养和应用性能，因此需要严格控制采集过程和条件，确保获得的脂肪组织质量和干细胞丰度。
二、脂肪组织处理和组织块制备1. 脂肪组织的去除杂质：将采集的脂肪组织在无菌条件下进行处理，去除多余的结缔组织、血管和表皮层，以获得纯净的脂肪组织。
2. 组织块的制备：将经过处理的脂肪组织切割成适当大小的块状（约1mm³），以便后续细胞的释放和培养。
三、脂肪干细胞的释放和培养1. 组织块的酶解：将制备好的组织块放入消化酶（如胰蛋白酶）的消化液中，在37℃的恒温培养箱内进行酶解，使脂肪干细胞从组织块中释放出来。
2. 细胞的培养和传代：将释放出的脂肪干细胞进行原代培养和传代培养，培养基的配方和培养条件需要进行严格控制和优化，以保证脂肪干细胞的生长和分化。
通过以上步骤和方法，我们可以获得高质量的脂肪干细胞，为其后续在再生医学、组织工程和临床治疗中的应用打下坚实基础。
在实际应用中，还需要结合特定的研究和临床需求，对脂肪干细胞进行进一步的分化和功能评价，以实现其在不同领域的应用和开发。
脂肪干细胞的培养方法对于再生医学和组织工程具有重要意义，通过持续的研究和优化，必将为人类健康事业带来更多的机遇和挑战。
希望本文对脂肪干细胞组织块培养方法的介绍，能够为相关研究和应用人员提供一定的参考和指导，共同推动脂肪干细胞领域的进步与发展。
小鼠睾丸支持细胞使用说明
小鼠睾丸支持细胞小鼠睾丸支持细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠睾丸支持细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠睾丸支持细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠睾丸支持细胞产品简介：产品名称：小鼠睾丸支持细胞组织来源：小鼠睾丸产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠睾丸支持细胞细胞简介：睾丸支持细胞又称sertoli细胞。
它是生精细胞的支架,为其提供必需的营养物质,能合成与分泌雄激素结合蛋白,为其提供高浓度的雄激素环境等,还具有构成血-睾屏障,形成睾丸内微环境,调节精子发生等功能。
制备高活率的sertoli 不仅对sertoli的基础研究有重要价值,而且在精子发生等领域有重要意义。
本研究旨在建立小鼠sertoli的快速高效分离方法,并根据其分泌FasL的特性,采用细胞免疫化学方法对分离的小鼠sertoli进行鉴定,以期为进一步研究和应用sertoli奠定基础。
小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析
中山大学学报 （ 医学科学版 ）
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中 图分 类 号 ： ７ ５５ Ｒ ２ ． Ｒ ２ ．： ３ ９４ 文献标 志码 ： Ａ 文章 编 号 ：６ ２ ３ ５ （０ ２ ０ — ２ ９ ０ １７ — ５ ４ ２ １ ）３ ０ ９ — ６
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来 源提供更 广阔的选择 ， 以利于 Ｍ Ｃ在小 鼠模 型 中的研究 。【 法 】 Ｓ 方 体外 分离 、 纯化 Ｂ Ｌ ／ 鼠 Ａ Ｓ ， Ａ Ｂ Ｃ小 Ｄ Ｃ 进行 细胞形态 、 表
面标 志 、 成脂及 成骨分化潜 能鉴定 、 隆形成能 力 、 克 生长动 力学等方 面 的研 究 ， 通过淋 巴细胞增 殖抑 制试验研 究其 免疫调 并
Ｃ ４ 、 Ｄ１ｂ 第 ３ Ａ Ｓ Ｄ ５ Ｃ ｌ ； 代 Ｄ Ｃ可诱 导分化为成骨 细胞和脂肪细胞 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ有 很强 的集 落形成能力 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ倍增 时
人脂肪干细胞的分离培养及鉴定
。
．
图 ３ 脂 肪 干 细胞 的表 型 特 征
被 称 为 Ａ Ｓ ｓ的 细 胞 ， 具 有 一 般 干 细 ＤＣ 它 胞 的 特性 ， 骨 髓 干 细 胞 相 比 ， 具 有 明 与 它 显优 势 ， 来 源 、 材 、 增 能 力 方 面 ， 在 取 扩 都
是骨 髓 干 细 胞 所 无 法 比拟 的 ， 可作 为 种 子
到第 １ ４天 时 可 见 细 胞 铺 满 瓶 底 ８ ％ 左 ０
右 。 而传 代 细 胞 生 长 速 度 明 显 快 于 原 代
陶凯 等 通 过 不 同 血 清 浓 度 作 用 下 生 长 曲线 绘 制 发 现 ， 血 清 浓 度 为 １％ 在 ５ 和 ２ ％ 时 ， 最 短 时 间 内 细 胞 可 进 入 平 ０ 在 台期 ， 到 细 胞 增 殖 高 峰 期 ， 合 考 虑 性 达 综 价 因 素 ， 际 应 用 中 可 将 １％ 作 为 血 清 实 ５ 的最 适 宜 浓 度 。通 过 两代 生 长 曲线 发 现 ， 第 ２代 细 胞 较 原 代 细 胞 更 快 进 入 增 殖 高
摘
要 目的 ： 索从 健 康 成人 脂肪 组 织 探 中分 离 、 养 并 鉴 定 脂 肪 千 细胞 。 方 法 ： 培
用健 康 成 人 的 脂肪 组 织 ， 除 可 见 纤 维结 剔
１ ， 次 当贴 壁细 胞接 近融 合时再 次传 代。
光学 显 微 镜 下 观察 细胞 生 长 及 形 态 。 流 式 细 胞 仪检 测 相 关 抗 原 ： 流式 细 胞 仪对 第 ３代 脂 肪 干 细 胞 表 面 相 对 特 异 性
