土壤酶实验步骤.
土壤酶活性测定方法
土壤酸性磷酸酶活性的测定1．试剂配制(1)0.115M p-硝基苯磷酸钠溶液取10.67g p-硝基苯磷酸二钠（6HO,分子量为371.1），溶于pH4.5通用缓冲液中并稀释至2250ml.4摄氏度冰箱保存。
(2)通用缓冲液（pH4.5）（缓冲液久置会有沉淀）原液由以下成分组成:三羟甲基氨基甲烷12.1g顺丁烯二酸11.6g柠檬酸14g硼酸6.3g溶于500ml 1N NaOH（40g定容1L）中，加蒸馏水至1L。
取原液200 ml，再加入0.1N HCL 或浓HCL来调pH为4.5。
最后稀释至1L，即得。
(3)甲苯(4)0.5 mol/L Cacl2.2H2O溶液：36.75g Cacl2.2H2O定容500ml. (无水CaCl2: 11.1g定容200ml)(5)0.5 mol/L NaOH溶液：20g NaOH定容1L.2．测定步骤置于50ml三角瓶中，加4ml通用缓冲液（pH4.5）、0.25ml甲苯和1ml 0.115M p-硝基苯磷酸钠溶液,摇匀后，置于37℃恒温箱中1h。
培养结束后，加入1ml 0.5 mol/L氯化钙溶液和4ml 0.5 mol/L NaOH溶液，通过致密滤纸过滤到50ml容量瓶，用蒸馏水定容后在410nm处比色.3．计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用单位时间内每克土中的对硝基苯酚的毫克数表示，W（mg·g-1·h-1）=M1/（m×t）式中：M1—标准曲线上查得样品中对硝基苯酚的质量（mg）；t —反应时间（h）；=1hm—样品土壤的重量（g）无土壤CK: 用1ml蒸馏水代替1g土壤；每批土样做2个；无基质CK: 用1ml蒸馏水代替1ml PNPP。
每个处理做1个。
标准曲线的制作：1）对硝基苯酚标液：1g对硝基苯酚定容1L，低温保存。
2）取标液0、1、2、3、4、5ml于0-6号硬质试管中，分别加pH6.5通用缓冲液4ml，Cacl2.2H2O 溶液1ml，NaOH溶液4ml，②混匀后，定量滤纸过滤到50ml容量瓶，定容后，再取各浓度标液1ml定容至50ml，以0号试管作为对照，在A410nm波长下测光吸收值，并记录光吸收值A410。
土壤酶测定方法
土壤磷酸酶（酸性）——磷酸苯二钠比色法（一）试剂1.pH5 醋酸盐缓冲液：A:L 醋酸溶液（稀释至1000ml）B:L 醋酸钠溶液 A 液+B液稀释至 100ml若使用无水乙酸及乙酸钠配制 1 升PH为的乙酸盐缓冲液，则需要无水乙酸及乙酸钠的量计算以下：①无水乙酸用量的计算：无水乙酸的浓度为，则需无水乙酸的体积为×1000/=（毫升）；②乙酸钠用量的计算：查表知，无水乙酸钠的摩尔质量为82，则需无水乙酸钠的质量为×82× 1=11（克）。
使用无水乙酸及乙酸钠配制 1 升PH为的乙酸盐缓冲液的方法以下：用量筒量取毫升无水乙酸至1000 毫升烧杯内，再用台秤称取无水乙酸钠11 克至该烧杯，而后用量筒量取=996 毫升蒸馏水至该烧杯内，搅拌至乙酸钠溶解并呈平均的溶液即为1 升PH为的乙酸 - 乙酸钠缓冲液。
或许：量 7ml 醋酸钠液 +3ml 醋酸液混淆即得。
2.% 磷酸苯二钠： pH5醋酸缓冲液3.氯代二溴对苯醌亚胺：称取 2 ，6- 二溴苯醌氯酰亚胺，用 10ml 96%乙醇（48ml 乙醇 +2ml 水）溶解，储存于棕色瓶中，寄存在冰箱中，保留的黄色溶液未变褐色以前均可使用。
4.酚标准溶液：酚原液 --- 取 1g 苯酚溶于蒸馏水中，定容至 1000ml 水中，保留于棕色瓶中。
酚工作液 --- 取 10 ml 酚原液稀释至 1000ml 水中，每毫升含酚5.甲苯硫酸铝溶液，称取硫酸铝，定容至100ml。
（二）实验步骤1.标线制作取 0，1， 3，5，7，9，11，13ml 酚工作液，置于 50ml 容量瓶中，加入5ml 缓冲液和 4 滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min 后比色测定。
以光密度值为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。
2.样品测定称取风干土样（过 20 目筛，去除杂质），搁置于 200ml 容量瓶（离心管）中，加甲苯，轻摇 15min 后，加入 20ml %磷酸苯二钠，认真摇匀后搁置于 37°C恒温箱中培育 24h，后于培育液中加入 %硫酸铝溶液过滤。
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤酶的测定方法
一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。
在37℃恒温箱中培养24ｈ。
