乳酸菌检验.
乳酸菌检验
食品中乳酸菌检验a.乳酸菌检测的意义：当益生菌占优势时（占总数的80%以上），人体则保持健康状态，否则处于亚健康或非健康状态。
长期科学研究结果表明，以乳酸菌为代表的益生菌是人体必不可少的且具有重要生理功能的有益菌，它们数量的多和少，与人的健康与长寿非常重要。
人体肠道内乳酸菌拥有的数量，随着人的年龄增长会逐渐减少，当人到老年或生病时，乳酸菌数量可能下降100至1000倍，直到老年人临终完全消失。
在平时，健康人比病人多50倍，长寿老人比普通老人多60倍。
因此，人体内乳酸菌数量的实际状况，已经成为检验人们是否健康长寿的重要指标。
b.实验原理：乳酸菌为一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。
乳酸菌主要为乳杆菌属（Lactobacillus)、双岐杆菌属(Bifidobacterium)和嗜热链球菌属(Streptococcus）。
c.实验材料：食品检样（酸奶)培养基：MRS 培养基、莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS培养基、MC培养基，无菌生理盐水其它：超净工作台、无菌培养皿、移液枪、10ml离心管和恒温培养箱等。
d.实验步骤：1、样品处理：以无菌操作取检样15mL，放于135mL灭菌生理盐水，经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。
吸取1mL1:10的稀释液依次做10倍梯度稀释，共10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6 共6个稀释度。
2、乳酸菌计数:2.1乳酸菌总数乳酸菌总数计数培养条件的选择及结果说明见表1。
2.2双歧杆菌计数根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2~3个连续适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。
稀释液移入平皿后，将冷却至48°℃的莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良的MRS培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。
37℃厌氧培养72h，培养后计数平板上的所有菌落数。
2.3嗜热链球菌计数根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
食品中乳酸菌的检测
1 范围本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lactic acid bacteria）的检验方法。
本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验。
2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 术语和定义3.1 乳酸菌lactic acid bacteria一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。
本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属（Lacto bacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和链球菌属（Streptococcus）。
4 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：4.1 恒温培养箱：36℃±1℃。
4.2 冰箱：2℃～5℃。
4.3 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。
4.4 天平：感量0.1 g。
4.5无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
4.6 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
4.7无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。
5 培养基和试剂5.1MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS培养基：见附录A中A.1。
5.2 MC培养基（Modified Chalmers培养基）：见附录A中A.2。
5.3 0.5%蔗糖发酵管:见附录A中A.3。
5.4 0.5%纤维二糖发酵管:见附录A中A.3。
5.50.5%麦芽糖发酵管:见附录A中A.3。
5.6 0.5%甘露醇发酵管:见附录A中A.3。
5.7 0.5%水杨苷发酵管:见附录A中A.3。
5.8 0.5%山梨醇发酵管:见附录A中A.3。
5.9 0.5%乳糖发酵管:见附录A中A.3。
5.10七叶苷发酵管:见附录A中A.45.11革兰氏染色液：见附录A中A.5。
