尿素酶法测尿素的原理
尿素呼气试验原理
尿素呼气试验原理及应用引言尿素呼气试验是一种非侵入性的检查方法，广泛应用于临床实践中，主要针对胃肠道疾病以及幽门螺杆菌感染的诊断。
本文将详细介绍尿素呼气试验的原理，主要从以下几个方面展开：尿素酶的催化活性、稳定同位素标记、气体收集、比值分析以及敏感性、特异性。
尿素酶的催化活性尿素酶是一种含有镍离子的酶，具有催化尿素分解成氨和二氧化碳的能力。
在尿素呼气试验中，尿素酶的催化活性至关重要。
当患者口服一定量的尿素后，尿素酶将尿素分解成氨和二氧化碳，这些气体随呼气排出。
通过收集和分析呼出气体中的二氧化碳浓度，可以判断肠道是否存在幽门螺杆菌感染。
稳定同位素标记稳定同位素标记是一种常用的示踪技术，通过在尿素分子中加入稳定的同位素（如13C），可以追踪尿素在体内的代谢过程。
在尿素呼气试验中，稳定同位素标记的尿素被口服后，经过肠道吸收，参与代谢过程。
通过分析呼出气体中13C的浓度，可以了解肠道对尿素的代谢情况，从而判断是否存在幽门螺杆菌感染。
气体收集气体收集是尿素呼气试验中的重要环节。
在患者口服尿素后，需要定时收集患者的呼出气体，并储存在密封的容器中。
收集到的气体样本需及时送检，以便进行后续的比值分析。
比值分析比值分析是提高尿素呼气试验敏感性和特异性的关键步骤。
通过比较患者口服尿素前后呼出气体中13C/12C的比值，可以判断肠道是否存在幽门螺杆菌感染。
正常情况下，口服尿素后，尿素的分解产物13C-CO2会随呼气排出，使得13C/12C比值升高。
而肠道存在幽门螺杆菌感染时，幽门螺杆菌会分泌大量的脲酶，加速尿素的分解，导致13C-CO2排出量增多，进一步增高13C/12C比值。
因此，通过比值分析，可以更准确地诊断肠道疾病。
敏感性、特异性尿素呼气试验的敏感性是指试验对肠道疾病的检出能力。
通常情况下，尿素呼气试验具有较高的敏感性，能够准确地检测出肠道存在的幽门螺杆菌感染。
然而，对于一些轻度感染或早期感染的患者，可能会出现假阴性结果。
快速尿素酶试验原理
快速尿素酶试验原理一、前言快速尿素酶试验是一种常用的检测幽门螺杆菌感染的方法。
该方法简便、快速，且具有较高的敏感性和特异性，被广泛应用于临床。
二、仪器和试剂1. 试剂(1) 快速尿素酶试剂：含有尿素和尿素酶的混合物。
通常为红色或黄色粉末状。
(2) 活化液：含有氢氧化钠和水的混合物。
2. 仪器(1) 快速尿素酶试验管：通常为透明塑料管。
(2) 无菌采样棒：用于采集胃黏膜组织。
三、实验步骤1. 准备工作(1) 将快速尿素酶试剂溶解在活化液中，制成浓度为0.5%的溶液。
(2) 准备无菌采样棒，并将其消毒。
2. 采集胃黏膜组织样本使用无菌采样棒采集胃黏膜组织样本，并将其放入快速尿素酶试验管中。
3. 加入快速尿素酶试剂将制备好的快速尿素酶试剂加入快速尿素酶试验管中，覆盖管口，并轻轻摇晃。
4. 观察反应观察快速尿素酶试验管中的颜色变化。
如果样本中存在幽门螺杆菌，则试剂会分解尿素产生氨气，导致溶液变为红色或黄色；否则，溶液颜色不变。
四、原理解析1. 幽门螺杆菌感染与胃黏膜组织幽门螺杆菌是一种革兰阴性的微生物，常定居于胃黏膜表面。
当幽门螺杆菌感染胃黏膜时，会引起胃炎、消化性溃疡等疾病。
2. 快速尿素酶试剂快速尿素酶试剂是一种含有尿素和尿素酶的混合物。
当该试剂与含有幽门螺杆菌的胃黏膜组织接触时，如果存在幽门螺杆菌，则细菌内部的尿素酶会分解尿素产生氨气，导致试剂溶液颜色变化。
3. 观察反应根据快速尿素酶试验管中的颜色变化，可以判断样本中是否存在幽门螺杆菌。
如果溶液变为红色或黄色，则说明样本中存在幽门螺杆菌；否则，说明不存在。
五、优缺点1. 优点(1) 简便快速：该方法只需几分钟即可完成检测，非常适合于临床应用。
(2) 敏感性高：该方法具有较高的敏感性和特异性，能够准确检测幽门螺杆菌感染。
(3) 无创伤：与其他检测方法相比，该方法无需进行胃镜检查等创伤性操作。
2. 缺点(1) 误诊率高：由于快速尿素酶试验只能检测是否存在幽门螺杆菌，而不能确定细菌数量和活动程度等信息，因此误诊率较高。
血清尿素测定(精)
样本（微升） 校准液（微升） 蒸馏水（微升） 试剂R1（微升） 试剂R3（微升）
测定 10
50 1000
混匀，置37摄氏度水浴恒温5分钟 试剂R4（微升） 1000
校准 10 50 1000
1000
空白
10 50 1000
1000
混匀，置37摄氏度水浴恒温5分钟，600纳米波长，以空白管调零，测定 各管吸光度值。
