实验一、乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验.doc
发酵工艺学实验指导
实验一、酿酒葡萄成熟度的控制以及入罐发酵一、目的与要求成熟度是决定葡萄酒质量的重要因素。
通过测定浆果的成熟度，来了解原料的成熟质量，确定各品种的最佳工艺成熟度，并以此决定葡萄酒类型和相应的工艺条件。
同时简单了解葡萄酒酿制的工艺原理。
二、试剂与仪器1.pH计、手持糖量计、托盘天平、量筒、水浴锅、电炉、移液管、锥形瓶、容量瓶、5L玻璃瓶。
2.斐林试剂A、B液，1%次甲基兰，0.1mol/L氢氧化钠溶液、1%酚酞指示剂、邻苯二甲酸氢钾，95%酒精，盐酸等。
三、方法与步骤1.采样：从转色期开始每隔5-7天采样一次，对于大面积园，采用250株取样法：每株随机取1-2粒果实，并取300—400粒；面积较小的品种。
可随机取5 - l0穗果实，装入塑料袋于冰壶中，迅速带回实验室分析。
简单的成熟度的测定可用手持糖量计测定，如果是精确的测定可在实验室中采用斐林试剂测定。
2.百粒重与百粒体积，随机取100粒果实，称重，然后将其放入250ml(或500ml)量筒中，加入一定体积的水，至完全淹没果实．读取量筒水面的读数，减去加入时的水量，即为百粒体积。
3.出汁率的测定；取100g分选较好的葡萄果粒，用纱布挤汁，放入小烧杯中，立即称量；出汁率=葡萄汁重量/葡萄果实重量。
干红葡萄酒的发酵工艺过程图计算：在发酵结束后还需要再进行出汁率的测定。
自流汁率(％)=W1/W2 x 100总出汁率(％)=(W1+W2)/ Ws x 100式中W1——葡萄浆自流汁的重量，(g)；Ws——试样重量，(g)；W2——经压榨流出的葡萄汁重量，(g)。
4.可溶性固形物与pH值；用手持糖量计测定葡萄汁的可溶性固形物(％)，取20ml汁测pH值。
5.还原糖与总酸：用斐林试剂法测定还原糖，用碱滴定法测定总酸。
6.果皮色价测定：取20粒果实，洗净擦干，撕下果皮并用吸水纸擦净皮上所带果肉及果汁，然后剪碎，称取0.2克果皮用盐酸乙醇溶液(1 mol/L盐酸: 95％乙醇= 15：85)50ml浸泡，浸泡20小时左右，然后测定540nm下的吸光度，计算果皮色价(X A x 10)/W (X A——吸光度，W——果皮重量g)。
微生物的常规检验技术--乳酸菌的检验
四、乳酸菌的检验
４ 检验程序
四、乳酸菌的检验
５ 操作步骤--样品制备 ➢ 样品制备无菌操作程序： ➢ 第一步：冷冻样品 可先使其在2~5℃条件下解冻，时间不超过18h,也可在温度不超 过45℃的条件下解冻，解冻时间不超过15min； ➢ 第二步：固体和半固体食品 以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的 无菌均质杯内，8000 ~ 10 000 r/min均质1 ~ 2min，制成1:10样品匀液； ➢ 第三步：液体样品 应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生 理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇,制成1:10的样 品匀液； ➢ 第四步：用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水 的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹 打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液； ➢ 第五步：另取1mL无菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液,每递增稀释一次， 即换用1次1mL灭菌吸管。
➢ 双歧杆菌培养:根据待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度，每个稀
释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐改良 MRS琼脂平板，表面涂布，每稀释度做
两个平板。36℃±1℃，厌氧培养48h ±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释
到平板涂布要求在15min内完成；
➢ 嗜热链球菌培养:根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度,每
培养皿1 培养皿2 平均数
乳酸菌鉴定
都要求无菌操作菌种的分离取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C 恒温下培养48h。
挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜检，茵体一致)。
结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。
再分别转移到试管斜面上进行保存。
分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2；保存用斜面培养基：酵母膏1％，碳酸钙2％，葡萄糖1％，琼脂2％，pH 7．0。
培养条件将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上，在30℃恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。
测定方法菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性及含量测定依据食品检验技术1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序自然发酵酸菜汁液一稀释一培养一挑起单菌落染色、镜检一挑选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优良菌株一试管穿刺低温保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鉴定用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。
生理生化特征鉴定：产乳酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应⋯、明胶水解反应、硫化氢反应、乳酸菌发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。
1．2．I．3 乳酸菌的保存⋯采用定期移植低温保藏法。
培养基配方：葡萄糖1％、蛋白胨0 2％、l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。
c灭菌30min。
将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。
1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度计上，用最大吸收光波长=6001RIifl测定。
乳酸菌检验.
