医学免疫学T淋巴细胞
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医学免疫学-10[Tlymphocyte]
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TCRαβ
异二聚体组成 V区基因数目 在TL分化中 TL细胞表型 分布
TCRγδ
α β γ δ α 链 50（V、J、C） γ 链 7 （ V 、J 、C ） β 链 57（V、D、J、C） δ 链 10（V、D、J、C） 出现较迟 出现较早 CD4阳性、CD8阳性细胞 CD4阴性、CD8阴性细胞 大多数外周成熟TL 定居在组织、上皮中的TL ＋ —
26
CD28和CTLA-4作用
27
⑵、 ICOS
ICOS (inducible co-stimulator) 组成： 配体：B7-H2 分布：活化T细胞 功能： • 类似于CD28的协同刺激分子 • 作用迟于CD28
28
⑶、 PD-1
(programmed death 1) 组成： 配体：PD-L1、PD-L2 分布：活化T细胞 功能： • 抑制T细胞增殖和细胞因子产生 • 抑制B细胞增殖、分化和Ig分泌
发挥效应作用的方式
细胞接触，分泌细胞 主要依赖细胞因子 因子（TGF-β、IL-10、 （TGF-β、IL-10) ， IL-35) 细胞接触
抑制自身反应性T细 胞应答 抑制自身损伤性炎症反 应和移植排斥反应，有 利于肿瘤生长
46
功能
T 淋巴细胞
• 一、T淋巴细胞的分化发育 • 二、T淋巴细胞的表面分子及其作用 • 三、T淋巴细胞的亚群 • 四、T淋巴细胞的功能
(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs， ITAM)
（2）功能 ① 参与T细胞发育过程中的TCR的膜表面表达 ② 介导TCR与抗原接触后产生的活化信号的传递 ③ 成熟T细胞表面的表面标志，用于成熟T细胞的检测
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异二聚体组成 V区基因数目 在TL分化中 TL细胞表型 分布
TCRγδ
α β γ δ α 链 50（V、J、C） γ 链 7 （ V 、J 、C ） β 链 57（V、D、J、C） δ 链 10（V、D、J、C） 出现较迟 出现较早 CD4阳性、CD8阳性细胞 CD4阴性、CD8阴性细胞 大多数外周成熟TL 定居在组织、上皮中的TL ＋ —
26
CD28和CTLA-4作用
27
⑵、 ICOS
ICOS (inducible co-stimulator) 组成： 配体：B7-H2 分布：活化T细胞 功能： • 类似于CD28的协同刺激分子 • 作用迟于CD28
28
⑶、 PD-1
(programmed death 1) 组成： 配体：PD-L1、PD-L2 分布：活化T细胞 功能： • 抑制T细胞增殖和细胞因子产生 • 抑制B细胞增殖、分化和Ig分泌
发挥效应作用的方式
细胞接触，分泌细胞 主要依赖细胞因子 因子（TGF-β、IL-10、 （TGF-β、IL-10) ， IL-35) 细胞接触
抑制自身反应性T细 胞应答 抑制自身损伤性炎症反 应和移植排斥反应，有 利于肿瘤生长
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功能
T 淋巴细胞
• 一、T淋巴细胞的分化发育 • 二、T淋巴细胞的表面分子及其作用 • 三、T淋巴细胞的亚群 • 四、T淋巴细胞的功能
(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs， ITAM)
（2）功能 ① 参与T细胞发育过程中的TCR的膜表面表达 ② 介导TCR与抗原接触后产生的活化信号的传递 ③ 成熟T细胞表面的表面标志，用于成熟T细胞的检测
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医学免疫学-第十章 T淋巴细胞
• 可诱导细胞凋亡的FaSL（CD95） • 常见的丝裂原
– 植物血凝素（PHA）和刀豆蛋白（ConA） ---T细胞
– 美洲商陆（PWM）---T细胞和B细胞
第三节 T细胞的分类和功能
• 根据所处的活化阶段分类
– 初始T细胞；效应T细胞；记忆T细胞
• 根据TCR类型分类