２ 王红祥 ， 李宾公 ， 邵诗颖 ， 人脂肪组 织分 等． 离培养基 质 干细胞 的方 法及 其 表型 鉴定 ［ ］ 中国临床康复，０ ６，０ ４ ） １ Ｊ． ２０ １ （ １ ：６—１ ． ８
小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析
小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析刘寿生;雷俊霞;黎阳;项鹏;周敦华【摘要】[Objective] To establish an effective way for isolation and expansion of mouse adipose-derived stromal cells (ADSC), and to observe the biological characteristics of mouse ADSC. [Methods] ADSC were obtained from adipose of BALB/C mouse, isolated and purified in vitro to determine cell morphology, immunophenotype, differentiation potentiality, clone formation ability, growth kinetics and immunoloregulation characteristics in the lymphocyte proliferation inhibition test; T lymphocytes (1 ?105) were cultured in the presence of ConA (ConA was 20 μg/mL), and ADSC of different number interacted with activated T lymphocytes respectively. Experiment was divided into 8 groups by the different number of ADSC: A group as positive control (ConA+T lymphocytes), B group (ADSC 1× 103+ConA+T lymphocytes), C group (ADSC× 1 04+ConA+T lymphocytes), D group (ADSC 2 × 104+ConA+T lymphocytes), E group as negative control (T lymphocytes), F group (ADSC1 ×103), G group (ADSC1 × 104), H group (ADSC 2 × 104), F, G, H were reference groups. The ability of T lymphocyte proliferation was measured by cck-8 method. [Results] ADSC showed plastic-adherent, fibroblastic-like morphologic characteristics, cell proliferation was inadequate and cell morphology changed to flat, enlarged shapes with the passage increasing. ADSC at passage 3 highly expressed CD29 and CD44, moderately expressed Sca-1, weakly expressed CD34, CD45, and CDllb.Three passaged ADSC could be induced to differentiate into osteoblasts and adipocytes, and had strong ability to shape colony forming unit-fibroblasts (CFU-Fs). Doubling time of three,five, and eight passaged ADSC was (22 ?3)h, (24 ?3)h, and (30 ?3)h, respectively. The proliferation rate after passage 5 slowed down gradually. ADSC could suppress T lymphocyte proliferation, the inhibition ratios of B, C, and D group were 20. 78%, 47. 94%, and 60.70%, respectively, which was similar to bone marrow mesenchymal stem cells (BMSC). [Conclusion] ADSC can be isolated and expanded effectively by using adherent culture, they possess general characteristics of mesenchymal stem cells, in addition, they are easier to be purified and their proliferation rate is faster compared with BMSC,so ADSC may be a good multipotential cell candidate for the future cell replacement therapy.