四、操作步骤
• 将灭过菌的蒸馏水分两次，用移液管移取10mL装入灭过 菌的试管中。
1、实验流程
实验 流程
样品
稀释
制平板 培养
检查计数
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2、实验步骤
1、样品稀释
• 先将酸奶样品搅拌均匀，用无 菌移液管吸取样品25mL加入盛 有225mL无菌水的三角瓶中， 在旋涡均匀器上充分振摇，务 必使样品均匀分散，即为10-1的 样品稀释液，然后根据对样品 含菌量的估计，将样品稀释至 适当的稀释度。
三、实验材料
• 1、培养基 改良MC培养基（MRS培养基，改良CHALMERS培养 基，M17培养基）。 • 2、仪器和器具 无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠 三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器，恒 温培养箱。
培养基
• 改良MC培养基
• 配方：大豆蛋白胨 5g，牛肉浸膏5g， 酵母浸膏5g，葡萄 糖20g，乳糖20g， 碳酸钙10g，琼脂 15g，蒸馏水 1000mL，硫酸多黏 菌素B
2、制平板
• 用1mL移液管移 取酸奶稀释液 1mL，放入培养 皿中（必须距离 酒精度10cm以内 ）。
• 选用2~3个适合的 稀释度，培养皿贴 上相应的标签，分 别吸取不同稀释度 的稀释液1mL置于 平皿内，每个稀释 度作2个重复。
• 然后用溶化冷却 至45℃左右的 MC培养基倒平皿 ，迅速转动平皿 使之混合均匀， 冷却成平板。
食品微生物技术
实训项目教程
适合专业（群）：食品加工技术专业群
教师：万国福
行动领域 任务一 菌落总数测定 任务二 大肠菌群检验 任务三 霉菌、酵母菌检验 任务四 乳酸菌检验
任务四 乳酸菌检验 一、实验目的
酸奶中乳酸菌地微生物的学检测与酸奶地制作
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验与酸奶的制作摘要本实验选用达能酸奶作为材料，通过制作改良MC和改良TJA两种培养基，观察分析比较达能酸奶在两种培养基中生成菌落的异同，并以达能酸奶作为菌源接种到奶粉液中制作酸奶，对所得酸奶进行感官评定，讨论影响菌落生成及酸奶感官的因素。
关键词：酸奶乳酸菌菌落形态菌落总数感官评价前言酸奶为纯绿色食品, 它是由牛奶经乳酸菌发酵制成的, 除具有鲜牛奶的营养价值外, 因内含乳酸菌并在发酵过程中产生乳酸及B族维生素（B2、B6、B12）等, 可促进人体消化呼吸, 提高人的免疫力, 长期饮用既可保证钙质的需求, 又可健肠胃, 调节人体代谢,提高人的抗病能力, 使人健康长寿[1]。
酸奶中的乳酸菌主要有乳杆菌、双歧杆菌和片球菌三个属，它们能够定植在人体内，起到改善营养健康状况、改善胃肠道功能、改善免疫能力、抗有害菌和抗衰老的作用[2]。
对酸奶中的这些益生菌进行研究，有助于了解酸奶的保健原理，对制作更加营养、更优质的酸奶具有指导意义。
1 材料与方法1. 1 仪器与材料1. 1. 1 仪器玻璃瓶（无盖，2个），电磁炉（带不锈钢锅），不锈钢杯，移液管及移液管筒，电子天平，量筒，具塞锥形瓶（带玻珠，3个），具塞试管（7支），培养皿（16个），接种环，酒精灯，载玻片（4片），光学显微镜。
1. 1. 2 材料达能酸奶，脱脂奶粉，白砂糖，MC培养基粉末，TJA培养基粉末，擦镜纸，吸水纸，牛皮纸，保鲜膜，橡皮筋。
1. 2 培养基和试剂1. 2. 1 改良MC培养基（每升）大豆蛋白胨5g，牛肉膏粉5g，酵母膏粉5g，葡萄糖20g，乳糖20g，碳酸钙10g，琼脂15g，中性红0.05g，最终pH6.0±0.2。
1. 2. 2 改良TJA培养基（每升）[3]番茄汁50mL，酵母抽提液5g，肉膏10g，乳糖20g，葡萄糖2g，K2HPO4 2g，吐温-80 1g，乙酸钠5g，琼脂15g，最终pH6.8±0.2。
酸奶中乳酸菌的微生物学检验与酸奶的制作_2
酸奶中乳酸菌的检测与酸奶的制作综合性实验报告组员：摘要：以奶粉为原料，蒙牛酸奶为接种剂自制酸奶并进行感官评价。
用稀释倒平皿法和划线分离法分离出蒙牛酸奶中的乳酸菌。
分别用改良MC培养基和改良TJA培养基培养一段时间后观察菌落形态并进行菌落计数。
再挑取少许不同培养基上的菌落用革兰氏染色法染色，观察乳酸菌的个体形态。
关键词：酸奶制作、乳酸菌菌落形态及总数、MC培养基、TJA培养基、革兰氏染色、乳酸菌个体形态1 前言酸奶是以新鲜的牛奶为原料经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌（发酵剂），经发醇后，再冷却灌装的一种牛奶制品。
按是否加糖，酸奶可分为淡酸奶和加糖酸奶两种，我国常见的酸奶制品是加糖酸奶，即在制作酸奶的原料乳中加入一定量的白糖进行发酵得到的酸奶产品。
酸奶营养丰富，其蛋白质和钙质较鲜乳更易消化吸收，抑制腐败细菌的繁殖，降低肠道内毒素浓度。
酸奶内含乳酸菌并在发酵过程中产生乳酸及族维生素等,能增强消化，促进肠道蠕动和机体物质的代谢，提高人的免疫力, 长期饮用即可保证钙质的需求, 又可健肠胃, 是一种对人体肠胃非常有益的保健食品。
2 材料与方法2.1 仪器与器材温箱：47℃、冰箱： 4℃、电磁炉、锅吸管：容量为1，10和25mL、广口瓶或三角瓶：容量为500mL、平皿：直径为9cm、试管（带试管塞）：18×180mm、显微镜、带玻璃珠的三角瓶、移液枪、移液管、恒温箱、电磁炉、平底锅、2个奶瓶、保鲜膜、接种环、酒精灯。
2.2 培养基和试剂培养基：改良MC 培养基,改良TJA培养基。
材料：番茄汁、革兰氏染色液、蒙牛酸奶、脱脂奶粉、白砂糖。
2.3 方法2.3.1 无菌水和培养基的制备(1)无菌水：将20支试管分别用移液枪注入9ml的自来水，塞上试管塞，分10支捆成一扎并用牛皮纸包好。
将2个三角瓶分别注入150ml的自来水，塞上瓶塞，分别用牛皮纸封好。
将上述的试管以及三角瓶一起高压蒸汽灭菌。
(2)培养基：MC培养基:称取16g改良MC培养基粉末加200mL水置于电炉上小火加热溶解；TJA培养基:称取12g改良TJA培养基粉末加10mL茄汁和200mL水置于电炉上小火加热溶解，分别制得。
食品中乳酸菌的检测
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载食品中乳酸菌的检测地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容1 范围本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lactic acid bacteria）的检验方法。
本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验。
2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 术语和定义3.1 乳酸菌lactic acid bacteria一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。
