17培养基配制记录
《细胞实验》17 质粒转染实验步骤
质粒转染大肠杆菌材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml 离心管，消毒枪头，无菌操作台实验步骤：1.LB培养基的配制：在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.固态培养基LB固体培养基及倒板：（1）.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为50μg/ml），以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
（3）.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
2.从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。
3.加入质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl），轻轻摇匀，冰上放置30分钟后。
4.42℃水浴中热击45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。
5.向管中加入1ml LB液体培养基（不含Amp），混匀后37℃振荡培养1小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr ）。
6.将上述菌液摇匀后取100μl 涂布于含Amp的筛选平板上，正面向上放置半小时，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37℃培养16-24小时。
同时做两个对照：对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，其它操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
细胞培养基及其配制方法
DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分DMEM(H) 细胞培养基（粉末型）成分DMEM(L) 细胞培养基（粉末型）成分【DMEM专题】DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项配制方法：（1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水。
（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。
（3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。
（4）加NaHCO3到培养基中。
（5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
（6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0. 2到0.3。
培养基在过滤前要保持密封。
配制培养基要注意以下问题：●认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHC O3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。
●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。
●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。
●所用器皿应严格消毒。
●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。
DMEM各种成分都有什么作用一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。
（1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。
（2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。
除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。
谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
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实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
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c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
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第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
17、培养基配制实验单
1、实验要求：本次实验主要考核学员相关培养基制备的操作，分为四步骤：称量、溶解、分装、灭菌，
2、注意事项：配备后用记号笔做好标识；称量误差0.2g，加纯化水需沿侧壁加入，防止飞溅；
3、实验器械：干粉培养基、称量勺、量筒、纯化水/蒸馏水、电子天平、称量纸、250ml锥形瓶、1000ml烧杯、电炉、玻璃棒、灭菌锅、牛皮纸、试管、酸度计。
3、配备明细：
类
别
ห้องสมุดไป่ตู้名称
胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA)
参照说明书
培养基
纯化水
类
别