%[目的]建立一种有效的分离、培养小鼠脂肪间充质干细胞(ADSC)的方法,从而为小鼠间充质干细胞(MSC)的来源提供更广阔的选择,以利于MSC在小鼠模型中的研究.[方法]体外分离、纯化BALB/C小鼠ADSC,进行细胞形态、表面标志、成脂及成骨分化潜能鉴定、克隆形成能力、生长动力学等方面的研究,并通过淋巴细胞增殖抑制试验研究其免疫调节特性:用终浓度为20μg/mL的ConA作用于T淋巴细胞(1×105个),以不同数量的ADSC分别与活化T淋巴细胞作用,根据ADSC数量不同实验分为A组(ConA+T细胞)、B组(ADSC 1×103/孔+ConA+T细胞)、C组(ADSC 1×104/孔+ConA+T细胞)、D组(ADSC 2×104/孔+ConA+T细胞),同时E组(单纯T细胞)作为阴性对照组,F组(ADSC 1×103孔)、G组(ADSC 1×104/孔 )、H组(ADSC 2×104/孔)作为参照组.用CCK-8法检测作用前后T细胞功能.[结果]ADSC镜下形态呈贴壁、梭型,且随着代数的增加,细胞逐渐增大；第3代ADSC高表达CD29和CD44,中表达Sca-1,低表达或不表达CD34、CD45、CD1 1b;第3代ADSC可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞;第3代ADSC有很强的集落形成能力；第3代ADSC倍增时间为(22±3)h,第5代ADSC 倍增时间为(24±3)h,第8代ADSC倍增时间为(30±3)h,第5代后的ADSC增殖速度随着代数的增加逐渐减慢;ADSC可以抑制T淋巴细胞的增殖,B、C、D组的抑制率分别为20.78％、47.94％、60.70％,抑制能力和骨髓间充质于细胞(BMSC)相似.[结论]通过贴壁培养可以从小鼠脂肪中分离培养出高纯度ADSC,该方法效率高,培养出的ADSC具有BMSC的一般特性,且与BMSC相比更易纯化,具有更快的增殖速度,有望作为小鼠MSC的有效来源.【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2012(033)003【总页数】6页(P299-304)【关键词】间充质干细胞;小鼠;骨髓;脂肪组织;免疫调节【作者】刘寿生;雷俊霞;黎阳;项鹏;周敦华【作者单位】中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120;中山大学中山医学院,广东广州510080;中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120;中山大学中山医学院,广东广州510080;中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120【正文语种】中文【中图分类】R725.5;R329.4间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）最初是在骨髓中分离出来的，但后来在脂肪组织、肌肉组织、牙根、胎盘、羊水及脐带血中均分离出MSC［1］。
干细胞分离、培养和鉴定方法概述
干细胞分离、培养和鉴定方法概述关键词：干细胞淋巴细胞平滑肌细胞细胞ES 北纳创联北京标准物质网胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES)是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，它是一种高度未分化的细胞，它具有无限增殖、自我更新和多向分化的特性，可在体外培养、扩增、建系，也可在适当条件下诱导分化为多种组织细胞，还可与受体胚胎嵌合，形成嵌合体。
ES细胞首先源于胚胎细胞，是胚胎细胞在特定的培养条件下分离筛选出来的，与胚胎细胞相比，ES细胞能在体外不断传代，并且相对稳定地增殖但不发生分化，能自我更新、自我复制，这是大量获得ES细胞并广泛应用的前提。
利用这一特点，可以用于医学上的药物试验。
ES细胞具有多能性，即ES细胞在解除分化抑制的条件下能参与包括生殖腺在内的各种组织的发育潜力，可为细胞的遗传操作和细胞分化研究提供丰富的实验材料。
ES细胞发育多能性的标志是ES细胞表面表达时相专一性胚胎抗原(stage specific embryorll’cant，SSEA)，而且可以检查到OCT4基因的表达，这两种蛋白是发育多能性的标志。
ES细胞中AKP及端粒酶活性较高，可用于ES细胞分化与否的鉴定。
自1981年首次成功分离小鼠ES细胞，现已在仓鼠、大鼠、兔、猪、牛、绵羊、山羊、水貂、恒河猴、美洲长尾猴以及人类分离获得了ES细胞，而且已经证明小鼠ES细胞可以分化为心肌细胞、造血细胞、卵黄囊细胞、骨髓细胞、平滑肌细胞、脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、内皮细胞、黑色素细胞、神经细胞、神经胶质细胞、少突胶质细胞、淋巴细胞、胰岛细胞、滋养层细胞等。
人类ES细胞也可以分化为滋养层细胞、神经细胞、神经胶质细胞、造血细胞、心肌细胞等。
ES细胞不仅可以作为体外研究细胞分化和发育调控机制的模型，而且还可以作为一种载体，将通过同源重组产生的基因组的定点突变导入个体，更重要的是，ES细胞将会给人类移植医学带来一场革命。
干细胞培养与鉴定