乳酸菌检验报告
乳酸菌检验报告1. 引言本报告旨在对乳酸菌样本的检验结果进行详细分析和解释。
乳酸菌是一类益生菌，具有多种益处，包括改善肠道菌群平衡、促进消化系统健康等。
通过对乳酸菌样本的检验，了解其数量和种类，能够为人们提供有关肠道健康的重要指标。
本报告将详细介绍检验方法、结果分析以及相关建议。
2. 检验方法乳酸菌样本的检验通常采用以下方法之一：2.1 培养基法乳酸菌样本首先被接种在含有适宜营养物质的培养基上。
经过一段时间的培养，菌种将生长并形成可见的菌落数量。
通过观察培养基上形成的菌落数量和形态特征，可以初步了解乳酸菌的情况。
2.2 PCR法PCR法是一种通过扩增目标DNA片段的技术。
在乳酸菌检验中，可以通过PCR方法扩增乳酸菌特异性基因片段。
通过测量扩增产物的数量，可以推测乳酸菌样本中乳酸菌的数量。
2.3 16S rRNA测序法16S rRNA测序法是一种通过测序乳酸菌样本中16S rRNA基因的方法。
16S rRNA是一种在细菌中普遍存在的基因，其序列具有一定的保守性和变异性。
通过测序并比对乳酸菌样本中的16S rRNA序列，可以确定乳酸菌的种类。
3. 检验结果与分析3.1 培养基法检验结果经过培养基法检验，乳酸菌样本形成了X个可见的菌落，其形态特征为Y。
根据经验数据，通过数量与形态的分析，可以判断肠道菌群平衡的情况。
3.2 PCR检验结果PCR法检验得到的扩增产物数量为Z，据推测，乳酸菌样本中可能存在的乳酸菌数量约为W。
3.3 16S rRNA测序结果通过16S rRNA测序，确定了乳酸菌样本中存在的乳酸菌种类为A、B、C。
根据已知的乳酸菌种类特点，可以初步评估肠道健康状况。
4. 结果解释与建议根据乳酸菌检验结果，结合个人的生活习惯和饮食情况，可以给出以下解释和建议：•根据培养基法检验结果，乳酸菌样本形成的菌落数量适中，形态特征正常，表明肠道菌群平衡较好。
•根据PCR检验结果，乳酸菌样本中可能存在适量的乳酸菌，有益于维持肠道健康。
微生物的常规检验技术--乳酸菌的检验
四、乳酸菌的检验
４ 检验程序
四、乳酸菌的检验
５ 操作步骤--样品制备 ➢ 样品制备无菌操作程序： ➢ 第一步：冷冻样品 可先使其在2~5℃条件下解冻，时间不超过18h,也可在温度不超 过45℃的条件下解冻，解冻时间不超过15min； ➢ 第二步：固体和半固体食品 以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的 无菌均质杯内，8000 ~ 10 000 r/min均质1 ~ 2min，制成1:10样品匀液； ➢ 第三步：液体样品 应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生 理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇,制成1:10的样 品匀液； ➢ 第四步：用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水 的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹 打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液； ➢ 第五步：另取1mL无菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液,每递增稀释一次， 即换用1次1mL灭菌吸管。
➢ 双歧杆菌培养:根据待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度，每个稀
释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐改良 MRS琼脂平板，表面涂布，每稀释度做
两个平板。36℃±1℃，厌氧培养48h ±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释
到平板涂布要求在15min内完成；
➢ 嗜热链球菌培养:根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度,每
培养皿1 培养皿2 平均数
乳酸菌的验收标准
乳酸菌的验收标准
乳酸菌的验收标准主要包括以下几个方面：
1. 感官指标：乳酸菌应呈现微黄色，状态近似炼乳状，表面有少量乳清析出，质地均匀一致，无砂质、片状或糊状感，口感细腻，甜酸适中，具有纯正的乳酸发酵香味和芒果风味。
2. 微生物指标：乳酸菌的数量应≥10~6个／毫升，杂菌总数≤100个／毫升；大肠杆菌≤3个／毫升；致病菌不得检出。
3. 保质期：用塑料杯灌装密封，保质期3个月。
以上信息仅供参考，具体的验收标准可能会根据不同的产品类型和生产厂家有所不同。
乳酸菌鉴定方法
乳酸菌鉴定方法嘿，你问乳酸菌的鉴定方法哈。
那我们得先从形态学方面入手。
把含有乳酸菌的样本放在显微镜下观察。
乳酸菌的形状有点特别，大多数是杆状或者球状的。
就像一个个小卫士，在微观世界里排着队。
你可以看看它们的大小，一般都比较小，得仔细观察才能看清它们的模样。
有的乳酸菌还会连在一起，像一串串小珠子似的。
