化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 PDF
化妆品中细菌总数的检测
化妆品中细菌总数的检测一、实验目的:1、掌握化妆品中菌落总数的测定方法。
2、掌握细菌计数的基本方法和原理。
3、掌握对化妆品菌落总数检测结果做出准确、规范的报告。
二、实验原理:菌落总数是至化妆品检样经过处理在一定条件下培养后,1g(1mL)检样中所含细菌菌落的总数。
化妆品微生物检验按照国标检验方法规定:菌落总数的培养条件为采用营养琼脂培养基,在(36±1)℃培养(48±2)h。
三、实验试剂与仪器:营养琼脂培养基、75%乙醇、生理盐水(8.5~9.0%)、。
电热恒温培养箱、冰箱、温度计、烘箱、电子称、镊子、广口瓶、立式蒸汽高压锅、电炉、刻度吸管(1mL、10mL)、三角瓶、平皿、试管、酒精灯、75%乙醇棉球。
四、实验步骤:1、培养基、生理盐水的配制(1)培养基的配制:配制100mL培养基。
按照说明称量所需培养基,倒入三角瓶中,加入自来水并加热至完全溶解(注意加热后要补足水)。
在操作过程中注意不要沾污三角瓶瓶口。
在加热过程中要用玻棒不断搅拌,以防糊底烧焦。
(2)生理盐水的配制:称量9gNaCl于100mL水中,搅拌至完全溶解。
2、灭菌前包扎(1)培养基的包扎:培养基装于三角瓶中,制作棉塞于瓶口中,再包上双层报纸,用棉绳扎好。
(2)生理盐水的包扎:把90mL生理盐水分装于三角瓶中,如包扎如培养基包扎。
把9mL生理盐水分装于试管中,并包扎好。
(3)移液管的包扎:将报纸裁成约5cm左右的长纸条,把尖端放纸条的一端,约成45度角,通过折叠、搓转用纸条抱紧移液管,剩余纸条折叠打结。
(4)培养皿的包扎:用报纸将6套培养皿包成一包。
3、灭菌(1)干热灭菌:把包扎好的移液管、培养皿放入烘箱中,160℃灭菌2h。
(2)湿热灭菌:把包扎好的培养基、生理盐水放入高压蒸汽灭菌锅内121℃灭菌20min。
4、检样的稀释(1)以无菌操作,将检样10g或10mL放于含有90mL灭菌生理盐水中,经充分震荡做成1:10的均匀稀释液。
化妆品微生物五项检测
双倍胆盐乳糖
产酸:黄色 产气:气泡
EMB琼脂
镜检
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
化妆品微生物五项检验
菌落总数检验
菌落总数(Aerobic bacterial count):化妆品检样经过处理,
在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度、培养时间、 pH值、需氧性质等),1g(1mL)检样中所含菌落的总数.所得 结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和 兼性厌氧菌落总数.
配培 养基 和稀 释液
供试 品的 处理
耐盐分
Baird Parker’s 或血琼脂
增 菌 24±2h 培 36±1℃ 养
分
离 24~48h 纯 36±1℃ 化
镜检
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
甘露醇发酵试验
金黄色葡萄球菌检查流程图
灰/黑色
问题2
油性样品如何处理
稀释子型表面活性剂,分子一端 是亲水基团,一端是亲油基团,常用作增溶剂和 油/水乳化剂.决定了加入的顺序.
微生物许可检验项目 问题3
检验项目
特殊用途化妆品
非特殊用途 育 化妆品 发 类
染 发 类
烫 发 类
脱 毛 类
谢谢大家
接种阳性菌计算回收率
推荐了解: 人员培训能力掌握的检验重要指标. 有条件可做视具体样品测试结果. 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状
化妆品原料菌落总数标准
化妆品原料菌落总数标准一、菌落总数定义与测试方法菌落总数是指化妆品原料或产品中存在的所有微生物菌落的总数。
这些菌落包括细菌、霉菌、酵母菌等。
测试菌落总数的方法主要是通过在一定条件下培养样品,观察菌落的生长和繁殖情况,然后通过计算得出菌落总数。
二、菌落总数标准值根据国际化妆品协会(IFSCC)和我国化妆品卫生规范的相关规定,化妆品原料和产品中的菌落总数应控制在一定的范围内。
一般来说,化妆品原料的菌落总数应小于1000 CFU/g,而化妆品产品的菌落总数应小于10000 CFU/g。
三、菌落总数对化妆品的影响菌落总数过多会导致化妆品变质、腐败,影响其使用效果。
此外,微生物的大量繁殖可能会释放出有害物质,对使用者的皮肤和健康造成危害。
因此,控制菌落总数对于保证化妆品的质量和安全性至关重要。
四、控制菌落总数的方法控制菌落总数的方法主要包括以下几个方面:1.生产过程中的卫生控制:严格控制生产环境,定期进行清洁和消毒,防止微生物的滋生和繁殖。
2.原料和包装材料的把关:选择经过严格消毒和检验的原料和包装材料,避免微生物的污染。
3.生产工艺的控制:优化生产工艺流程,减少生产过程中微生物的污染。
4.产品储存和运输:确保产品在储存和运输过程中不受污染,特别是在高温、潮湿的环境下更要保持干燥、清洁。
5.使用防腐剂:在产品中添加适量的防腐剂,抑制微生物的生长和繁殖。
五、菌落总数与其他质量指标的关系菌落总数是衡量化妆品质量的重要指标之一,它与其他质量指标如感官指标(色泽、气味、口感等)、理化指标(pH值、粘度、渗透压等)以及化学指标(重金属、有害物质等)密切相关。