本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和链球菌属（Streptococcus）。
4 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：4.1 恒温培养箱：36 ℃±1℃。
4.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
4.3 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。
4.4 天平：感量0.1 g。
4.5 无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
4.6 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
4.7 无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。
5 培养基和试剂5.1 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS培养基：见附录A中A.1。
5.2 MC培养基（Modified Chalmers 培养基）：见附录A中A.2。
5.3 0.5%蔗糖发酵管:见附录A中A.3。
GB-T 16347-1996 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验
GB-T 16347-1996 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验GB/T 16347-1996乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验Microbiological examination oflactic acid bacteria in yoghurt beverage1 主题内容与适用范畴本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。
本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料，经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 术语乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
乳酸菌菌落总数：检样在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。
4 设备和材料4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 电炉：可调式。
4.5 吸管：容量为1，10和25mL。
4.6 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.7 平皿：直径为9cm。
4.8 试管：18 ×180mm。
4.9 显微镜。
5 培养基和试剂5.1 改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）。
5.2 改良MC培养基（Modified Chalmers培养基）5.3 0.1%美兰牛乳培养基。
5.46.5%氯化钠肉汤。
5.5 pH9.6葡萄糖肉汤。
5.6 40%胆汁肉汤。
5.7 淀粉水解培养基。
5.8 精氨酸水解培养基。
5.9 乳酸杆菌糖发酵管。
5.10 七叶苷培养基。
5.11 革兰氏染色液：按GB 4789.28规定执行。
5.12 3%过氧化氢溶液：按GB 4789.28规定执行。
5.13 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.14 明胶培养基：按GB 4789.28规定执行。
5.15 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.16 生理盐水：定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。
实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。
本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。
正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。
2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。
3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。
二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。
2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。
三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。
经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。
3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。
四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。
经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。
2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。
通过观察生长情况，计算活菌数。
五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。
总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。
乳酸菌检验方法
乳酸菌检验方法乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。
乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。
二样本采集检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂，样本应放入冰箱保存，心快检验。