名称
R2A琼脂培养基
参照说明书
培养基
纯化水
类
别
名称
硫乙醇酸盐流体培养基（FTM)
参照说明书
培养基
纯化水
类
别
名称
胰酪大豆胨液体培养基（TSB）
参照说明书
培养基
纯化水
（备注：以组为单位，每
（备注：以组为单位，每组4-6人，每组配备其中两种组4-6人，每组配备其中两种）
微生物实验室管理培训考核试题含答案
微生物实验室管理培训考核试题含答案一填空题（每空0.5分，共45分）1.药品微生物试验工作的人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操技术等，经考核合格后方可上岗。
3.微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相4.微生物实验室使用的培养基可按处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基，在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培养基5.配制培养基所用容器不得影响培养基质量，一般为玻璃容器。
验证的条件下贮藏。
8.培养基灭菌后不得贮藏在高压灭菌器中，琼脂培养基不得在0℃或0℃以下存放，因为冷冻可能破坏凝胶特性。
培养基保存应防止水分流失，9.固体培养基灭菌后只允许1次再融化，避免因过度受热造成培养基质量下降或微生物污染。
10.11.微生物检验的实验室应有符合无菌检查法和微生物限度检查要求12.微生物实验室应按相关国家标准制定完整的洁净室（区）和隔离系13.实验室在使用前和使用后应进行消毒，并定期监测消毒效果，要有足够洗手和手消毒设施,所用消毒剂和清洁剂的微生物污染状况应进行监处理的消毒剂和清洁剂。
14.进行维护和保管，保证其运行状态正常和受控，同时应有相应的备用设备，15.验室应在决定是否检测或拒绝接受样品之前与相关人员沟通。
样品的包装和标签有可能被严重污染，因此搬运和储存样品时应小心以避免污染的扩散，说明。
行。
二、判断题（每题1分，共8分）1.平皿法操作时应先注入培养基，再加入1ml供试液。
（× ）2.以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查（√ ）3.从菌种保藏中心获得的干燥菌种为0代，试验用菌株的传代次数不得超过5代（√）4.控制菌检查用培养基促生长能力检查、抑制能力检查接种不大于100cfu试验菌于被检培养基和对照培养基中。
（×）5.纯化水的微生物限度质量标准为每lml供试品中需氧菌总数不得过lOOcfu。
各种培养基配方
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红100mL（rose bengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
微生物学实验常用培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化10g钠琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL 121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀20g粉硝酸钾1g氯化0.5g钠磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼20g脂水1000mLpH7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红100mL（rose bengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
培养基配制记录范文
培养基配制记录范文
培养基是微生物学实验的基础，在实验中具有很重要的作用。
培养基的组成和配制方法对微生物的培养和生长有着重要的影响，因此培养基的配制记录也是非常关键的。
下面我将详细介绍一下培养基的配制记录。
培养基的配制记录通常包括以下几个方面：培养基的名称、配方及重量、pH值、消毒和保存方法等。
在记录培养基的配制过程中，需要非常详细地记录每一步操作，以确保培养基的质量和稳定性。
首先是培养基的名称。
培养基的名称通常跟随着具体的实验内容或微生物种类，如LB培养基、LB琼脂培养基等。
在配制培养基时，需要确保使用正确的培养基名称，以免造成混乱。
其次是培养基的配方及重量。
培养基的配方非常重要，它决定了培养基中各种成分的比例和含量。
在记录培养基的配方时，需要确保配方的准确性和完整性，避免漏掉任何一个成分。
配方中各种成分的重量也需要准确记录下来，以确保后续操作时的准确性。
第三是培养基的pH值。
培养基的pH值对微生物的生长和繁殖有着重要的影响。
在培养基的配制过程中，需要确保调整培养基的pH值到适合微生物生长的范围内。
记录培养基的pH值有助于后续实验中对培养基的质量进行监控和调整。
最后是培养基的消毒和保存方法。
培养基在配制完成后需要进行消毒处理，以确保培养基中不含有任何杂菌或细菌。
消毒方法通常包括高压灭菌、紫外线消毒等。
记录消毒过程的方法和时间有助于确保培养基的无菌性。
另外，培养基在消毒后需要妥善保存，以确保其质量和稳定性。
记录培养基的保存方法和保存时间有助于避免培养基变质或失效。
常用培养基和抗生素的配制方法
常用培养基和抗生素的配制方法1.LB培养基：材料：10g蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠、水至1000mL。
方法：将蛋白胨、酵母提取物和氯化钠加入水中，调整pH值至7.0，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
2.M9盐基培养基：材料：64gNa2HPO4•7H2O、15gKH2PO4、2.5gNaCl、5gNH4Cl、水至1000mL。
