3.金黄色葡萄球菌及其检验
金黄色葡萄球菌检验与计数
▪ 耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰 蛋白酶的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一 般烹调温度不能将其破坏。218~248 ℃的油中 需30min才能被破坏。可引起急性胃肠炎。
▪ 根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、 C2）、D、E 5 个型。A型肠毒素引起的食物中 毒较多，约占50%左右。其他依次为D、C、B 和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。
---某一稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典 型菌落，且上一稀释度平板上有典型菌落， 其平板上的菌落数不在20 cfu～200 cfu之 间，计数该稀释度平板上的典型菌落；
公式一
T=AB/Cd T:样品中金黄色葡萄球菌落数； A:某一稀释度典型菌落的总数 ； B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数 ； C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数； d:某一稀释度。
▪ 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛 有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无 菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠) 中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
增菌与分离培养
▪ 增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于 50mL 7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉 汤培养基内，36℃±1℃培养18h～24h。金 黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生 长，污染严重时在10%胰酪胨大豆肉汤内呈 混浊生长。
血浆凝固酶试验
▪ 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌 落1个或以上，分别接种到5mL BHI和营养 琼脂小斜面，36℃±1℃培养18 h～24 h。
▪ 取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中， 再加入可疑菌落的BHI培养物0.2mL～ 0.3mL，振荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴 箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现 凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块） 或凝固体积大于原体积的一半，判定为阳性 结果。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析【摘要】金黄色葡萄球菌是导致多种感染的重要病原体，对其进行准确快速的检验至关重要。
本文首先介绍了金黄色葡萄球菌检验技术的原理，包括典型菌株鉴定和培养特点；其次详细描述了金黄色葡萄球菌检验方法，包括传统和分子生物学技术；接着分析了检验结果的意义和如何应对不同结果；最后探讨了金黄色葡萄球菌检验技术的优势和在临床应用中的意义。
在文章讨论了金黄色葡萄球菌检验技术的发展前景以及其局限性和未来发展方向。
通过本文的介绍和分析，读者将更全面地了解金黄色葡萄球菌检验技术，有助于提高对该病原体的检测与管理水平，促进临床诊疗水平的提升。
【关键词】金黄色葡萄球菌、检验技术、原理、方法、结果分析、优势、临床应用、发展前景、局限性、未来发展方向1. 引言1.1 背景介绍金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可导致多种感染性疾病，如皮肤感染、败血症等。
因其对抗生素的抗性逐渐增加，使得对其进行有效检验和监测显得尤为重要。
金黄色葡萄球菌检验技术是一种能够快速准确检测金黄色葡萄球菌的方法，对于临床诊断和治疗具有重要意义。
背景介绍的部分主要从以下几个方面展开：介绍金黄色葡萄球菌的基本特征，包括其形态特征、生长条件等；说明金黄色葡萄球菌对人体的危害和致病机制，引出对其进行检验的必要性；介绍目前金黄色葡萄球菌感染的流行状况和抗生素抗性情况，指出对其进行检验的紧迫性；简要介绍当前金黄色葡萄球菌检验技术的发展现状和存在的问题，为后续正文内容做铺垫。
通过背景介绍，读者可以对金黄色葡萄球菌检验技术的研究和应用有一个初步的了解，为后续内容的阐述提供了必要的背景信息。
1.2 研究意义金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，在医疗卫生领域中具有重要的病原检测价值。
对于金黄色葡萄球菌的检测技术的研究意义主要可以从以下几个方面来看：1. 临床诊断：金黄色葡萄球菌是导致各种感染的主要细菌之一，如皮肤感染、呼吸道感染等。
准确检测金黄色葡萄球菌的存在可以帮助医生及时诊断并采取相应的治疗措施，有助于提高治疗效果和减少治疗成本。
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
01
02
样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
03
04
金黄色葡萄球菌及检验
金黄色葡萄球菌及检验一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
二.流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
金黄色葡萄球菌检验与计数
第二法 MPN法
MPN检验程序
25g(mL)检样+225mL稀释液，
匀质
10倍系列
稀释 选择3个适宜稀释度的样品匀液，吸1mL样液，每稀释
度各接种3管胰酪胨大豆肉汤，样品的最高稀释度，
能达到获得阴性3终6±点1
45~48h
℃接种Baird-Parker
平3板6±1
45~48h
℃血浆凝固酶
试验 查MPN表
7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪
胨大3豆6±肉1汤℃
18~24h
Baird-Parker平板，血
36±1 ℃
平板血平板18~24h， Baird-Parke r平板18~24h或45~48h。
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂 小斜面