– T细胞；T细胞
B7-H2
三、共刺激分子
4. PD-1（programmed death 1）
– 表达于活化的T细胞，配体为PD-L1和PD-L2。 – 可抑制T细胞的增殖以及IL-2和IFN-等细胞因子的
产生，并抑制B细胞的增殖、分化以及Ig的分泌。 – 参与外周免疫耐受的形成。
三、共刺激分子
5. CD2（LFA-2）
• TCR T细胞
– 占脾脏、淋巴结和循环T细胞的95%以上。
• TCR T细胞
– 分布于皮肤和黏膜组织处，识别抗原无MHC限制性； – 识别由CD1分子提呈的糖脂、糖蛋白、HSP等； – 抗感染和抗肿瘤； – 活化后，通过分泌多种细胞因子发挥免疫调节作用，介
导炎症反应。
T细胞和T细胞的比较
第一节 T细胞的分化发育
• T细胞在胸腺内的发育
功能性TCR的表达、自身MHC限制性和自身耐受的形成
• T细胞在外周淋巴器官中的增殖分化
• 成熟的淋巴细胞接受抗原刺激后活化、增殖，并分化为 效应细胞，产生效应分子，识别清除相应抗原。
一、T细胞在胸腺中的发育
一、T细胞在胸腺中的发育
• 胸腺：
– 胸腺基质细胞、细胞外基质、细胞因子。
• DP细胞分化为SP 细胞。
（四）T细胞发育过程中的阴性选择
• 阴性选择（negtive selection）：
– 植物血凝素（PHA）和刀豆蛋白（ConA） ---T细胞
– 美洲商陆（PWM）---T细胞和B细胞
第三节 T细胞的分类和功能
• 根据所处的活化阶段分类
– 初始T细胞；效应T细胞；记忆T细胞
• 根据TCR类型分类
– T细胞；T细胞
B7-H2
三、共刺激分子
4. PD-1（programmed death 1）
– 表达于活化的T细胞，配体为PD-L1和PD-L2。 – 可抑制T细胞的增殖以及IL-2和IFN-等细胞因子的
产生，并抑制B细胞的增殖、分化以及Ig的分泌。 – 参与外周免疫耐受的形成。
三、共刺激分子
5. CD2（LFA-2）
• TCR T细胞
– 占脾脏、淋巴结和循环T细胞的95%以上。
• TCR T细胞
– 分布于皮肤和黏膜组织处，识别抗原无MHC限制性； – 识别由CD1分子提呈的糖脂、糖蛋白、HSP等； – 抗感染和抗肿瘤； – 活化后，通过分泌多种细胞因子发挥免疫调节作用，介
导炎症反应。
T细胞和T细胞的比较
第一节 T细胞的分化发育
• T细胞在胸腺内的发育
功能性TCR的表达、自身MHC限制性和自身耐受的形成
• T细胞在外周淋巴器官中的增殖分化
• 成熟的淋巴细胞接受抗原刺激后活化、增殖，并分化为 效应细胞，产生效应分子，识别清除相应抗原。
一、T细胞在胸腺中的发育
一、T细胞在胸腺中的发育
• 胸腺：
– 胸腺基质细胞、细胞外基质、细胞因子。
• DP细胞分化为SP 细胞。
（四）T细胞发育过程中的阴性选择
• 阴性选择（negtive selection）：
10T淋巴细胞
功
能
初始T细胞 效应T细胞 记忆T细胞
初次应答识别Ag 炎症部位起效应 再次免疫应答
z
z
同上
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二、按细胞膜表面表达的TCR类型分为 TCRαβ＋T细胞（αβT细胞） 参与特异性细胞IR，辅助体液IR TCRγδ＋T细胞（γδT细胞） 参与非特异性IR
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(2) Tr1细胞 Tr1 分泌IL-10 抑制Mφ 间接抑 制细胞Ir
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复习思考题
一、概念 TCR,Th细胞,CTL,初始T细胞 二、T细胞表面有哪些重要分子？其功能 是什么？ 三、简述T细胞亚群分类及其功能。 四、简述CTL细胞的杀伤机制和特点。
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㈡ CTL细胞/Tc细胞
TCRαβ CD8+T细胞：特异性杀伤 CTL TCR γδ+T细胞 NKT细胞
（适应性免疫）
非特异性杀伤
（固有免疫）
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返回