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
• 染色体结构
核型分析：正常稳定的二倍体核型，小鼠（40， XX/ XY) 。
不随传代次数而改变。
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
• 核型分析：显色技术
小鼠ES核型分析：40，XY
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ESC（胚胎干细胞）鉴定检测
• 全能性
体内分化：畸胎瘤实验 体外分化：EB（拟胚体）形成实验
• 细胞汇合度的判断
• 传代消化时间的控制 • 接种密度的控制
培养体系的选择
12
扩增传代-细胞汇合度的判断(MSC)
13
扩增传代-消化时间的控制(MSC)
细胞消化15s
细胞消化35s
细胞消化55s
14
扩增传代-接种密度的控制
不同物种、细胞类型之间接种密度有差异
MSC、ADSC：2×104/cm2~4×104/cm2
43
培养体系的选择
干细胞的研究和利用过程中，最主要的提供最适生长环境，保持培养开始时细胞群 体的状态，这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规。
44
干细胞饲养员必备素质-细节决定成败
无菌意识，重中之重
• 规范化的无菌操作
超净台取用物品摆放、操作时细节问题 • 环境的控制
培养箱的定期消毒、水浴锅定期换水、大环境的控制等
解析：干细胞的培养与鉴定
产品经理：施真
主要内容
1. 干细胞原代提取及鉴定
2.干细胞培养体系与操作细节的重要性 3.OricellTM系列干细胞产品及售后服务
2
原代培养过程
3
原代取材
组织来源（个体年龄、健康状况）
BMSC、ADSC：成人（18-45周岁）、大鼠和小鼠（4周龄）、兔和狗（1-3 周龄） NSC：大鼠（孕龄14.5天的胚胎）；小鼠（孕龄12.5天的胚胎） ESC：小鼠（见栓后3.5天的孕鼠）
小鼠睾丸组织分离分选
组织消化1.取小鼠睾丸组织，放入1xPBS中，剥去白膜组织，用镊子轻轻撕开；2.15ml离心管中加入6ml的消化体系：5.88ml DMEM + 120ul 胶原酶+ 3ulDNAase；3.37℃消化10min：其中消化5min时上下吹打10次，再继续消化5min；4.消化期间，配制胰酶消化体系：取15ml离心管，加入5.28ml DMEM + 600ul胰酶+ 120ul 胶原酶+ 3ul DNase, 37℃预热；5.消化完成的组织室温静置2分钟后期弃上清，加入预热后的胰酶消化液，上下吹打10次后，放入37℃培养12min；6.12min后，取出，上下吹打10次，继续消化12min；7.将消化后的组织加入2ml的血清，终止消化，100um滤网过滤；8.过滤后100g离心5min,弃上清，加入含10%FBS的DMEM，40um过滤，进行镜检；流式分选1.镜检后的单细胞悬液，根据细胞量进行染：Hochest浓度：6ug/million细胞（我们的Hochest浓度是10ug/ul），避光染色1h；2.100g离心5min，弃上清；3.加入2%FBS的1xPBS重悬细胞，进行上机分选，同时准备含10%FBS的DMEM培养基收集细胞；染色体铺展1.分选出的细胞，400g,4℃，离心5min，弃上清，1xPBS重悬，并转移到1.5ml的EP管中；2.400g,4℃，5min，弃上清；3.用染色体铺展的低渗Buffer重悬细胞，一般50ul重悬，室温放置30min；（低渗Buffer: 现用现配：250ul蔗糖溶液+150.15ul Tris+85ul柠檬酸钠溶液+50ulEDTA+2.5ulDTT+25ulPMSF, 补ddH20至5ml。
以上所有溶液均配制的储存液）4.准备多聚赖氨酸处理过的玻片，玻片用之前在多聚甲醛Buffer中浸润；（PFA Buffer: 现用现配：称0.1gPFA加入10ml水中，100℃加热溶解，冷却后加入38.137mg硼酸钠和20ul Tritonx-100）5.处理后的细胞，用20ul枪头轻轻吹打，滴加在浸润过PFA的玻片上，自然晾干5h以上；免疫荧光1.将玻片放入12孔板中，用含5%BSA的PBS封闭1h；2.弃封闭液，染1抗：1:200，染色1h, 350ul/孔，染色液：1xPBS即可；3.用含0.1%Triton 的1xPBS洗3遍，5min/次；4.染2抗，避光，室温1h, 二抗：1:1000, 350ul/孔（DAPI可在该步骤一起染，1:1000）；5.按上述同样步骤洗三遍6.封片：取普通载玻片，滴加7ul封片剂，将含有细胞的玻片压在上面，注意不要产生气泡；7；待晾干后进行荧光检测试剂及耗材的位置：所有的抗体在4℃均有分装用的消化的酶4℃分装用的也有，DNase在-20度染色体伸展Buffer：用的几个试剂存储液在实验台上50ml离心管中存储，DTT 和PMSF在-20度存储血清，培养基，1XPBS在4℃PFA粉末在4℃硼酸钠及Triton在实验台上抗淬灭剂在4℃包好的盖玻片在试验台抽屉中50ml离心管中，普通载玻片在实验台抽屉中。
小鼠脂肪干细胞提取方法-概述说明以及解释
小鼠脂肪干细胞提取方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述：随着干细胞研究领域的不断深入，小鼠脂肪干细胞作为一种重要的干细胞资源备受关注。
小鼠脂肪干细胞具有较高的分化潜能和增殖能力，可广泛应用于再生医学、组织工程和疾病治疗等领域。
提取小鼠脂肪干细胞是进行相关研究的基础和关键步骤，因此本文将详细介绍小鼠脂肪干细胞的提取方法及其在研究中的应用。