再说说菌落特征。
把乳酸菌接种到固体培养基上，让它们生长繁殖。
过一段时间后，你会看到培养基上长出了一个个小菌落。
乳酸菌的菌落通常比较小，而且表面光滑、湿润。
有点像小小的露珠落在培养基上。
颜色一般是白色或者乳白色的，看起来很干净。
接着讲讲生化反应鉴定。
乳酸菌能发酵一些糖类，比如葡萄糖、乳糖等。
我们可以通过检测它们发酵糖类产生的产物来鉴定。
比如检测有没有产生乳酸，因为乳酸菌的名字可不是白叫的，它们可是产乳酸的能手。
可以用一些化学试剂来检测，要是试剂变色了，那就说明产生了乳酸。
还有一个方法是通过分子生物学技术来鉴定。
这就有点像用高科技手段来识别乳酸菌。
提取乳酸菌的DNA，然后用特定的引物进行PCR 扩增。
就像给乳酸菌的DNA 做个标记，这样就能准确地知道是不是乳酸菌了。
我给你讲个事儿哈。
在一家做酸奶的工厂里，他们很关心酸奶里的乳酸菌。
有一次，他们怀疑酸奶里的乳酸菌有点问题，就开始进行鉴定。
先把酸奶样品放在显微镜下看，发现有很多球状的小东西，看着像是乳酸菌。
然后把样品接种到培养基上，长出了好多小菌落，菌落的特征和乳酸菌的很像。
接着他们又做了生化反应测试，发现这些菌确实能发酵乳糖产生乳酸。
最后还不放心，又用分子生物学技术验证了一下，确定就是乳酸菌。
这样他们就放心了，知道自己的酸奶里有足够的、正宗的乳酸菌。
在鉴定乳酸菌的时候，每一个方法都很重要。
就像我们认识一个人，要从不同的方面去了解。
不能只看外表，还得看看他的行为、习惯等。
鉴定乳酸菌也是一样，综合运用这些方法，才能准确地鉴定出乳酸菌。
而且操作过程要仔细，不能马虎，不然就可能得出错误的结论。
乳酸菌的检测实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实验操作，掌握乳酸菌的检测方法，了解乳酸菌的基本特性，提高对微生物检测技术的实际操作能力，并加深对乳酸菌在食品、医药等领域的应用认识。
二、实训时间2023年10月25日至2023年11月5日三、实训地点生物实验室四、实训内容1. 乳酸菌样品的采集与处理2. 乳酸菌的分离纯化3. 乳酸菌的形态观察4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定5. 乳酸菌产酸能力的测定五、实训方法1. 乳酸菌样品的采集与处理（1）采集：从市场上购买含有乳酸菌的酸奶、酸奶饮料等样品。
（2）处理：将样品用无菌生理盐水进行梯度稀释，制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化（1）平板划线法：将稀释后的样品涂布在MRS平板上，用无菌接种针进行划线。
（2）培养：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（3）挑取单菌落：根据菌落的特征，挑取疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察（1）制作临时玻片：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，用无菌盖玻片覆盖。
（2）显微镜观察：在显微镜下观察乳酸菌的形态、大小、排列等特征。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定（1）革兰氏染色：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，进行革兰氏染色。
（2）生化反应：进行糖发酵试验、氧化酶试验、V-P试验等。
5. 乳酸菌产酸能力的测定（1）制作MRS培养基：按照实验要求配制MRS培养基。
（2）接种：将挑取的单菌落接种于MRS培养基中。
（3）培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（4）测定pH值：使用pH计测定培养基的pH值，计算产酸能力。
六、实训结果与分析1. 乳酸菌样品的采集与处理采集了5个样品，均成功制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化共分离纯化出10个疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察在显微镜下观察到乳酸菌为杆状，大小约为0.5～1.0μm，排列呈链状。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定10个疑似乳酸菌均呈革兰氏阳性，能发酵乳糖，不产生硫化氢，氧化酶试验阴性。
饮料中乳酸菌的检验
乳酸菌
双歧杆属菌
2.(1)形态特征 细胞形态多样，Y字型，V字型，弯 曲状，勺型，典型形态为分叉杆菌。革兰氏阳性，亚 甲基蓝染色菌体着色不规则。无芽孢和鞭毛，不运动。 (2)生化特性 营养要求苛刻，培养许多种双歧因子。 。 。 专性厌氧。温度范围25~45 C可生长，最适温度37 C。 不耐酸，PH大于等于5.5对菌体存活不利。能利用葡 萄糖，果糖，乳糖和半乳糖，蛋白质分解能力微弱， 能利用铵盐作为氮源，不还原硝酸盐，不水解精氨酸， 不液化明胶，不产生吲哚，联苯胺反应阴性，接触酶 反应阴性。