然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。
取滤液1mL 置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。
脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。
1h内在分光光度计上于578nm处比色。
土壤酶的测定方法
参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法一、土壤蔗糖酶3，5- 二硝基水杨酸比色法：1、试剂的配制①3，5- 二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）②pH5.5磷酸缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。
③8%蔗糖溶液。
④甲苯。
⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，真空干燥至恒重。
然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。
再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。
标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
到时取出，迅速过滤。
从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml3，5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。
无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。
无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5- 二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。
土壤纤维素酶测定方法
⼟壤纤维素酶测定⽅法纤维素酶⼀、试剂：1）醋酸缓冲液（pH 5.5）：164.08 g⽆⽔醋酸钠（C2H3O2Na）溶于700 ml去离⼦⽔，⽤醋酸（C2H4O2）调节pH⾄5.5，⽤去离⼦⽔稀释⾄1 L。
2）CMC溶液（0.7%，w:v）：7 g羧甲基纤维素钠盐溶于1 L醋酸缓冲液，45℃下搅拌2 h，此溶液在4℃下可存放7天。
3）还原糖试剂：试剂A：16 g⽆⽔碳酸钠（Na2CO3）和0.9 g氰化钾（KCN）溶于去离⼦⽔并稀释⾄1 L。
试剂B：0.5 g六氰铁钾（K4Fe（CN）6）溶于去离⼦⽔并稀释⾄1 L，贮于棕⾊瓶中。
试剂C：1.5 g 硫酸铁铵（NH4SO4Fe2(SO4)2·H2O）、1 g⼗⼆烷基硫酸钠（C12H25O4SNa）和4.2 ml浓硫酸溶于50℃去离⼦⽔，冷却后稀释⾄1 L。
4）⽔合葡萄糖溶液：28 mg⽔合葡萄糖溶于少量去离⼦⽔中，并定容⾄1 L。
⼆、仪器设备恒温培养箱，⽔浴锅，分光光度计，搅拌器，三⾓瓶三、操作步骤取10.00 g（耕地）或5.00 g（林地）新鲜⼟壤（＜2 mm）于100 ml三⾓瓶中，加15 ml 醋酸缓冲液和15 ml CMC溶液，盖上塞⼦，于50℃下培养24 h，过滤。
同时做空⽩对照，但在培养结束时才加⼊15 ml CMC溶液，并迅速过滤。
取2.00 ml滤液于50 ml容量瓶中，并⽤去离⼦⽔定容⾄刻度。
吸取2.00 ml稀释液于20 ml试管中，加2.00 ml还原糖试剂A和2.00 ml还原糖试剂B，盖紧混匀，在100℃⽔浴中加热15 min 后，⽴即⾄于20℃⽔中冷却5 min。
加10.00 ml还原糖试剂C，混匀，20℃下静置显⾊60 min，于690 nm波长处⽐⾊测定（要求在30 min内完成）。
标准曲线：吸取0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 ml⽔合葡萄糖溶液，⽤去离⼦⽔稀释⾄2 ml，同上加⼊还原糖试剂A、B、C后，⽐⾊测定还原糖含量。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或者塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）与0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱与水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱与溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳固，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳固后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
