靶向Hiwi基因的shRNA表达载体的干扰效果评价

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慢病毒shRNA表达载体介导人肿瘤细胞基因稳定沉默的影响因素

慢病毒shRNA表达载体介导人肿瘤细胞基因稳定沉默的影响因素宋现让;迟伟玲;魏玲;王兴武;柳永蕾;宋宝【期刊名称】《中国生物工程杂志》【年(卷),期】2007(27)2【摘要】目的:探讨慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰的影响因素。

方法:用介导RNAi的慢病毒载体Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β分别转导人肿瘤细胞系Hela、SPCA1和A549,筛选靶基因稳定表达沉默的细胞株。

病毒RNA分子拷贝数和靶基因mRNA水平用实时定量RT-PCR确定。

结果:针对不同靶基因的慢病毒转导肿瘤细胞的效率与靶基因无关、存在细胞类型特异性。

8h内病毒转导效率与吸附时间呈正关,12h后继续延长吸附时间不能提高转导效率。

对靶基因表达的特异性抑制效果与病毒量呈正相关。

靶基因稳定沉默细胞株的RNAi效果与细胞类型无关,与靶细胞基因组整合的shRNA表达结构的拷贝数呈正相关。

结论:慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰,短期基因抑制效果取决于细胞类型、病毒量和病毒的吸附时间,稳定基因沉默效果与病毒整合到靶细胞基因组的拷贝数相关,筛选稳定基因沉默细胞株时,应尽可能提高病毒量以提高病毒整合的拷贝数。

【总页数】5页(P19-23)【关键词】乏氧诱导因-1α;慢病毒载体;RNA干扰;整合【作者】宋现让;迟伟玲;魏玲;王兴武;柳永蕾;宋宝【作者单位】山东省肿瘤医院基础研究中心;山东省千佛山医院【正文语种】中文【中图分类】R730.21【相关文献】1.慢病毒介导shRNA沉默人纤维介素基因对心肌微血管内皮细胞增殖、迁移的影响 [J], 王亮;吴友平;郑振中;殷然;王梦洪;郑泽琪;彭景添;魏云锋2.慢病毒介导 shRNA 沉默 QKI －6基因对人肺腺癌 A549细胞生物学行为的影响[J], 柯昌康;王武平;康树宏;白峻峰;吕峰;倪云峰3.慢病毒介导shRNA沉默Nicastrin基因的人永生化角质形成细胞模型构建 [J], 毛秋霞;陈旭;王宝玺;李诚让;张婉璐;何艳艳;贾苇雪;Yang Brooks;李莉;李黎明;张晓峰;徐浩翔4.慢病毒载体介导半乳凝素-3-shRNA沉默基因对肿瘤细胞的影响 [J], 王明栋;王洪;马文斌;史彦芳;王任直5.慢病毒介导的shRNA沉默PTTG基因抑制人PRL型垂体腺瘤细胞生长的体外实验研究的护理方式 [J], 罗巧灵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

靶向表皮生长因子受体shRNA表达载体的构建和鉴定

靶向表皮生长因子受体shRNA表达载体的构建和鉴定【摘要】目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)质粒表达载体并进行鉴定。

方法①根据人类EGFR的mRNA序列，设计4条干扰片段，以PGPU6/GFP/Neo质粒为载体，构建shRNA重组体，转化入DH5a大肠杆菌，提取质粒，进行酶切和测序鉴定;②采用脂质体Lipofectamin 2000分别转染人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞，用G418筛选阳性克隆。

结果①经酶切及测序鉴定，成功构建了针对EGFR的4个重组干扰质粒;②成功转染Colo-16细胞，经筛选后得到稳定表达的细胞克隆。

结论利用RNAi 技术原理成功构建针对EGFR的shRNA重组质粒，并转染入Colo-16细胞。

【关键词】表皮生长因子受体;RNA干扰;短发卡状RNA;转染Abstract：Objective To establish and identify the plasmid expression vector encoding short hairpin RNA (shRNA) targeting epidermal growth factor receptor (EGFR) of human gene. Methods ①Four short hairpin RNAs (shRNA) were designed according to the homo sapiens EGFR mRNA ID, and then recombinant shRNA was reconstructed, with PGPU6/GFP/Neo plasmids as vectors, respectively. The plasmids were transferred into E. coli DH5αfor plasmid extraction and the subsequent identification by enzyme digesting and sequencing. ②Four recombinant plasmids were transfected into Colo-16 cells with lipofectamine 2000 and were screened for positive clones by G418. Results ①The results of enzyme-digestion sequencing confirmed that four plasmids containing shRNA were successfully constructed. ②Four recombinant plasmids were successfully transfected into Colo-16 cells and the cell clones with stable expression were obtained. Conclusion With RNAi technology, the recombinant shRNA plasmids targeting EGFR were successfully established and transfected into Colo-16 cells.Key words: epidermal growth factor receptor; RNA interference; small hairpin RNA; transfection表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)属于表皮生长因子家族[1] (erbB家族)，为原癌基因C-erbB(HER-1)的表达产物，是一种细胞膜表面的糖蛋白受体，它与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、转化生长因子(transferring growth factor ,TGF)等配体结合，能激活酪氨酸激酶受体，导致酪氨酸残基的磷酸化，促进细胞无节制地增殖分裂，导致恶性肿瘤的发生[2]。