4.明串珠菌属 (1)形态特征 细胞球形或豆状，成对或成链排列。革兰式阳 性，不运动，无芽孢。 (2)生化特征 培养需要复合生长因 子烟酸，硫胺素，生物素和氨基酸，不需要泛酸及其衍生物。 。 。 兼性厌氧。温度范围5~30 C可生长，最适温度25 C。异性乳 酸发酵。通常不酸化和凝固牛乳，不水解精氨酸，不水解蛋白， 不还原硝酸盐，不溶血，不产吲哚，接触酶反应阴性。 (3)培 养特性 菌落光滑，圆形，灰白色，直径一般小于1.0MM ，液 体中均匀浑浊，但长链状菌株可产生沉淀。
做成几个适当倍数的稀释度
选择2~3个适宜稀释度，各取1ML加入灭菌平皿内
报告
菌落计数
每皿内加入适量改良TJA或改良MC培养基
﹙1﹚检样处理 以无菌操作取经过充分摇匀的检样25ML，放入含有225ML 灭菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液。 ﹙2﹚样品稀释 用1ML灭菌吸管吸出取1：10稀释液1ML，沿管壁徐徐注 入含有9ML灭菌生理盐水的试管内，作成1：100稀释液，另取一毫升灭菌吸 管，按上述操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支一毫 升灭菌吸管。 ﹙3﹚选择适宜稀释样液 选择2~3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增 稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移一毫升稀释液于灭菌平皿内，每个 稀释度做两个平皿。 ﹙4﹚制检样倾注平板 稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计 数培养基注入平皿约15ML，并转动平皿使混合均匀后，静置，冷却成平板。 ﹙5﹚制作空白对照平板 将乳酸菌计数培养基倾入加有一毫升灭菌生理盐水 的灭菌平皿内作空白对照。
乳酸菌检测方法
一、乳酸菌检测方法植物乳杆菌的检验1原理植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下，于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落，根据长出的菌落数和稀释倍数，计算出活菌数。
2仪器与试药2.1 仪器超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱（60℃±1℃）、恒温水浴锅、显微镜（10x—100x）、架盘天平（0—500g，精确至0.5g）、250ml锥形瓶、250ml 盐水瓶、灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度）、灭菌平皿（直径90mm）、灭菌试管（15mm×160mm）、灭菌L型玻璃棒等。
2.2 试药酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂；无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯；水为双蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。
2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备2.3.1培养基的组成酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。
2.3.2培养基制备将上述的各组分在80～90℃加热使溶解，校正pH6.2，加蒸馏水至1000ml中，摇匀，分装于盐水瓶，每瓶100ml。
在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
2.4营养琼脂平板的制备取冷至45℃左右的MCA琼脂培养基，在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中，每平皿各约15ml，待冷却凝固后，备用。
2.5无菌生理盐水的制备称取氯化钠9.0g，用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中，摇匀，分装于250ml三角瓶中，每瓶装90ml. 在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
3供试品溶液的制备以无菌操作法取检品10.0g，加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中，充分振荡10分钟，制成1﹕10样品悬液。
实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。
本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。
正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。
2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。