土壤酶实验方法
脱氢酶（改良法）1. 取5 g过1 mm的风干土样于带塞磨口三角瓶中；2. 加入1 ml TTC、1 ml葡萄糖和1.5 ml水；3. 置于30 ℃恒温培养箱，在暗处培养24小时；4. 分次少量加入甲醇50 ml；5. 震荡1小时，过滤后用滤液在波长485nm比色。
试剂1.0.5 mol/L三（羟甲基）氨基甲烷-盐酸缓冲液，调pH值至7.6；2.0.5% TTC：取0.5 g TTC加入到0.5 mol/L三（羟甲基）氨基甲烷-盐酸缓冲液中，定容至100 ml；3. 纯甲醇；4. 三苯基甲臜标准溶液，称量10 mg甲醇定容到100 ml，其浓度为100ppm，在配成浓度为1,2,4,8,10 mg/L的标准溶液。
磷酸酶试剂配制（1）甲苯：取一定量的甲苯原液备用。
（2）苯磷酸二钠溶液：称取6.75 g苯磷酸二钠用水溶至1 L。
（3）柠檬酸缓冲液（pH为7.0）：a.0.1mol柠檬酸溶液，b.0.2mol 磷酸氢二钠溶液，取6.4 ml a溶液加43.6 ml b溶液加水稀释至100 ml。
（4） Gibbs 试剂：取200 mg 2,6-双溴苯醌氯酰亚胺用乙醇溶至100 ml。
（5）酚标准溶液：a.原液：称取1 g酚用水溶至1 L，保存在暗色瓶中。
b.工作液：取10 ml 原液用水稀释至1 L。
绘制标准曲线：分别用1,2,5,10,20和50 ml稀释的工作液于100 ml容量瓶中，加5 ml pH为7.0的柠檬酸缓冲液，再加入1 ml Gibbs 试剂，将瓶中混合物仔细混合并静置20分钟。
这时溶液呈现青色。
用蒸馏水稀释至刻度。
将着色溶液在光电比色计上用1 cm 液槽于578 nm处进行比色测定。
然后以工作液浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制曲线图。
操作步骤（1）称取10 g过1 mm筛的风干土样置于100 ml容量瓶中。
（2）钝化：加入1.5 ml 甲苯放置15分钟。
（3）注入10 ml 苯磷酸二钠溶液和10 ml为相应的磷酸酶所对应的缓冲液。
土壤酶活活性测定方法
土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
（二）试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脲酶活性的测定称取10 g土壤置于100mL容量瓶中。
用2mL甲苯处理15分钟。
往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。
仔细混合后，将瓶放在37℃恒温箱中，放置3 h。
与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。
培养结束后，用热至38℃的水稀释至刻度。
摇匀，将悬液过滤。
吸取1mL 滤液于50mL容量瓶中，用蒸馏水加至10mL。
然后按标准曲线绘制的操作加入苯酚钠等试剂，显色，比色，最后根据标准曲线求出氨态氮含量。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。
三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。
培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定办法
土壤酶活性及微生物测定配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
七、八、实验步骤取5克过20目筛的风干土样于50毫升容量瓶中，用0.8(16滴)毫升甲苯处理，15分钟后，加入5毫升苯磷酸二钠溶液（6.75克苯磷酸二钠溶于水，并稀释至1升）和5毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用pH10的硼酸缓冲液，中性磷酸酶用pH7.0的柠檬酸缓冲液，酸性磷酸酶用pH5.0的醋酸缓冲液）。
仔细混合后，将反应物置于37摄氏度恒温箱中培养12小时，然后用蒸馏水定容至刻度，摇匀过滤，用5毫升水代替基质以设置对照。