RNA干扰技术在基因功能分析中的应用前景

RNA干扰技术在基因功能分析中的应用前景随着生物技术的迅猛发展，研究基因功能的方法也得到了极大的突破。

RNA干扰技术作为其中一种重要的方法之一，被广泛应用于基因功能分析、基因沉默以及潜在药物目标的筛选等研究领域。

本文将深入探讨RNA干扰技术在基因功能分析中的应用前景，并探讨其在研究领域中的潜在应用。

RNA干扰技术通过引入小分子RNA，即小干扰RNA (siRNA) 或者表达载体中产生的短发夹RNA(shRNA)，来靶向特定的基因，从而在转录后水平上进行基因沉默。

因此，RNA干扰技术具有高效、特异性和可逆定位基因沉默的优点。

这种技术已经在生物学研究和临床应用中取得了巨大的成功，特别是在基因功能分析领域。

首先，RNA干扰技术在基因功能分析中发挥了重要的作用。

通过对目标基因进行RNA干扰，可以准确地验证其在特定生物过程中的功能。

例如，通过沉默细胞周期相关基因，研究人员发现这些基因在细胞周期调控中起到关键的作用，从而促进了对细胞周期调控机制的深入理解。

此外，在研究基因功能、病因探究以及药物筛选中，RNA干扰技术也能够提供更加准确和高效的结果。

其次，RNA干扰技术在治疗基因相关疾病方面具有巨大的潜力。

许多疾病的发生和发展与基因的异常表达密切相关。

通过使用RNA干扰技术，研究人员可以选择性地沉默这些异常基因，从而阻断或逆转疾病进程。

例如，利用RNA干扰技术沉默基因中的突变位点，已经取得了一些遗传性疾病治疗的初步成功。

随着RNA干扰技术的不断发展，它在治疗基因相关疾病中的应用前景将会变得更加广阔。

此外，RNA干扰技术还可以用于筛选潜在的药物目标。

正因为基因表达的异常与疾病的发生和发展密切相关，通过RNA干扰沉默疾病相关基因，可以确定这些基因是否是潜在的治疗靶点。

研究人员可以通过筛选大量基因，确定在特定疾病治疗中具有显著效果的基因。

这种方法被广泛用于在癌症研究中发现新的治疗靶点。

因此，RNA干扰技术为药物开发提供了新的方法和思路。

靶向Hiwi基因的siRNA干扰对诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

Ｚｈａｎｊｉａｎｇ５２４００１，Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｔｅｆｒｅｒｉｎｇＨｉｗｉｇｅｎｅｏｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＭＤＡ — ＭＢ一２３１
３ｇｒｏｕｐｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ：ｉｎｔｅｆｅｒｒｅｎｃｅｇｒｏｕｐ，ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｒｏｇｕｐ／ＮＣ，ｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｒｏｇｕｐ／Ｂ１ａｎｋ．Ｔｈｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｌｆｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｔｆｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍＲＮＡ
（Ｈｉｗｉ１０３３０组），再按照试验设计分为３组分别是干扰组，阴性对照组（ＮＣ组）、空白对照组（Ｂｌａｎｋ组），在细
胞转染后进行细胞流式检测各实验组细胞凋亡率。结果：靶向Ｈｉｗｉ基因的ｓｉＲＮＡ干扰后，干扰组中ｍＲＮＡ的表达量明显降低（Ｐ＜０．０５），Ｈｉｗｉ基因靶蛋白的表达也出现了明显的抑制（Ｐ＜０．０５）。靶向Ｈｉｗｉ基因的