3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。
二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。
2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。
三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。
经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。
3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。
四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。
经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。
2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。
通过观察生长情况，计算活菌数。
五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。
总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。
乳酸菌检验方法
河北世翔生物有限公司乳酸菌检验方法前言1.本检验方法针对公司各种形式（固态、液态）的乳酸菌菌微生物添加剂；2.本标准的制定依据GBT 23181-2008 、SNT 1941.1-2007、GB 478935-2010等国家标准制定；3.本标准由研发部起草，经公司总经理批准，公布之日起实施。
一、检验前的准备1.培养基及其试剂1.1盛有若干玻璃珠的无菌水225ml，1.2MRS琼脂培养基：牛肉膏10g蛋白胨10g酵母膏5g121℃，灭菌15-20min1.3培养皿12个，试管12个，涂布棒1个，用报纸包扎后灭菌1.4打开超净工作台，用消毒水或者酒精喷洒，工作台台面，打开紫外灯杀菌30分钟，打开风机，5分钟后，打开照明二、取样按照GB/T14699.1进行取样：用灭菌的铲子，选取有代表性的样品适量放入取样袋中，标注好取样日期，批次备用；液体取样使用灭菌的试管，在火焰保护下进行，完成后放入低温冰箱储藏。
三、检测步骤1. 以无菌操作称取试样25g（ml），加入225ml有玻璃珠的无菌水中，放在摇床上，200r/min，摇动30min，制成1：10的初始菌悬浮液。
取1：10的初始菌悬浮液0.5ml，加入4.5ml无菌水，经充分混匀后，制成1：100的稀释液。
依次方法依次稀释到1：1082.选择107 、108 二个稀释度，用移液枪分别吸取0.1ml，接种到3个营养琼脂平板上，使用涂布棒尽可能小心快速地涂布接种液于琼脂表面，涂布棒不得接触平皿边缘，涂布好的平皿改好，置室温中放置15min使接种物完全被琼脂吸收。
翻转上述平皿置于36±1℃培养箱中培养48±2h。
从样品稀释到涂布完成要求在15分钟内完成。
3.培养后，选取菌落数在30到300个之间的平板计数，低于30 CFU 平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
若平板中有较大片状菌落生长时，则不宜计数；若片状菌落步不到平板的一半，而其余一半分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
乳酸菌检测思考题与讨论
乳酸菌检测思考题与讨论乳酸菌检测思考题与讨论引言：乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。
乳酸菌不仅可以产生乳酸，还能够抑制有害菌的生长，增强人体免疫力，并对人体健康具有多种益处。
乳酸菌的检测对于食品、医药、农业等领域具有重要意义。
一、乳酸菌检测方法1. 培养基法：这是最常用的乳酸菌检测方法之一。
通过将样品接种到含有特定培养基的琼脂平板上，利用乳酸菌对特定营养物质的需求进行筛选和培养。
通过观察琼脂平板上是否出现特定形态和颜色的细菌落，可以初步判断样品中是否存在乳酸菌。
2. PCR法：PCR（聚合酶链式反应）是一种分子生物学技术，可以在短时间内扩增目标DNA片段。
通过设计特异性引物，可以选择性地扩增与乳酸菌相关的基因序列。
通过检测PCR反应产物的存在与否，可以判断样品中是否存在乳酸菌。
3. 酶法：乳酸菌在代谢过程中会产生一些特定的酶，如乳酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等。
利用这些特定的酶可以进行乳酸菌的检测。
常用的方法有色谱法、比色法等。
二、乳酸菌检测的应用领域1. 食品行业：乳制品是乳酸菌最常见的应用领域之一。
通过对食品中乳酸菌含量的检测，可以评估产品质量和卫生安全，并指导生产工艺和储存条件的控制。
还可以通过检测食品中潜在致病菌和有害物质的含量来保障消费者健康。
2. 医药领域：乳酸菌具有调节肠道微生态平衡、增强免疫力等作用，在医药领域有广泛应用。