血浆凝固酶 试验
报告
Baird-Parker琼脂平板
•金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿 润，直径约2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色， 周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接 触菌落似有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和透 明圈的非典型菌落。
培养特性：
• 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。
• 需氧或兼性厌氧。
• 最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。耐盐性强，在含10～15%的氯化钠培养基中仍 能生长，可用于筛选菌种。
• 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产 生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。
金黄色葡萄球菌检验与计数
概况
金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于 葡萄球菌属（Staphylococcus），可引起多种 严重感染。有“嗜肉菌"的别称。 •
金黄色葡萄球菌的测定
金黄色葡萄球菌的测定1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。
2 检验方法2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。
显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。
是常见的引起食物中毒的致病菌。
常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。
2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。
（2）冰箱：2℃～5℃。
（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。
（4）天平：感量0.1g。
（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。
（7）无菌培养皿：直径90mm。
（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4；2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
（2）B－P琼脂平板1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.22）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。
3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。
分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界中，同时也是人体皮肤和黏膜的正常微生物。
金黄色葡萄球菌也是人体病原微生物中的一种，并且可以引起一系列的感染疾病，包括皮肤感染、肺炎、败血症等严重疾病。
及时、准确地检测金黄色葡萄球菌对于预防和控制与该菌相关的疾病具有重要意义。
金黄色葡萄球菌的检验技术主要包括细菌培养、生化鉴定、药敏试验等，下面将对这些技术进行介绍。
一、细菌培养1. 培养基金黄色葡萄球菌主要可在营养琼脂、大豆肉汤琼脂、牛肉心脏培养基等细菌培养基上生长。
营养琼脂是最常用的培养基，可用于对金黄色葡萄球菌的初步筛查。
2. 培养条件金黄色葡萄球菌在37°C下培养24-48小时，产生充分的菌落。
3. 形态特征金黄色葡萄球菌在琼脂培养基上可形成金黄色的圆形菌落，直径一般在1-2mm左右。
二、生化鉴定1. 皮肤试验皮肤试验是金黄色葡萄球菌的特异性鉴定方法之一，又称为凝集素试验。
通过皮肤试验，可以判断金黄色葡萄球菌是否具有产生凝集素的能力。
2. 协和试验协和试验又称凝集酶试验，是用于检测金黄色葡萄球菌产生凝集酶的一种生化试验。
该试验通过将金黄色葡萄球菌的培养液加入到含有凝集酶专一底物的试管中，观察底物被溶解的情况，用于判断金黄色葡萄球菌是否产生凝集酶。
3. 床旋试验床旋试验又称为巯基甲酸盐试验，是一种利用巯基甲酸盐来检测金黄色葡萄球菌的特异性试验。
通过观察琼脂培养基上金黄色葡萄球菌菌落周围出现的红色环的形成情况，判断金黄色葡萄球菌是否产生巯基甲酸盐酶。
4. 溶血酶试验溶血酶试验是一种通过检测金黄色葡萄球菌产生的溶血酶来鉴定其特性的生化试验。
溶血酶试验主要有两种方法：血凝素试验和牛血红蛋白试验。
这两种方法都是通过观察金黄色葡萄球菌对红细胞造成的溶血现象来判断其产生的溶血酶。
三、药敏试验药敏试验是检测金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性的一种方法。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它是引起人体多种感染的病原菌之一。
金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。
以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。
金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。
样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的，也可以从环境中收集。
分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上，然后进行培养和鉴定来完成。
金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。
培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。
常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag：脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag：镜光菌属琼脂等。
金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，它可以在各种营养富集培养基中生长，但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。
培养的时间通常为24小时，金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。
鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。
鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。
形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。
金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的，常呈簇状分布。
生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。
一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。
分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。
金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌，从而指导合理的治疗方案。
金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员，对多种抗生素具有耐药性，因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。
金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等，检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，它存在于人体的鼻腔、口腔、皮肤和肠道中。
虽然大多数金黄色葡萄球菌是无害的，但也有些菌株可以引起感染，导致严重的疾病。
对金黄色葡萄球菌进行及时而准确的检验至关重要。
本文将介绍金黄色葡萄球菌的检验技术及分析。
一、金黄色葡萄球菌检验技术介绍1. 大肠杆菌萤光素酶法大肠杆菌萤光素酶法是一种快速、敏感的金黄色葡萄球菌检验技术。
该方法基于金黄色葡萄球菌产生蛋白A（Protein A）的特性，利用蛋白A对大肠杆菌萤光素酶的亲和力来检测金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：- 取一定数量的待测样品，加入培养基中，并培养一定时间使细菌繁殖；- 加入大肠杆菌萤光素酶，与待测样品中的金黄色葡萄球菌结合；- 通过检测发光信号的强度来判断金黄色葡萄球菌的存在。
2. PCR技术PCR技术是一种常用的分子生物学技术，可以快速、准确地检测金黄色葡萄球菌。
该方法利用PCR扩增金黄色葡萄球菌的特定基因序列，然后通过凝胶电泳等手段对扩增产物进行分析，从而确定金黄色葡萄球菌的存在与否。
3. 生化检验生化检验是通过分析金黄色葡萄球菌产生的代谢产物来确定其存在与否。
常用的生化检验方法包括酶活性检测、代谢产物检测等，通过观察细菌在不同培养基中的反应来判断金黄色葡萄球菌的存在。
以上介绍的几种金黄色葡萄球菌检验技术各有优缺点，可以根据实际需求选择合适的方法进行检验。
二、金黄色葡萄球菌检验技术分析1. 大肠杆菌萤光素酶法的优点是快速、敏感，可以在短时间内得到检测结果。
但该方法对培养基的选择要求严格，容易受到其他细菌的干扰，且需要特殊设备（如发光计）进行检测，成本较高。
2. PCR技术的优点是高度特异性和灵敏度，可以检测样品中极微量的金黄色葡萄球菌。
PCR技术无需培养细菌，可以在短时间内完成检测，因此被广泛应用于金黄色葡萄球菌的检验中。
PCR技术需要特殊的实验条件和设备支持，成本较高。
金黄色葡萄球菌
1.血浆凝固酶试验：原理:金黄色葡萄球菌能产生结合型血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝集颗粒；游离型的血浆凝固酶则可使试管中血浆发生凝固。
大多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，而非致病株一般不产生。
因此，血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。
葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合凝固酶（用玻片法测试），另一种是游离凝固酶（用试管法检测）。
方法：（1）玻片法：在1张洁净玻片中央加1滴9g／L氯化钠(生理盐水)溶液，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10～20s内无自凝现象发生，则加入兔新鲜血浆1环，与菌悬液混合，观察结果。
（如出现颗粒状凝集现象即为阳性。
如不立即发生凝集，可稍待一，二分钟，并轻轻摇动玻片，加速反应，若无凝集时则为阴性。
）（2）试管法：用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释，取0．5ml于试管再加0.5ml 待测菌浓菌悬液（需做阳性对照及阴性对照。
），混匀后置37℃水浴中，每30min 观察1次结果。
若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管（即浓菌液管）不凝固，为阳性；若阴性，继续观察到24小时，不凝固者为阴性。
（观察结果，将试管微微倾斜，血浆成冻胶样凝块者为阳性，血浆仍为液状者为阴性。
）【结果判断】（1）玻片法：5～10s内出现凝集者为阳性。
（2）试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳性。
4h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。
【注意事项】（1）最好使用EDTA抗凝的兔血浆，因为如果使用枸缘酸盐抗凝血浆会产生假阳性结果（2）玻片法：10秒内观察结果，如超过10 秒可出现假阳性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。
2. 耐热核酸酶试验原理：致病性葡萄球菌能产生一种耐热核酸酶，它能分解DNA，使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色玻片法：取融化好的甲苯胺蓝DNA琼脂3ml均匀浇在载玻片上，待琼脂凝固后打上6-8个孔径为2-5mm的小孔，各孔分别加一滴经沸水浴3分钟处理过的待检葡萄球菌和阳性阴性对照葡萄球菌培养物，35℃大气环境孵育3小时，观察有无粉红色圈及其大小。
金黄色葡萄球菌的检验
金黄色葡萄球菌的检验(定性检测)一．金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；无芽孢，无鞭毛、无荚膜、不运动；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
普通平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
主要存在于主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。