为了测定反应混合物中的酚量，取1毫升滤液于100毫升容量瓶中，加5毫升硼酸缓冲液（pH9.0），再加入3毫升2.5%的铁氰化钾和3毫升0.5%的4-氨基安替吡啉，摇动，溶液呈粉红色，然后再加水定容，待颜色褪到稳定时（约需20~30分钟），在分光光度计上于波长570纳米处测定溶液的光密度，根据用酚制备的标准曲线查出供试滤液中酚的含量。
土壤学酶活性实验报告
土壤学酶活性实验报告实验目的：本实验的目的是通过测定土壤样品中的酶活性，了解土壤中酶活性对土壤养分转化和有机质降解的影响，为土壤肥力评价提供参考依据。
实验原理：土壤是一个复杂的微生物生态系统，其中微生物和土壤酶活性对于土壤有机质降解和养分转化起着关键作用。
本实验选择常用的酶活性指标进行测定，包括脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶活性。
脲酶是土壤中一种主要的氨氧化酶，催化氨离子氧化为亚硝酸离子。
本实验采用亚硝酸盐评价方法，根据脲酶催化下苏亚硝酸盐的生成量来测定酶活性。
过氧化氢酶是一种氧化酶，催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气。
在本实验中，加入过氧化氢和酶作用后，通过测定生成的氧气体积来计算酶活性。
蔗糖酶是一种糖酶，催化蔗糖降解为葡萄糖和果糖。
在实验中，将土壤样品与蔗糖溶液反应，再通过添加硫酸酸化，使用菲林试剂测定生成的还原糖量来测定酶活性。
实验步骤：1. 收集土壤样品，并将其空气干燥后研磨成粉末状。
2. 准备酶活性测定所需的荧光素磷酸盐、过氧化氢、蔗糖等试剂，按照说明书配制所需的溶液。
3. 酶活性测定前，先将土壤样品与适量的氯仿进行均匀摇匀，以杀死微生物活性。
4. 进行脲酶活性的测定，依次将土壤样品溶液、反应液和荧光素磷酸盐溶液加入96孔板中，放入荧光光度计中进行测量。
5. 进行过氧化氢酶活性的测定，将土壤样品溶液、过氧化氢和缓冲液加入96孔板中，加入过氧化氢酶溶液后，用气泡计测定产生的气体体积。
6. 进行蔗糖酶活性的测定，将土壤样品溶液、蔗糖溶液和酸化剂加入96孔板中，加入菲林试剂后，使用分光光度计测定溶液的吸光度。
实验结果：根据实验步骤测定得到的数据，可以计算出脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶的活性值。
根据实验条件和添加的试剂浓度，可以计算出单位土壤样品中酶活性的相对值，以便进行土壤酶活性的比较和评价。
实验结论：通过测定土壤样品的酶活性，可以了解土壤中微生物代谢活性和有机质降解程度。
较高的脲酶活性表明土壤中氮转化能力较强，有机氮物质较容易转化为无机氮形式。
土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶活性测定的实验步骤土壤酶的测定1．三角瓶用稀HNO3（3-5%）或用洗衣粉浸泡24h，后刷洗，然后再用蒸馏水润洗，晾干。
2．土样研磨精细后分袋装好。
土量需2g+2.5g+5g+5g=14.5g，重复一次，14.5某2=29g。
一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫P323）1．试剂配制：(1)0.3%过氧化氢溶液：①（1：10030%的H2O2和水）②（0.5molH2O2+49.5ml蒸馏水）③（1ml30%H2O2+99ml蒸馏水）(2)3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）(3)0.1N 高锰酸钾溶液：（1.58gKMnO4+100ml蒸馏水）2．操作步骤：2g风干土置100三角烧瓶→注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢（现配）→在往复式振荡机上振荡20min→加入5ml3N硫酸（以稳定未分解的H2O2）→用慢速型滤纸过滤，→吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾的滴定至淡粉红色3．结果计算过氧化氢酶的活性（M），以20min后1g土壤的0.1NKMnO4的毫升数表示：M=（A－B）某T式中：A：空白消耗的0.1NKMnO4毫升数B：滤液消耗的0.1NKMnO4毫升数T：KMnO4滴定度的校正值备注：以容量法测H2O2的酶活：Kappen（1913）首先介绍硫酸存在下用高锰酸钾滴定剩余的过氧化氢测定酶活。