通过对患者粪便或血液样本中乳酸菌含量的检测，可以评估肠道健康状况，并指导医生制定个体化的治疗方案。
3. 农业领域：乳酸菌在农业领域中也有一定的应用价值。
通过检测土壤或植物体内乳酸菌的含量，可以评估土壤质量和植物健康状况，并指导农民合理施肥和防治病虫害。
三、乳酸菌检测中存在的问题与挑战1. 检测方法选择：不同的乳酸菌检测方法具有不同的灵敏度、特异性和操作难度。
在实际应用中，需要根据具体需求选择合适的检测方法。
同时，还需要考虑成本、时间等因素。
乳酸菌检测报告
乳酸菌检测报告引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界和人体内的细菌，以革兰氏阳性菌为主，能够发酵碳水化合物并产生乳酸。
乳酸菌具有许多益生作用，如改善肠道菌群平衡、增强免疫力、促进食物消化等。
因此，对乳酸菌进行检测具有非常重要的意义。
本报告旨在介绍乳酸菌检测的方法和结果。
检测方法样品收集乳酸菌检测的样品可以包括食品、饮料和生物样本等。
收集样品时，首先需要保持卫生条件，避免外界环境的污染。
然后，选择合适的容器收集样品，并尽快送至实验室进行分析。
菌落计数菌落计数是一种常用的乳酸菌检测方法。
该方法通过将合适稀释的样品涂布在琼脂平板上，经培养后根据菌落的数量进行计数。
具体步骤如下：1.将样品进行系列稀释，以获得合适的菌落计数范围。
2.取适量的稀释液，均匀涂布在琼脂平板上。
3.将平板倒置放置在恒温培养箱中，通常在30-37摄氏度下培养24-48小时。
4.检查平板上的菌落数量，并根据菌落的形态和颜色等特征进行初步鉴别。
5.计算菌落计数值，并根据所在单位面积的菌落数量转换为CFU/mL。
PCR检测PCR（聚合酶链式反应）是一种基因检测技术，可以通过扩增目标基因区域来间接检测乳酸菌。
该方法适用于检测数量较少的乳酸菌，并可以对乳酸菌的种类进行鉴定。
具体步骤如下：1.收集样品，并进行细菌的提取。
可以使用商用的细菌提取试剂盒，或者自行制备细菌提取缓冲液。
2.通过PCR扩增目标基因区域。
根据乳酸菌的保守序列设计引物，将待检样品的DNA与引物进行反应，产生特定大小的DNA片段。
3.将PCR产物进行电泳分析。
将PCR产物与DNA标记物一起加载到琼脂糖凝胶上进行电泳分离，根据标记物的迁移情况判断是否存在乳酸菌DNA片段。
4.根据PCR产物的大小和电泳图谱进行结果解读。
与已知的乳酸菌DNA片段进行比对，可以确定乳酸菌的种类和数量。
检测结果菌落计数根据菌落计数的结果，我们发现样品中乳酸菌的数量为XXXX CFU/mL。
通过初步鉴别，确定所检测的乳酸菌为XXXX属。
乳酸菌的鉴定
乳酸菌的鉴定吲哚试验1）.试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管2支，分别标记乳酸菌和空白对照。
2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的不接种，置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。
3）.观察记录：在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。
糖发酵试验1）.试管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各2支，每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和空白对照。
2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。
将装有培养液的杜氏小管倒置试管中，置37摄氏度恒温培养箱中培养24小时，观察结果。
3）.观察记录：与对照管比较，若接种培养液保持原由颜色，其反映结果为阴性；如果培养液呈黄色，反映结果为阳性。
培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，杜氏小管内没有气泡为阴性反应。
1.2.3 乳酸的检测选用已经分离的菌种做小型发酵实验，取发酵液的上清液约10 ml于试管中，加入10%硫酸1 ml ,再加2%高锰酸钾 1 ml ,此时乳酸转化为乙醛，把事先在含氨的硝酸银溶液中侵泡的滤纸条搭在试管口中，微火加热试管至沸，观察滤纸变化。
1.结果和分析2.1 乳酸菌的分离提纯在平板上出现了圆形稍扁平的黄色菌落，周围培养基变为黄色，初步定为乳酸菌⑴，取出少量在显微镜下观察到了链球状和杆状两种形状（如图一2.2乳酸菌的鉴定该菌种的菌落为圆形稍扁平的黄色菌落，有杆状和链球状两种形状。
在吲哚试验中，加入菌种的试管无任何变化，证明为阴性反应（如图二）。
说明该菌不具有分解色氨酸产生吲哚的能力。
也说明此菌种不是大肠杆菌，因为大肠杆菌的吲哚试验证明为阳性。
在糖发酵试验中，在加入葡萄糖的发酵培养液中加入菌种后，培养液变为黄色，反应结果为阳性，且杜氏小管内无气泡（如图三）；加入蔗糖的发酵培养液中加入菌种后的反应结果也为阳性且杜氏小管内无气泡（如图四）。
乳酸菌检验的方法要点