三检验方法（中华人民共和国国家标准乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验GB／T 16347-1996）乳酸菌菌总数的测定：乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后，所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数。
（一）检验程序乳酸菌菌落总数检验程序如下：（二）培养基和试剂改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）；改良MC培养基（modified Chalmers培养基）；0.1％亚甲蓝牛乳培养基；6.5％氯化钠肉汤参照；pH9.6葡萄糖肉汤；40％胆汁肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染色液；3％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌。
（三）操作步骤1．以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml（或25g）放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液。
2．用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。
3．另取1ml灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
4．选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
食品微生物检验技术W5203乳酸菌检验—检验操作程序及要点-1-微设计
微课编号
W5203
微课名称
乳酸菌检验—检验操作程序及要点
所属模块
农产品/食品其他微生物检验
子模块
M5-2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ酸菌检验
关键词
乳酸菌；检验操作程序；检验准备
是否通用
√通用农产品食品
是否重点建设
√是否
微课类型
讲授型
微课形式
混合拍摄式
教学设计模式
讲授法、任务驱动法
教学目标
了解乳酸菌国家检验标准的版本变化，掌握标准中乳酸菌的检验基本流程，掌握实验的材料准备要求。
教学内容
知识点
技能点
1、乳酸菌检验的具体操作程序
2、乳酸菌检验的操作要点
1、乳酸菌检验的培养基选择
2、乳酸菌检验的分离涂布
3、乳酸菌检验的结果计数
设计思路
教学步骤
呈现形式与素材
时长(min)
1、讲解乳酸菌检验的具体操作程序（知识点1）
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1
2、讲解乳酸菌检验的操作要点
（知识点2）
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2
3、讲解乳酸菌检验的培养基选择
（技能点1）
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4、讲解乳酸菌检验的分离涂布
（技能点2）
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5、讲解乳酸菌检验的结果计数
（技能点3）
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6、总结
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1
小计
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PBL讨论
请思考乳酸菌厌氧培养中的氧气指示剂，如何判别其是有氧状态还是厌氧状态？
3、微课教学设计模式：讲授法、直观演示法、任务驱动法、讨论法、案例分析法、角色扮演法等；
酸奶中乳酸菌菌落总数测定 (2)
目录中文摘要 (2)英文摘要 (2)1.前言 (3)2.材料与方法 (3)2.1 试验材料 (3)2.2 试剂及其配置 (3)2.3 主要仪器 (4)2.4 实验方法 (4)2.4.1实验原理 (4)2.4.2亚硝酸钠标准曲线的绘制 (4)2.4.3样品的处理 (5)2.4.3样品中亚硝酸盐的测定 (5)3. 样品中亚硝酸钠含量的计算结果 (6)4.讨论 (6)参考文献 (7)中文摘要摘要：本实验采用分光光度法对腐乳中的亚硝酸钠的含量进行了测定。
并将测出的检测值与食品安全国家标准（GB 5009.33-2010）中关于食品中亚硝酸钠的最大残留量比较，以确定腐乳亚硝酸钠含量指标是否合格。
实验结果显示，所选样品中的亚硝酸钠含量均在国家食品安全标准之内，分光光度法是使其行之有效的方法。
关键词：腐乳；亚硝酸钠含量；分光光度法；英文摘要Abstract:The experimental results of the fermented bean curd spectrophotometric method of sodium nitrite content was determined. And the measured assessment and the national food safety standards (GB 5009.33-2010) about the biggest residues in food central Asia sodium nitrate compared to make sure fermented bean curd sodium nitrite content if they are qualified index. Experimental results show that the selected samples of the content of sodium nitrite were in the national food safety standards, spectrophotometry is within the effective method.Key words：Fermented bean curd, Sodium nitrite content, spectrophotometry腐乳中亚硝酸钠含量的测定1.前言腐乳（sufu）又称豆腐乳，是我国独特的传统发酵食品，已有一千五百多年历史。
实验一、乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
实验一、乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验一、实验目的1.了解酸乳中乳酸菌分离原理2. 学习并掌握乳酸菌饮料中乳酸菌菌数的检测方法。
二、实验原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、实验材料1.培养基改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)2.仪器和器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器。