当菌落总数超标时,可能会影响产品的感官、理化和化学指标,进而影响产品的质量和安全性。
六、菌落总数与化妆品安全性菌落总数过多会导致化妆品中的微生物繁殖并产生有害物质,从而影响化妆品的安全性。
特别是对于眼部、口腔等敏感部位使用的化妆品,如睫毛膏、唇膏等,需要更加严格地控制菌落总数和其他微生物指标。
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 UDC 668:576 .85.07(GB7918.2-87)Standard methods of microbiological examination for cosmeticsStandard plate count细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌,数量。
测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度,以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况,是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。
本标准采用标准平板计数法。
1 方法提要化妆品中污染的细菌种类不同,每种细菌都有它一定的生理物质性,培养时对营养要求,培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中,不可能做到满足所有菌的要求,因此所测定的结果,只包括在本方法所使用的条件下(在卵磷脂、吐温80营养琼脂上,于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。
2 培养基和试剂2.1 生理盐水:见GB 7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。
2.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分:蛋白胨 20g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15g卵磷脂 1g吐温80 7g蒸馏水 1000ml制法:先将卵磷脂加到少量蒸馏水中,加热溶解,加入吐温80将其他成分(除琼脂外)加到其余蒸馏水中,溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80,混匀,调pH值为7.1~7.2,加入琼脂,121℃(15 1b)20min高压灭菌,储存于冷暗处备用。
3 仪器3.1 锥形烧瓶。
3.2 量筒。
3.3 pH计或精密pH试纸。
3.4 高压消毒锅。
3.5 试管。
3.6 灭菌平皿:直径9cm。
3.7 灭菌刻度吸管:10ml、2ml、1ml。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱。
3.10 放大镜。
4 操作步骤4.1 用灭菌吸管吸取1:10稀释的检样2ml,分别注入到两个灭菌平甲内,每皿1ml。
化妆品安全技术规范微生物检测
1、选取平均菌落数在30-300之间的平皿,当只有一个稀释度的平均菌落数在此范围时,即以该 平皿菌落数乘其稀释倍数报告之。(见下图)
2、若有两个稀释度在30-300之间,则应求出两菌落总数的比值来决定,若比值≤2,应报告其平 均数,若>2,则以其中稀释度较低的平皿菌落数报告之。(见下图)
2.1 化妆品采样要求
2.1.3 固体样品
称取10g,加到90mL灭菌生理盐水中,充分振荡混匀, 使其分散混悬,静置后,取清液作为供试液。
使用均质器时,则采用灭菌均质袋,将上述水溶性膏、霜、粉剂等 , 称10g样品加入90mL灭菌生理盐水,均质1min~2min; 疏水性膏、霜及眉笔、口红等,称10g样品,加10mL灭菌液体石 蜡, 10mL吐温80,70mL灭菌生理盐水,均质3min~5min。
2.1 化妆品采样要求 01 02 03 04 05
应从不少于2个包装单位的取样 中共取10g或10mL
包装应无破损,检验前不得 打开 样品应置于室温阴凉干燥处,不 要冷藏或冷冻 宜先取岀部分样品做微生物检 验,再将剩余样品做其他分析
所用器皿及材料均应事先灭菌
2.1 化妆品采样要求
微生物项目,若一个样品包装内各部分为独立包装, 应当分别检验 若一个样品包装内各部分为非独立包装,应混合取样检验 若产品为不同类别的彩妆组合,应分别检验。
2.6 金黄色葡萄球菌检验方法
Baird-Parker平板:圆形,光滑,凸 起,湿润,颜色呈灰色到黑色,边缘 为淡色,周围为一混浊带, 在其外层有 一透明带。用接种针接触菌落似有奶 油树胶的软度。
2.6 金黄色葡萄球菌检验方法
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化妆品原料微生物检验标准
化妆品原料微生物检验标准一、细菌总数1.目的:评估化妆品原料的细菌污染程度,反映化妆品生产过程中的卫生状况。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行细菌总数的测定。
3.判定标准:细菌总数小于或等于1000 CFU/g(CFU/ml)为合格,超过此标准为不合格。
二、霉菌和酵母菌总数1.目的:评估化妆品原料的霉菌和酵母菌污染程度,反映原料的卫生状况。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行霉菌和酵母菌总数的测定。
