血清天门冬氨酸氨基转移酶测定

血清天门冬氨酸氨基转移酶测定

1 检验目的

指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理

本试剂以国际临床化学联合会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。

⑴样本中的天门冬氨酸氨基转移酶催化L-天冬氨酸和α-氧代戊二酸氨基转移，生成草酰乙酸和L谷氨酸；

⑵在还原型辅酶I（NADH+H+）和苹果酸脱氢酶（MDH）的存在下，草酰乙酸被还原为L-苹果酸，还原型辅酶I （NADH+H+）被氧化为辅酶I（NAD），从而使波长340 nm处的吸光度值下降。通过对波长340 nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性

L-天门冬氨酸+ -酮戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸

草酰乙酸+ NADH +H+ MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD+

3 标本

3.1 病人准备：12小时禁食。

3.2 类型：血清。

3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～

25℃保存：<10%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定3个

月。

3.4 标本运输：常温条件下保存运输。

3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

4 实验材料

4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司AST试剂盒（沪

食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）

4.1.1 试剂组成

试剂1（R1）：乳酸脱氢酶＞1365 U/L NADH 0.26mmol/ L-天冬氨酸300mmol/L Tris缓冲液 88mmol/L

试剂2（R2）：苹果酸脱氢

酶＞1635 U/L α氧代戊二

酸

36mmol/L

Tris缓冲液88mmol/L EDTA 5.0mmol/L 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件

下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。

4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，

或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使

用。

4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激

作用和毒性，请勿直接接触皮肤及眼睛。一旦接触，即用大

量清水冲洗。请勿吞服。

4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的

AST校准品对自动分析仪进行校准。

4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

5 仪器

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子

ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪

6 操作步骤

6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。

6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。

6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定。

6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。

7 质量控制

在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

8 计算方法

以AST复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。

9 参考值范围

37℃：5～34 U/L（0.1～0.6μkat/L）

我室的参考值:13-40 U/L

10 临床意义

丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给 -酮酸的反应。

ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率可用于肝病的鉴别诊断。比率<1预示中度的肝损伤；比率>1和严重肝病有关，常见慢性肝病。病毒性肝炎，急性风湿性心肌炎、中毒性肝炎等此酶活性显毒增高。

11 操作性能

11.1分析灵敏度：10.0U/L样本的吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.003。

11.2线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖[5～450]U/L。

a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) [5～50]U/L 范围内，线性偏差应不超过±3.0U/L；[51～450] U/L 范围内，线性偏差应不超过±10％。

11.3准确度：相对偏差（B）应不大于±10%。

11.4精密度：(1)重复性：变异系数（CV）应不大于5%；(2)批间差：相对极差（R）应不大于5%。

12 超出范围结果处理

试剂的线性范围为5～450U/L。当测定样本中天冬氨酸氨基转移酶活性高于450U/L时，应对样本进行稀释后再进行测。应将样品用0.9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。

13 病危报警值的处理

无警告/危急值。

14 方法局限性