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CTL根据其分泌的CKs不同分为2个亚群： ¾Tc1细胞：主要分泌 IFNγ； ¾Tc2细胞：主要分泌 IL-4、IL-5和IL-10
CD4+T细胞分化为Th0，Th0分化为四种Th亚型
Th1：分泌IL-2,IFN- γ等 Th0 Th2： 分泌IL-4,5,6,10等 Th3： TGF -β Th17：分泌IL-17
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细胞IR 体液IR
负调节
固有免疫、炎症发生
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㈡ CD4+Th 细胞分化的调节
(人卫5版医学免疫学)第十章 T淋巴细胞
三、协同刺激分子
• • • • • • • CD28 CTLA-4（CD152) ICOS PD-1 CD2 CD40L（CD154） LFA-1和ICAM-1
CD28
• 表达：两条相同肽链组成的同 源二聚体，表达于90%CD4+T 细胞和50%CD8+T细胞。 • 功能：与B7（B7.1 、 B7.2/CD80、CD86）结合， 在T细胞活化中发挥重要作用。
第十章
T淋巴细胞
第一节 T淋巴细胞的分化发育
•T细胞在胸腺中的发育 •T细胞在外周淋巴器官中的分化发育
一、T细胞在胸腺中的发育
T细胞在胸腺发育过程中获得功能性TCR的 表达、自身MHC限制以及自身免疫耐受。
依据CD3以及辅助受体CD4和CD8的表达
双阴性阶段：TN细胞（triple negative cell， CD3-CD4-CD8-） DN细胞（double negative cell，
二、CD4分子和CD8分子
• 成熟的T细胞只表达CD4或CD8分子。
• 主要功能是辅助TCR识别抗原和参与T细胞 活化信号的传导，又称为T细胞的辅助受体。
CD4分子
• 单链跨膜蛋白； • 表达：60％-65％αβT细胞及部 分NKT细胞； • 功能：可与MHCⅡ类分子β2结 构域结合，增强T细胞与APC之 间的相互作用并辅助TCR识别抗 原，参与TCR识别抗原所产生的 活化信号传导过程。 • 是HIVgp120的受体。
• 所有T细胞表面的特征性标志。
• 结构：TCR是由两条不同肽链构成的异二聚
体，分别为、链（ 95%-99% ）或、链
（1%-5%），含V区和C区。
• 功能：识别抗原肽-MHC分子复合物。 具有双重特异性
医学免疫学 淋巴细胞
tyrosinebased activation motif）结构 ➢功能：向胞内传导抗原活化信号
ITAM：ITAM是由15-19个氨基酸残基组成，含 有两个YxxL/V保守序列，当 TCR 与抗原特异 性结合时，保守序列中的酪氨酸可在酪氨酸激 酶的作用下磷酸化，由此引起信号传导的级联 反应，导致T细胞的活化。
2、阳性选择（positive selection）
DP—SP （未成熟T细胞）
• 凡所表达TCR 能够以适当亲和力结合胸腺皮质内 上皮细胞表面的抗原肽-MHCI/II类分子复合物的 双阳性胸腺细胞被选择而存活
• 凡所表达TCR 不能有效结合或高亲和力结合抗原 肽-MHCI/II类分子复合物的双阳性胸腺细胞则自 行凋亡
SP（未成熟T细胞）
• 凡TCR与自身Ag肽-MHC分子复合物高亲和 力结合的单阳性胸腺细胞，发生凋亡
• 凡TCR与自身Ag肽-MHC分子复合物低亲和 力结合或不结合的单阳性胸腺细胞，则存活
• 结果: 清除自身反应性T细胞，获得自身耐受
三、TCR多样性产生的机制
1. TCRαβ的基因结构 αchain (14 chromosome): V, J, C βchain (7 chromosome): V, D, J, C 2.TCRγδ的基因结构 γchain (7 chromosome): V, J, C δchain (14 chromosome): V, D, J, C
二、T细胞胸腺内成熟过程的主要事件
三事件： • TCR基因重排 • 阳性选择 • 阴性选择
1、TCR受体基因重排
DN－DP阶段 （祖T细胞、前T细胞、未成熟T细胞）
• TCRβ基因重排
– pTα∶β/ CD3 – CD4; CD8
ITAM：ITAM是由15-19个氨基酸残基组成，含 有两个YxxL/V保守序列，当 TCR 与抗原特异 性结合时，保守序列中的酪氨酸可在酪氨酸激 酶的作用下磷酸化，由此引起信号传导的级联 反应，导致T细胞的活化。