RNA干扰在基因编辑中的应用

RNA干扰在基因编辑中的应用RNA干扰是一种重要的遗传工具，已经被广泛应用于基因编辑领域。

它通过干扰目标基因的转录或翻译过程，实现对基因功能的调控。

RNA干扰技术具有高度特异性和灵活性，可以实现基因敲除、靶向基因沉默、基因表达调控等多种功能，对于研究基因功能和治疗人类疾病具有重要意义。

在基因编辑中，RNA干扰主要应用于两方面：基因靶向沉默和基因表达调控。

首先，RNA干扰可用于实现基因的靶向沉默。

通过合成特异性的小干扰RNA （siRNA）或利用细胞内产生的小干扰RNA（endogenous siRNA），可以靶向并降低目标基因的表达水平。

这种方法通常通过转染siRNA分子来实现，在细胞内通过RNA-酶复合物介导的降解过程中，定向抑制目标基因的转录或翻译。

实验室中的常用实践是设计靶向目标基因特异序列的siRNA，将其导入到基因编辑的细胞中，从而实现对目标基因的沉默。

这种靶向沉默的方法可以有效地研究目标基因的功能，揭示其在细胞生物学和生物化学过程中的作用。

其次，RNA干扰还可以应用于基因表达调控。

siRNA分子的反义链序列可以用于设计人工反义RNA（antisense RNA），经转染后在细胞内被识别为靶基因mRNA的互补序列，从而实现特定基因的抑制或转录调控。

此外，还可以通过设计小干扰RNA（shRNA）表达载体，将其导入到细胞中，通过细胞内的RNA干扰机制形成RNA-酶复合物，将目标基因的mRNA降解或抑制其转录。

这种基因表达调控的方法可以使研究者精确控制特定基因的表达水平，探究其在生物过程中的功能。

基因编辑中的RNA干扰技术具有许多优势。

首先，RNA干扰能够实现高度特异性的基因沉默，只影响目标基因的表达，不影响其他基因的功能。

其次，RNA干扰可以用于靶向多个基因的调控，并且可以针对不同的基因靶点设计不同的siRNA序列。

此外，RNA干扰技术还可以应用于不同的细胞类型和动物模型，具有广泛的适用性。

Survivin特异性shRNA表达载体的构建及评价

Survivin特异性shRNA表达载体的构建及评价【摘要】目的构建针对人结肠癌细胞系Lovo的高效率沉默Survivin 的shRNA表达载体。

方法合成特异性干扰Survivin的小发卡RNA （shRNA）片段，并与pGenesil2 载体连接，构建Survivin干扰载体（pGenesil2Survivin shRNA）。

利用脂质体将其转染Lovo细胞，分为正常细胞对照组和3个shRNA干扰组（pGenesil2Survivin1、2及3），应用荧光显微镜对转染效果进行评价，应用Western印迹和免疫细胞化学法分析转染后Lovo中Survivin的蛋白表达水平。

结果插入片段测序结果与合成shRNA结果一致；转染效率可达70%左右，转染pGenesil2Survivin shRNA后，3个干扰组的Lovo细胞中Survivin蛋白表达水平均较正常对照组显著降低（P＜0.01）。

结论成功构建了能高效沉默Survivin的RNAi表达载体；且pGenesil2 Survivin高效抑制结肠癌Lovo细胞中Survivin基因表达。

【关键词】 RNA干扰；生存素；结肠癌；shRNA研究显示，Survivin 在人结肠癌组织以及细胞系中存在高表达，并与人结肠癌的形成和演进存在密切关系，其作用机制可能涉及促进结肠癌恶性增殖及抗细胞凋亡等多个方面〔1，2〕。

因此，靶向Survivin 的研究对明确结肠癌的发病及转移机制以及提高结肠癌的疗效均有重要意义〔3～5〕。

故本研究利用pGenesil2真核表达载体构建了含高效的靶向Survivin基因的重组载体pGenesil2Survivin shRNA，并进一步应用其沉默人结肠癌系Lovo的Survivin 基因，为探讨Survivin 在结肠癌发生、发展中的作用及应用其进行结肠癌的基因治疗奠定实验室基础。

1 材料与方法1.1 材料感受态细胞DH5α为我室保存。

靶向CGI-100基因shRNA干扰载体的构建与鉴定

ｃｌａｓａｅｙＴＰＲｎ０ｌ．Ｒｓｃ１ｅ０ｂｎｎｌｍｄｆＰｅｅｉ１ＣＩｌｏｗｒｕｃｓｆｌｅｓｗｓａｓｙｄｈＲ — ＣａｄｄｆｏＢ：Ｉｅｒｃｍｉｔｐａｉｓ０Ｇｎｓ一一Ｇ — ｏｅｅｃｅｓｌｌｂｔｆ上ｈａｓｌｓｕｙ
ｃｎｔｃｅｂＤＮＡｅｕｎｉｇｎｌｓ．ｈｆｓｆＧｎｓ一一ＧＩ１０ａｔｅｉｈｓｎｉｉｏｅｉｎｙｎ０ｓｕｔｄｙＩｓｑｅｅｎａａｙｉＴｅｉｔＰｅｅｉ１Ｃ一０ｈｄｈｈｇｅｔｈｈｔｎ佑ｃｅｃｉｍＲＮＡｓｒｏｌｉｉ
靶向ＣＩ１０基因ｓＲＡ干扰载体的构建与鉴定Ｇ一０ｈＮ
汪永强，张
（重庆医科大学临床生化教研室
彦，雷
燕
重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆４０ｌ）００６
【要】摘目的：构建靶向ｃＩ１Ｏ因的ＲＡ表达载体并鉴定其抑制效率。方法：Ｇ一０基Ｎｉ设计及化学合成３对靶向ｃＩ１０因的Ｇ一Ｏ基
达的变化。结果：ＤＡ测序证实３对靶向ｃＩ１ｏ基因的ＲＡ干扰表达载体Ｐｅｅｉ１ｃＩ１０构建成功，中第ｌ经ＮＧ一０ＮＧｎｓ一一Ｇ一０ｌ其对Ｐｅｅｉ１ｃＩｌ０ｍＲＡ水平抑制白血病Ｋ６Ｇｎｓ一一Ｇ — ｏ在ｌＮ５２细胞中ｃＩｌＯＧ — Ｏ基因表达的效率最高，５％。结论：达４成功构建针对ｃＩ１ｏＧ一ｏ基因的ＲＡ干扰的表达载体，Ｎ并筛选出１对抑制效率较高的重组干扰载体，为进一步研究Ｋ６５２细胞中ｃＩ１０因的功能奠Ｇ一ｏ基