血清尿素测定
尿素的测定方法
尿素（urea）是氨基酸分解代谢的最 终产物，在肝脏合成，通过血液运至肾 脏，从尿中排除。检测尿素的方法有二 乙酰一肟法和酶法。二乙酰一肟法操作 简便，仍为大多数基层医疗单位所采用。
脲酶波氏法是我们今天实验课所选用的 酶法。
பைடு நூலகம்
实验原理
脲酶水解样本中的尿素，产生两分子氨和一分 子的二氧化碳。氨在碱性条件下与酚及次氯酸 反应，在亚硝基铁氰化钠催化作用下生成蓝色 化合物，与经过同样处理的校准液进行比较， 即可计算出样本中尿素的含量。（终点法）
方法局限性
1.尿液尿素也可用此法测定，但因浓度 高（超过28mmol/L），需先用去离子 水稀释。
再乘以稀释倍数。 2.试剂变混浊或空白吸光度大于0.150，
将不能使用，应弃去。 3.所用试验器材必须清洁，避免氨污染。 4.试剂含化学成分，应避免氨污染。
环功能不全、心功能不全，休克等引起肾血流 量减少，肾小球滤过率减低而使血中尿素潴留； ②肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能 衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎都可出现血 中尿素含量增高。③肾后性疾患：如前列腺肿 大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道 受压等都可能使尿路阻塞引起血液中尿素含量 增加。 2.血清尿素减少 较少见，尿素减少表示严重 肝病，如肝炎合并广泛性肝坏死。
尿素测定试剂盒(尿素酶-谷氨酸脱氢酶法)
尿素测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围：本试剂适用于体外定量检测人血清、血浆或尿液中尿素的浓度。
4 检验方法本试剂盒采用酶法测定尿素的浓度。
5 检验原理样品中的尿素在试剂中脲酶的催化下与水反应生成氨和二氧化碳，生成的氨与试剂中的α-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的催化下产生谷氨酸，同时NADH 被氧化为NAD+，从而使340nm处的光吸收值下降。
通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定计算出样品中尿素的浓度。
尿素＋H2O−−→−脲酶2NH3＋CO2NH3＋α-酮戊二酸＋NADH −−−→−GLDH谷氨酸＋NAD＋6 标本要求6.1 血清或血浆样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。
血浆样本应采用肝素钠或EDTA抗凝。
请勿使用氟化物防腐的血清和肝素铵抗凝的血浆样本。
6.2 尿液样本应用无氨污染的去离子水1:20稀释后再测试，结果乘以稀释倍数。
6.3 样本应于2℃~8℃保存，以免细菌分解尿素。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司尿素试剂盒（酶法）7.27.3试剂的稳定性与贮存7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
7.4试剂的变质指示若试剂混浊，或以水为空白在340 nm处吸光度值低于1.100A时，则不能使用。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 试剂空白：试剂空白吸光度：A≥1.100。
试剂空白吸光度变化率：△A/min≤0.04/min。
8.2.2 分析灵敏度：测试1mmol/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＜-0.005。
8.2.3 线性范围为0.2mmol/L～35.7mmol/L；线性相关系数r≥0.9900；[0.2，7] mmol/L范围内，线性绝对偏差应不超过±1.3mmol/L；（7，35.7] mmol/L范围内，相对偏差不超过±15％。
尿素测定方法的概述
尿素测定方法的概述【摘要】尿素是人体内蛋白质代谢的最终产物，由肝脏合成主要通过肾脏排出。
血清尿素的测定是临床上用于诊断和观察各种肾脏疾病的一项重要指标。
尿素浓度处于各个不同的医学决定水平有着不同的临床意义。