2、阳性选择（positive selection）
DP—SP （未成熟T细胞）
• 凡所表达TCR 能够以适当亲和力结合胸腺皮质内 上皮细胞表面的抗原肽-MHCI/II类分子复合物的 双阳性胸腺细胞被选择而存活
• 凡所表达TCR 不能有效结合或高亲和力结合抗原 肽-MHCI/II类分子复合物的双阳性胸腺细胞则自 行凋亡
SP（未成熟T细胞）
• 凡TCR与自身Ag肽-MHC分子复合物高亲和 力结合的单阳性胸腺细胞，发生凋亡
• 凡TCR与自身Ag肽-MHC分子复合物低亲和 力结合或不结合的单阳性胸腺细胞，则存活
• 结果: 清除自身反应性T细胞，获得自身耐受
三、TCR多样性产生的机制
1. TCRαβ的基因结构 αchain (14 chromosome): V, J, C βchain (7 chromosome): V, D, J, C 2.TCRγδ的基因结构 γchain (7 chromosome): V, J, C δchain (14 chromosome): V, D, J, C
二、T细胞胸腺内成熟过程的主要事件
三事件： • TCR基因重排 • 阳性选择 • 阴性选择
1、TCR受体基因重排
DN－DP阶段 （祖T细胞、前T细胞、未成熟T细胞）
• TCRβ基因重排
– pTα∶β/ CD3 – CD4; CD8
淋巴细胞分类和标记
淋巴细胞是免疫系统中的一种白细胞，它们在机体的免疫反应和免疫防御中发挥着核心作用。
根据功能、形态和表面标志物的不同，淋巴细胞主要可以分为以下几类：
1. T淋巴细胞（T细胞）：
- 标记：CD3+，这是所有成熟T细胞的共同标记。
进一步细分，有：
- 辅助性T细胞（Helper T cells, Th细胞）：通常表达CD4分子，如Th1、Th2、Th17等亚群。
- 细胞毒性或抑制性T细胞（Cytotoxic or Suppressor T cells, Tc/Ts细胞）：主要表达CD8分子。
2. B淋巴细胞（B细胞）：
- 标记：CD19、CD20、CD22是B细胞常见的表面标志物，而成熟的B细胞还表达BCR（B细胞受体），即抗体分子。
3. 自然杀伤细胞（NK细胞）：
- 标记：虽然NK细胞不是严格意义上的淋巴细胞（因为它们不通过胸腺发育成熟），但通常也归入广义的淋巴细胞范畴。
NK细胞的主要标记包括CD56和CD16。
此外，还有一些特殊的淋巴细胞亚群，例如调节性T细胞（Regulatory T cells, Tregs）表达CD4+CD25+FoxP3+；记忆性T细胞（Memory T cells）
有不同的表型，如CD45RO+或CCR7-等。
这些不同类型的淋巴细胞在免疫应答中各有分工，协同工作以保护身体免受外来病原微生物的侵害，并维持机体内的免疫平衡。
医学免疫学课件 第10章 T 淋巴细胞
通过阴性选择－－获得自身耐受性 (针对自身抗原成分的T细胞被清除)
T 细胞经阳性选择、阴性选择后， 只有能识别自身MHC 和识别非自身 抗原肽的T细胞克隆才能发育成熟， 进入外周淋巴组织。
外周成熟的T细胞： MHC 限制性 自身耐受
T细胞在外周淋巴器官中的分化和发育
初始T细胞（naive T cell ）: 定位于胸腺依赖区 在抗原的刺激下
• • • • T细胞－TCR • •
I – CD8 克隆增殖 结合 MHC (胸腺上皮细胞) II－CD4 克隆增殖
不结合 MHC (胸腺上皮细胞) T 细胞克隆调亡
•
阳性选择
在胸腺皮质中，能与胸腺上皮细胞表达的抗 原肽-MHC I或II类分子复合物特异结合的双 阳性 细胞，可继续分化为CD8+或CD4+ 的 单阳性细胞，此过程为胸腺的阳性选择。
CD4+ CD8+ (双阳性细胞，DP)—第二阶段
•
胸腺皮质
阳性选择，获MHC限制性
•
CD4+
CD8+ (单阳性细胞，SP）
•
•
胸腺
阴性选择，获自身耐受
第 三
阶
•
CD4+
CD8+
段
•
(MHC-II限制性，TH) (MHC-I限制性，CTL)
• 周围淋巴组织
阳性选择
此时，T细胞的抗原识别受体经基因重排后， 形成TCR-CD3结构，具识别 MHC-抗原肽能力。
双阴性细胞（DN,CD4-CD8-） TCR基因重排（获得功能性与多样性的TCR ）
双阳性细胞（DP，TCR+CD4+CD8+） 阳性选择（获得MHC限制性） 阴性选择（获得自身耐受）