Hiwi在乳腺癌组织中siRNA的表达及其对乳腺癌细胞增殖的影响的开题报告

Hiwi在乳腺癌组织中siRNA的表达及其对乳腺癌细
胞增殖的影响的开题报告
题目：Hiwi在乳腺癌组织中siRNA的表达及其对乳腺癌细胞增殖的
影响
背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。

虽然现有的治疗方法
可以有效控制疾病的进展，但是仍然存在治疗失败和复发的情况。

因此，寻找新的治疗方法和靶点显得尤为重要。

Hiwi是一个与RNA干扰相关的蛋白质，在多种癌症中都有表达。

然而，对于Hiwi在乳腺癌中的作用和
机制仍然知之甚少。

方法：本研究将采用组织芯片和实时荧光定量PCR来检测Hiwi在正常乳腺和乳腺癌组织中的表达。

然后，使用siRNA技术沉默Hiwi在乳腺
癌细胞中的表达，并通过MTT实验来确定其对乳腺癌细胞增殖的影响。

预期结果：本研究将揭示Hiwi在乳腺癌中的表达情况，并探究其对乳腺癌细胞增殖的影响。

如果成功沉默了Hiwi的表达，预计将会抑制乳
腺癌细胞的增殖，从而为乳腺癌的治疗提供新的靶点和治疗策略。

意义：本研究将为乳腺癌的治疗提供新的思路和方法，并有望为其
他癌症的治疗提供借鉴。

同时，对于Hiwi的研究也将为RNA干扰在癌症治疗中的应用提供新的启示。

靶向卵巢癌HIF_1_基因siRNA真核表达载体的构建及鉴定

染组图 3A 转染 72 h 后 HIF 1
染组* 与 2 比较 P < 0. 05 图 3B 转染 72 h 后 HIF 1
mRNA 表达
mRNA 表达
蛋白表达
蛋白表达
Байду номын сангаас
源 mRNA 的特异性降解, 因而抑制其相应基因表达的过程[ 6] 。制备 siRNA 的方法有两类: ( 1) 体外制备: 主要有化学合成法[ 6] , 体外转录合成法[ 7] , RNase !消化长片段 dsRNA 法[ 8] ; ( 2) 体内表达: 包括质粒或病毒载体表达法[ 7, 9] 以及 PCR 方法制备 siRNA 表达框架[ 10] 。每种方法各有优缺点, 化学合成法费用昂贵, 而且体外制备的 siRNA 不能持久抑制基因表达。针对以上不足, 本实验采用 OligoEngine 公司的 pSuper. gfp/ neo 质粒制备 siRNA, 其优点在于它带有属于人类 RNA 聚合酶 III 之一的 H1 启动子。转录产物形成由 2 个 U 组成的 3# 黏端, 这与化学合成的 siRNA 的结构十分类似, 因此该质粒更适于在哺乳动物细胞中表达。另外, 由于质粒带有绿色荧光标记, 更容易观察到转染效率和目的基因的沉默效果。该质粒还具有
RNA 干扰( RNA interference, RNAi) 是生物体内普遍存在于 RNA 水平上调节基因表达的方式[ 1] , 具有很强的转录后基因沉默作用, 已广泛用于抗肿瘤的研究中。缺氧诱导因子 1 表达与肿瘤的耐药可能有密切关系[ 2] , 卵巢癌细胞中亦有 HIF 1 蛋白的高表达[ 3] , 因此抑制卵巢癌细胞中 HIF 1 基因的表达可能逆转肿瘤耐药。本研究构建靶向卵巢癌 HIF 1 siRNA 真核表达载体 pshRNA HIF, 为进一步阐明 HIF 1 与卵巢癌耐药的关系提供基础。 1 材料与方法 1. 1 材料