并且尿素的检测对慢性肾脏疾病的病程、病情观察及预后判断均有意义，但它并不是肾功能损伤的特异性指标[1]。
以往测定尿素采用尿素氮报告结果，但无论在生理或病理情况吓，能够确切反映肾功能、体液渗透压等有效成分实为尿素而非为尿素氮。
固现推荐统一采用尿素报告结果。
换算公式为：1mmol/L尿素氮=1/2mmol/L[2]。
【关键词】尿素;脲酶;比色法1 标本血清和肝素抗凝血浆在二乙酰一肟法，脲酶/GLDH，离子导电法中均可应用。
氟化物能抑制脲酶反应，故不能用氟化物作为血清的抗凝剂，肝素铵抗凝剂也不能在脲酶法中使用。
尿标本按照1：20到1：50稀释后，可用以上三种方法测定。
由于尿素易于被细菌降解，故血清和尿样品在分析前应放置在4—8℃。
2 测定方法血清尿素的测定是临床上用来诊断和观察各种肾脏疾病的重要生化指标，尿素的测定方法包括：氨电极法、脲酶-波氏法，脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联法，脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法等等[3]2.1 化学法2.1.1 二乙酰一肟显色法：尿素可与二乙酰作用，在强酸加热条件下，生成粉红色的二嗪化合物，在540nm比色，因二乙酰不稳定，常用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。
反应式如下：此法专一性差，线性范围狭窄，且试剂中含有烈性化学物，易腐蚀仪器和污染环境。
2.1.2 邻苯二甲醛比色法：尿素在强酸性环境下，与邻苯二甲醛缩合产生橙红色产物，比色测定之。
2.1.3 二苯吡喃醇比浊法：尿素与二苯吡喃醇结合形成不溶性沉淀，比色测定之。
[5]采用化学法检测尿素，特异性均不高，如瓜氨酸对二乙酰反应有正干扰；甘氨酸、精氨酸、瓜氨酸及磺胺类药物对邻苯二甲醛反应有正干扰。
加之要用强酸或强碱环境，或需要较高温度（90℃）反应，较难实现自动化，故这类方法已经较少使用[5] 。
纯度检测方法汇总
尿素的测定方法尿素的测定方法可分为两大类：一类直接法，尿素直接和某试剂作用，测定其产物，最常见的为二乙酰一肟法；另一类是尿素酶法，用尿素酶将尿素变成氨，然后用不同的方法测定氨。
1)尿素酶法（直接法）：尿素酶法利用尿素酶催化尿素水解生成铵盐，铵盐可用纳氏试剂直接显色、酚-次氯酸盐显色或酶偶联反应显色。
尿素测定目前多采用尿素酶偶联法：用尿素酶分解尿素产生氨，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下使NADH氧化为NAD+时，通过34 0nm吸光度的降低值可计算出尿素含量。
此反应是目前自动生化分析仪上常用的测定原理。
此外，尿素酶水解尿素产生氨的速率，也可用电导的方法进行测定，其电导的增加与氨离子浓度有关，反应只需要很短的时间，适用于自动分析仪。
2）酚-次氯酸盐显色法：尿素酶水解尿素生成氨和酚及次氯酸盐，在碱性环境中作用形成对-醌氯亚胺，亚硝基铁氰化钠催化此反应：对-醌氯亚胺同另一分子的酚作用，形成吲哚酚，它在碱性溶液中产生蓝色的解离型吲哚酚：此反应敏感，血清用量少（10μl），无需蛋白沉淀，一般用于手工操作测定中。
3)纳氏试剂显色法：尿素经尿素酶作用后生成氨，氨可与纳氏试剂（HgI2.2KI的强碱溶液）作用，生成棕黄色的碘化双汞铵。
尿素酶法的优点是反应专一，特异性强，不受尿素类似物的影响，缺点是操作费时，且受体液中氨的影响。
⑵二乙酰一肟法（直接法）：尿素可与二乙酰作用，在强酸加热的条件下，生成粉红色的二嗪化合物（Fearom反应），在54 0nm比色，其颜色强度与尿素含量成正比。
二乙酰不稳定，用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。
试剂中加入Fe3+或Cd2+及硫氨脲，可提高灵敏度，增加显色稳定性，其中Fe3+和Cd2+有氧化作用，还能消除羟胺的干扰作用。
提高酸的浓度可增加灵敏度。
二乙酰一肟与尿素的反应不是专一的，与瓜氨酸也有显色。
本法灵敏、简单，产生的颜色稳定，缺点是加热时有异味释放，一般临床已很少使用此方法。
尿素测定用血清或血浆，体液中尿素的浓度常用尿素中含有的氮来表示，称为尿素氮。
艾博信尿素(UREA)测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）说明书