T 细胞经阳性选择、阴性选择后， 只有能识别自身MHC 和识别非自身 抗原肽的T细胞克隆才能发育成熟， 进入外周淋巴组织。
外周成熟的T细胞： MHC 限制性 自身耐受
T细胞在外周淋巴器官中的分化和发育
初始T细胞（naive T cell ）: 定位于胸腺依赖区 在抗原的刺激下
• • • • T细胞－TCR • •
I – CD8 克隆增殖 结合 MHC (胸腺上皮细胞) II－CD4 克隆增殖
不结合 MHC (胸腺上皮细胞) T 细胞克隆调亡
•
阳性选择
在胸腺皮质中，能与胸腺上皮细胞表达的抗 原肽-MHC I或II类分子复合物特异结合的双 阳性 细胞，可继续分化为CD8+或CD4+ 的 单阳性细胞，此过程为胸腺的阳性选择。
CD4+ CD8+ (双阳性细胞，DP)—第二阶段
•
胸腺皮质
阳性选择，获MHC限制性
•
CD4+
CD8+ (单阳性细胞，SP）
•
•
胸腺
阴性选择，获自身耐受
第 三
阶
•
CD4+
CD8+
段
•
(MHC-II限制性，TH) (MHC-I限制性，CTL)
• 周围淋巴组织
阳性选择
此时，T细胞的抗原识别受体经基因重排后， 形成TCR-CD3结构，具识别 MHC-抗原肽能力。
双阴性细胞（DN,CD4-CD8-） TCR基因重排（获得功能性与多样性的TCR ）
双阳性细胞（DP，TCR+CD4+CD8+） 阳性选择（获得MHC限制性） 阴性选择（获得自身耐受）
免疫学名词解释th
免疫学名词解释th
Th通常是免疫学中用来表示T淋巴细胞辅助功能的缩写。
T淋巴细胞是一类免疫系统中的白细胞，它们在免疫应答中起着重要作用。
Th细胞（T helper cell）是一种T淋巴细胞亚群，它们在免疫应答中通过分泌细胞因子来调节和协调其他免疫细胞的活动。
Th 细胞在抵抗感染病原体、调节免疫应答和维持免疫平衡方面发挥着关键作用。
Th细胞通常被分为不同的亚型，例如Th1细胞和Th2细胞。
Th1细胞主要参与细胞免疫应答，对于清除细胞内病原体感染（如细菌、病毒感染）起着重要作用；而Th2细胞则主要参与体液免疫应答，对于清除体液内病原体（如寄生虫）有重要作用。
此外，还有其他类型的Th细胞，如Th17细胞和调节性T细胞（Treg），它们在免疫应答的调节和平衡中发挥作用。
总的来说，Th细胞在免疫系统中扮演着重要的角色，它们通过分泌细胞因子来调节和协调免疫细胞的活动，从而对抗病原体感染并维持免疫平衡。
这些细胞在免疫系统的功能中起着至关重要的作用，对于我们的身体健康具有重要意义。
医学免疫学 T淋巴细胞 PPT教案
• CD4和CD8分子的主要功能: （1）辅助TCR识别抗原 （2）参与T细胞活化（第一）信号的转导。
是TCR的共受体
CD4基本结构及作用
CD4分子是由一条肽链 组成的跨膜蛋白。胞外 区具有4个Ig样结构域， 其中远膜端的2个结构 域能够与MHCⅡ类分 子的β2结构域结合。
CD8基本结构及作用
CD8分子由α和β肽链组成， 2条肽链均为跨膜蛋白，由二 硫键连接。胞外区各含一个 Ig样结构域， 能够与MHCⅠ 类分子的α3功能区结合 。
7．LFA-1和ICAM-1
T 细 胞 表 面 的 淋 巴 细 胞 功 能 相 关 抗 原 -1 （LFA-1）与APC细胞上细胞间黏附分子1（ICAM-1）相互结合，介导T细胞与APC 或靶细胞的黏附。T细胞也可表达ICAM-1， 同APC、靶细胞或T细胞自身表达的LFA-1 结合。
四、丝裂原受体及其他表面分子
（四）T细胞发育的阴性选择（negative selection)
部位：胸腺皮髓交界处、髓质，主要由胸腺
DC、Mφ起选择作用。
SP
胸腺DC、Mφ
高亲和力结合自身肽:MHC-Ⅰ类分子
凋亡或无能
CD8+T
不结合 自身肽:MHC-Ⅰ类分子
成熟CD8+T细胞
高亲和力结合 自身肽:MHC-Ⅱ类分子
凋亡或无能
2．CD3的结构和功能 1) 是成熟T细胞又一特征性表面标志。
2）是TCR-CD3复合体中信号转导的亚单位， 将TCR接受的抗原刺激信号转导至细胞内，使T 细胞活化。
3) 组成与结构：由、、、、五种
肽链组成。两两形成二聚体与TCR组成复合体。
4）每条肽链胞质区较长，均含有 免疫受体 酪氨酸激活基序（ITAM），由18个aa组成，含2 个YxxL/V保守序列。
是TCR的共受体
CD4基本结构及作用
CD4分子是由一条肽链 组成的跨膜蛋白。胞外 区具有4个Ig样结构域， 其中远膜端的2个结构 域能够与MHCⅡ类分 子的β2结构域结合。