此法根据H2O2与土壤相互作用时，未分解的H2O2的数量用容量法（常用高锰酸钾滴定未分解的H2O2）测定H2O2的酶活2KMnO4＋5H2O2＋3H2SO4→2MnSO4＋K2SO4＋8H2O＋5O2土壤H2O2酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用二、蔗糖酶（P278）滴定法1.试剂配制：(1)20％蔗糖：（20g蔗糖＋80ml水或12.5g蔗糖＋50ml水）(2)甲苯(分析纯)(3)PH5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液0.5ml磷酸氢二钠·12H2O(1/15M)+9.5ml磷酸二氢钾（1/15M）磷酸氢二钠·12H2O(1/15M)：23.88gNa2HPO4,，加H2O溶解，定容至100ml。
测土壤酶活方法
测土壤酶活方法酶活性是评价土壤质量和生物活性的重要指标之一。
测定土壤酶活性可以帮助我们了解土壤中微生物的活动水平和土壤中有机物的分解能力，从而判断土壤的肥力和健康状况。
本文将介绍几种常用的测土壤酶活性的方法。
一、脲酶法测定土壤酶活性脲酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中脲酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
脲酶是一种催化尿素分解的酶，可以将尿素分解为氨和二氧化碳。
测定土壤中脲酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
脲酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有尿素和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的尿素，计算出脲酶的活性。
二、过氧化氢酶法测定土壤酶活性过氧化氢酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中过氧化氢酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可以将过氧化氢分解为水和氧气。
测定土壤中过氧化氢酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
过氧化氢酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有过氧化氢和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的过氧化氢，计算出过氧化氢酶的活性。
三、醋酸红法测定土壤酶活性醋酸红法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中醋酸红酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
醋酸红酶是一种催化醋酸红分解的酶，可以将醋酸红分解为醋酸和二氧化碳。
测定土壤中醋酸红酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
醋酸红法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有醋酸红和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的醋酸红，计算出醋酸红酶的活性。
测定土壤酶活性可以通过脲酶法、过氧化氢酶法和醋酸红法等方法来进行。
土壤酶测定方法
土壤酶测定方法芳基酰胺酶Arylamidase （EC 3.4.11.2）试剂：1、THAM缓冲液（0.1 M，pH 8.0）：2.44 g 三羟甲基氨基甲烷溶于50 mL水中，用0.05 M H2SO4滴定调节pH，加水稀释溶液至200 mL。
2、L-leucine β-naphthylamide solution L-亮氨酸β-萘胺（8.0 mM）(2 mM)：称取0.2342 g L-亮氨酸β-萘胺盐酸盐溶于水，定容至100 mL。
3、Ethanol 乙醇：（95%）4、Acidified ethanol 酸化乙醇（0.26 M HCl）：4.32 mL浓HCl加入乙醇中，用乙醇定容至200 mL。
5、p-Dimethylaminocinnamaldehyde solution 对二甲氨基肉桂醛溶液(0.6mg/mL)：0.12 g 对二甲氨基肉桂醛溶于乙醇，用乙醇定容至200 mL。
6、标准液β-萘胺溶液（β-naphthylamine）（125 ug/mL）：称取12.5 mg β-萘胺，75 mL蒸馏水，5 mL乙醇，用蒸馏水定容至100 mL。
7、β-萘胺标准曲线：分别吸取1，2，3，4，5，6 mL标准液β-萘胺溶液（125 ug/mL）与25 mL容量瓶，定容。
标曲溶液浓度分别为：5，10，15，20，25，30 ug/mL β-萘胺。
步骤：1、称取1 g土壤（风干，<2 mm）于25 mL 三角瓶，加入3 mL 0.1 M 的THAM缓冲液（pH 8.0），1 mL 8.0 mM 的L-亮氨酸β-萘胺盐酸盐。
