液相色谱使用说明

实验前处理，配制流动相时尽量用色谱纯的试剂，另外流动相处理时先抽滤（有机相用有机膜（红色），水相用水膜（蓝色），膜不能装反），再超声除气。安装时一定要注意根据不同的相安装到对应的管子上，还要注意及时补加流动相。

规定：A管道-纯甲醇，B管道-水或者磷酸盐缓冲液，D-5%的甲醇，记得每周更换。

提醒：每次用前先开空调，换流动相时先关泵，这个时候注意保证关紫外灯关闭状态，然后等压力和流速均降为0后再更换流动相，冲柱子时同理。

第一步:开电脑，开启泵，进样装置，柱温箱和检测器开关（均为仪器后面的开关）；点击电脑右下角变色龙图标，待本地连接好后，打开变色龙软件。

第二步：冲洗泵的管道：一般4个管道都需要清洗，点击进入泵界面，打开马达，然后先手动开purge阀排气，再点击冲洗(流速：1ml/min，流动相根据自己的比例调节)等待泵界面控制时间冲洗结束，关闭purge阀（不要拧太紧），马达一直开启状态，冲洗关闭后，这时可以洗进样针，方法：进入进样界面，然后分别运行灌注注射器（默认的3次），清洗缓冲环和清洗进样针，这个时候进样阀模式是Load模式，如果要进样，需要调成进样模式。直到自动冲洗完成。接着冲洗整个管路，保证流速和泵都打开，调节流速和流动相的比例，这时可以开紫外灯，冲洗半个小时左右可以点基线监视看是否平衡，如果已经平衡，点击停止，

注意：在进行序列样品分析前，一定先停止基线监视。

第三步：冲洗过程中可以进入数据设置方法里面根据实验需要编辑仪器方法（根据实验条件设置），处理方法（默认的）和报告模板。

仪器方法：首先点击左下角的数据选项：查看本地连接和HPLC，点击创建——新建文件夹并命名，再点击创建——仪器方法——这时设置运行时间（一般是出

峰时间的2.5倍时长），点击取消选择所有通道。点击下一步

泵设置：设置流速和流动相比例。在溶剂名称下面的方框中输入所用流动相的名字，如%A:“100%水” %D:“100%甲醇。

进样器：选择进样前冲洗，进样阀到进样位置，进样量，

柱温箱：打开温度控制里面的设置温度即可，其他不用设置

检测器：命令里面开紫外灯。注意：开灯前一定要先开流速

DAD通道设置：常规分析时可以选一个通道采集数据，一般参比波长选OFF。点击下一步

仪器方法设定完成后输入名称并保存。最好是将左边的仪器方法重新检查一遍。

处理方法：处理方法是在进完样后对采集到的谱图进行处理数据时需要用到的，所以不需要做任何改动。

步骤：“创建”菜单的下拉菜单中点击“处理方法”，弹出下图“创建处理方法”直接点击3D定量，根据需要选择你所设置的处理方法命名并保存在之前的文件夹里面。

报告模板：“创建”菜单的下拉菜单中点击“报告模板”，弹出下图“创建报告模板”，选择默认。命名并保存在你所建文件夹。

序列：创建一个新序列：在U3000色谱仪器工作区（Chromeleon Console）“创

建”菜单的下拉菜单中点击“序列”。

点击下一步如图

设置样品数，进样次数，开始位置和进样量。

注：放置试剂瓶的时候，可以用感应笔点击旋转。

为新建序列指定所用方法和报告，点击下一步：

点击下一步命名，进入样品进样模式，这里选择好各个参数，一定要点击保存。

第四步：进入“队列”面板，点击“添加”已建好的文件夹。

运行“就绪检查”，停止之前的基线监视，点击开始。

（注意及时查看流动相是否足够）点击启动栏就会显示设置的一些参数。

补充1：这时仍然可以设置冲柱程序，可以在这个界面插入一行空白样，用作冲柱子，方法可以将之前文件上有的冲柱程序复制到下面一栏，然后自己设置冲充柱时间，对于有盐的通道要换成水冲洗，先将泵的流速调为0，待压力和流速均降为0后再将有盐的通道换成水。

补充2：若需要重新更改标样和待测样品的名字、修改样品类型、自动进样器的样品瓶位置、进样体积、选择所用仪器文件、选择所用方法文件、状态、修改样品重量、稀释因子、内标量等均可在相应的位置进行设定和修改。

（注意：以上4步骤都修改和设定完成后，必须点击左上方工具栏中的“保存”按钮，经修改后的样品序列表被保存，样品序列表修改成功。

第六步：数据分析

双击已完成的某个样品，切换到色谱数据处理区的“数据处理”界面，点击功能区中“结果”，可以看到完整的色谱图和结果，从色谱峰图可以观察分离情况。

点击“处理”再点击“向导”，这时可以调节最小峰面积进行结果处理。如果想看3D图谱，就直接点击“等值图和结果”。

第六步：管路清洗：做完所有的样品后，需要冲洗流路（包括色谱柱）。

a)待冲洗柱子的这一栏运行完成后，关“队列”里面的“停止”。

b)关闭检测器的“紫外灯”（如果连续使用，建议不要关灯，因为开关一次可能有20小时的灯寿命损失）。

c) 关闭“柱温箱”

d）样品这一栏不用管

e）泵里面的流速暂时不降为0，待几分钟以后再设置为0

f）关“马达”g）关软件

h）关仪器

关于新建立仪器方法的预览与修改

下图中左侧“仪器方法”下选中“脚本编辑器”，右边方框中把刚才的所有设置项转化成了程序，在此程序中的所有项设置仍可重新修改，只要点击左边仪器方法下对应的各个设备的直观的图示，更改其中的某项也同样起作用。

关于工作站主页的介绍：

左下角有仪器和数据选项。

仪器界面：主页：显示每一个仪器的实时状态，

泵：设置里面有流速设置，流动相比例设置等

进样：进样阀至进样位置，这里运行序列前必须检查灌注注射器看是否有气泡，接着清洗缓冲环，清洗进样针。

柱温：这里只需要设置温度

检测：命令里面开紫外灯，注意：开灯一定要先开流速关于试剂瓶的清洗

1.用过的试剂瓶用酒精擦拭掉上面的标记

2.用洗洁精浸泡超声10min

3.超纯水冲洗2-3次

4.85%乙醇浸泡冲洗