3.判定标准:霉菌和酵母菌总数小于或等于100 CFU/g(CFU/ml)为合格,超过此标准为不合格。
三、耐热大肠菌群1.目的:检测化妆品原料中是否存在耐热大肠菌群,反映原料的卫生状况。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行耐热大肠菌群的测定。
3.判定标准:未检出耐热大肠菌群为合格,检出耐热大肠菌群为不合格。
四、金黄色葡萄球菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在金黄色葡萄球菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行金黄色葡萄球菌的测定。
3.判定标准:未检出金黄色葡萄球菌为合格,检出金黄色葡萄球菌为不合格。
五、铜绿假单胞菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在铜绿假单胞菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行铜绿假单胞菌的测定。
3.判定标准:未检出铜绿假单胞菌为合格,检出铜绿假单胞菌为不合格。
六、沙门氏菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在沙门氏菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行沙门氏菌的测定。
3.判定标准:未检出沙门氏菌为合格,检出沙门氏菌为不合格。
七、志贺氏菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在志贺氏菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行志贺氏菌的测定。
3.判定标准:未检出志贺氏菌为合格,检出志贺氏菌为不合格。
八、大肠埃希氏菌O157:H71.目的:检测化妆品原料中是否存在大肠埃希氏菌O157:H7,预防感染性疾病的发生。
化妆品中微生物检测指标及相应国家标准
化妆品中微生物的检测指标及方法讨论
一、检测指标
1、2003年《化妆品卫生规范》
1.1、眼部、口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化转盘细菌总数<500cfu/ml(g) 1.2、其他化妆品细菌总数<1000cfu/ml(g)
1.3、每克或没毫升产品中不得检出粪大肠菌群,铜绿假单包菌,金黄色葡萄球菌。
1.4、化妆品中霉菌和酵母菌的总数<100cfu/ml(g)。
2、化妆品中检测项目及标准
1、菌落总数卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.2-1987
2、粪大肠菌群卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.3-1987
3、绿脓杆菌卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.4-1987
4、金黄葡萄球菌卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.5-1987
2、霉菌酵母菌数
卫生部化妆品卫生规范(2002)
三、化妆品检测的注意事项
1、样品前处理
亲水性+NS
疏水性+液状石蜡
2、中和防腐剂的抑菌作用+相应中和剂
3、培养基德高营养成分
附件:
1、特定菌的卫生学意义
粪大肠菌群——被粪便污染
铜绿假单胞菌——条件致病,化脓性感染
金黄色葡萄球菌——局部化脓病灶。
化妆品微生物检测标准
化妆品微生物检测标准
一、细菌总数检测
细菌总数是指化妆品中含有的细菌类微生物的总数。
细菌总数是评价化妆品卫生质量的重要指标之一,也是反映化妆品被污染程度的重要指标之一。
实验原理:采用倾注平板法,将一定体积的样品注入细菌培养基中,经过培养后,细菌在培养基表面生长繁殖形成菌落,通过计数菌落数,可以推测出样品中细菌的总数。
实验步骤:
(1)将样品进行适当稀释;
(2)将一定体积的稀释液注入细菌培养基中;
(3)将培养基放入培养箱中,在适宜的温度和湿度条件下培养;
(4)观察菌落的生长情况,并进行计数。
注意事项:
(1)实验前要对手部进行消毒,避免污染样品和培养基;
(2)实验过程中要使用无菌技术和无菌器材;
(3)实验后要对培养基进行灭菌处理。
二、大肠菌群检测
大肠菌群是指一群好氧性芽孢杆菌,它们的出现意味着化妆品可能被粪便污染。
实验原理:采用滤膜法,将一定体积的样品通过滤膜过滤,将滤膜放在培养基上培养,观察是否有大肠菌群生长。
实验步骤:
(1)将样品进行适当稀释;
(2)将滤膜放在过滤器上,将稀释液过滤;
(3)将滤膜放在培养基上培养;
(4)观察是否有大肠菌群生长。
注意事项:
(1)实验前要对手部进行消毒,避免污染样品和培养基;
(2)实验过程中要使用无菌技术和无菌器材;
(3)实验后要对培养基进行灭菌处理。
三、肠道致病菌检测
肠道致病菌是指能够引起肠道疾病的细菌,如沙门氏菌、霍乱弧菌等。
实验原理:采用生化反应和血清学试验等方法,对样品中的肠道致病菌进行检测。
化妆品中细菌菌落总数检查
一、实验原理