通过深入探讨小鼠脂肪干细胞的重要性和相关提取方法，旨在为读者提供实用的研究参考和启发，促进小鼠脂肪干细胞研究领域的进一步发展。
1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三部分。
在引言部分，将介绍小鼠脂肪干细胞的重要性，并简要阐述文章的结构和目的。
正文部分将详细介绍小鼠脂肪干细胞提取方法，包括提取的步骤、操作注意事项和实验流程。
同时还会探讨小鼠脂肪干细胞在研究中的应用，如在生物医学研究中的作用和潜在应用价值。
在结论部分，将对提取方法的重要性进行总结，并展望小鼠脂肪干细胞研究的未来发展趋势。
最后，对整篇文章进行总结，强调小鼠脂肪干细胞研究的重要性和潜在价值。
1.3 目的小鼠脂肪干细胞作为一种重要的细胞资源，在干细胞研究领域具有广泛的应用价值。
本文旨在探讨小鼠脂肪干细胞的提取方法，为相关研究人员提供可操作的实验指导，推动小鼠脂肪干细胞研究的进展。
同时，通过总结现有提取方法的优缺点，展望未来小鼠脂肪干细胞研究的发展方向，为更深入的研究提供理论基础和实践指导。
通过本文的阐述和分析，旨在促进小鼠脂肪干细胞领域的持续发展，推动干细胞研究的进步。
2.正文2.1 小鼠脂肪干细胞的重要性:小鼠脂肪干细胞是一种来源于小鼠脂肪组织的多能干细胞，具有很高的潜在应用价值。
首先，小鼠脂肪干细胞具有自我更新和多向分化的能力，可以分化成多种细胞类型，如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，这使得它们在再生医学领域具有重要意义。
其次，小鼠脂肪干细胞来源广泛，并且易于提取和培养，这为研究人员提供了便利。
小鼠附睾脂肪干细胞的分离培养及鉴定
小鼠附睾脂肪干细胞的分离培养及鉴定张鉴清1，季佳霖2，崔新明2，张祺3，李艳茹21吉林大学第四医院，吉林省长春市130011；2吉林大学病理生物学教育部重点实验室，吉林大学基础医学院病理学系，吉林省长春市130021；3吉林大学，吉林省长春市130021 Isolation, culture and identification of adipose-derived stem cells from mouse epididymisZhang Jian-qing1, Ji Jia-lin2, Cui Xin-ming2, Zhang Qi3, Li Yan-ru21 the Fourth Hospital of Jilin University, Changchun 130011, Jilin Province, China;2 the Key Laboratory of Pathobiology of Ministry of Education, Department of Pathology, School of Basic Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China;3 Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China 摘要背景：脂肪干细胞作为一种新的成体干细胞，具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点，受到人们越来越多地关注。
目的：体外分离培养小鼠附睾脂肪组织中的脂肪干细胞，并鉴定其生物学特性。
方法：无菌切取小鼠附睾处脂肪组织，采用胶原酶进行消化，利用1次消化多次收集与差速贴壁法分离纯化脂肪干细胞。
倒置显微镜及透射电子显微镜观察脂肪干细胞的形态。
绘制脂肪干细胞的生长曲线。
流式细胞术检测脂肪干细胞的免疫表型。
加入细胞诱导剂对脂肪干细胞进行成骨及成脂肪的诱导分化。
小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定
小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定【摘要】本文结合文献报道及本课题组实验研究,对小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定进行了总结。
同时,由于前脂肪细胞的分化与肥胖病的形成有密切的关系,故前脂肪细胞的培养具有很重要的研究意义。
【关键词】前脂肪细胞;原代培养;鉴定脂肪组织在体内有在胞浆内积聚脂滴的成熟脂肪细胞和虽未在胞浆内积聚脂滴但有这种潜能的前脂肪细胞。
成熟的脂肪细胞呈圆形,前脂肪细胞呈梭形,成熟的脂肪细胞失去分裂及增殖的能力,而前脂肪细胞则有分裂和增殖的能力。
由于前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化了的前体细胞,与肥胖有着非常密切的关系,笔者参照多本参考书及有关文献报道,在科研中对前脂肪细胞的培养及鉴定方法进行了验证和比较,结合本课题组反复的实践对其进行了总结,拟为进一步研究奠定基础。
由于小鼠的取材比较方便,而且关于小鼠前脂肪细胞的培养研究得比较多,故本课题组所采用的前脂肪细胞均取自小鼠。
1.材料与方法1.1实验材料:实验选用体重为18-22g的4周龄昆明种雄性小鼠。
由成都中医药大学实验动物中心提供。
动物在实验前适应性驯养1周,动物房温度和湿度分别维持在20℃和70%左右。
实验药品主要有F12培养基、胰酶(Trypsin)、小牛血清、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)、油红O等。
实验主要使用仪器设备包括二氧化碳培养箱、超净工作台、倒置相差显微镜等。