方法：将Na2HPO4•7H2O、KH2PO4、NaCl和NH4Cl加入水中，调整pH值至7.0，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
3.TSB培养基：材料：17g磷酸二氢钾、20g蛋白胨、5g氯化钠、水至1000mL。
方法：将磷酸二氢钾、蛋白胨和氯化钠加入水中，调整pH值至7.3，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
4.青霉素琼脂培养基：材料：5g酵母提取物、1g酪蛋白、10gD-葡萄糖、2gK2HPO4、2gKH2PO4、20g琼脂、水至1000mL。
方法：将酵母提取物、酪蛋白、D-葡萄糖、K2HPO4和KH2PO4加入水中，调整pH值至7.0，加入琼脂，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
抗生素的配制方法：1.青霉素盐酸盐溶液：材料：10g青霉素盐酸盐、水至100mL。
方法：将青霉素盐酸盐加入水中，搅拌至溶解。
2.氨苄青霉素钠盐溶液：材料：10g氨苄青霉素钠盐、水至100mL。
方法：将氨苄青霉素钠盐加入水中，搅拌至溶解。
3.克拉霉素溶液：材料：10g克拉霉素、水至100mL。
方法：将克拉霉素加入水中，搅拌至溶解。
4.挠敏霉素溶液：材料：10g挠敏霉素、水至100mL。
方法：将挠敏霉素加入水中，搅拌至溶解。
5.氯霉素溶液：材料：10g氯霉素、水至100mL。
方法：将氯霉素加入水中，搅拌至溶解。
以上是常用培养基和抗生素的基本配制方法，具体使用时还需要根据实验的需求和文献资料进行相应的优化和调整。
在配制过程中，需要注意配制环境的无菌操作、避免污染和准确称量材料的重量等。
培 养 基 配 制
培养基配制1)血平板：5%脱纤维绵羊血琼脂平板。
英国Oxoid公司哥伦比亚琼脂（或TSA琼脂或脑心浸液琼脂）加热溶化后，高温高压灭菌，用时冷却至500C左右，加入无菌5-10%脱纤维绵羊血，充分轻摇混匀后，倾制平板，血平板厚4mm。
2)巧克力平板：应用马血或兔血制备，市售哥伦比亚琼脂热溶化后，高温高压灭菌，约在800C左右加入无菌血液配成5-10%，摇匀后置800C左右水浴中维持15分钟，使之成为巧克力色，絮状，取出冷却至500C左右倾制平板。
因其中含有X和V因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好。
若用绵羊血制备，则要加入X、V因子添加剂（按产品操作说明）。
3)庆大霉素血平板：（分离肺炎链球菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL绵羊血12.5mL庆大霉素0.5mL附：庆大霉素配法：4万单位+16mL水=2.5mg/mL1万单位（u）=10mg 4万单位=40mg4)杆菌肽巧克力平板：（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL兔血（马血）12.5mL杆菌肽lmL附：杆菌肽配制：1.含760mg杆菌肽加10mL灭菌水。
2. 250mL兔血巧克力加入1mL(76mg/mL)杆菌肽。
杆菌肽最终浓度：0.3mg/mL(300mg/L)5)万古霉素巧克力平板（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂 250mL兔血（马血） 12.5mL万古霉素 1.0mL (5mg/250mL)附：万古霉素配制法：（去甲万古霉素400mg/瓶，相当500mg/瓶万古霉素，分装80支）①一瓶400mg去甲万古霉素加0.85％NaCl 10mL=50mg/mL②1mL万古霉素（50mg/mL）加0.85％NaCl 9mL=5mg/mL6)高盐甘露醇琼脂：（分离金黄色葡萄球菌培养基）蛋白胨10g 牛肉浸膏1g氯化钠7g 琼脂15g水 1000mL 甘露醇10g0.2%酚红25mL煮溶后调pH7.4，冷却用大试管倾倒斜面保存。
7)吕氏血清培养基：（分离白喉棒状杆菌用）1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸汽灭菌器内灭菌制成斜面。
培养基及配制全解
（5）母液配制（以MS培养基为例）
无机大量 母液 激素母液
有机物母液
无机微量母液
铁盐母液
配制MS培养基时母液的计算
A 无机大量母液(扩大10倍配1L )
成分
硝酸钾 硝酸铵 硫酸镁 磷酸二氢钾 氯化钙
称量工具
托盘天平 百分电子天平
注意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中 有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解， 再进行混合，而且钙盐最后缓慢加入进去。
多数需过滤灭菌。
6.3 抗氧化物
1)常用抗氧化剂：半胱氨酸、VC 2)用量：50－200mg/L， 3)作用：防止氧化 4)注意：可用抗氧化剂洗 涤外植体伤口表面。
6.4 其它成分： AgNO3 ：
• 作用：吸附乙烯，促进茎芽分化，防玻璃 化苗、早衰、落叶；只能短期培养，
• 用量 1~10mg/L，需过滤灭菌
B 无机微量母液（扩大100倍配1000ml）
成分
硼酸，硫酸铜， 硫酸锰，硫酸锌， 氯化钴，钼酸钠， 碘化钾
称量工具
万分电子天平
C 铁盐（扩大100倍1000ml）
铁盐
硫酸亚铁， Na2-EDTA
注意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它 溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。
在装有800ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒氢氧化钠。溶解后 加入3.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢 慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至 1000ml，置于冰箱中备用。