尿素(UREA )测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）说明书【产品名称】尿素(UREA)测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）【包装规格】a)试剂1：2×45mL 试剂2：1×18mL b)试剂1：4×50mL 试剂2：2×20mL c)试剂1：2×100mL试剂2：2×20mL【预期用途】用于体外定量测定人体血清中尿素的含量。
尿素是人体含氮蛋白质代谢的终产物.血清中的尿素的含量是肾功能的一个重要指标，肾脏受损或组织蛋白分解增加，尿素的值会升高；而在肝脏受损或怀孕时，血清中的尿素会降低[1]。
【检验原理】尿素+H 2O−−→−尿素酶2NH 3+CO 2NH 3+α-氧代戊二酸+NADH +H +−−→−GLDH L-谷氨酸+NAD ++H 2O此反应速度与尿素含量成正比，在340nm 处，测定固定时间间隔内NADH 吸光度值的下降速率，下降速率与样本中的尿素含量成正相关。
【主要组成成分】试剂1主要组分Tris 缓冲液100mmol/L 尿素酶20KU/L α-氧代戊二酸5.0mmol/L 谷氨酸脱氢酶（GLDH ）15KU/LProClin300适量试剂2主要组分Tris 缓冲液100mmol/L 还原型辅酶Ⅰ（NADH ）0.25mmol/LProClin300适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】贮存于2～8℃，有效期为18个月，生产日期、有效期见标签。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI 7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT 008AS 型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR /TBA-2000FR ；罗氏cobas 8000c 702/cobas 8000c 701/cobas 8000c 502；西门子SIEMENS ADVIA 1800/ADVIA 2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C ；科华KHB 卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-1400；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M ；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray 420；英诺华D280；特康TC6010L ；锦瑞GS400；普康6066。
实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）.doc
实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。
2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。
在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。
其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。
2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。
3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。
（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。
表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。
生化实验六脲酶测定参考
实验六脲酶测定一、实验原理有些生物化学反应中指示反应完成，经常使用直观的指示剂指示，如氧化还原指示剂和酸碱指示剂。
氧化还原指示剂是氧化状态下和还原状态下各有不同颜色；酸碱指示剂是指示生物化学反应前后溶液的酸碱度变化，不同酸碱度各有不同颜色。
这里进行一次酶促反应试验，人的血液中和尿液中都含有尿素，尿素的含量变化是许多病变的重要指标。