1.2实验方法:1.2.1小鼠前脂肪细胞的取材及原代培养:小鼠前脂肪细胞的培养方法,参照杨建梅等所发表文献 [1-3] 及《体外培养的原理与技术》 [4] 、《组织培养技术及其在医学研究中的应用》 [5] 等书所载方法进行培养。
1.2.1.1断脊髓处死雄性小鼠,在培养室无菌条件下解剖小鼠,剪取小鼠附睾附近的脂肪组织,放入培养皿中的D-Hanks液中,反复洗涤之后,用剪刀充分剪碎,将组织移入离心管。
1.2.1.2用吸管加入适量0.25%胰酶在37℃条件下消化(消化时间根据具体情况而定),离心后,收集沉底的细胞,在离心管内加入适量含20%小牛血清的F12培养液,用吸管混匀后吸取细胞及培养液经筛网过滤入另一离心管,上清及漂浮的脂肪组织弃去不用。
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小鼠附睾脂肪干细胞的分离培养及鉴定张鉴清1，季佳霖2，崔新明2，张祺3，李艳茹21吉林大学第四医院，吉林省长春市130011；2吉林大学病理生物学教育部重点实验室，吉林大学基础医学院病理学系，吉林省长春市130021；3吉林大学，吉林省长春市130021 Isolation, culture and identification of adipose-derived stem cells from mouse epididymisZhang Jian-qing1, Ji Jia-lin2, Cui Xin-ming2, Zhang Qi3, Li Yan-ru21 the Fourth Hospital of Jilin University, Changchun 130011, Jilin Province, China;2 the Key Laboratory of Pathobiology of Ministry of Education, Department of Pathology, School of Basic Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China;3 Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China 摘要背景：脂肪干细胞作为一种新的成体干细胞，具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点，受到人们越来越多地关注。
目的：体外分离培养小鼠附睾脂肪组织中的脂肪干细胞，并鉴定其生物学特性。
方法：无菌切取小鼠附睾处脂肪组织，采用胶原酶进行消化，利用1次消化多次收集与差速贴壁法分离纯化脂肪干细胞。
倒置显微镜及透射电子显微镜观察脂肪干细胞的形态。
绘制脂肪干细胞的生长曲线。
流式细胞术检测脂肪干细胞的免疫表型。
加入细胞诱导剂对脂肪干细胞进行成骨及成脂肪的诱导分化。
扫描电子显微镜观察脂肪干细胞与胶原支架材料的相容性。
结果与结论：倒置显微镜下可见脂肪干细胞呈长梭形或成纤维细胞样，密集排列成漩涡状或成束状交织，可在体外稳定传至第9代。
透射电子显微镜下可见脂肪干细胞表面有丰富的微绒毛结构，细胞核体积大，细胞质内可见线粒体、粗面内质网等细胞器。
脂肪干细胞表达CD44、CD29，不表达CD34。
经成脂肪诱导剂诱导后，多数脂肪干细胞胞质内可见小脂滴，油红O 染色可将小脂滴染成红色。
经成骨诱导剂诱导后，在脂肪干细胞生长密集区域内的细胞结构模糊、细胞间界限不清楚。
经茜素红染色后，可见较多大小不一的折光率较强颗粒状结构沉积。
扫描电子显微镜观察到脂肪干细胞呈铺展状生长于胶原支架材料上。
结果表明该方法分离出的脂肪干细胞能在体外扩增并稳定传代，在一定诱导条件下，能够分化为成骨细胞和脂肪细胞并且与胶原支架具有良好的相容性。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程全文链接：关键词：干细胞；脂肪干细胞；小鼠；附睾；脂肪组织；差速贴壁；培养；Abstract：BACKGROUND: As a new kind of adult stem cells, adipose-derived stem cells get more and more attention, because of rich source, drawing materials easily and powerful proliferation.OBJECTIVE: To isolate and culture adipose-derived stem cells from the epididymal adipose tissue in mice, and to identify their biological characteristics. METHODS: Adipose tissue was obtained from epididymis in mice by aseptically cutting. The tissue was digested using collagenase. Adipose-derived stem cells were separated and purified by using one digestion, multiple collection method and differential adhesion method. The morphology of adipose-derived stem cells was observed using inverted microscopy and transmission