激光诱导荧光检测技术简介

荧光分析法

原理：根据物质分子吸收光谱和荧光光谱能级跃迁机理，具有吸收光子能力的

物质在特定波长光（如紫外光）照射下可在瞬间发射出比激发光波长长的光，即荧光。荧光强度与物质浓度的关系可表示为：I=kC，因此紫外荧光光强I与样气的浓度C成线性关系。这是紫外荧光法进行定量检测的重要依据。

两种测定方法：

直接测定法:利用物质自身发射的荧光进行测定分析。

间接测定法：由于有些物质本身不发射荧光（或荧光很弱），这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂（如荧光染料），使其与不发射荧光的物质生成络合物，这种络合物能发射荧光，再进行测定。因此荧光试剂的使用，对一些原来不发荧光的无机物质和有机物质进行荧光分析打开了大门，扩展了分析的范围。

不管是直接测定，还是间接测定，一般的采用标准工作曲线法，取各种已知量的荧光物质，配成一系列的标准溶液，测定出这些标准溶液的荧光强度，然后给出荧光强度对标准溶液的浓度的工作曲线。在同样的仪器条件下，测定未知样品的荧光强度，然后从标准工作曲线上查出未知样品的浓度（即含量）。

一般常用的荧光分析仪器有：目测荧光仪（荧光分析灯），荧光光度计和荧光分光光度计三种。

荧光分析是一种先进的分析方法，它比电子探针法、质谱法、光谱法、极谱法等都应用的较广泛和普及，这同荧光分析具有很多优点分不开的。荧光分析所用的设备较简单，如目测荧光仪和荧光光度计构造非常简单完全可以自己制造。比起质谱仪、极谱仪和电子探针仪来它在造价上要便宜很多倍，而且荧光分析的最大特点是：分析灵敏度高、选择性强和使用简便。同时具备这三大特点的仪器并不多.

激光诱导荧光分析（LIF）

激光的特点：亮度高，方向性好，单色性好，相干性好

仪器组成：与普通的荧光检测器一样，激光诱导荧光检测器主要由光源、光学系统、检测池和光检测元件组成，两者最重要的区别是激光诱导荧光检测器的光源是激光器。

激光器：激光器是激光诱导荧光检测器的重要组成部分，用脉冲激光为光源，采用时间分辨技术可消除瑞利散射光（半径比光或其他电磁辐射的波长小很多的微小颗粒对入射光束的散射）和拉曼散射光（光波在被散射后频率发生变化）对测定的干扰，同时增加被测成分之间测定的选择性。以上这些特性使激光诱导荧光检测器的信噪比大大增强，显示出最高的灵敏度和较好的选择性。

光学系统：激光诱导荧光检测器的光学系统元件主要为光学透镜和单色器。

光检测器用两个单色器分光，消除杂散光对荧光检测的干扰。激发单色器将光源分光，得到所需要波长的激发光束，发射单色器用于去除干扰荧光和其它杂散光。而用激光为光源时，尤其是可调谐激光器，仅用一个发射单色器即可。用光栅分光能得到较高的信噪比，但其透光效率低，如f/4 光栅大约仅能透过入射光强度的0.3%。滤光片具有相对较高的透光效率（>50%）。激光本身有很好的单色性，因此很少采用带通滤光片，采用较多的是剪切式滤光片和空间滤光片。

检测池：常规液相色谱检测池，采用立方形的较多。激光垂直入射到检测池上，消除了由于激光散射产生的背景噪声，提高检测灵敏度。

光检测元器件：可采用的光检测元器件有光电倍增管、二极管阵列检测器和电荷耦合器件，以光电倍增管的应用最为普遍。三者比较，电荷耦合器件具有较高的量子效率和信噪比，增强型的甚至可以进行单分子检测。通过加和和合并，电荷耦合器件还可以进一步提高信噪比，但价格昂贵限制了它的应用。

应用：化学、生物、药物分析；司法取证鉴定；环境污染监测；测量技术；生物体疾病诊断