使用效价： IAA<IBA<NAA<2,4-D
NAA、IBA →生根培养 2,4-D →愈伤组织诱导与增殖 （2）作用 诱导愈伤组织和根分化，促进细胞分裂 和伸长。 NAA和IBA常与细胞分裂素结合用于芽的增殖。 （3）浓度 0.05－5mg/L （4）配制 生长素可溶解在稀NaOH中或溶于乙醇。
常用培养基的配方
伊红美蓝培养基原理一般用来鉴定大肠杆菌;伊红为酸性染料,美蓝为碱性染料;当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽;在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落;金葡菌在此培养基上不生长;常用的伊红美蓝乳糖培养基,可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌;如果有大肠杆菌,因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸,菌体带H+,故菌落被染成深紫色,从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽;用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌步骤如下：①制作伊红美蓝培养基,趁热注入培养皿中,凝成平板,待用;②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水,按1：10稀释;③取毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上;用平板划线分离法进行分离;④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时;培养基中会出现大肠杆菌菌落,菌落中心呈暗蓝黑色,发金属光泽;⑤将菌落接种于斜面培养基上由营养琼脂培养基制成;蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 20~30g蒸馏水 1000ml2%伊红水溶液 20ml%美蓝水溶液 13ml储备培养基的制备先将琼脂加至900ml蒸馏水,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,调整PH为~;趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用;制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正PH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用;临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50～55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板;麦康凯培养基原理1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯2.一种用于分离鉴定的培养基,杆菌在其上呈红色或,有的菌落只是中间红色;配置方法蛋白胨17g脙胨3g猪胆盐或牛、羊胆盐 5g氯化钠5g琼脂17g蒸馏水1000mL乳糖10g%结晶紫水溶液 10mL%中性红水5mL麦康凯-制法1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL中,校正;将琼脂加入600mL加热溶解;将两液合并,分装于烧瓶内,121℃灭菌15min备用;2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50～55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板;注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌;吲哚试验吲哚indol试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚靛基质,经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚而呈红色,是为吲哚试验阳性;LB培养基配方1g提取物0.5g1g-2g 100mlLB培养基-LB培养基条件LB培养基-固态培养基LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗生素,并且倒好板;LB固体培养基倒板1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中,待培养基温度降到55℃时手可触摸加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀;3.倒板：一般10ml倒1个板子;培养基倒入培养皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟;4.