恒温培养箱。
四、实验方法流程：酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数1.样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2.制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至46℃左右的改良MC 培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3.培养和计数将平皿倒置于40℃恒温箱内培养24~48h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
五、结果1.指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小，1~3mm，园形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2.镜检形态必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。
酸奶微生物检验
《酸奶卫生标准》编号：GB 19302—2010一、准备内容：1、无菌器材准备表：2、培养基、试剂准备表：备注：无菌生理盐水氯化钠 2. 5g 蒸馏水300ml平板计数琼脂有现成的培养基，直接称取即可，配制120ml 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤胰蛋白胨或胰酪胨 2.0g氯化钠 0.5 g乳糖 0.5 g磷酸氢二钾（K2HPO4） 0.275 g磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.275g月桂基硫酸钠 0.01 g蒸馏水 100 mL将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10 min，煮沸溶解，调节pH，高压灭菌121 ℃，15min。
煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤蛋白胨 1 g乳糖 1.0 g牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液 20 mL0.1%煌绿水溶液 1.33 mL蒸馏水 80mLpH 7.2±0.1A.2.2 制法将蛋白胨、乳糖溶于约50mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液20 mL（将2.0 g脱水牛胆粉溶于20 mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液1.33 mL，用蒸馏水补足到1 00mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。
121 ℃高压灭菌15 min。
7.5%氯化钠肉汤蛋白胨 2.25g牛肉膏 1.125g氯化钠 16.875 g蒸馏水 225mLpH 7.4将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225 mL，121 ℃高压灭菌15 min。
Baird－Parker琼脂平板胰蛋白胨 0.5g牛肉膏 0.25 g酵母膏 0.05g丙酮酸钠 0.5g甘氨酸 0.6g氯化锂（LiCl·6H2O） 0.25g琼脂 1.0 g蒸馏水 47.5mLpH 7.0±0.2增菌剂的配法30%卵黄盐水50 mL 和经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10 mL 混合，保存于冰箱内。
A.4.3 制法将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。
GB4789. 35乳酸菌检验
食品安全国家标准
食品微生物学检验 食品中乳酸菌检验
GB 4789.35－2010
定义
GB/T 4789.35－2007: 检验方法有三部分： 第1部分：分离与计数方法； 第2部分：PetrifilmTM测试片法； 第3部分：乳杆菌的PCR法
SN标准
GB/T 4789.35－2008 乳酸菌饮料中乳酸菌检验修订
本标准与GB/T 4789.35－2003相比主要修 改如下： ——将选择性分离培养基由改良TJA 培养基 （改良番茄汁琼脂培养基）改为MRS培养基； ——增加API 50CH 诊断试剂条； ——乳酸菌计数由倾注法改为涂布法。
乳酸菌计数
乳杆菌计数 乳酸菌总数结果减去 双歧杆菌与 嗜热链球 菌计数结果之和即得乳杆菌计数。
报告（GB/T4789.35-2008）
根据菌落计数结果出具检测报告。最终确定 的乳酸菌菌落在30～300之间的平板计数， 再乘以相应的稀释倍数，修约保留两位有效 数字，之后的数字，采用10的指数表示。参 照GB/T 4789.2规定。每克（或毫升）食品 中所含有的乳酸菌数以CFU/g（mL）表示。
结果的表述
7.4.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在 适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平 均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为 每g（mL）中菌落总数结果。 7.4.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在 适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
7.4.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平 板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以 最高稀释倍数计算。 7.4.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数计算。 7.4.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平 板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍 数计算。 7.4.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验与酸奶的制作
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验与酸奶的制作摘要：本实验通过酸奶的制作以及酸奶中菌落的培养、革兰氏染色检验，熟悉了乳酸菌发酵酸奶的制作流程，含糖量、接种菌量、温度条件等各种因素对其感官评价的影响；掌握了酸奶中菌落的分离技术。
