琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段

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2.实验原理
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琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯 化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快捷，可以分辨用其他 text1 text2 text3 方法（如密度梯度离心法）无法分离的DNA片段。用低浓度的嵌 入式荧光染料溴乙锭（EB以确定DNA片段在凝胶中的位置。聚丙烯酰胺凝 胶电泳分离1kb以下的小片段DNA效果较好，甚至可以分辨相差 1bp的DNA片段。聚丙烯酰胺凝胶电泳速率快，容量相对较大，采 用垂直装置进行电泳，但制备和操作比琼脂糖凝胶电泳困难，常 用于核酸的序列测定。琼脂糖凝胶电泳的分辨率比聚丙烯酰胺凝 胶电泳低，但其分离范围广，不同浓度的琼脂糖凝胶电泳可分离 DNA片段的范围为200bp~50kb，通常在水平装置上进行，操作简 便。
WARNING
（2）紫外光对眼睛有害， 观察电泳结果时最好戴上 防护镜或眼镜，或隔着玻 璃或有机玻璃观察。
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6.思考题
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简述琼脂糖凝胶和EB染料 在电泳分离DNA中的作用。
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3.仪器与试剂
仪器
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试剂
（1）0.5 × TBE 电泳缓冲液：54g
（1）天平 （2）电炉 （3）制胶槽 （4）电泳仪 （5）电泳槽 （6）荧光成像仪 （7）移液枪
Tris、27.5g硼酸、3.72g二水合EDTA 二钠盐，用水定容至1000mL。使用 时稀释10倍。 （2）EB溶液：称取EB溶于无菌水 中，母液浓度1mg/mL，4℃避光保 存。
4.实验步骤
（5）开启电源开关，接通电泳槽和电泳 仪，注意DNA向正极移动，加样端要接负 极。调节电泳电压为100V。在电泳途中 可用紫外灯直接观察，DNA各条区带分开 后，电泳结束。
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5.注意事项
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（1）EB为强致癌物，注意 避免接触皮肤，使用时一定 要戴手套。
4.实验步骤
（3）室温下放置30~40min，使凝胶完全 凝固后，加入少量0.5×TBE电泳缓冲液 ，小心拔出梳子，将胶膜放入电泳槽中 （注意加样端接负极），加入适量0.5× TBE电泳缓冲液，使液面高出胶面约1mm
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4.实验步骤
（3）相对分子质量标准（100bp， DNA标准物）
（4）6 × 点样缓冲液（0.25%溴酚 蓝，400g/L蔗糖） （5）琼脂糖 （6）扩增好的毛囊DNA样品
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4.实验步骤
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（1） 溶解
（2） 制胶
（3） 装配
（4） 点样
（5） 电泳
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（4）用移液枪取10μL PCR扩增样品和2μL点 样缓冲液混匀，用移液枪将样品加入凝胶的加 样孔中，注意枪头不可穿透孔底。另取10μL 相对分子质量标准液（已和加样缓冲液混匀） ，同法加样至另一泳道的加样孔。记录样品点 样顺序（泳道）与点样量。
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琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段
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琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段
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实验目的
实验原理 仪器与试剂 实验步骤 注意事项
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1.实验目的
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学习用琼脂糖凝胶电泳检测DNA 的纯度、浓度、构型及其相对分子质量 大小的方法。
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4.实验步骤
（1） 称取0.4g琼脂糖于150mL三角瓶中，加 入20mL 0.5×TBE电泳溶液，置电炉上加热溶 解（注意要经常晃动，避免过热溢出！），制 成2%琼脂糖溶液。 琼脂糖
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4.实验步骤
（2）将琼脂糖溶液冷却 至60℃左右，加入5μL浓 度为1mg/mL的EB溶液（戴 手套！），摇匀，立即小 心倒入准备好的胶模槽中 （已插好梳子），使琼脂 糖溶液在槽中的厚度为 3~5mm，排除梳齿上的气 泡（一般轻轻抖动梳子或 用小针头挑一下即可）。
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