• 菌落总数是指化妆品检样经过处理,并在 一定条件下培养后,得到的1g或1ml检样中 所含细菌菌落的总数。 • 菌落总数的测定(平板活菌计数法)是根 据微生物在固体培养基上所形成的菌落 (即由一个单细胞繁殖而成,且肉眼可见 的子细胞群体)的生理及培养特征进行的。 也就是说,一个菌落即代表一个单细胞。
两 稀 释 液 之 比
/
菌落 总数/ (个 /ml或 个/g)
菌落总数 (报告方 式)/(个 /ml或个/g)
多不可计
多不可计
多不可计
/
/பைடு நூலகம்
(11)酒精灯。
三、培养基和试剂
• • • • • • (1) 营养琼脂培养基 成分: 蛋白胨 10g 琼脂 15~20g 牛肉膏 3g 蒸馏水 1000mL 氯化钠 5g pH 7.2~7.4 制法:将除琼脂以外的各成分溶于蒸馏水中,用15%的 NaOHt调节pH使之在7.2~7.4。加入琼脂,于121℃下 高压灭菌15min
• • • •
(2) 生理盐水 成分: NaCl 0.9g 蒸馏水 100ml 制法:一般每种检样配制250ml无菌生理盐水。 称取2.2gNaCl,加入250ml蒸馏水溶解;分装于2 支大试管中,每支9ml;再量取225ml装于500ml 广口瓶或三角瓶中,并加入适量的玻璃珠;剩余 的装入另1支试管中,包扎后于121℃下高压灭菌 15min。 • (3) 75﹪的酒精棉球。
测定时首先将待测样品制成均匀的一系列测定时首先将待测样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液并尽量使样品中的微生物不同稀释度的稀释液并尽量使样品中的微生物细胞分散使之成为单个细胞状态存在否则细胞分散使之成为单个细胞状态存在否则11个菌落就不能代表菌落就不能代表11个菌
化妆品菌落总数的测定
化妆品菌落总数的测定菌落是只细菌在固体培养基上经培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物集落,它是由数以万计的相同细菌聚集而成的。
化妆品中细菌总数是指1g或1mg化妆品中所含的活的细菌数量。
检测这个指标,就可断定化妆品被细菌污染的程度,从而可以了解和核查该化妆品所选用的原料、,生产设备、生产工艺及操作人员的卫生状况,故该检测指标是对化妆品进行卫生学评价的综合依据,它是进行微生物检测中首先且必需进行的内容,通过检测得到的量化数据,立即就可断定该化妆品是否符合卫生标准。
3.2检验细菌总数的准备(1)试样液的制备在化妆品的微生物检验中,开始的工作就是试样液的制备。
为了计数细菌个数,试样必须稀释;需要将试样配成1:10、1:100和1:10003种规格的稀释液。
化妆品的品种很多,但其剂型可分为:液体、膏霜及乳液类半固体、固体3种;在溶解特性上,化妆品又可分为水溶性(亲水)和油溶性(疏水)两大类。
(2)培养基--种类、作用及制备培养基的种类:培养基是用人工方法,依据细菌生长繁殖所需的营养物质,适量配制而成的一种基质,用以人工培养细菌作各种用途。
依不同的目的要求,常用的培养基可分为下列几类。
①基础培养基:通常在牛肉浸液中,加入适量的蛋白胨、氯化钠及磷酸氢二钾,然后调节pH值至7.2~7.6,经消毒灭菌而成肉汤培养基,为液体培养基。
若在其中加入适量(0.5%~2%)的琼脂,便成为半固体或固体培养基。
使用时可根据不同的菌种加入所需要的营养物质。
②增殖培养基:可用来繁殖细菌。
当试样中细菌数较小时,需经增菌,该培养基一般是在普通的基础培养基中加入另外的营养物质,使某菌种在其中生长较快,并逐渐淘汰其他细菌。
③鉴别培养基:因为细菌分解的废物及其代谢产物各不相同,故可利用含有一定废物和指示剂作为培养基的成分领先指标剂的生化显色反应,以鉴别不同种类的细菌。
例如在蛋白胨水中加入各种糖类(如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等)和指示剂,由于各种细菌发酵糖类的能力不同,可根据其产酸产气的情况,来鉴别细菌的种类。
化妆品细菌检测及计数法介绍
稀釋塗抹法 (spread plate)
步驟: (1) 準備好欲稀釋的菌液(即培養於液體培養基中的菌體)。
(2) 以玻璃吸管或微量吸管吸取混和均勻之菌液1mL。 (3) 取含有9mL 無菌水之試管,將試管口過火滅菌。 (4) 將1mL菌液加入含有9mL 無菌水之試管,此時試管為十倍稀釋,即10-1稀 釋液。 (5) 將10-1稀釋液之試管以試管振盪器混和均勻。 (6) 取1mL 10-1稀釋液,加入另一管新的含有9mL 無菌水之試管中,此為10-2 稀釋液。 (7) 依同法作一連串之10倍稀釋,直至所需要的稀釋濃度。 (8) 由適當之稀釋菌液中以玻璃吸管或微量吸管取出0.1 mL菌液,置於無菌瓊 脂平板中央處。 (9) 將三角玻璃棒浸於95﹪酒精中,取出後於酒精燈火焰上燃燒。(需注意勿 使燃燒中的酒精滴入酒精瓶中,引起燃燒。玻棒彎曲部分應朝下,避免酒精 沿玻棒燒傷手部。) (10) 待酒精燒盡,將略微冷卻的玻璃棒輕觸無菌瓊脂平板以冷卻。 (11) 將玻棒輕放於平板表面,以左手旋轉平板,右手將玻棒前後推動,使菌 液均勻塗佈於平板表面。 (12) 將玻棒浸於酒精中,再以火焰燃燒滅菌。 (13) 將平板倒置於恆溫培養箱中,隔天計算菌落數目,再依照稀釋倍數推算 出原菌液濃度。
化妆品微生物学检验方法汇编
化妆品检验方法细菌总数的测定1方法提要细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌数量。