electron microscopy. Growth curve of adipose-derived stem cells was drawn. Immunophenotype ofadipose-derived stem cells was identified by flow cytometry. Adipose-derived stem cells were induced to differentiate into adipocytes and osteocytes using cell inductors. Compatibility of adipose-derived stem cells and collagen scaffold material was observed using scanning electron microscope.RESULTS AND CONCLUSION: Adipose-derived stem cells exhibited long spindle-like or fibroblast-like appearance, grew intensively and arranged in scroll and fascicular shape. In vitro, adipose-derived stem cells could be passaged to passage 9 under the inverted microscope. Under the transmission electron microscope, adipose-derived stem cells showed abundant microvilli on the cell surface. The nuclei were big in size. Some organelles were seen in cytoplasma, such as mitochondria and rough endoplasmic reticulum. Adipose-derived stem cells expressed CD44 and CD29, did not express CD34. After inducing by inductor, many small lipid droplets were seen in the cytoplasm of adipose-derived stem cells. The small lipid droplets were dyed red with oil red O. After induction of osteogenic inductor, the boundary line among adipose-derived stem cells was not clear and the structure of cells was fuzzy in the growth-intensive areas. There were many strong refractive granular material deposits at that field after dyeing with alizarin red. Scanning electron microscope revealed that adipose-derived stem cells were spread on the collagen scaffold. Results suggested that adipose-derived stem cells isolated by this method could amplify in vitro and stably subcultured. Under a certain inducing condition, adipose-derived stem cells could differentiate into osteoblasts and adipocytes, which showed a good compatibility with collagen scaffold.中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程全文链接：Key words：stem cells; adipose tissue; epididymis; mice, inbred BALB C; cells, cultured;中图分类号:R394.2基金资助: 吉林省科技发展计划青年科研基金资助项目(20090192)通讯作者:李艳茹，副教授，硕士生导师，吉林大学病理生物学教育部重点实验室，吉林大学基础医学院病理学系，吉林省长春市130021作者简介: 张鉴清，男，1972年生，吉林省舒兰市人，汉族，副主任医师，主要从事手足外科的临床研究工作。
引用本文:张鉴清,季佳霖,崔新明等. 小鼠附睾脂肪干细胞的分离培养及鉴定[J]. 中国组织工程研究, 2014,18(28): 4535-4541.Zhang Jian-qing,Ji Jia-lin,Cui Xin-ming et al. Isolation, culture and identification of adipose-derived stem cells from mouse epididymis [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(28): 4535-4541.。