三角瓶涡旋几秒，混匀，密封，放置在震荡培养箱1 h（37o C）。
2、培养结束后，加入6 mL乙醇（95%）终止反应，土壤悬浮液立即混匀，转移至离心管，在17000xg离心1 min。
3、将上层清液转移至测试管，阻止基质的进一步水解。
吸取1 mL上层清液至另一个测试管，加入1 mL乙醇，2 mL 酸化乙醇，2 mL对二甲氨基肉桂醛溶液，混合溶液涡旋混匀，红色偶氮化合物在540 nm下比色。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤酶活性测定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法1. 试剂配制（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。
（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。
（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。
（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。
（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。
（7）甲苯。
（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。
然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。
取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。
用蒸馏水补足至10mL。
加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。
最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g土样，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
土壤酶活性的测定
土壤酶活性的测定1.土壤样品采集与制备取根际土壤为土壤样品，同时挖取根系周围0-20cm和20-40cm土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。
充分混匀后取样，用于土壤酶活性测定的土壤经风干后，过1mm筛，测定多酚氧化酶活性土样过0.25mm筛。
供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带回实验室，磨细过2mm筛后，置于4℃冰箱内保存备测土壤微生物种群、数量等。
2.土壤酶活性的测定方法2.1.土壤脲酶比色法测定多酚氧化酶、过氧化物酶活性采用邻苯三酚比色法测定；过氧化氢酶活性采用高锰酸钾滴定法；碱性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法（2）测定操作步骤：称2g过1mm筛风干土，置于100mL三角瓶中，注入40mL蒸馏水和5mL 0.3%过氧化氢溶液，振荡(120次/分钟)20分钟。
随即加入3N硫酸5mL，稳定未分解的过氧化氢并终止反应。
用慢速型滤纸过滤瓶中的土壤悬浊液，吸取25nil滤液，用0.01N高锰敏钾滴定至淡粉红色终点。
结果计算：设滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量(mL数)为B滴定25而原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量(mL数)为A高锰酸钾滴定度的校正值为T=(A-B)×T/2等于20分钟土壤的过氧化氢酶活性(mL 0.lmol KMnO4/g)2.2.脲酶采用靛酚蓝比色法操作步骤：取2.5g风干土，置于50mL三角瓶中，加0.5mL甲苯，15min后加5mL 10%尿素液和10mL pH6.7柠檬酸盐缓冲液。
摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
过滤后取0.5mL滤液注入25mL容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
氮的标液：精确称取0.4717g硫酸按溶于水并稀释至1000mL，则得1mL含0.1mg氮的标准液。
绘制标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。