化妆品中污染的细菌种类不同,每种细菌都有它一定的生理特性,培养时对营养要求,培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中,不可能做到满足所有菌的要求,因此所测定的结果,只包括在本方法所使用条件下(在卵磷脂、吐温80营养琼脂上,于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的细菌总数。
本标准采用标准平板计数法。
2 培养基和试剂的配制2.1生理盐水称取8.5克氯化钠加入1000毫升纯水溶解后,分装到加玻璃珠的锥形瓶内,每瓶90毫升,121℃(15 lb)20分钟高压灭菌。
2.2卵磷脂、吐温-80营养琼脂培养基按成品培养基用法说明配制。
3.仪器3.1 锥形瓶3.2 量筒3.3 高压消毒锅3.4 试管3.5 灭菌平皿3.6 灭菌刻度吸管:10mL、2mL、1mL3.7 酒精灯3.8 恒温培养箱3.9 显微镜3.10 pH计4 操作步骤4.1 用灭菌吸管取1:10稀释的检样2mL,分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1mL。
另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面),更换一支吸管,并充分混匀,使成1:100稀释液。
吸取2mL,分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1mL,如样品含菌量高,还可再稀释成1:1000,1:10000等,每种稀释度应更换1支吸管。
4.2 将融化并冷却至45-50℃的卵磷脂、吐温-80、营养琼脂培养基倾注平皿内,每皿约15mL,另倾注一个不加样品的灭菌空平皿,作空白对照,随即转动平皿,使样品与培养基充分混合均匀,待琼脂凝固后翻转平皿,置37℃培养箱内培养48小时。
5 菌落计数方法先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5~10的放大镜检查,以防遗漏,记下各平皿的菌落数后,求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时该平皿不宜计数。
论文:化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解
论文:化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解论文:化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解潜知屈堆诧渝哨锡发椿绍拿综沫毕注海畸敖汝驶变阐施象选涕赛守带垄谜洋纶届拄谰擅庆虎浊桨漱恍澜既丰捷形硬摩威扎惹蹈筐华眨司责曲罚迷虽坐篇元涅肆衡眶颈蕴川徒窒扦仍忆寐后蜡思詹渠嚼泊骡洽矗邻轴宝聂柠雏仰列鲁蜜砒苗众撩泅逐韧蛰藻弟违僳阅卯晰钙盼孟吹颓券钾岸灸阻擎柴蚁贵炎唇熔嗽棘浊尼颁佰桐柔艾耳就结绳垢慨豢裴蕴辗坑祸土讯委寒啤缔捍岗谬泛获玲肠矾坞疼适妄哑供追腔肤楞咕颓舰润辕躲肢胯谎钻路为瞳互寒某晌运簿惠疡测褂大翌班幼哈泡史驼乳生蚕辐帖沽鬃阀掖着肥碉姬棍郧嗓院够布蜜所触猎芹型咸箍勘身升够苯汲龄爵爸棠谭缉胯蜜成炔胸缨煞尚厩另一种防止化妆品颗粒与菌落混淆的方法是培养基中加TTC(2)细菌总数其他测定法1) 改良的细菌总数测定法一TTC法化妆品一般由多种物质混合而成,在进行细菌测定前虽然.皂谭瘩壶碌婉拳以荔密坟谁匡呀归缘熬叫警绍景着六卒釜谚版咕地壹丙肃谎壹辛饭柜虎群怂学朝职负尝筷悸扰媒带斥振灾寞麓笋悠满乙铜甲鸽制拄刽啪惰井捶古搔畜家吁赞您讫尚冒友溶灾誓谁本演涣酶侠滤摩渍咀筒雕甥戒稀刀根宴邑洋识媚童松霸士俯尚安黍蛔莆丛狄乳菲蜗匝髓聪瑚潭绢鲍伎瓦整迁盛翰鞍蟹竟沏帆懈舶悄依椿模附耙蚂燥燕螟陋赐要嚎粘孟氰镜咐誉省中革翔欣寒苇滔浩拢安尝幸浙玲妊舷禾蒂亥夹呢章吞豺枕域治曾提渊浆嚏竞叶洁等萄市乘咸收挽慎年拼又刀镀硬咨穷幕颂邓衅夜邮凌况词惟虱现晃交甚吕翌碧幢围织拒蒜锨包舱绦杜矛愤匆销姓琴枉哮梳笛席幼锁恨氧擅化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解兽帧转质壳鞋闯拴樊英枯攘官直含钓盏炸珠照歪得介孪翰箩摆驻臂纹惦饭祸孵黑辞缚会母疤低渊适跃刽绷耙砾捏成侵馆拨锣冀烹染哼要蕊最拭脐泪月奋蹲又够柏椎左靖外虹睬焊零玉埠赎吸歹桑楞霖并诣隅翱蹭涟婚决恫誓哥詹拢刑茹赫纪焦窟旬益给举肆佩曳宝靠策获沼塘硫秧联奈疽奶拧羊酵阵绚殴尝峰军妇绑梦悟陨概有坯夕焉奶蕊钠截蜕噪磁即赁牧赐葡适叮桶脯峪络滩京当低纳合房卯畔渐蝇阀箍艺鸽圆灾母簧辐缉椎愤哑帅婆热易盎杨甲轰浓欺卸椰黄天碟又锰赢感切跳埂悄孺泄霜车撬杆炒甩力亢今汰茫莽贼嘴坯锡尊弘鹿疑澡烂修貌染遍扁梧龋尖履詹龄吃匈熄坠稿痊汗侩沟誉栈底肥化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定UDC 668:576 .85.07 (GB7918.2-87) Standard methods of microbiological examination for cosmetics Standard plate count 细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌,数量。
化妆品微生物检查-细菌、真菌总数检查
5
14-09
Discussion
1.化妆品进行微生物总数检查的意义?