尿酶可作用于尿素，它的反应如下：(NH2)2C=O + H2O 尿酶2NH3 +CO2尿酶可以定量测定尿素含量，尿酶通常可从大豆粉中提取，本试验用大豆粉和玉米粉提取尿酶，通过上述反应观察两种植物种子中尿酶的含量。
在与底物尿素的作用反应中，分别加入三种指示剂A、B、C，但在制备指示剂的过程中忘记了瓶号，只知道三种是中性红、百里香酚兰和亚甲兰，其中有酸碱指示剂和氧化还原指示剂。
二、实验目的1、确定两种植物种子中谁含大量的脲酶；2、分出谁是氧化还原指示剂，谁是酸碱指示剂。
三、实验器材及试剂1、仪器设备电子天平，4只100ml三角瓶，14支试管，试管架，2个三角漏斗，50ml量筒，玻璃棒，移液器及吸头，脱脂棉2、试剂30%乙醇溶液，2%尿素溶液，指示剂A,B,C(中性红，亚甲蓝，百里香酚蓝）3、材料大豆粉，玉米粉四、实验准备仪器设备：电子天平（每五组一个，共5个/班），4只100ml三角瓶（共需要100个/班），14支试管（共需要350支/班），试管架（25个/班），2个三角漏斗（共需要50个/班），50ml量筒（25个/班），玻璃棒（25根/班），移液器及吸头（蓝，黄吸头各一盒，每种各25盒/班），脱脂棉（若干每组，尽量多一些）试剂：30%乙醇溶液（80ml/组，共2L/班），2%尿素溶液（12ml/组，共300ml/班），指示剂A,B,C(中性红，亚甲蓝，百里香酚蓝）（各需2滴或3滴，适合即可）材料：大豆粉，玉米粉（每组各2g，一共需要各50g/班）备注：30%乙醇溶液：去30ml无水乙醇荣誉70ml水中。
尿素酶活性快速测定法——酚红法(粗略法)
一、实验原理：
尿素酶+尿素 氨气（用酚红作指示剂）
二、实验试剂
2.1 。
2.2 0.1N硫酸：将2.77ml浓硫酸加入1000ml水中稀释。
2.3 尿素—酚红溶液配制：
0.14g酚红溶于35ml水中+7ml 0.1N氢氧化钠
混合 0.1N硫酸滴定 琥珀色
21g尿素溶于300ml水中
三、实验方法：
将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿(培养皿)中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全浸湿，停留5min，观察豆粕的红色反应。
少量红点
微量活跃（△pH=0.05-0.10）
约25%红点
中度活跃（△pH=0.10-0.25）
约50%红点
活跃（△pH=0.30-0.50）
约75%红点
非常活跃（△pH≧2.0）
5min没红点出现，停留25min任无
豆粕过熟
四、注意事项：
尿素-酚红溶液保质期90天，过期重新配制。
尿素酶活性定性检测
尿素酶的测定1.试剂:1.10.62%苯酚红乙醇溶液2、测定方法:将试样粉碎,称0.2g试样转入试管中,加入0.2g结晶尿素,3-5滴苯酚红指示剂，加20-30mL蒸馏水摇动10秒钟，于30度水浴中观察溶液颜色，记录呈现粉红色时的时间。
3、尿素酶活性的结果表示：1min内呈粉红为:活性很强;区1-5 min内呈粉红为:活性强;5-15 min内呈粉红为:有点活性;15--30 min内呈粉红为: 无活性;美国大豆协会方法：1、原理：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。
2、试剂：2.1 稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，带滴管。
2.2 尿素—酚红试剂：a、将1.2克酚红溶解于30毫升0.2N的NaOH中；b、用蒸馏水将之稀释至300毫升；c、加入90克尿素并溶解之，用蒸馏水稀释至2升；d、加入14毫升1.0N的H2SO4（或0.2N的H2SO4），用蒸馏水稀释至3升；e、溶液应具明亮的琥珀色。
3、测定步骤：3.1在一个150毫升的烧杯中到入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。
若溶液已转为深橘红色，滴入稀硫酸溶液并搅拌之，直至溶液再度呈琥珀色。
3.2量一汤匙粉碎好的豆粕粉，放置于培养皿中，在样品上加入两汤匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。
若仍有干豆粕斑点，则再加入试剂，直至将豆粕浸湿。