CD8基本结构及作用
CD8分子由α和β肽链组成， 2条肽链均为跨膜蛋白，由二 硫键连接。胞外区各含一个 Ig样结构域， 能够与MHCⅠ 类分子的α3功能区结合 。
7．LFA-1和ICAM-1
T 细 胞 表 面 的 淋 巴 细 胞 功 能 相 关 抗 原 -1 （LFA-1）与APC细胞上细胞间黏附分子1（ICAM-1）相互结合，介导T细胞与APC 或靶细胞的黏附。T细胞也可表达ICAM-1， 同APC、靶细胞或T细胞自身表达的LFA-1 结合。
四、丝裂原受体及其他表面分子
（四）T细胞发育的阴性选择（negative selection)
部位：胸腺皮髓交界处、髓质，主要由胸腺
DC、Mφ起选择作用。
SP
胸腺DC、Mφ
高亲和力结合自身肽:MHC-Ⅰ类分子
凋亡或无能
CD8+T
不结合 自身肽:MHC-Ⅰ类分子
成熟CD8+T细胞
高亲和力结合 自身肽:MHC-Ⅱ类分子
凋亡或无能
2．CD3的结构和功能 1) 是成熟T细胞又一特征性表面标志。
2）是TCR-CD3复合体中信号转导的亚单位， 将TCR接受的抗原刺激信号转导至细胞内，使T 细胞活化。
3) 组成与结构：由、、、、五种
肽链组成。两两形成二聚体与TCR组成复合体。
4）每条肽链胞质区较长，均含有 免疫受体 酪氨酸激活基序（ITAM），由18个aa组成，含2 个YxxL/V保守序列。
医学免疫学实验：T 淋巴细胞转化试验
T 淋巴细胞转化试验一、实验目的学习并掌握T淋巴细胞转化方法。
二、实验原理T 细胞在体外培养时，受到有丝分裂原（如PHA、ConA）刺激后，可出现细胞体积增大，代谢旺盛，蛋白和核酸合成增加，即向淋巴母细胞转化和增殖。
淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平，因此可作为测定机体免疫功能的指标之一。
淋巴细胞转化试验结果的读取可以有形态计数法、MTT 法和同位素法三种。
MTT 法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。
MTT 是一种噻唑盐，化学名3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑，水溶液为黄橙色。
小鼠脾细胞受到ConA（刀豆蛋白A）作用后发生增殖活化，其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高，MTT作为其底物参与反应，形成蓝色的甲臜（Formazan）颗粒沉积于细胞内或细胞周围，经盐酸-异丙醇溶解后为蓝色溶液，可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD值，测定波长570 nm。
根据OD 值的大小计算反应体系中细胞增殖程度。
三、实验材料1. ICR 小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）2. RPMI 1640 培养液，Hank's 液3. 刀豆蛋白A（Concanvalin A, ConA），用RPMI 1640 液配成1 mg / ml，分装小瓶，冷冻保存4. MTT (1mg/ml, 溶于pH 7.2 的PBS 中)5. 2.5%碘酒、75%酒精6. 无菌尖吸管和刻度吸量管7. 无菌解剖器械8. 96 孔平底培养板9. 5% CO2 培养箱（美国NAPCO 公司产品）10. 酶标测定仪（美国BioRad 公司产品）四、实验步骤1. 小鼠脾细胞悬液的制备：取一个灭菌的平皿，加入5 ml Hank's 液。
颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏，放入平皿中，在钢网上研磨并过筛，制成细胞悬液。
取出100 μl用于计数。
将其余细胞悬液移入一离心管中，离心1500 rpm，7 min，（或1000 rpm，10 min）弃去上清，用RPMI 1640 培养液稀释，制成2.5 × 10^6 / ml 的脾细胞悬液，然后加入ConA 使每孔最终浓度为2 μg / ml，同时做不加ConA 的阴性对照孔。
医学免疫学 T淋巴细胞
医学免疫学
上海第二医科大学免疫教研室
医学免疫学
上海第二医科大学免疫教研室
Cuby p207 f9-7
T淋巴细胞表面分子及其作用
T LYMPHOCYTE