关键词：酸奶制作，乳酸菌分离，感官评价前言酸奶始源于保加利亚，有着悠久的历史。
现代酸奶是一种以新鲜的牛奶为原料，经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌，经发酵后，再冷却灌装的一种牛奶制品，对人类健康有着很大促进作用。
目前市场上酸奶制品多以凝固型、搅拌型和添加各种果汁果酱等辅料的果味型为多。
乳酸菌并非一种菌，而是指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，目前至少可分为18个属，共有200多种。
发酵性酸奶主要含菌类为嗜热链球菌、保加利亚杆菌、双歧杆菌，一般将凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称乳酸菌。
乳酸菌具有改善肠胃道功能、改善免疫力、抗菌及抗衰老等作用，深受各国人民喜爱[1]。
通过本次实验操作及查阅相关文献，我们了解到，含糖量、接种菌量，温度等因素对乳酸菌发酵酸奶风味有着密切影响；乳酸菌的特性、功能及其广泛应用，如乳酸菌在改良MC培养基中的生长情况较在改良TJA培养基中好；同时也认识到目前市售酸奶的菌活性有待进一步提高；酸奶中富含的菌群的革兰氏染色特性等。
1 材料与方法1．1 实验材料与仪器100ml蒙牛酸奶一盒，雀巢奶粉30g，白砂糖20g，接种针，培养皿，酒精灯，三角瓶（带玻珠），移液枪，玻片，显微镜；1．2 培养基与试剂改良MC培养基粉末，改良TJA培养基粉末，番茄汁，番红花染液，95%乙醇，结晶紫染液，碘液。
1．3 实验方法1.3.1 无菌水和培养基的制备无菌水：用100ml量筒量取95ml蒸馏水（稀释水）装入150ml的三角瓶中，同样方法制作2瓶。
一瓶置少许玻璃珠于内，防止暴沸；另一瓶分装7支试管，每管9ml，两瓶分别塞上瓶塞用牛皮纸包扎好，高压灭菌备用。
酸奶中乳酸菌菌落总数测定
存档日期：存档编号：连云港师范高等专科学校毕业论文（设计）论文题目：酸奶中乳酸菌菌落总数的测定*名：***系科：生命科学系专业、班级：08生物技术及应用***师：**连云港师范高等专科学校教务处目录中文摘要 (3)ABSTRACT (3)1.引言 (4)2.材料与方法 (4)2.1实验样品 (4)2.2主要的试剂与仪器 (4)2.3培养基 (5)2.4准备工作 (5)3．实验过程 (5)3.1编号 (5)3.2样品稀释 (5)3.3制作平板 (6)3.4菌落培养 (6)3.5菌落计数 (6)4.结果 (6)4.1菌落观察结果 (6)4.2菌落计数结果 (6)4.3计算样液中的乳酸菌菌落数 (7)5.分析与讨论 (8)参考文献 (8)中文摘要摘要:本试验采用平板记数法，对完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3个品牌市售酸奶中乳酸菌菌落总数进行了测定。
测定结果显示，完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3种市售酸奶均符合国家标准(GB2746-1999)规定的质量标准。
其中，完达山优钙酸牛奶中乳酸菌菌落总数最多，平均达到298cfu/mL，最少是君乐宝原味发酵型酸奶平均达到110 cfu/mL。
关键词:酸奶；乳酸菌；菌落总数的测定；平板记数法ABSTRACTAbstract:This test method to count the flat panel, WanDaShan optimal calcium yogurt, YiLi flavor to the yogurt, JunLeBao plain yogurt fermentation type three the sold yogurt active lactobacillus total colonies were determined. The determination results showed that WanDaShan optimal calcium yogurt, Yili flavor to the yogurt, jun LeBao plain yogurt fermentation type three the sold yogurt which conform to the national standard (GB2746-1999) stipulated quality standards. Among them, WanDaShan optimal calcium in the most lactic acid bacteria colonies yogurt, average was exceed 298 cfu/mL, At least a royal LeBao plain yogurt fermentation type average was exceed 110 cfu/mL. Keywords:yogurt, lactic acid bacteria, determination of total colonies, plate counting method酸奶中乳酸菌菌落总数的测定1.引言随着人们经济水平的提高及自我保健意识的增强，乳制品日益受到广大消费者的喜爱。
乳酸菌实验报告
乳酸菌的分离与培养保加利亚乳杆菌组长：王小英组员：王小英郑春玲阙小琴柳洁实验目的： 1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观察；2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术；3.通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。
4.了解各种灭菌的基本原理和应用范围，以及实验室中常用的灭菌方法。
5.了解酸奶中乳酸菌分离原理, 观察乳酸菌的基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目的测定的方法。
6.了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法。
明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
7．初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法，掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
8.了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法及其优缺点，并了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性。