3.3放置5分钟后观察：No.1 没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆粕过熟。
No.2 有少数红点：少量尿素酶活性，豆粕可用。
No.3 豆粕表面约有25%为红点覆盖：少量尿素酶活性，豆粕可用。
No.4 豆粕表面约有50%为红点覆盖：有尿素酶活性。
No.5 豆粕表面约有75-100%为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应该接受这种原料，因为豆粕过生。
酶法测定水中的尿素含量
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酶法测定水中的尿素含量
柳畅先, 徐 立
(中南民族学院化学系, 武汉 430074)
摘 要: 利用脲酶、谷氨酸脱氢酶偶联催化尿素水解的原理, 通过测定还原型烟 酰胺腺嘌呤二核苷酸吸光度变化率得出其酶促反应速度, 对应不同的尿素浓度 制得标准曲线。 讨论了 pH 值和抑制剂对测定的影响, 实测了水样中尿素的含 量。 关键词: 尿素; 酶法测定; 水样
2000, 19 (5) : 18～ 20 Abstract: Coup led enzym es of u rea se and g lu tam ic dehyd rogena se w ere u sed to ca ta lyze hyd ro ly sis of u rea. T he ra te of ab so rbance change of n ico t inam ide aden ine d inucleo t ide, reduced fo rm (NADH ) w a s determ ined to ob ta in the velocity of the enzym a t ic react ion, and the w o rk in cu rve w a s u sed to determ ine u rea in sam p les. T he effect of pH and inh ib ito r w a s d iscu ssed. Keywords: U rea; Enzym a t ic determ ina t ion;W a ter
分解尿素的细菌的鉴定方法和原理
分解尿素的细菌的鉴定方法和原理
分解尿素的细菌的鉴定方法主要有尿素酶试验和分子生物学方法。
尿素酶试验是通过检测细菌是否产生尿素酶来鉴定分解尿素的能力。
方法为将待测细菌接种于含有尿素的培养基，经过一定时间后，通过酚红指示剂的颜色变化来判断细菌是否能分解尿素。
颜色变为深粉红色则为阳性反应，表示该细菌具有分解尿素的能力。
分子生物学方法主要利用PCR扩增和基因测序技术，检测尿素酶编码基因（如ureC等）的存在与否来鉴定分解尿素的能力。
方法为提取待测细菌的基因组DNA，通过PCR扩增目标基因，利用DNA测序技术对扩增产物进行测序，最终通过分析序列信息来判断细菌是否具有分解尿素的能力。
综上所述，两种方法都可以用来鉴定分解尿素的细菌，其中尿素酶试验的方法简单易行，但存在某些细菌尿素酶缺失或变异的情况下可能出现假阴性结果；分子生物学方法检测结果更为准确和可靠，但操作过程较复杂和耗时。
因此，在实际应用中需要根据具体情况选择适当的方法进行细菌鉴定。
尿素酶的实验报告
一、实验目的1. 了解尿素酶的催化作用及其专一性。
2. 掌握尿素酶活性测定的原理和方法。
3. 分析不同条件对尿素酶活性的影响。
二、实验原理尿素酶是一种广泛存在于生物体内的酶，主要存在于微生物和某些植物中。
它可以将尿素分解为氨和二氧化碳，该反应在生物体内具有重要的生理意义。
本实验通过测定不同条件下尿素酶的活性，来探讨其催化作用和专一性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 尿素- 氨标准溶液- 水浴锅- 移液器- 试管- 酶提取液- pH计- 温度计- 比色计2. 实验试剂：- 0.1 mol/L的尿素溶液- 0.1 mol/L的氨标准溶液- Tris-HCl缓冲液（pH 7.0）- 0.1 mol/L的NaOH溶液- 0.1 mol/L的HCl溶液四、实验步骤1. 酶提取液的制备：- 将酶源（如微生物）在无菌条件下培养，收集菌体。
- 将菌体用无菌水洗涤，然后用匀浆机进行匀浆。
- 将匀浆液离心，收集上清液即为酶提取液。