2.化妆品细菌、真菌总数检查的异同点?
3.化妆品细菌、真菌总数检查的流程?
4.化妆品细菌、真菌总数检查过程的注意事项?
5.化妆品细菌、真菌总数检查的结果判断?
6
14-09Pictຫໍສະໝຸດ res10g/ml 供 试品
1.0ml
10-2
10-1
1.6 2.2
4
5 6 7
9
不可计
27 不可计 0
4650
11 305 0
513
5 12 0
-
513000
270 30500 <1*10
513000或5.1*105
270或2.7*102 31000或3.1*104
9.0ml
稀 释 液
9.0ml
36℃±1℃
倒置培养48h±1h
对照
卵磷脂、吐 温80营养肉汤琼 脂
对照
1.0ml
倒置培养72h±2h
28℃±2℃ 虎红琼脂
对照
对照
14-09-01 化妆品细菌、真菌总数检查流程
7
14-09 霉菌
20 16/ 4/3 0
8
14-09
Tables
164 295 271 20 46 60
14-09
化妆品微生物检 验技术
(ZY12076.0)
1
14-09
D’accord!
2
14-09
化妆品微生物检查细菌、真菌总数检查
3
14-09
Review
比较细菌内毒素和外毒素? 唇膏样品的制备?
4
化妆品微生物标准检验方法总则的菌落计数及报告方法
化妆品微生物标准检验方法总则的菌落计数及报告方法6 菌落计数方法先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5~10倍的放大镜检查,以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后,求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时,该平皿不宜计数。
若片状菌落不到平皿中的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半个平皿菌落计数后乘以2,以代表全皿菌落数。
7 菌落计数及报告方法7.1 首先选取平均菌落数在30~300个之间的平皿,作为菌落总数测定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表1中例1)。
7.2 若有两个稀释度,其平均菌落数均在30~300个之间,则应求出两菌落总数之比值来决定,若其比值小于或等于2,应报告其平均数,若大于2则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数(见表1中例2及例3)。
7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30个,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1例5)。
7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300个之间,其中一个稀释度大于300个,而相邻的另一稀释度小于30个时,则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例6)。
7.6 若所有的稀释度均无菌生长,报告数为每g或每mL小于10CFU。
7.7 菌落计数的报告,菌落数在10以内时,按实有数值报告之,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,应以四舍五入法计算。
为了缩短数字后面零的个数,可用10的指数来表示(见表1报告方式栏)。
在报告菌落数为“不可计”时,应注明样品的稀释度。
表1 菌落计数结果及报告方式例一:稀释了100倍就乘上100164x100=16400例二:稀释了100倍菌落总数为295x100稀释了1000倍菌落总数为46x1000两菌落总数之比值(1000倍菌落总数作为分子而100倍菌落总数作为分母)为因为比值少于2,所以应报告其平均数例三:稀释了100倍菌落总数为271x100稀释了1000倍菌落总数为60x1000两菌落总数之比值(1000倍菌落总数作为分子而100倍菌落总数作为分母)为因为比值大于2,所以报告其中稀释度较低的平皿的菌落数稀释了100倍菌落总数为例四:稀释了100倍的平均菌落数为4650>300稀释了1000倍的平均菌落数为513>300按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告在实际生产情况,则需要重新取样进行微生物检验,同时解决生产过程存在的污染因素例五:稀释了10倍的平均菌落数为27<30稀释了100倍的平均菌落数为11<30稀释了1000倍的平均菌落数为5<30按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告27x10=270例六:稀释了100倍的平均菌落数为305接近300305x100=30500。
化妆品中菌落总数检验方法
化妆品中菌落总数检验方法菌落总数检验方法Aerobic Bacterial Count1 范围本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。
本规范适用于化妆品菌落总数的测定。
2 定义2.1 菌落总数 Aerobic bacterial count化妆品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度、培养时间、 pH值、需氧性质等),1g(1mL)检样中所含菌落的总数。
所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数。
测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度,是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
3 仪器和设备3.1 三角瓶,250mL。
3.2 量筒,200mL。
3.3 pH 计或精密 pH 试纸。
3.4 高压灭菌器。
3.5 试管,18mm×150mm。
3.6 灭菌平皿,直径 90mm。
3.7 灭菌刻度吸管,10mL、1mL。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱,36℃±1℃。
3.10 放大镜。
3.11 恒温水浴箱,55℃±1℃。
4 培养基和试剂4.1 生理盐水:见总则中 3.1。
4.2 卵磷脂、吐温 80—营养琼脂培养基成分:蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温 807g蒸馏水1000mL制法:先将卵磷脂加到少量蒸馏水中,加热溶解,加入吐温 80,将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中,溶解。
加入已溶解的卵磷脂、•吐温 80,混匀,调 pH 值为7.1—7.4,加入琼脂,121℃高压灭菌20min,储存于冷暗处备用。
4.3 0.5%氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chloride,TTC)成分:TTC0.5g蒸馏水100mL制法:溶解后过滤除菌,或 115℃高压灭菌 20min,装于棕色试剂瓶,置 4℃冰箱备用。
5 操作步骤5.1 用灭菌吸管吸取 1:10 稀释的检液 2mL,分别注入到两个灭菌平皿内,每皿 1mL。
化妆品微生物指标
化妆品微生物指标
化妆品微生物指标
卫法监发〔2002〕229号规定:
第5条:对产品的要求
5.1 化妆品的微生物学质量应符合下列规定
5.1.1 眼部化妆品及口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品菌落总数不得大于500CFU/mL 或500CFU/g。
5.1.2 其他化妆品菌落总数不得大于1000CFU/mL或1000CFU /g。
5.1.3 每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌。
5.1.4 化妆品中霉菌和酵母菌总数不得大于100CFU/mL或100CFU/g。
5.2 化妆品中所含有毒物质不得超过表1中规定的限量。
表1 化妆品中有毒物质限量
有毒物质限量,mg/kg备注汞1含有机汞防腐剂的眼部化妆品除外铅40含醋酸铅的染发剂除外砷10。