TCR：有、、、四种肽链，可将T细胞分为 TCR 和 TCR 两种类型，是 T 细胞特异性识别抗原的分子 CD3：与TCR一起组成 TCR-CD3复合分子， 是 T 细胞的信号转导
T细胞在胸腺中发育的三个阶段
CD4–、CD8–（double negative thymucyte，DN） T细胞： 其表型为CD3 CD4 CD8 CD44+CD25+ ，占胸腺细胞的1%~5%，其中 80%为 TCR ，10%为 TCR+ ，10%为TCR+
– – – –
CD4+ 、CD8+ （double positive thymucyte，DP） T细胞：
CD28/CTLA-4（CD152)：其配体是 B7
ICOS: 表达活化的T细胞，配体为ICOSL/B7-H2,是T细胞活化的协同刺激
信号，主要在CD28后发挥作用
CD2（LFA-2）：又称 SRBCR，其配体是
CD58（ LFA-3 ），可介导T
细胞旁路激活途径
CD40L：参与B细胞的免疫应答 LFA-1：其配体是
T LYMPHOCYTE
T LYMPHOCYTE
T LYMPHOCYTE
阳性选择与阴性选择
• 阳性选择：即双阳性胸腺细胞的 TCR与胸腺基质细胞表面的 MHC 分子
以适当亲和力结合，导致克隆增殖，分化成功能性 T 细胞的过程。
阳性选择赋予成熟T细胞具有识别和结合MHC的能力，保存了与自己MHC 结合的、受 MHC 限制的、对外来抗原发生特异性反应的细胞克隆，是T细胞 成熟的一种方式
医学免疫学 T淋巴细胞(完整版)
T LYMPHOCYTE
T LYMPHOCYTE
阳性选择与阴性选择
• 阳性选择：即双阳性胸腺细胞的 TCR与胸腺基质细胞表面的 MHC 分子 以适当亲和力结合，导致克隆增殖，分化成功能性 T 细胞的过程。
阳性选择赋予成熟T细胞具有识别和结合MHC的能力，保存了与自己MHC 结合的、受 MHC 限制的、对外来抗原发生特异性反应的细胞克隆，是T细胞 成熟的一种方式
TCR基因结构
链基因结构：位于第14号染色体上，由V、J、C三种基因片段组成 链基因结构：位于第7号染色体上，由V、D、J、C四种基因片段组成 链基因结构：位于第7号染色体上，由V、J、C三种基因片段组成 链基因结构：位于第14号染色体上，由V、D、J、C四种基因片段组成
1. 重排多样性 2. 链和 链配对多样性
3. 不精确连接 4. N区核苷酸插入 （ 、b 链均发生）
TCR多样性和CDR3
肽 TCR
MHC
V区：CDRs
CDR1 CDR2 CDR3
MHC 肽
CDR3决定特异性（克隆水平） 多样性（个体水平）
医学免疫学
上海第二医科大学免疫教研室
医学免疫学
medical immunology
T LYMPHOCYTE
T 淋巴细胞:来自卵黄囊、胎肝及骨髓的 T 细胞 的前体干细胞，经血流输送至胸腺，从胸腺的浅皮 质区至深皮质区、髓质区移行，并在胸腺微环境中 分化、发育、成熟。故称其为胸腺依赖性淋巴细胞 （thymus dependent lymphocyte)。
胸腺细胞的阳性选择，获得MHC限制性 胸腺细胞的阴性选择，获得自身免疫耐受性 T细胞受抗原刺激在外周淋巴器官的进一步分化 TCR、CD4、CD8分子的表达是T细胞不同发育阶段的主要标志。
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T细胞的协同刺激分子受体： LFA-1和ICAM-1：
介导T细胞与APC或靶细胞的相互黏附。
表面分子及其作用
• TCR-CD3复合物 • CD4分子和CD8分子 • 协同刺激分子受体 • 丝裂原结合分子
丝裂原结合分子： 刀豆蛋白A（ConA）： 植物血凝素（PHA）： 美洲商陆 ：
T细胞的发育
表面分子及其作用
• TCR-CD3复合物 • CD4分子和CD8分子 • 协同刺激分子受体 • 丝裂原结合分子
TCR－CD3：
TCR是T细胞的特征性标志，作用是识别抗原；与CD3分 子非共价键结合，形成复合物。分TCRαβ和TCRγδ两种。
TCR－CD3：
TCR不能直接识别蛋白质抗原表面的表位，只能特异性识 别APC或靶细胞表面的抗原肽－MHC分子复合物——“双识 别”——MHC限制性。
活化T细胞多种细胞因子的产生，上调T细胞 黏附分子的表达，促进T细胞增殖。 配体：B7-H1
T细胞的协同刺激分子受体： CD40L：表达于活化T细胞；配体是CD40；
促进APC活化； 促进T细胞活化；