标线绘制：取稀释的标准液l、3、5、7、9、11、13mL，移于50rnl容量瓶中，然后加入蒸馏水至20mL。
再加4mL苯酸钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
土壤酶的测定
1．三角瓶用稀HNO3（3-5%）或用洗衣粉浸泡24h，后刷洗，然后再用蒸馏水润洗，晾干。
2．土样研磨精细后分袋装好。
土量需2g+2.5g+5g+5g=14.5g ，重复一次，
14.5×2=29g。
一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫P323）
1．试剂配制：
(1)0.3%过氧化氢溶液：
①（1：100 30%的H2O2和水）
②（0.5molH2O2+49.5ml蒸馏水）
③（1ml30% H2O2+99ml蒸馏水）
(2)3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）
(3)0.1N高锰酸钾溶液：（1.58gKMnO4+100ml蒸馏水）
2．操作步骤：
2g风干土置100三角烧瓶→注入40ml蒸馏水和5ml 0.3%过氧化氢（现配）→在往复式振荡机上振荡20min→加入5ml3N硫酸（以稳定未分解的H2O2）→用慢速型滤纸过滤，→吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾的滴定至淡粉红色
3．结果计算
过氧化氢酶的活性（M），以20min后1g土壤的0.1N KMnO4的毫升数表示：M=（A－B）×T
式中：
A：空白消耗的0.1N KMnO4 毫升数
B：滤液消耗的0.1 N KMnO4 毫升数
T：KMnO4滴定度的校正值
备注：
以容量法测H2O2的酶活：Kappen（1913）首先介绍硫酸存在下用高锰酸钾滴定剩余的过氧化氢测定酶活。
此法根据H2O2与土壤相互作用时，未分解的H2O2的数量用容量法（常用高锰酸钾滴定未分解的H2O2）测定H2O2的酶活
2 KMnO4＋5H2O2＋3H2SO4→2MnSO4＋K2SO4＋8H2O＋5O2
土壤H2O2酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用
二、蔗糖酶（P278）滴定法
1.试剂配制：
(1)20％蔗糖：（20g蔗糖＋80ml水或12.5g蔗糖＋50ml水）
(2)甲苯(分析纯)
(3)PH5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液
0.5ml磷酸氢二钠·12 H2O(1/15M) + 9.5ml 磷酸二氢钾（1/15M）
磷酸氢二钠·12H2O(1/15M) ：23.88g Na2HPO4,，加H2O溶解，定容至100ml。
磷酸二氢钾（1/15M）：9.072g KH2PO4，加H2O溶解，定容至1000ml。
(4)33%KI溶液（4.925g+10ml水）现配，冰箱遮光
(5) H2SO4（1：3）（体积比）：15ml 98%H2SO4 + 45ml蒸馏水
(6)淀粉指示剂
取0.5g淀粉溶于少许水中，加10ml煮沸的2.5%NaCl液煮沸1min。
（2.5%NaCl：2.5g NaCl加97.5ml蒸馏水。
）
(7)0.1NNaS2O3 滴定液
取25克-----溶解于刚煮沸而冷却的蒸馏水中，加入少量的碳酸钠，稀释至1升。
(8)菲林溶液
取3.464克CuSO4· 5H2O溶于蒸馏水，并稀释至50ml（a）,取17.3g酒石酸钾钠和5gNaOH溶于蒸馏水，并稀释至50ml（b），使用前将（a）（b）按1：1混合。
2.操作步骤
取2.5g土置于100ml三角瓶→用0.375ml甲苯处理15min。
加2.5ml 20％蔗糖和2.5mlPH5.5醋酸铅－磷酸盐缓冲液摇匀后放在37度恒温箱中培养24h。
培养结束后，加12.5ml蒸馏水。
摇荡后过滤，取5ml的滤液移入100ml三角瓶中，加2.5ml的菲林溶液，在沸水浴上放置10min，冷却至室温后，再加0.75ml 33%KI溶液和1ml H2SO4（1：3）。
加入淀粉指示剂2滴，然后用0.1NNaS2O3 滴定。
颜色：棕色→棕蓝色→乳白色（滴定结束）
注意：减量滴定，一般取5ml即可，滴定需NaS2O3溶液（大量）
空白对照：30.15ml（取5ml时）
3．结果计算：
蔗糖酶活性（M），用对照与试验的0.1NNaS2O3滴定量毫升数之差表示。
试验应设以水20毫升代替基质。
M=（A－B）×T×17.875/5/2.5
式中：
A：对照所消耗的0.1NNaS2O3 毫升数
B：滤液所消耗的0.1NNaS2O3毫升数
T：NaS2O3 滴定度的校正值