乳酸菌检验的方法要点乳酸菌不是分类学上的名称，它是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳糖产生乳酸、需氧和兼性厌氧、多数无动力、过氧化氢酶阴性、革兰氏阳性的无芽孢杆菌和球菌。
这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。
乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。
乳酸菌的检测流程：1、乳酸菌悬液的制备：将待检测的样品，准确称取0.5克，量取99.5mL无菌生理盐水稀释，（此次稀释了200倍，即0.5克样品，稀释到了100克水溶液），再加入灭菌玻璃珠20～30粒于250mL三角瓶中，置于振荡器或摇床上剧烈摇晃30分钟以上，目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散从而分散开来。
2、稀释到适当倍数：根据所待检测的样品可能的乳酸菌含量，进行适当的稀释操作，例如如果估计样品的含乳酸菌活菌数为200亿/克左右，则建议稀释2亿倍，这样将来在90mm平板上培养时会长出大约100个乳酸菌落，比较便于计数，总之控制平板培养皿上的乳酸菌落数量在30～300个的范围内，比较便于计数。
3、倒制平板即“接种”：倒制平板在超净工作台上进行，养殖户可使用一盏简单的酒精灯和一个干净的操作台就可操作。
即事先配制好并灭菌处理的检测用琼脂培养基，在水浴锅内保持50℃的温度，使琼脂培养基呈溶解状态，置于操作台旁边备用。
（养殖户可先不从压力锅中取出，在压力锅维持一定的温度，从而也不会凝固。
）取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作台上备用。
（养殖户的培养皿平板可在压力锅中进行蒸汽灭菌处理。
）在无菌条件下（打开超净工作台无菌风，或养殖户点上酒精灯），将稀释了2亿倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL，于培养皿中，再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右（倒培养基时，估计能覆盖满平皿的液体量即可），然后，盖好培养皿盖，轻轻转动平皿，原地转几圈，使培养基液与乳酸菌液混合均匀，等数分钟后，待培养基凝固后，可移入培养箱中进行培养；4、在培养箱中进行培养：将前面倒制好的平板倒转（即盖子在下面），放于培养箱中于33℃温度下培养2～3天，待培养皿平板中长出比较明显的带有透明圈的菌落时，即可进行计数得出检测结果。
乳酸菌的检测
乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。
乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。
二样本采集检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂，样本应放入冰箱保存，心快检验。
三检验方法（中华人民共和国国家标准乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验GB／T 16347-1996）乳酸菌菌总数的测定：乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后，所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数。
（一）检验程序乳酸菌菌落总数检验程序如下：（二）培养基和试剂改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）；改良MC培养基（modified Chalmers培养基）；0.1％亚甲蓝牛乳培养基；6.5％氯化钠肉汤参照；pH9.6葡萄糖肉汤；40％胆汁肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染色液；3％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌。
（三）操作步骤1．以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml（或25g）放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液。
2．用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。
3．另取1ml灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
4．选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
微生物检测乳酸菌检验实验解读PPT
嗜热链球菌(S.thermophilus)
表3 嗜热链球菌的主要生化反应
菊糖
乳糖 甘露醇 水杨苷
－
＋
－
－
山梨醇 －
马尿酸 －
注：＋表示90%以上菌株阳性；－表示90%以上菌株阴性。
棉籽糖 － －
d ＋ ＋
七叶苷 －
GB 4789.35-2023标准解读