二、培养基7.5%的氯化钠（三角瓶135mL）；BP平板培养基；血平板培养基；BHI肉浸液肉汤培养基（试管5个）。
三、金黄色葡萄球菌的定性检测主要包含四个步骤：样品处理；增殖培养；平板分离培养；鉴定（染色镜检和血浆凝固酶实验）。
1.样品的处理和增殖培养：样品为冷冻鱼丸，每组称量15g，放于研钵中，用研磨棒捣碎，放于135mL 7.5%的氯化钠肉汤中进行增菌培养，36℃±1℃培养18h～24h后，可观察到金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
2.血平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于血平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个血平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个血平板）。
金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征：菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。
3.BP平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于BP平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个BP平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个BP平板）。
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征：菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。
金黄色葡萄球菌的检验
鉴定
A 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，
排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m～ 1m。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等
四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）用水冲洗。 4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒 后水洗，吸去水分。
基本原理
金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。在血 平板上生成金黄色色素使菌落呈现金黄色；由于 产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈， 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多 数致病菌株能产生溶血素，使血琼脂平板菌落周 围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些事 鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。在B-P 平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾使菌 落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊带， 而在其外层饮产生蛋白水解酶有一透明带。
将上述样品匀液于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～ 24 h。金黄色葡萄球菌在 7.5%氯化钠肉汤中呈混 浊生 长，污染严重时在 10%氯化钠胰酪胨大豆肉 汤内呈混浊生长。
将上述培养物，分别划线接种到 BairdParker 平板和血平板，血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 Baird-Parker 平板 36 ℃±1 ℃培 养 18 h～24 h 或 45 h～48 h。
金黄色葡萄球菌的检验
目的
参考:GB 4789.10-2010
1、了解金黄色葡萄球菌的生物学特征级临床 症状。
2、了解食品中掌握金黄色葡萄球菌群的检验方法。
基本原理
肉汤中培养时菌体可生成血浆凝固酶 并释放于培养基中，此酶类类似凝血酶原 物质，不直接作用到血浆纤维蛋白原上， 而是被血浆中的致活剂激活后,变成耐热的 凝血酶样物质,此物质可使血浆中的液态纤 维蛋白原变成纤维蛋白,血浆因而成凝固状 态。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，广泛存在于环境中和人体的皮肤黏膜上。
它是一种革兰氏阳性球菌，通过空气、飞沫、直接接触等途径传播。
金黄色葡萄球菌引起的感染包括皮肤感染、呼吸道感染、骨髓炎、心内膜炎等，严重时还可以导致败血症和中毒性休克。
为了诊断金黄色葡萄球菌感染，需要进行相关的检验技术。
以下是金黄色葡萄球菌检验的常用技术介绍及分析：1. 细菌培养：将样品（如血液、脓液、分泌物等）接种到适当的培养基上，利用培养器将细菌培养在适当的温度和湿度下。
金黄色葡萄球菌能够在常规寒温培养基上生长，并产生特征性的金黄色色素。
2. 葡萄糖发酵试验：用含葡萄糖的培养基培养金黄色葡萄球菌，通过观察培养基的酸碱指示剂变化，如果培养基变为黄色，则说明金黄色葡萄球菌能够发酵葡萄糖产生酸。
3. 凝固酶试验：用凝固酶试剂与金黄色葡萄球菌接触，在一定时间内观察是否发生凝固反应。
凝固酶是金黄色葡萄球菌特有的酶，可以将凝血蛋白原转化为凝血蛋白，从而导致液体凝固。
4. 硝酸盐还原试验：将含有硝酸盐的培养基与金黄色葡萄球菌接触，观察是否产生还原反应。
正常情况下，金黄色葡萄球菌可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐和硝酸，导致培养基变为红色。
5. 蛋白酶试验：用含有牛血清蛋白的培养基培养金黄色葡萄球菌，观察是否溶解蛋白质。
金黄色葡萄球菌能够产生多种蛋白酶，可以分解牛血清蛋白，形成溶解区。
通过以上的检验技术，可以初步判断金黄色葡萄球菌的存在和性质。
这些检验方法并不是专门针对金黄色葡萄球菌的，也不能确定金黄色葡萄球菌的毒力和抗药性等重要特征。
要做进一步的分析和确认，需要使用专门的分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）和基因测序等。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它常见于我们日常生活中，例如皮肤、鼻子、口腔等部位。
金黄色葡萄球菌可以引发多种感染病，包括肺炎、败血症和皮肤感染等，并且有着高毒性和高致命性。
因此，及时检测金黄色葡萄球菌是非常必要的。