靶向表皮生长因子受体shRNA质粒表达载体的构建和鉴定

靶向表皮生长因子受体shRNA质粒表达载体的构建和鉴定邬跃刚;曹政;吴相柏;魏亚元;霍磊;陶凯雄【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2006(46)36【摘要】目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)质粒表达载体并进行鉴定.方法设计两个小分子干扰RNA(siRNA)序列,体外合成DNA 模板引物,与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNA的表达载体,进行酶切鉴定和测序,再转染人大肠癌LoVo细胞,进行荧光摄像和G418抗性筛选.结果构建的质粒表达载体完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示为绿色,G418可以筛选出阳性克隆.结论成功构建了编码EGFR-shRNA的质粒表达载体,并可以进行稳定筛选.【总页数】2页(P11-12)【作者】邬跃刚;曹政;吴相柏;魏亚元;霍磊;陶凯雄【作者单位】宜昌市第二人民医院,湖北,宜昌,443000;宜昌市第二人民医院,湖北,宜昌,443000;宜昌市第二人民医院,湖北,宜昌,443000;宜昌市第二人民医院,湖北,宜昌,443000;宜昌市第二人民医院,湖北,宜昌,443000;华中科技大学同济医学院附属协和医院【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.靶向RhoA基因的shRNA质粒表达载体的构建与鉴定 [J], 李正伟;白云深;任宪盛;杨有庚2.靶向hVEGF165基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选 [J], 王卫东;蒋立新;徐江平;陆兵勋3.靶向表皮生长因子受体shRNA表达载体的构建和鉴定 [J], 王慧;魏志平;刘彦群4.靶向survivin基因的shRNA质粒表达载体的构建 [J], 熊英;郭文5.靶向钠钾ATP酶α1亚单位shRNA质粒表达载体的构建与筛选 [J], 周蔚;徐忠伟;王凤梅;陈小义;呼文亮;徐瑞成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RNA干扰技术在重要蔬菜作物基因改良中的效果评估