8. 乳酸菌的鉴定（可选做）：
8.2 第二法 实时荧光PCR法鉴定 8.2.1 纯培养
GB 4789.35-2023标准解读
8. 乳酸菌的鉴定（可选做）：
8.1 第一法 生化鉴定 8.1.4 乳酸菌菌种主要生化反应
表2 常见乳杆菌属内种的主要生化反应
菌种
七叶苷 纤维二糖 麦芽糖 甘露醇 水杨苷
干酪乳杆菌(L.casei )
＋
＋
鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus )
＋
＋
＋
德氏乳杆菌保加利亚种
包埋型益生菌产品前处理，比如参考相应技术/工衣要求： 可在无菌条件下研磨，多次稀释，确保益生菌可以有效溶解； 用磷酸盐稀释液稀释，震荡摇匀
GB 4789.35-2023标准解读
6. 操作步骤：
6.2 稀释及培养 6.2.1 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1: 10 样品液 1 mL沿管缓慢注于装有 9 mL 稀释液的无菌试管中(注 意吸管或微量移液器吸头尖端不要触及稀释液)，振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制 成 1: 100 的样品匀液。 6.2.2 另取 1 ml 无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做 10 倍递增样品匀液，每递增稀释一次， 即换用1次 1 mL灭菌吸管或吸头。 6.2.3 经特殊技术(如包埋技术)处理的含乳酸菌食品应按照相应技术/工艺要求进行稀释。
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3、倒培养基
4、培养
• 将平皿倒置于37℃恒温箱内培养72h
五、实验数据及结果
将各稀释平板上的菌落数填入下表
稀释度 10－1 1 2 3 平 均 1 10－2 2 3 平 均 1 10－3 2 3 平 均
平板号 菌落个数
根据试验结果，报告检测结果： 被检样品每1mL（g）食品中乳酸菌数为：
。
2、制平板
• 用1mL移液管移 取酸奶稀释液 1mL，放入培养 皿中（必须距离 酒精度10cm以内 ）。
ห้องสมุดไป่ตู้
• 选用2~3个适合的 稀释度，培养皿贴 上相应的标签，分 别吸取不同稀释度 的稀释液1mL置于 平皿内，每个稀释 度作2个重复。
• 然后用溶化冷却 至45℃左右的 MC培养基倒平皿 ，迅速转动平皿 使之混合均匀， 冷却成平板。
食品微生物技术
实训项目教程
适合专业（群）：食品加工技术专业群
教师：万国福
行动领域 任务一 菌落总数测定 任务二 大肠菌群检验 任务三 霉菌、酵母菌检验 任务四 乳酸菌检验
任务四 乳酸菌检验 一、实验目的
• 1、了解酸乳中乳酸菌分离原理 • 2、学习并掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法
二、实验原理
• 活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家 将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量 的依据。由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长 需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类 、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤 培养基难以满足其要求。测定乳酸菌时必须尽量 将试样中所有活的乳酸菌检测出来。要提高检出 率，关键是选用特定良好的培养基。采用稀释平 板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得 满意的结果。
三、实验材料
• 1、培养基 改良MC培养基（MRS培养基，改良CHALMERS培养 基，M17培养基）。 • 2、仪器和器具 无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠 三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器，恒 温培养箱。
培养基
• 改良MC培养基
• 配方：大豆蛋白胨 5g，牛肉浸膏5g， 酵母浸膏5g，葡萄 糖20g，乳糖20g， 碳酸钙10g，琼脂 15g，蒸馏水 1000mL，硫酸多黏 菌素B
四、操作步骤
• 将灭过菌的蒸馏水分两次，用移液管移取10mL装入灭过 菌的试管中。
1、实验流程
实验 流程
样品
稀释
制平板 培养
检查计数
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2、实验步骤
1、样品稀释
• 先将酸奶样品搅拌均匀，用无 菌移液管吸取样品25mL加入盛 有225mL无菌水的三角瓶中， 在旋涡均匀器上充分振摇，务 必使样品均匀分散，即为10-1的 样品稀释液，然后根据对样品 含菌量的估计，将样品稀释至 适当的稀释度。