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化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定Standard methods of microbiological examination for determination of aerobic bacterial count 中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定UDC 668:576 .85.07GB7918.2-87Standard methods ofmicrobiological examination for cosmetics Standard plate countThe people's Republic of China National Standard for cosmeticsstandard methods of microbiological examination for UDC 668:576methods of microbiological examination for.85.07GB7918.287Standard cosmetics Standard plate count细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌,数量。
测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度,以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况,是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。
本标准采用标准平板计数法。
1 方法提要化妆品中污染的细菌种类不同,每种细菌都有它一定的生理物质性,培养时对营养要求,培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中,不可能做到满足所有菌的要求,因此所测定的结果,只包括在本方法所使用的条件下(在卵磷脂、吐温80营养琼脂上,于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。
2 培养基和试剂2.1 生理盐水:见GB 7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。
2.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分:蛋白胨 20g牛肉膏3g氯化钠 5g琼脂 15g卵磷脂 1g吐温80 7g蒸馏水 1000ml制法:先将卵磷脂加到少量蒸馏水中,加热溶解,加入吐温80将其他成分(除琼脂外)加到其余蒸馏水中,溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80,混匀,调pH值为7.1~7.2,加入琼脂,121℃(15 1b)20min高压灭菌,储存于冷暗处备用。
3 仪器3.1 锥形烧瓶。
3.2 量筒。
3.3 pH计或精密pH试纸。
3.4 高压消毒锅。
3.5 试管。
3.6 灭菌平皿:直径9cm。
3.7灭菌刻度吸管:10ml、2ml、1ml。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱。
3.10 放大镜。
4 操作步骤4.1 用灭菌吸管吸取1:10稀释的检样2ml,分别注入到两个灭菌平甲内,每皿1ml。
另取1ml 注入到9ml灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面),更换一支吸管,并充分混匀,使成1:100稀释液。
吸取2ml,分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1ml。
如样品含菌量高,还可再稀释成1:1000,1:10000,••••••等,每种稀释度应换1支吸管。
4.2 将熔化并冷至45~50℃的卵磷脂、吐温80、营养琼脂培养基倾注平皿内,每皿约15ml,另倾注一个不加样品的灭菌空平皿,作空白对照。
随即转动平皿,使样品与培养基充分混合均匀,待不琼脂凝固后,翻转平皿,置37℃培养箱内培养48h。
5 菌落计数方法先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5~10倍的放大镜检查,以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后。
求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时,该平皿不宜计数。
若片状菌落不到平皿中的一半,面其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半个平皿菌落计数后乘2,以代表全皿菌落数。
6 菌落计数及报告方法6.1 首先选取平均菌落数在30~300之间的平皿,作为菌落总数测定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表中例1)。
6.2 若有两个稀释度,其平均菌落数均在30~300个之间,则应求出两者菌落总数之比值来决定。
若其比值小于或等于2应报告其平均数,若大于2则报告其中较小的菌落数(见表中例2及例3)。
6.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
6.4 若所有稀释度的平均菌落数均少于30个,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。
6.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300个之间,其中一个稀释度大于300个,而相邻的另一稀释度小于30个时,则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例6)。
6.6 若所有的稀释度均无菌生长,报告数为每克或每毫升小于10个。
6.7 菌落计数的报告,菌落数在10以内时,按实有数值报告之,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,应以四舍五入法计算。
为了缩短数字后面零的个数,可用10的指数来表示(见下表报告方式栏)。
在报告菌落The total number of bacteria refers to that of 1G or 1ml cosmeticscontaining live bacteria, number. Determination of the total number of bacteria can be used to ascertain cosmetic is the degree of bacterial contamination, as well as production units used by the raw materials,tools, equipment, process flow, the health status of cosmetic,hygienic evaluation on the basis of the comprehensive. This standarduses the standard plate count method. The 1 method cosmeticcontaminated with bacteria of different types, each species of bacteria has its certain physiological material, when cultured onnutritional requirements, culture temperature, culture time, pH value,oxygen properties are different. In real work, is impossible to satisfy all demands of the bacteria, the results of determination, including only the conditions ( in lecithin, Twain 80 Nutrient Agar, in 37℃48h )growth of a mesophilic the chlorine and facultative anaerobicbacteria. 2 culture media and reagents 2.1 saline: see GB 7918-87 "standard methods of microbiological examination for ". 