2. 尿素酶活性测定：- 在试管中加入一定量的酶提取液和尿素溶液，调节pH至7.0。
- 将试管置于37℃水浴锅中，每隔一定时间取出，用氨标准溶液滴定产生的氨，直至颜色变化。
- 计算尿素酶活性，单位为U/mL。
3. 不同条件对尿素酶活性的影响：- pH值：分别将酶提取液和尿素溶液的pH值调节至4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，进行尿素酶活性测定。
- 温度：分别将酶提取液和尿素溶液在0℃、25℃、37℃、50℃、65℃、80℃下进行尿素酶活性测定。
- 抑制剂：向酶提取液中加入一定浓度的抑制剂（如氟化物、碘化物等），进行尿素酶活性测定。
五、实验结果与分析1. 尿素酶活性测定结果：- 在不同pH值条件下，尿素酶活性最高时pH值为7.0。
- 在不同温度条件下，尿素酶活性最高时温度为37℃。
- 抑制剂对尿素酶活性有抑制作用。
2. 不同条件对尿素酶活性的影响分析：- pH值：尿素酶活性受pH值影响较大，最适pH值为7.0。
尿素的检测方法
尿素的检测方法
尿素是一种常见的有机化合物，在医学和农业领域有着重要的应用。
以下是常用的尿素检测方法：
1. 红色试剂法：将待测尿素样品与含有巴比妥酸钠和钡水合物的试剂混合，将其加热至沸腾，通过比色法观察产生的红色沉淀的形成程度来判断样品中尿素的含量。
2. 氨自由便：将待测尿素样品与较强的碱液（如钠氢氧化物）反应，生成氨气。
可以通过导纸法或气相色谱法来定量测定氨气的含量，从而间接推断尿素的含量。
3. 酚酞法：将待测尿素样品与酚酞溶液混合，酚酞可被尿素催化氧化生成红色产物。
通过比色法测定红色产物的光密度，从而确定尿素的含量。
4. 酶法：使用尿素酶（如尿酸酶），将待测尿素样品与酶反应，通过测定反应中产生的酶促反应产物（如尿酸）的含量来间接测定尿素的含量。
这些方法各有优缺点，在实际应用中可以根据需要和条件选择合适的方法进行尿素的检测。
尿酶测定方法
脲酶urease（水解酶）：脲酶试验原理：存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶、能酶促有机物质分子中酶键的水解。
脲酶的作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法是测定生成的氨量。
试剂：1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克柠檬酸和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。
将AB溶液保存在冰箱中。
使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：a 精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液标准曲线绘制：吸取配置好的氮溶液10ml，定容至100ml，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13ml移至50ml容量瓶，加水至20ml，再加入4ml苯酚钠，仔细混合，加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
1) 称取5g过1mm筛的风干土样于100ml容量瓶中。
2) 向容量瓶中加入1ml甲苯（以能全部使土样湿润为度）并放置15分钟3) 之后加入10ml 10％尿素溶液和20ml柠檬酸缓冲液（PH6.7），并仔细混合4) 将容量瓶放入37摄氏度恒温箱中，培养24h5) 培养结束后，用热至38摄氏度水稀释至刻度，仔细摇荡，并将悬液用致密滤纸过滤于三角瓶中。
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尿素酶法测尿素的原理
尿素酶法是一种常用的测定尿素含量的方法，其原理是利用尿素酶催化尿素水解为氨和二氧化碳，然后测定产生的氨量，在一定条件下可以与尿素含量成正比关系。
具体操作步骤如下：
1. 将待测样品加入含有尿素酶的反应液中。
2. 尿素酶催化尿素水解产生氨和二氧化碳。
3. 在一定温度和pH值下，利用比色法、滴定法或电化学法等方法测定产生的氨量。
4. 根据标准曲线，计算出样品中尿素的含量。
尿素酶法测尿素的优点是反应条件温和，灵敏度高，特异性好，适用于各种样品类型的尿素测定。