促进B细胞的增殖、分化、抗体产生和类别转换。
T细胞的协同刺激分子受体： CD2（LFA-2）：
配体是CD58(LFA-3)； 参与协同刺激信号； 又称为绵羊红细胞受体。
表面分子及其作用
• TCR-CD3复合物 • CD4分子和CD8分子 • 协同刺激分子受体 • 丝裂原结合分子
T细胞的辅助受体：
CD4和CD8分子属于IGSF，可分别结合MHCⅡ类分子的 β2结构域和MHCⅠ类分子的α3结构域。
T细胞的辅助受体：
增强T细胞和APC或靶细胞之间的相互作用； 参与MHC限制性；
T细胞 B细胞 NK细胞
T细胞的发育
• 造血干细胞的分化 • T细胞谱系的发育过程
功能性TCR的表达 获得MHC限制性 获得自身耐受性
T细胞的发育过程
功能性TCR的表达
获得MHC限制性——阳性选择
不能与抗原肽-MHC 分子复合物有效结合或亲和力过高的DP 细胞在胸腺皮质中发生凋亡。
T细胞的发育过程
• 造血干细胞的分化 • T细胞谱系的发育过程
T细胞的发育
• 造血干细胞的分化 • T细胞谱系的发育过程
造血干细胞的分化：
造血干细胞是多能干细胞，可自我更新和分化。主要表面 标记是CD34、c-kit。
髓
样
干
细
造
胞
血
干
细
胞
淋
巴
样
干
细
胞
红系：红细胞 巨核系：血小板 粒单系：中性粒细胞、单核/巨噬细胞 嗜酸性粒细胞： 嗜碱性粒细胞：
获得自身耐受性——阴性选择
能与抗原肽-MHC 分子复合物高亲和力结合的SP细胞在胸腺 皮髓质交界或髓质中发生凋亡。
T细胞的发育过程
T细胞的亚群
• 根据活化阶段分类 • 根据TCR类型分类 • 根据CD4、CD8分子分类 • 根据功能分类
根据活化阶段分类
初始T细胞：表达CD45RA和高水平L-选择素。 效应T细胞：高表达IL-2受体、黏附分子和CD45RO。 记忆T细胞：高表达CD45RO和黏附分子，
Th细胞： Tc细胞： Tr细胞：
根据功能分类
Th细胞： Tc细胞： Tr细胞：CD4、CD25、IL-2Rα链、foxp3
直接与靶细胞接触而发挥抑制作用； 下调靶细胞IL-2Rα链的表达； 抑制APC的抗原提呈功能。
下课了！！！
根据CD4、CD8分子分类
CD4+T细胞： CD8+T细胞：
根据功能分类
Th细胞：help T cell Tc细胞：cytotoxic T cell Tr细胞：regulatory T cell
根据功能分类
Th细胞： Tc细胞： Tr细胞：
根据功能分类
T细胞的辅助受体：
增强T细胞和APC或靶细胞之间的相互作用； 参与MHC限制性； 参与TCR识别抗原产生的活化信号转导过程。
表面分子及其作用
• TCR-CD3复合物 • CD4分子和CD8分子 • 协同刺激分子受体 • 丝裂原结合分子
T细胞活化的双信号：
第一信号：TCR识别结合抗原肽-MHC 分子复合物； 第二信号：APC或靶细胞和T细胞表面的协同刺激分子相互作用。
T淋巴细胞
( T Lymphocyte)
内容纲要
Ⅰ. 表面分子及其作用 Ⅱ. T细胞的亚群 Ⅲ. T细胞的功能
T细胞的概述
• 来源：淋巴样干细胞 • 发育：胸腺 • 异质性：多特异性，多亚群，多功能 • 功能：介导细胞免疫，辅助体液免疫
表面分子及其作用
• TCR-CD3复合物 • CD4分子和CD8分子 • 协同刺激分子受体 • 丝裂原结合分子
介导再次免疫应答。
根据TCR类型分类
αβT细胞： γδT细胞：
•大多为CD4-及CD8-； •主要分布于皮肤和黏膜组织； •只能识别多种病原体表达的共同抗原成分； •具有抗感染和抗肿瘤作用； •通过分泌多种细胞因子CR类型分类
αβT细胞： γδT细胞：
协同刺激信号：
基本作用是扩大适应性免疫应答的免疫效应。
T细胞的协同刺激分子受体：
CD28：结合B7分子，促进IL-2的生成和T细胞增殖； CTLA-4：胞浆区有ITIM基序（I/VxYxxL），Y被磷酸化后，可
与PTP结合，产生抑制性信号，抑制T细胞活化信号的转导。
T细胞的协同刺激分子受体： ICOS：表达于活化T细胞，属于CD28家族。可调节
TCR－CD3：
TCR识别抗原所产生的活化信号由CD3分子转导到T细胞 内，因为CD3分子胞浆区有ITAM。
ITAM：由18个氨基酸残基组成，其中含有2个YxxL/V保守
系列。其中Y被T细胞内的酪氨酸蛋白激酶Lck磷酸化后，与其 他具有SH2结构域的酪氨酸蛋白激酶结合，是细胞活化信号转 导的重要部分。