保存：用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用;牛肉膏蛋白胨培养基营养琼脂配方10g；3g ；5g；15～20g；1000mL；制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH 至～;加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化;分装烧瓶,121℃高压灭菌15min;注：此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面;如用于菌落计数,琼脂量为%；如作成平板或斜面,则应为2%;甲基红试验甲基红试验-化学属性甲基红Methyl Red试验肠杆菌科各菌属都能发酵,在分解葡萄糖过程中产生,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降至以下,使甲基红变红;甲基红试验-试验方法挑取新的待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于36±1°C或30°C以30°C较好3~5天,从第二天起,每日取培养液1ml,加甲基红指示剂1~2滴,阳性呈鲜红色,弱阳性呈淡红色,阴性为黄色;迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定; 甲基红为酸性指示剂,pH范围为~,其pK值为;故在以下,随酸度而增强黄色,在以上,则随碱度而增强黄色,在或上下接近时,可能变色不够明显,此时应延长培养,重复;尿素酶某些能产生尿素酶,分解尿素产生大量的氨,使培养基变碱;将待检菌接种于含有尿素的培养基中,35℃孵育18~24h,观察结果;红色为阳性,不变为阴性;主要用于肠杆菌科变形、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定;明胶液化gelaune liquefaction指把的现象;明胶液化-它的特征这种能力可因细菌种类不同而有显着差异,因此很早以来就被用来作为、的一种特征;明胶液化-适应范围、、属均具有能力,而大肠杆菌就无这种液化能力;由于明胶是在热水中溶解胶原collagen而成的,因此,它是由产生于体外的蛋白酶进行分解的;用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象;VP试验VP试验-试验简介英 VP test检验中常用的之一;某些在蛋白胨水中能分解葡萄糖产生,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在环境下,被空气中氧氧化为,二乙酰与蛋白胨中的生成红色化合物,称V－P+反应;VP试验-试验方法1O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养48h,培养液1ml 加O’Meara试剂加有%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液1ml,摇动试管1~2min,静置于室温或36±1°C恒温箱,若4h内不呈现伊红、即判定为阴性;亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者;2Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养4天、培养液先加入5°Cα萘酚2-na-phthol纯酒精溶液,再加40%氢氧化钾水溶液,摇动2~5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置于室温或36±1°C恒温箱,如2h内仍不显现红色、可判定为阴性;3快速法：将%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后放置5min,判定结果;不产酸的培养物不能使用;本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别;在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时,通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生,故应省去或以氯化钠代替;生理盐水生理盐水就是%的氯化钠水溶液,因为它的渗透压值和正常人的、组织液都是大致一样的,所以可以用作补液不会降低和增加正常人体内钠离子浓度以及其他医疗用途,也常用作体外培养活组织、细胞;氯化钠：俗称盐、食盐;菌注射用水一般使用来溶解难溶于药物使用的, 生理盐水就是我们静脉点滴常用的％的氯化钠注射液,外用具有一定的杀菌消毒作用;所以它们不是一样的概念. ;人体生活中所处环境的配方：需用生理盐水浓度是%;称取0.9克氯化钠,溶解在少量水中,稀释到100毫升;血琼脂平板制法：取营养琼脂PH7．6,加热使其溶解待冷至45-50℃,以灭菌操作于每100毫升加或血5-10毫升,轻轻摇匀,立即倾注于或分装,制成斜面备用;血琼脂平板-用途用途：1．一般棉拭子均接种此培养基;2．尿液,脓液3．分离标本用;胰蛋白胨胰蛋白胨水成分胰蛋白胨10g；蒸馏水1000mL；制法将上述成分溶解,校正pH;分装试管,121℃高压灭菌15min;Baird－Parker氏培养基成分胰蛋白胨10g ；牛肉膏5g ；酵母膏1g ；丙酮酸钠10g ；甘氨酸12g ；氯化锂LiCl·6H2O5g ；琼脂20g ；蒸馏水950mL ； ;增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合,保存于冰箱内;制法将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解;冷至25℃,校正pH;分装每瓶95mL,121℃高压灭菌15min;临用时加热溶化琼脂,冷至50℃,每95mL加入预热至50℃的卵黄亚蹄酸钾增菌剂5mL,摇匀后倾注平板;培养基应是致密不透明的;使用前在冰箱储存不得超过48h;血浆凝固酶血浆凝固酶-血浆凝固酶:是能使含有肝素等的人或兔血浆发生凝固的物质,致病株大多数能产生,是鉴别有无的重要.。
【2017年整理】平板计数琼脂培养基
PCA平板计数琼脂培养基平板计数琼脂培养基即PCA，是在08GB中用于菌落总数测定的配方：1、成分胰蛋白胨 5.0g酵母浸粉 2.5g葡萄糖 1.0g琼脂 15.0g蒸馏水1000mlpH 7.0士0.22、制法：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。
LST 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤简称LST，在08GB中是用于大肠菌群的检测，大肠杆菌的计数，金黄色葡萄球菌的检测。