RNA干扰技术在重要蔬菜作物基因改良中的效果评估引言：随着全球人口的不断增长和对食物需求的迫切增长，农业生产的可持续性和效率变得极为重要。

在这一背景下，基因改良技术为改善农作物产量、质量和抗病性方面提供了新的可能性。

其中，RNA干扰技术作为一种功能基因研究和基因组改良的有力工具，已广泛应用于蔬菜作物的基因改良中，取得了显著的效果。

1. RNA干扰技术的原理和应用：RNA干扰技术是一种通过短长度的双链RNA（siRNA）抑制目标基因的表达的技术。

siRNA能特异性地与目标基因的mRNA相结合，从而切断并降解其mRNA，有效地抑制基因的转录和翻译过程。

RNA干扰技术可以用于基因沉默、基因功能研究和基因改良等方面。

在蔬菜作物基因改良中，RNA干扰技术广泛应用于增强植物抗病性、提高产量和改善品质等方面。

通过选择适当的靶点基因，可以抑制抗病基因的表达，从而增强蔬菜作物的抗病性。

同时，通过抑制负性调控基因的表达来提高产量和改善品质也取得了显著的效果。

RNA干扰技术还可以用于生物安全筛查和草坪美化等方面。

2. RNA干扰技术在蔬菜作物基因改良中的效果评估：2.1. 抗病性改良效果评估RNA干扰技术可用于增强蔬菜作物对多种病原微生物的抵抗能力。

例如，对西红柿、辣椒和黄瓜等重要蔬菜作物进行抗病基因AtSPL6靶向RNA干扰，显著提高了这些作物对番茄花叶病毒和黄瓜花叶病毒的抵抗性。

类似地，通过靶向光合作用相关基因的RNA干扰，在菠菜和小白菜等作物中提高了宽叶黄萎病的抵抗性。

2.2. 产量和品质改良效果评估RNA干扰技术在蔬菜作物基因改良中也发挥着重要作用，特别是在提高产量和改善品质方面。

例如，通过干扰转录因子WRKY7基因的表达，可显著改善番茄果实的糖度和抗氧化性能。

此外，通过抑制热激蛋白基因的表达，可提高番茄果实的耐热性和产量。

2.3. 生物安全筛查效果评估蔬菜作物基因改良中的生物安全性一直备受关注。

RNA干扰技术可用于筛查转基因植物的安全性。

靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定

靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定陈岐辉;卢绩;王小庆;王春喜;姚子明【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2008(012)001【摘要】目的构建靶向H1WI基因的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术探索HIWI基因的作用的研究做准备.方法根据HIWI mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入pGenesil-2载体,并进行酶切鉴定和测序.结果酶切证明构建的shRNA已插入载体中,经测序证明与设计相同.结论成功构靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究HIWI基因在干细胞和肿瘤细胞中的作用机制及后续的体内外RNAi实验研究奠定了基础.【总页数】5页(P42-46)【作者】陈岐辉;卢绩;王小庆;王春喜;姚子明【作者单位】吉林大学第一医院,泌尿外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院,泌尿外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院,泌尿外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院,泌尿外科,吉林,长春,130021;舒兰市医院,外科【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.靶向EZH2基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定 [J], 卢绩;陈岐辉;许宁;王春喜;王晓庆;侯宇川;汪岩2.大鼠STAT3基因靶向shRNA真核表达载体的构建及鉴定 [J], 张五星;周伟;赵学伟;丁晓然;周喆;张智敏;周焕芝;石炳毅3.靶向人血管内皮生长因子-C基因的shRNA真核表达载体的构建与鉴定 [J], 谢晓斌;陈小卫;龙捷;张雅洁4.靶向大鼠gnas基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定 [J], 田运娇;易岂建;米青;李娅莎5.靶向人Trb3基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定 [J], 文浩杰;隋军;孙传政;蒋玉娥;曾木圣;李满枝;张晶;李科;李晓江;王虎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

ShRNA 靶向干扰 BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖

ShRNA 靶向干扰 BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖张艳平;丁矢;李雪兰;杨杰;唐峰;欧勇【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】目的：针对 ShRNA 靶向干扰 BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖以分析癌症靶向治疗的前景。

方法通过基因测序法鉴定所构建的siRNA 表达载体。

用四唑盐比色（MTT）法、流式细胞术评价转染 siRNA 后对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响。

结果与 NC－shRNA 组相比，BHRF1－shRNA 组细胞凋亡增加，凋亡率为（31．51±1．59）％。

结论由慢病毒载体介导的 shRNA 表达载体进入细胞后，可以有效下调 BHRF1基因表达水平，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。

【总页数】3页(P17-18,19)【作者】张艳平;丁矢;李雪兰;杨杰;唐峰;欧勇【作者单位】常德职业技术学院医学系，湖南常德 415100;常德职业技术学院医学系，湖南常德 415100;常德职业技术学院医学系，湖南常德 415100;常德职业技术学院医学系，湖南常德 415100;常德职业技术学院医学系，湖南常德415100;常德职业技术学院医学系，湖南常德 415100【正文语种】中文【中图分类】R739.63【相关文献】1.ShRNA靶向干扰BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究 [J], 张艳平2.靶向MR-1基因shRNA表达载体的构建及其对白血病K562细胞增殖的抑制作用 [J], 赵午莉;任开环;李保卫;邵荣光3.干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体4基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响 [J], 鲁保才;卢振民;张爱民;余文发;连荣;史海旭;李靖;王慧敏;袁东杰4.靶向EGFR基因的shRNA抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖的研究 [J], 林远洪;雷小林;吴永忠;高泽莉5.ShRNA靶向干扰EGFR抑制结直肠癌细胞增殖的机制 [J], 闵寒;陈志荣;张舒羽;周俊东;胡群超;孟星君;吴锦昌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RNA干扰技术在基因靶向治疗中的应用

RNA干扰技术在基因靶向治疗中的应用近年来，基因靶向治疗成为了肿瘤治疗的热门领域。

RNA干扰技术作为一种重要的基因调控工具，已经被广泛应用于基因靶向治疗中。

本文将介绍RNA干扰技术的原理和应用，探讨其在基因靶向治疗中的潜力和挑战。

一、RNA干扰技术的原理RNA干扰技术利用RNA分子对目标基因进行选择性沉默，通过两种方式实现基因的抑制：小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）和miRNA介导的RNA干扰。

siRNA是由双链RNA降解而来，可以直接靶向特定基因的mRNA，导致其降解和抑制蛋白质合成。

miRNA则是在基因组中编码的短RNA分子，能够通过与靶基因mRNA的部分互补序列结合，诱导mRNA降解或抑制转录。

二、RNA干扰技术在基因靶向治疗中的应用1. 癌症治疗癌症是RNA干扰技术在基因靶向治疗中的主要领域之一。

通过选择性抑制癌症相关基因的表达，可以抑制癌细胞的生长和扩散，并提高化疗的疗效。

例如，siRNA靶向抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达可以增强化疗药物对癌细胞的杀伤效果。