实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。
通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。
酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。
细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质；灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢；自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。
教学设计：乳酸菌检验.
教师姓名20 年月日星期
授课班级
项目名称项目八微生物检验技术实训任务4 乳酸菌群检验
目的与要求1.掌握微生物检验流程
2.熟悉微生物检验的相关国标
3.掌握微生物检验的一般操作技术
课时 4
测定原理
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
仪器、试剂生理盐水、改良MC培养基、试管、小倒管、三角瓶等。
教学过程及时间安排1.实验内容讲解40min
2.取样及样品处理20min
3.样品稀释处理40min
4.制作平板及倒平板培养50min
5.菌落计数20min
6.讨论评分、实验整理10min
注意事项1.在进行样品稀释时，每做一个稀释度要换一支吸管；
2.接种时要先加入稀释液后再到培养基；
3.注意无菌操作；
4.正确计数。
结果分析依据国标要求计数。
课后体会
教案。
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实验一、乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
一、实验目的
1.了解酸乳中乳酸菌分离原理
2. 学习并掌握乳酸菌饮料中乳酸菌菌数的检测方法。
二、实验原理
活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、实验材料
1.培养基
改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)
2.仪器和器具
无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器。
恒温培养箱。
四、实验方法
流程：酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数
1.样品稀释
先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2.制平板
选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至46℃左右的改良MC 培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3.培养和计数
将平皿倒置于40℃恒温箱内培养24~48h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
五、结果
1.指示剂显色反应
乳酸菌的菌落很小，1~3mm，园形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2.镜检形态
必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。
嗜热链球菌，呈球状，成对、或短链、或长链状。
3.计数结果
公式：平均菌落数×稀释倍数
八、思考
1.为什么乳酸菌的检测关键是选用特定良好的培养基？
2.培养基中为什么要加CaCO3？
实验二、发酵制品中大肠菌群的测定
一、实验目的
1、学习食品中大肠菌群检测程序、方法；
2、掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。
二、实验原理
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
三、实验材料
1、设备和材料
温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针
2、培养基及试剂
乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（EMB）、远腾氏琼脂、革兰氏染色液
3、样品
发酵香肠
四、实验方法与步骤
1、采样及稀释
①以无菌操作将检样25g放于含有225ml灭菌生理盐水，用均质器，以8 000～10000r/min 的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。
②用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做成1：100的稀释液，换用1支1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液
③根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
也可直接用样品接种。
2. 乳糖初发酵试验
即通常所说的假定试验。
其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌。
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖发酵管。
每一个稀释度接种3管，置（36±1）0C温箱内，培养（24±2）h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行
3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上，置（36±1）0C温箱内，培养18h~24h，然后取出，观察菌落形态并作革兰氏染色镜检和复发酵试验。
4.乳糖复发酵试验
即通常所说的证实试验，其目的在于证明从乳糖初酵管试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无芽胞杆菌，确能发酵乳糖产生气体。
在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群1~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36±1）0C的温箱内培养（24±2）h，观察产气情况。
凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为阴性。
5.报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）食品中大肠菌群的最可能数。
实验三伤寒疫菌免疫力实验
一、实验目的
学习如何进行伤寒疫菌免疫力测定.