配方：1、成分：胰蛋白胨或胰酪胨 20.0g氯化钠 5.0g乳糖 5.0g磷酸氢二钾 2.75g磷酸二氢钾 2.75g月桂基磺酸钠0.1g蒸馏水1000mlpH 6.8士0.22、制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH ，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。
121℃高压灭菌15min。
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB煌绿乳糖胆盐肉汤简称BGLB，在08国标中是用于大肠菌群的检测配方：1、成分：蛋白胨10.0g乳糖 10.0g牛胆粉溶液 200.0ml0.1%煌绿水溶液 13.3ml蒸馏水1000mlpH 7.2士0.12、制法：将蛋白胨、乳糖溶解于500ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200.0ml（将20.0g脱水牛胆粉溶于200ml的蒸馏水中，pH7.0-7.5）用蒸馏水稀释到975ml，调节pH至7.4，再加入0.1%煌绿水溶液13.3ml，用蒸馏水补足到1000ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。
121℃高压灭菌15min。
V-P试剂 Voges-Proskauer试剂V-P试剂是V oges-Proskauer试剂的简称，用于副溶血性弧菌的V-P试验。
配方：1、成分甲液α-萘酚 5.0g无水乙醇100.0ml乙液氢氧化钾40.0g用蒸馏水加至1000ml2、试验方法将3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯化钠MR-VP培养基，36℃士1℃培养48h。
实验室常用培养基
实验用培养基配制 >1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）牛肉膏3g ，蛋白胨10g ，NaCl 5g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.62. 高氏1 号培养基( 用于放线菌培养)可溶性淀粉20g ，KNO 3 1g ，NaCl 0.5g ，K 2 HPO 4- · 3H 2 O 0.5g ，MgSO4 · 7H 2 O 0.5g, ，FeSO4 · 7H 2 O 0.01g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.6 。
配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3 ．马丁氏（Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌）K 2 HPO 4 1g ，MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g ，蛋白胨5g ，葡萄糖10g ，1/3000 孟加拉红水溶液100mL, 水900mL ，自然pH ，121 ℃湿热灭菌30min 。
待培养基融化后冷却55 ～60 ℃时加入链霉素( 链霉素含量为30 μ g/mL).4. 马铃薯培养基(PDA)( 用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯( 去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖) 20g, 水1000mL配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖, 再补足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖.5. 察氏培养基( 蔗糖硝酸钠培养基)( 用于霉菌培养)蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 · 7H2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ～7.26. Hayflik 培养基( 用于支原体培养)牛心消化液( 或浸出液)1000mL, 蛋白胨10g, NaCl 5g, 琼脂15g, pH7.8 ～8.0,分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊是极毒的药品, 需特别注意安全操作.7 ．麦氏(McCLary) 培养基( 醋酸钠培养基)葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏0.25g ，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ，蒸馏水l00mL 。
微生物实验室管理培训考核试题含答案
一填空题（每空分，共45分）1.药品微生物试验工作的人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操本技术等，经考核合格后方可上岗。
3.微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围4.微生物实验室使用的培养基可按处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基，在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培5.6.7.已验证的条件下贮藏。
8.0℃以下存放，因为冷冻可能破坏凝胶特性。
培养基保存应防止水分流失，9.质量下降或微生物污染。
10.11. 微生物检验的实验室应有符合无菌检查法和微生物限度检查要求域。