金黄色葡萄球菌检验技术是一种常用的检测方法，可以针对不同的样本类型进行检测，例如流感样本、皮肤和软组织样本等。
本文将介绍金黄色葡萄球菌检测技术的常见方法及其分析。
1. 文化检测文化检测是最常用的金黄色葡萄球菌检测方法之一。
它可以通过将样本放入富含营养物质的琼脂平板上，并放置在37℃的培养箱中, 培养时间一般为12-24小时，然后观察细菌在琼脂平板上的生长情况。
金黄色的菌落是检测金黄色葡萄球菌的明显指标。
如果在样本中发现金黄色的菌落，那么可以判定存在金黄色葡萄球菌。
2. PCR检测PCR（聚合酶链反应）是一种高效，灵敏且特异性高的检测技术，PCR方法可以将DNA多份复制、扩增，然后转化为成可检测的DNA分子。
PCR的金黄色葡萄球菌检测方法非常快速，通过基因扩增技术，对金黄色葡萄球菌特异性基因进行扩增，然后通过凝胶电泳或其他方法检测扩增产物。
PCR方法具有高灵敏度和特异性，可以检测到非常小的金黄色葡萄球菌数量，并且还可以检测到含量非常低的金黄色葡萄球菌，具有非常广泛的应用价值。
3. 免疫学检测目前，免疫学检测是一种非常流行的金黄色葡萄球菌检测方法。
这种技术是基于免疫反应的原理进行的，利用特定的抗原与金黄色葡萄球菌中的特异性抗原反应，从而识别并检测出金黄色葡萄球菌。
免疫学检测具有高灵敏度和快速性的特点。
以ELISA检测为例，抗体首先被覆盖在微孔板上，待样本与具有特异性的金黄色葡萄球菌抗原结合后，反应孔中的酶(substrate)会产生荧光信号从而定性和定量分析。
这种方法不但可以用于金黄色葡萄球菌的检测，还可以应用于其他一些细菌的检测。
综上所述，金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，及时检测非常必要，而且能够有效地防止其引起的感染病的发生和扩散。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
按照现行的国标方法，金黄色葡萄球菌检测方法分为第一法定性检验、第二法平板计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品），以及第三法M P N 计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品）。
第一法定性检验过程包括样品处理、样品增菌、平板分离划线、初步鉴定、确证鉴定这5个步骤，整个流程全部完成至少需要5天时间。
第二法平板计数法包括5个步骤——样品稀释、样品接种涂布、典型菌和可疑菌计数、鉴定试验、结果计算，整个流程全部完成至少需要4天时间。
第三法M P N 计数法同样包括5个步骤，即样品稀释、样品增菌、平板分离划线、鉴定试验、查MPN 表确认结果，整个流程全部完成至少需要5天时间。
以下将对金黄色葡萄球菌的检测流程进行简单介绍，并对难点、注意事项进行梳理和讲解。
1 第一法：金黄色葡萄球菌定性1.1 样品处理固态和半固态样品：称取25g样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤中，充分混匀。
液体样品：吸取25m L 样品至盛有225m L 7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。
1.2 样品增菌将上述样品匀液置于金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析□ 李留洋 锐德检测技术（天津）有限公司重的感染。
该菌对营养的要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧。
容易受金黄色葡萄球菌污染的食品主要为乳制品、蛋及蛋制品、各类熟肉制品，其次是含有乳类的冷冻食品等，因此对于该菌的检验也被确定为食品致病性菌种检验中的重要项目。
图1 样品处理36±1℃的恒温培养箱中培养18~24h 。
1.3 平板分离划线该步骤是整个金黄色葡萄球菌检测环节中最重要的步骤之一，因为平板划线分离的效果决定了可疑菌落的判定和选择。
平板划线选择三分法或四分法则分离效果较好，更容易出现单菌落平板。
1.4 初步鉴定分离的培养基选用B a i r d -Pa r k e r 平板（B P 平板）和血平板。
结果显示，金黄色葡萄球菌在B a i r d -Pa r k e r 平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，菌落直径为2~3m m ，颜色呈灰黑色至黑色、有光泽，常有浅色（非白色）边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带，当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感；有时可见到不分解脂肪的菌株——除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同；从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其颜色常较典型菌落略浅，且外观可能较为粗糙，质地较干燥。
食品中金黄葡萄球菌及其检验
食品中金黄葡萄球菌及其检验第七章食品中致病球菌的检验第一节金黄葡萄球菌及其检验金黄色葡萄球菌及其检验金黄色葡萄球菌属于微球菌科葡萄球菌属,金黄色葡萄球菌是该属中的一个种引起人类疾病的葡萄球菌主要是金黄色葡萄球菌,除可引起皮肤组织炎症外,还可产生肠毒素如果该菌在食品中大量生长繁殖,产生毒素,人误食了含有毒素的食品,就会发生食物中毒,因此,由该菌引起的中毒为毒素型食物中毒食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在威胁,所以检验食品中的金黄葡萄球菌及数量具有实际意义主要内容一、金黄色葡萄球菌的生物学特性二、金黄色葡萄球菌的检验一、金黄色葡萄球菌的生物学特性、形态与染色分型简介、培养特性生化特性毒素与酶抵抗力致病性、形态与染色：(staphylococcusaureus)典型的金黄色葡萄球菌为球型直径μm 左右显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛大多数无荚膜。
革兰氏染色阳性。
典型的金黄色葡萄球菌为球型直径mm左右显微镜下排列成葡萄串状。
葡萄球菌革兰染色镜下图金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片金黄色葡萄球菌的透射电镜照片分型简介血清学分型：金黄色葡萄球菌水解获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原蛋白抗原主要为葡萄球菌A 蛋白（SPA)是一种表面抗原以上金黄色葡萄球菌有此抗原无特异性。
多糖抗原为半抗原有型特异性。
噬菌体分型根据肠毒素分型根据血浆凝固酶分型、培养特性金黄色葡萄球菌营养要求不高在普通培养基上生长良好需氧或兼性厌氧最适生长温度°C,最适生长pH。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性可在NaCl肉汤中生长。