二、实验原理
伤寒是一种由伤寒杆菌感染所致的、使人衰弱并威胁生命的肠道传染病。
伤寒患者会有持续发热、疲倦、食欲不振、严重头痛、脾脏胀大、便秘或腹泻的情况出现。
副伤寒的病征与伤寒相似，但程度一般较轻，它是由另一类的沙门氏菌所引起的。
伤寒及副伤寒的传播途径是经由一些受到病者或带菌者的粪便或尿液所沾染的饮食而传播。
带菌者是一些经感染后而康复的人士，但在体内仍存着病菌。
若食物及饮品曾由一些不断排放病菌的人员处理、或饮用和冲洗食物的水受到污水所污染，便有机会传播伤寒及副伤寒病。
该疾病在缺少充分的排污系统和环境卫生设施的发展中国家比较多见。
据美国疾病控制和预防中心报道，全世界每年约有1600万人发生伤寒，其中大约60万人死于该疾病。
三、实验材料
小鼠毒菌伤寒疫苗
四、实验步骤
将经56℃30分钟加温杀菌（或用其他方法杀菌），不加防腐剂的菌液稀释为每1ml含伤寒菌2.5×108。
用该菌液免疫体重为14~16g小鼠至少30只，每只皮下注射0.5ml，注射2次，间隔7天，末次免疫后9~11天进行毒菌攻击。
免疫组小鼠每只腹腔注射1 MLD 的毒菌（含于0.5ml中），同时应用同批饲养或体重与免疫组相同的小鼠3组（每组至少5只）作对照，分别于腹腔注射2、1及1/2 MLD 的毒菌（各含于0.5ml中）。
观察3天，对照组小鼠感染2 MLD及1 MLD者应全部死亡，感染1/2 MLD者要有部分死亡。
免疫组至少保护70%小鼠活存。
五、实验结果：
实验四光化学荧光分析法测定氨苄青霉素
一实验目的
学会氨苄青霉素的测定方法
二、实验原理
氨苄青霉素(Ampicillin) 为临床上常用控制细菌感染的一类重要的青霉素类抗生素,属广谱抗菌素，对大多数G+菌的抗菌作用不及青霉素G,对阴性杆菌的作用超过青霉素。
作用机制同青霉素。
但肠球菌对氨苄青霉素较为敏感,对G-杆菌作用较卡那霉素,庆大霉素弱,
与四环素相仿,对伤寒杆菌,大肠杆菌的抗菌作用较强,绿脓杆菌和金葡菌对本品耐药.主要用于治疗敏感细菌所致的败血症、尿路感染、肺部感染、胆道感染等；治疗伤寒、副伤寒疗效与氯霉素相仿。
本品在脑膜炎症时，脑脊液浓度较高，也适用于治疗由肺炎球菌、脑膜炎双球菌及流感杆菌引起的脑膜炎。
与其他半合成青霉素类、氨基糖甙类及氯霉素等合用可增强疗效。
鉴于其特殊的药理作用,其质量控制就显得更为重要。
目前国内外主要通过高效液相色谱法来测定氨苄青霉素的含量,本实验采用光化学荧光分析法来测定其粉针剂中氨苄青霉素的含量。
三、实验材料
氨苄青霉素药物（市售）
RF-5000型荧光分光光度计
YE-1型荧光分光光度计
125W高压汞灯（破除玻璃外壳）
TOA型Ph计
2%甲醛溶液
四、实验步骤：
将药物样品稀释，制定溶液，移取一定量的药物溶液于25ml干燥烧杯中，加入2.0ml,Ph=5.6缓冲溶液，加入至20.0ml混匀，移取2.00ml于10ml容量瓶中，加入1.00ml 2%甲醛，用2mol/L NaOH溶液定容至刻度，摇匀，避光放置40min,后于426nm处测量荧光相对强度。
五、实验结果：
测量该药物中氨苄青霉素含量为。