2. 免疫疾病治疗RNA干扰技术也被应用于免疫疾病的治疗。

免疫疾病通常涉及免疫系统中的异常反应，通过RNA干扰技术可实现对相关免疫调节基因的抑制，从而减轻免疫系统的活性或恢复免疫平衡。

例如，在炎症性肠病治疗中，靶向抑制肠道炎症相关基因表达的siRNA可以减轻炎症反应和组织损伤。

3. 疾病基因治疗RNA干扰技术还可以用于治疗某些与单一基因缺陷相关的遗传性疾病。

通过选择性抑制异常基因的表达，可以修复或缓解相关疾病的症状。

例如，靶向抑制甘氨酸胺甲基转移酶基因的siRNA可以治疗遗传性非典型甘氨酸血症。

三、RNA干扰技术的挑战和前景尽管RNA干扰技术在基因靶向治疗中显示出巨大的潜力，但仍然存在一些技术和安全性的挑战。

例如，如何有效地将siRNA递送到靶细胞，并确保其稳定性和选择性，仍然是一个需要解决的问题。

shRNA干扰Treg细胞Helios表达对TIL细胞抗瘤活性影响的实验研究

shRNA干扰Treg细胞Helios表达对TIL细胞抗瘤活性影响的实验研究研究背景:由于具有肿瘤抗原特异性等优势,TIL细胞过继转移治疗被认为是最具发展前景的免疫治疗方法之一。

尽管细胞过继转移治疗已经在多种肿瘤的治疗上取得了很多突破性进展,但机体内肿瘤的“免疫逃逸”现象严重影响治疗效果,仍是肿瘤免疫治疗中函待解决的一个重要问题。

Treg细胞是具有免疫调节功能的一类T细胞亚群,在肿瘤免疫中能够抑制机体的抗肿瘤免疫应答从而降低免疫治疗效果。

所以,如何消除Treg的免疫抑制作用一直是免疫治疗研究中的热点和难点。

Helios(IKZF2)是Ikaros转录因子家族的一员,研究发现其与控制Treg发育和免疫抑制功能的FoxP3转录因子关系密切,同时发现Treg细胞内部表达高水平的Helios蛋白就能够保持免疫抑制性,而缺少Helios蛋白会造成Treg细胞表型不稳定,引起FoxP3表达下降,进而无法提供免疫抑制效果。

因此我们考虑可以通过设计构建针对Helios基因的shRNA慢病毒载体,利用慢病毒载体介导的RNA 干扰技术沉默Helios基因,靶向切断Treg细胞的肿瘤免疫抑制因素,增强TIL 细胞的抗肿瘤免疫应答。

研究目的:建立从恶性腹水中高效分离TIL细胞和肿瘤细胞的方法,设计构建针对Helios基因的shRNA慢病毒载体。

应用shHelios慢病毒转染TIL细胞,干预Treg数量和功能,探究干扰Helios表达对TIL细胞体外及体内特异性抗瘤活性的影响。

研究方法:1)制备健康志愿者和胃癌患者PBMC,从恶性腹水中分离TIL细胞和自体肿瘤细胞,并进行体外活化扩增。

流式细胞术检测对比PBMC和TIL细胞亚群特征以及经体外活化扩增前后TIL细胞表型情况,LDH检测其对自体和异体肿瘤细胞的杀伤活性。

2)设计构建针对Helios基因的shRNA慢病毒载体,明确转染TIL细胞最佳MOI值,筛选出沉默Helios效果最佳慢病毒。

基于RNA干扰技术的肿瘤基因靶向治疗研究

基于RNA干扰技术的肿瘤基因靶向治疗研究随着科技的不断进步，治疗肿瘤的方式也在发生着改变。

传统的治疗方式，如放疗、化疗等，不仅破坏正常细胞，而且对肿瘤细胞也有很大的限制。

因此，寻找一种更安全、更有效的治疗方式显得尤为重要。

RNA干扰技术就是这样一种新兴的治疗方式，其具有肿瘤基因靶向治疗的优越性。

RNA干扰技术是指通过siRNA或shRNA等RNA干扰分子介入细胞内特定靶标基因的表达，从而达到精准靶向治疗疾病的目的。

这种技术不同于传统治疗方法，不会对正常细胞产生影响，仅仅是通过靶向特定基因来杀死肿瘤细胞。

因此，该技术在治疗肿瘤方面具有很大的优势。

RNA 干扰分子如siRNA和 shRNA都能干扰基因的表达。

siRNA是指双链RNA分子，其长度为21个核苷酸，可以介导基因靶向沉默。

shRNA是指小臂环RNA，其是siRNA的前体RNA，构建shRNA质粒在细胞内转录为 shRNA，切割后直接形成 siRNA。

他们的靶向作用主要来自于miRNA与 RNA诱导的沉默复合物（RISC）的作用。

RNA干扰技术在治疗肿瘤方面的应用主要集中在两个方面：一、肿瘤基因敲除通过RNA 干扰技术，我们可以靶向抑制肿瘤细胞生长、增殖等并最终产生瘤细胞死亡的甚至是细胞凋亡等功效。