12. 微生物实验室应按相关国家标准制定完整的洁净室（区）和隔离13. 实验室在使用前和使用后应进行消毒，并定期监测消毒效果，要有足够洗手和手消毒设施, 所用消毒剂和清洁剂的微生物污染状况应进经无菌处理的消毒剂和清洁剂。
14.责进行维护和保管，保证其运行状态正常和受控，同时应有相应的备用设15.实验室应在决定是否检测或拒绝接受样品之前与相关人员沟通。
样品的包装和标签有可能被严重污染，因此搬运和储存样品时应小心以避免污染的告中应有说明。
行。
二、判断题（每题1分，共8分）1.平皿法操作时应先注入培养基，再加入1ml供试液。
（× ）2.以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查（√ ）3.从菌种保藏中心获得的干燥菌种为0代，试验用菌株的传代次数不得超过5代（√）4.控制菌检查用培养基促生长能力检查、抑制能力检查接种不大于100cfu试验菌于被检培养基和对照培养基中。
（×）5.纯化水的微生物限度质量标准为每lml供试品中需氧菌总数不得过lOOcfu。
（√）6.用于环境监控的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养，以防止外来的污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。
常用25种培养基详细配方
常用25种培养基详细配方以下是常用的25种培养基的详细配方：1. LB培养基（Luria-Bertani medium）-天然培养基：10g蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.0。
- 固体培养基：添加15g agar。
2. TSA培养基（Tryptic Soy Agar）-17g蛋白胨，3g酵母提取物，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.3-7.5- 固体培养基：添加15g agar。
3. NB培养基（Nutrient Broth）-8g蛋白胨，2g胰蛋白胨，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.4 - 固体培养基：不添加agar。
4. R2A培养基（Reasoner's 2A medium）- 0.5g peptone，0.5g casein hydrolysate，0.5g yeast extract，0.5g glucose，0.5g soluble starch，0.3g dipotassium phosphate，0.05g magnesium sulfate，0.3g sodium pyruvate，10μg m anganese sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至7.2-7.4- 固体培养基：添加15g agar。
5. BHIS培养基（Brain Heart Infusion with 20% Sucrose）- 37.5g BHIS培养基，10g sucrose，添加适量蒸馏水，pH值调至7.5- 固体培养基：添加15g agar。
6. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）-200g马铃薯，20g葡萄糖，添加适量蒸馏水，pH值调至5.6- 固体培养基：添加20g agar。
7. MRS培养基（de Man Rogosa Sharpe medium）- 10g peptone，10g beef extract，4g yeast extract，20g glucose，5g sodium acetate，2g dipotassium phosphate，0.02g magnesium sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至6.2-6.6- 固体培养基：添加20g agar。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。
太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。
在糖化过程中，应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
2 基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。
pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。
培养基制备监控记录
培养基制备监控记录
制备培养基是微生物实验的重要步骤之一，而且是确保实验结果准确
可靠的关键环节。
为了确保培养基制备的质量和可重复性，需要对制备过
程进行监控记录和分析，以便及时发现和解决问题。
本文将介绍培养基制
备监控记录的内容和要点。
首先，培养基制备监控记录应包括以下几个方面：原材料和试剂的验
收记录、制备过程记录、环境条件记录和后续操作记录。
制备过程记录是制备培养基的核心内容，需要详细记录每一步的操作
步骤、相关参数和操作人员。
具体包括称量原材料的重量、加热溶解的温
度和时间、过滤的方法和过滤器的型号、pH的调整和控制等。
操作过程
中应注意卫生和安全，避免交叉感染和污染。
同时，需要记录制备过程中
的实际用量和理论用量的差异，以评估制备质量。
环境条件记录是制备培养基过程中的关键环节，可能会对培养基质量
产生影响。
因此，需要记录制备过程中的温度、湿度和洁净度等环境条件。
这些记录可以帮助分析制备过程中的环境因素对培养基质量的影响，并及
时调整，保证制备质量的稳定。
总结起来，培养基制备监控记录对于保证实验结果的准确性和可靠性
非常重要。
通过记录和分析原材料的验收、制备过程、环境条件和后续操
作等信息，可以及时发现和解决问题，提高制备质量的稳定性和可重复性。
因此，在进行微生物实验时，制备培养基的监控记录是必不可少的步骤，
值得科研人员重视和注意。