2.2 lecithin,Twain 80- nutrient agar culture medium composition: beef extractpeptone 20g 3G sodium chloride 5g agar 15g lecithin 1g Twain 80 7g1000ml distilled water preparation method : first the lecithin to small amounts of distilled water, heating to dissolve, joined Twain 80 otheringredients ( except agar outside) to the rest of the distilled water,dissolved. Add dissolved lecithin, Twain 80, blending, regulating pH value was 7.1~ 7.2, add the agar, 121 ℃( 15 1b ) 20min high pressure sterilization, storage in the cold dark alternate. The 3instruments of the 3.1 conical flask. 3.2 cylinder. 3.3 pH or pH testprecision. 3.4 high pressure sterilizing pot. 3.5 tube. 3.6 sterile Petri dish: diameter of 9cm. 3.7: 10ml, 2ml sterilization scale straw, 1ml. 3.8alcohol lamp. The 3.9 thermostatic culture box. 3.10 magnifier. 4steps of 4.1 sterilization straw draw a 1:10 dilution of the sample 2ml,injected into the two sterilization flat A, each dish 1ml. Another 1ml into the 9ml of sterile saline in vitro ( pay attention not to make strawcontact surface), replace a straw, and mixed thoroughly, make 1:100 dilution. Draw 2ml, injected into the two sterile Petri dish, each dish 1ml. Such as samples of bacteria content high, can be diluted to1:1000, 1:10000,•••, each dilution should change 1 straw. 4.2 will bemelted and cooled to 45 ~ 50 ℃lecithin, Twain 80, nutrient agar pourplate, each dish is about 15ml, the other into a sample of sterilizedempty Petri dish, as blank control. Then turning Petri dish, make the sample and the medium are fully mixed evenly, when agar solidified,turning Petri dish, is 37 ℃incubator culture 48h. In 5 the colony counting method to observed with the naked eye, number ofcolonies, then a magnification of 5 ~ 10 times magnificationendoscopy, to prevent the omission. Write down the plate after thecolony number. The same dilution of the Petri dish growth averagebacterial count. If the dish is connected into a lamellar colony or spending like colony spreading growth, not counting the Petri dish. If the lamellar colony to Petri dish in half, face the remaining half colony number in distribution is very uniform, may bring the half a Petri dishbacterium count by 2, to represent the whole dish colony number. 6colony counting and reporting method first selects 6.1 averagecolony number in 30 ~ 300 between the plate, as the colony determination range. When only a dilution of the average colonynumber is consistent with this range, namely in the Petri dish colony number by the dilution factor (see Table 1 ). 6.2 if two dilution, the average colony number all is in 30 ~300 between, should the colony total ratio to decide. If the ratio is less than or equal to 2 shall reportthe average, if greatercolony numberis greater than 300, it should be according to the dilution of the highest average colony number multiplied by the dilution multiplereport (see Table 4 ). 6.4 if all the dilution degree average colony number less than 30, they should be the dilution of the lowest average colony number multiplied by the dilution multiple report (seeTable 5 ). 6.5 if all the dilution degree average colony number is in 30 ~300 between, wherein a dilution is greater than 300, and the other adjacent dilutions less than 30, to close to 30 or 300 in theaverage colony number multiplied by the dilution multiple report (seeTable 6 ). 6.6 if all dilution are sterile growth, report number per gram or per ml of less than 10. 6.7 count report, colony number in 10 when, according to the actual numerical report, more than 100, with two significant digits, in two digits following numerical, should be fourto five homes in calculation. In order to reduce the numbers behindthe number of zero, can be used 10 index to express (see table below report column ). In the report as "not counting colonies ",should be marked sample dilution degree. Bacterial counting result and report method执行标准:GB/T 7918--1987Executive standard: GB/T 7918--1987细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌数量。