在肉汤培养基中生长迅速℃,培养后h,呈均匀浑浊生长,延长培养时间,管底出现少量沉淀,轻轻振摇,沉淀物上升,旋即消散,培养d后可形成很薄的菌环,在管底则形成多量粘稠沉淀。
、培养特性葡萄球菌在普通营养琼脂平板上培养h后,可形成圆形凸起、边沿整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明的菌落直径mm。
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1、 金黄色葡萄球菌的生物学特性
2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、
金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介 金黄色葡萄球菌的致病性 金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌的检验方法 金黄色葡萄球菌肠毒素的检测 金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌污染的控制
一、金黄色葡萄球菌的生物学的流行病学一般有如下特点： 季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、 鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒 事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化 脓性感染部位常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品： 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食 品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒 素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶 牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
金黄色葡萄球菌检验方法
用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表 面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。
怎样在平板上进行细菌的划线分离。
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
金黄色葡萄球菌的单个菌落在 Baird-Parker琼脂平板上呈圆形,表 面光滑、凸起、湿 润,直径2～3mm。 灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白 色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀), 其外常有一清晰带。当用接种针触及 菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见 到不分 解脂肪的菌株,除没有不透明 圈和清晰带外,其他外观基本相同。从 长期贮存的冷冻或脱 水食品中分离的 菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外 观可能较粗糙,质地较干燥。
原理 应用酶联免疫法，最后测蓝色 荧光（ELFA）抗原（细菌、 蛋白）的检测是应用一种夹心 的技术，包被针上有抗体包被， 所测得的荧光与标本中抗原的 含量成正比。 测试范围 用以食品及环境样本中的致病 菌包括：沙门氏菌、李斯特菌、 单核细胞增生李斯特菌、葡萄 球菌肠毒素、大肠埃希菌 O157、弯曲菌、免疫浓缩沙 门氏菌、免疫浓缩大肠埃希菌 O157。
一、动物学试验：主要用幼猫和猴。 二、血清学试验： 肠毒素作为抗原，可以和特异性抗体发生结合 性反应，产生可见沉淀。 用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素，方 法主要有：
免疫琼脂扩散法 反向间接血凝试验 免疫荧光法 酶联免役吸附法
七、金黄色葡萄球菌快速检测方法（简介）
目前，随着研究的深入，一些快速和采用现代 技术的检测方法不断出现，这些新的快速方法，一 般都缩短了传统检测方法的时间，能够较快地得到 检测结果，并且操作相对简单。 比如：法国梅 里埃公司生产的RPF试剂盒、API检测系统等。梅 里埃公司生产的miniVIDAS利用荧光免疫的方法 检测葡萄球菌肠毒素，在仪器上45分钟可以得到 结果。 附：梅里埃公司生产的miniVIDAS 比如：美国3M公司生产的金黄色葡萄球菌快速检 测试片，可以直接计数产生耐热核酸酶的金黄色葡 萄球菌，操作简单，缩短了时间。
金黄色葡萄球菌的流行病学
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美 国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个 细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%， 我国每年发生的此类中毒事件也非常多。肠毒素形 成条件： 存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量 淀粉的食物，肠毒素易生成。
食品卫生微生物学检验 五、 金黄色葡萄球菌检验方法
1 主题内容与适用范围 本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌的检验方 法。 本标准适用于食品和食物中毒样品中金黄色葡 萄球菌的检验。 2 引用标准 GB 4789.28-2003 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 设备和材料(略) 4 培养基和试剂(略) 5 检验程序(略)
四、金黄色葡萄球菌的流行病学
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及 人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌， 其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康 人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的 机会很多。 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起 的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
八、金黄色葡萄球菌污染的控制
