脑脊液常规操作规程

1．检验目的

指导脑脊液（CSF)常规测定。

2．方法原理

2.1脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。由于脉络丛上皮细胞对血浆

中各种物质的选择性分泌和超滤作用，血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不同。其中最易通过血脑屏障的是氯、钠、镁离子及乙醇;其次为清蛋白、葡萄糖、钙离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、胆固醇则极难或不能通过。中枢神经系统任何部位发生器质性病变时，如感染、炎症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。通过对脑脊液理学检查，显微镜检查、化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治疗和预后判断提供依据。

2.2脑脊液（CSF）常规测定内容包括:颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、潘

氏试验、细菌等。

2.3潘氏（pandys)试验：CSF中的球蛋白和苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白

色混浊或沉淀。

3．方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特

1 颜色（COLOR) 6 中性粒细胞（NE)

2 透明度（clearity) 7 淋巴细胞（LY）

3 凝固性（coagulability） 8 单核细胞（MO）

4 脑脊液有核细胞计数（CSF—NUCL) 9 潘氏试验（pandys test）

5 脑脊液红细胞计数（CSF—RBC)

4.标本类型

4.1标本类型：新鲜CSF。

4.2标本拒收条件：拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。

4.3标本保存和稳定性：一般室温1h内完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数

及分类检查。

5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统

5.1标本容器：BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。

5.2试剂

5.2.1试剂组分：

生理盐水0.9%Nacl溶液

白细胞稀释液1%冰乙酸（1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml)

刘氏快速瑞氏染色液 A液：曙红、甲醇

B液：亚甲蓝

潘氏试剂10%苯酚溶液（纯苯酚10ml+蒸馏水至100ml）

5.2.2 试剂存储和有效期：

试剂名称存储条件有效期开瓶有效期位置

生理盐水室温1年1年存货柜/血常规室操作台

冰乙酸室温2年1年药品柜

1%乙酸冷藏1年1年试剂冰箱

10%苯酚溶液室温1年1年药品柜

刘氏快速瑞氏染色液室温2年6个月药品柜/染色操作台

5.3仪器：OLYMPUS光学显微镜，血细胞计数板。

6. 校准程序（计量学溯源性）

不适用

7. 质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施

不适用

8. 程序步骤

8.1一般性状检查：轻轻混匀CSF，观察量、颜色、有无凝块和透明度（一般细胞数≥300 /μl个时或蛋白增加可产生混浊），并记录。

8.2显微镜检查

8.2.1细胞计数（无凝块标本）

（1）清或微混标本：a) 混匀后直接冲入计数池，计数四角四大方格内细胞总

数（包括RBC，NUCL）。

b) 用白细胞稀释液作1：1稀释，计数有核细胞数

c) 红细胞数＝细胞总数－有核细胞数

（当白细胞数≥30个/μl时，在白细胞计数池中直接分类至少50个白细胞）

（2）混浊及以上标本：

外观稀释样本量稀释液/溶解剂

粉色/轻度混浊1:20 20μl 380μl

红色/混浊1:50 10μl 490μl

带血量极高/极度混浊1:100 10μl 990μl

a)稀释标

本：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数细胞总数；

b)溶解RBC：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数有核细胞数；

c)冲池；计数

d)红细胞数=细胞总数－有核细胞数

8.2.2 有凝块或粘稠标本：

（1）用吸管旋转并挤压凝块，挤出里面的液体及细胞。

（2）2000rpm×5min离心，分离上清液和沉渣。

（3）混匀沉渣，涂片，用高倍镜观察NUCL、RBC。

（4）报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。

8.2.3离心获取沉渣和上清液：将完成计数的CSF离心，2000rpm×5min离心,吸出上

清液于另一试管，并在试管上编号。

8.2.4瑞氏染色：当NUCL>106/μl时进行操作。将沉渣混匀涂片，厚薄根据有核细

胞数而定，血性标本可考虑推片。待干后，瑞氏染色进行分类（分 100个NUCL）；如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时，应请示

上级主管，由有经验的上级主管进行分析，并在报告时另行描述报

告，如脑膜白血病或肿瘤细胞等。

8.3潘氏试验

8.3.1试验操作：取小试管一支，加入10%的石碳酸水溶液约5ml，用一次性吸管

加一滴CSF上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。

8.3.2结果判定：阴性：清晰透明。

弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。

阳性（+）：灰白色云雾状。

（2+）：白色浑浊。

（3+)：白色浓絮状沉淀。

（4+）：白色凝块。

9. 计算结果原理

9.1颜色

9.1.1红色：常见于穿刺损伤或出血性病变。

为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意：

(1)离心沉淀后：如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出

血，且出血时间已经超过4小时。如上层液体澄清无色，红细胞均沉

管底，多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血。

（2）红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺损伤引起出血时也可看

到，因脑脊液渗透压较血浆高所致。