×17.875/5/2.5：换算成1g 土消耗的0.1NNaS2O3 量
三、脲酶
1.试剂配制
(1)PH=6.7柠檬酸盐缓冲液
取3.68g柠檬酸溶液于6ml蒸馏水中，另取2.95g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将PH调至6.7，并将水稀释至20ml 。
(2)苯酚钠溶液
称62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，然后用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中。
称27gNaOH溶于100ml水中（B液），存于冰箱中。
使用前，取A,B两液各20ml混合，并用蒸馏水稀释至100ml备用。
(3)次氯酸钠溶液
用水稀释制剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
（17.3mlNaClO定容至100ml）。
(4)10%尿素液
10g尿素＋90ml水
50g尿素＋450ml水
(5)甲苯
(6)氮的标准溶液（不要配）
精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。
绘制氮的标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。
2.操作步骤
取5g风干土，至于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。
15min加10ml 10%尿素液和20mlPH6.7柠檬酸缓冲液。
摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
过滤后取3ml滤液注入50ml锥形瓶中，然后加蒸馏水20ml，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，边加边摇匀。
20min后显色，定容50ml：1h内在分光光度计上于波长578nm处比色。
然后按绘制标准曲线（显色方法）进行比色测定。
3．结果计算：
脲酶活性（M）以24h后1g土壤中NH3－N的毫克数表示
M=x×31/3/5
标准曲线：y=0.0268x+0.001804
即：M=（0.001804-y）×31/3/5/0.0268
式中：
x：从标准曲线查得的NH3－N毫克数
y：578nm处吸光度
×31/3/5：换算成1g土的系数
四、磷酸酶
1.试剂配制
(1)PH=9.8氯化铵－氢氧化钠缓冲液
取20g NaOH溶于100mlNH4OH中
(2)8%铁氰化钾液
称8g铁氰化钾，溶于蒸馏水中稀释至100ml（仅在同一周内存放）
(3) 2% 4－氨基安替比林液
取1g 4－氨基安替比林溶于水中，稀释至50ml（仅在同一周内存放）
(4)0.5%磷酸苯二钠溶液
取1g溶于200ml水中
(5) 酚的标准溶液（不要配）
酚原溶液的配制及酚工作液的稀释浓度同磷酸苯二钠法
酚原液：取1g重蒸酚溶于水中，稀释至1L存于棕色瓶中
酚工作液：取10ml酚原液稀释至1L（0.01mg/ml酚）
(6) 甲苯
标准曲线绘制
吸取1,3,5,7,9,11,13ml酚工作液，分置50ml的容量瓶中，分别加20ml蒸馏水，再加0.25ml缓冲液，0.5ml4－氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾液，每次充分摇动。
最后定容至50ml，15min内在分光光度计上于波长510nm处比色。
根据光密度值于溶液浓度绘制标准曲线。
50－（20＋2＋0.5＋0.5＋0.25）=26.75ml蒸馏水
2.操作步骤
取5g风干土，至于50ml三角瓶中，加5滴甲苯。
20ml 0.5%磷酸苯二钠，充分振荡后在37℃恒温箱中培养2h。
取培养后滤液5ml，分置50ml的锥形瓶中，加20ml蒸馏水，再加0.25ml缓冲液，0.5ml 4－氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾液，每次充分摇动。
最后定容至50ml，15min内在分光光度计上于波长510nm处比色。
3．计算
磷酸酶的活性（M），以2h后100g土壤中P2O5的毫克数表示
M＝x×80×0.32×2.29
标准曲线：y=0.002161x-0.000839
即：M=（y+0.000839）×80×0.32×2.29/0.002161
式中：
x：从标准曲线查得5ml滤液中酚的完整数
y：510nm处吸光度
80：换算为100g土壤的余数
0.32：在磷酸苯二钠中，1个重量单位的酚相当于0.32g重量单位的磷
2.29：将P换算为P2O5的系数。