防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查， 患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦 炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛 的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至10℃以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料， 注意低温保存。 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体 应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高 的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用 前要彻底加热。
附：
金黄色葡萄球菌平板菌落照片。
金黄色葡萄球菌的生物学特性
3、生化特性： 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖， 产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱 阳性。 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还 原硝酸盐，液化明胶。 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对 磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素 等高度敏感。
二、金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型（简介）
对分型进行简单的了解 １、血清学分型： 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 多糖抗原有特异性。 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶阴 性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 ２、噬菌体分型： ３、根据肠毒素分型： ４、根据血浆凝固酶分型：
三、金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常 见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引 起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血 症、脓毒症等全身感染。
金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体， 引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤 维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感 染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温， 可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒 素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、 肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。肠毒素 可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏,它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶 等。
金黄色葡萄球菌检验方法
定性试验 定量检测（Baird Parker平板法）
金黄色葡萄球菌检验方法
6 操作步骤
6.1 增菌培养法 6.1.1 检样处理 称取25g固体样品；吸取25mL液体样品，加入225mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成混 悬液。 6.1.2 增菌及分离培养 吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪陈大豆肉汤50mL培养基内，置36±1℃温箱培养 24h，转种血平板和Baird－Parker平板，36±1℃培养24h，挑取金黄色葡萄球菌菌落进行革兰氏染色镜检 及血浆凝固酶试验。 6.1.3 形态 本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5～ 1μm。 6.1.4 在肉汤中呈混浊生长，在胰酪陈大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落 呈金黄色，也有时为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在Baird－Parker平板上为 圆形、光滑凸起、湿润、直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有 一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。 6.1.5 血浆凝固酶试验 吸取1∶4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物 0.5mL，振荡摇匀，放36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或 倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。 6.2 直接计数方法 6.2.1 吸取上述1：10混悬液，进行十倍递次稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液1mL， 分别加入三块Baird－Parker平板，每个平板接种量分别为0.3mL、0.3mL、0.4mL，然后用灭菌L棒涂布整 个平板。如水分不多吸收，可将平板放在36±1℃温箱1h，等水分蒸发后反转平皿置36±1℃温箱培养。 6.2.2 在三个平板上点数周围有混浊带的黑色菌落，并从中任选5个菌落，分别接种血平板， 36±1℃24h培养后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养法。 6.2.3 菌落计数：将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5， 再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。
1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无 荚膜。 革兰氏染色阳性。