由于肿瘤细胞通常会出现基因的突变或缺失，从而使细胞丧失控制信号，细胞不断地增殖，导致了肿瘤的形成。

RNA干扰技术则能够干扰这些错乱的基因，使其重新回到正常的状态，从而使肿瘤细胞失去增殖能力，甚至死亡。

二、肿瘤转移抑制肿瘤的转移一直是治疗肿瘤的难点，通过RNA干扰技术，可以靶向抑制肿瘤细胞的转移过程。

具体而言，RNA干扰技术可以通过靶向转录因子、miRNA和跨膜受体等靶标，来干扰肿瘤细胞的迁移能力，从而抑制其转移过程。

临床研究表明，通过该技术对某些癌症所表达的转录因子和蛋白质进行干扰，可以有效地抑制肿瘤的转移，减少其对身体的危害。

总体而言， RNA 干扰技术虽然有着巨大的潜力和优越性，但在实际应用过程中仍存在一些问题。

shRNA干扰胃泌素基因表达对人胃癌细胞BGC823增殖和迁移能力的抑制作用

shRNA干扰胃泌素基因表达对人胃癌细胞BGC823增殖和迁移能力的抑制作用刘燕;耿排力;吕有勇【期刊名称】《青海医学院学报》【年(卷),期】2010(031)001【摘要】目的构建针对人胃泌素基因的shRNA干扰表达载体,观察胃泌素基因表达抑制对人胃癌细胞系BGC823细胞增殖和迁移能力的影响.方法根据人胃泌素序列设计并构建3个靶向人胃泌素基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染的方法将胃泌素干扰质粒转染至人胃癌细胞系BGC823,经G418筛选出稳定转染的阳性细胞.通过RT-PCR技术筛选出表达抑制最强的稳定转染胃癌细胞系.应用流式细胞仪技术检测其细胞周期变化情况.采用Trans-well小室法检测细胞体外迁移能力.结果经测序证明胃泌素shRNA基因已成功插入Psilencer3.1质粒中,构建的干扰质粒能够显著抑制胃泌素的表达.胃泌素基因的表达下调将胃癌细胞阻滞在G1期,且穿过Trans-well小室膜的细胞数显著下降.结论干扰胃泌素的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力.【总页数】6页(P1-5,23)【作者】刘燕;耿排力;吕有勇【作者单位】青海大学医学院;青海大学医学院;北京大学临床肿瘤学院分子生物学实验室【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.RegⅠ-shRNA载体对胃泌素促胃癌细胞BGC823增殖作用的影响 [J], 程珊;丁一;张钦宪2.siRNA干扰LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭的影响及机制 [J], 吴胜春;杨永宾;赵伟;石晓明;唐雷;孙喜龙;吕柏楠3.干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响 [J], 刘玉珍; 张梦雪; 吕世军; 郑洁4.银杏叶类黄酮对人胃癌细胞BGC823体外的增殖抑制作用 [J], 张凤;杨桂文;张金凤;安利国5.siRNA干扰VRK1表达对食管癌细胞BANF1蛋白表达及增殖迁移能力的抑制作用 [J], 耿杰;李雨晴;李晋;王婷婷;裴露;刘红春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

靶向糖基转移酶shRNA表达质粒对LoVo细胞转移和增殖能力的抑制作用的开题报告

靶向糖基转移酶shRNA表达质粒对LoVo细胞转移和增殖能力的抑制作用的开题报告一、研究背景和意义结直肠癌是目前全球范围内死亡率最高的消化系统恶性肿瘤之一，在我国也是常见的恶性肿瘤之一。

虽然目前已经有多种治疗方法，但结直肠癌仍有很高的病死率。

因此，研究结直肠癌的发生机制，寻找新的治疗方法具有非常重要的意义。

靶向糖基转移酶(shRNA)是一种较新的治疗方法，用于治疗多种癌症，包括结直肠癌。

shRNA可以干扰糖基转移酶在细胞内的表达，从而抑制肿瘤细胞的增殖和转移能力。

LoVo细胞可以用来研究结直肠癌的转移和增殖，因此，本研究旨在探索靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒对LoVo细胞转移和增殖能力的抑制作用。

二、研究内容和方法本研究将使用靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒转染LoVo细胞，研究靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒对LoVo细胞转移和增殖能力的抑制作用。

具体实验内容和方法如下:1. 实验材料：LoVo细胞、靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒、对照表达质粒、转染试剂、细胞培养液等。

2. 实验步骤：(1)将靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒和对照表达质粒转染LoVo细胞。

(2)观察转染后的细胞生长情况和细胞形态学变化。

(3)使用Transwell实验和MTT实验检测细胞的迁移和增殖能力。

(4)使用Western blot检测糖基转移酶的表达量。

三、预期结果本研究预期通过实验研究靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒对LoVo 细胞转移和增殖能力的抑制作用，可以发现靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒是否能有效抑制LoVo细胞的转移和增殖能力。

如果靶向糖基转移酶(shRNA)表达质粒能够有效抑制LoVo细胞的转移和增殖能力，那么将为结直肠癌的治疗提供新的思路和方法。