无菌检验方法学验证方案研讨
对注射剂无菌检查及方法学验证共性问题的一些探讨
对注射剂无菌检查及方法学验证共性问题的一些探讨对注射剂无菌检查及方法学验证共性问题的一些探讨审评四部刘宁注射剂作为药品的一种重要剂型被广泛地应用于临床，由于其直接注入人体体内，发挥疗效，因此其安全性显得更为重要。
现在对于注射剂的质量越来越受到高度关注，其中注射剂的灭菌是关系到药品质量、保证用药安全的重要工艺步骤之一，选择合适的灭菌方法，做到既杀灭除去微生物，达到灭菌目的，又保持药物稳定。
无菌检查是体现灭菌效果的主要手段，也是注射剂质量控制的一个重要指标。
在这里，结合审评实践，对注射剂在研发和药学审评中存在的一些无菌检查及方法学验证方面的共性问题进行探讨。
无菌检查是检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料以及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
符合无菌检查法的规定仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
2005年版中国药典无菌检查要求更加严格，修订了培养时间，把无菌检查的培养时间增加至14天（而2000年版的培养时间仅为7天），与国外药典完全一致，并新增了无菌检查方法学验证试验，以保证无菌检验结果的准确性和可靠性。
无菌检查法一般分为两种方法：直接接种法和薄膜过滤法。
直接接种法即每支（或瓶）供试品按规定量分别接入含培养细菌及真菌培养基的容器中。
薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也可用一般薄膜过滤器。
无菌检查用的滤膜孔径为0.45μm，直径约为50mm。
根据供试品及溶剂的特性选择滤膜的材质。
如抑菌性供试品采用具有疏水性边缘及低吸附性的滤膜。
滤器及滤膜采用适宜的方法灭菌；使用时，要保证滤膜的完整性；水溶性供试品，先用少量冲洗液湿润滤膜。
油类供试品，滤膜和滤器，在使用前应充分干燥，备用。
过滤时，保持供试液及冲洗液覆盖整个滤膜表面；冲洗滤膜时，每张滤膜每次冲洗量为100ml，冲洗液、冲洗量及冲洗方法与方法验证相同。
2005年版中国药典都较详细地各提供了8种供试品的处理方式，在实际检验中可参考执行。
无菌检查方法学验证
无菌检查方法学验证无菌检查方法学验证1. 概述将规定量的供试品按无菌检查法中的薄膜过滤法进行操作,并接种小于100cfu 的试验菌,同时设置阳性对照,按规定温度培养3~5 天,与各相应的阳性对照管比较: 如含供试品各管中的试验菌均生长良好,则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用,可按此法进行供试品的无菌检查;如含供试品的任一管中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长,则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用,应采用增加冲洗量或使用中和剂等方法消除供试品的抑菌作用,并再重新进行验证试验。
2. 验证前提条件供试品的选择原则:相同配方,不同规格的制品,选择其中装量最大的制品进行验证。
种类相同,含量不同的制品,选择含量最高的制品进行验证。
照此原则,多规格制品按下表选择供试品进行验证。
3. 验证方法3.1菌液制备3.1.1细菌菌液制备程序①取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的冻干菌种管各一支，分别在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后，吸出滴入营养琼脂斜面上,使均匀分布，置30~35C培养18h~24h。
用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于营养琼脂培养基斜面上，于30~35C培养18h~24h o 同法操作,培养得第3代培养物。
②取生抱梭菌的冻干菌种管一支,在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后,吸出滴入胃酶肉肝疱斜面上,使均匀分布,置30~35C培养18h~24h o用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于胃酶肉肝疱斜面上，于30~ 35°C培养18h~24h。
取生抱梭菌的第二代新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,30~35C培养18h~24h,得第3代培养物。
③分别取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的第3代营养琼脂斜面新鲜培养物，用5.0ml吸管吸取3.0ml~5.0ml稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：2010•MEF•041•05•004起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)起草人(Composer)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：批准人(Approved by)：日期(Date)：目录1. 验证目的2. 验证人员3. 验证依据及参考文件4. 仪器与设备5. 验证过程5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备5.3 方法验证试验6. 验证总结1. 验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。
即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。
2. 验证人员：验证小组组长：刘长宏验证小组副组长：宋芳良验证小组成员：曲晓燕、常西胜3. 验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4. 仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5. 验证过程：5.1 培养基及稀释液5.1.1 培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1 培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
结果记录：结论：5.1.2.2 培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。
医疗器械无菌检验方法验证方案
医疗器械无菌检验方法验证方案一、背景医疗器械无菌检验是确保医疗器械在使用前不会引起感染的关键步骤之一。
为了保证无菌检验方法的准确性和有效性，需要进行方法验证。
本文将介绍医疗器械无菌检验方法验证的方案。
二、目的本方案的目的是验证所采用的无菌检验方法对医疗器械的适用性和可靠性。
通过验证，确保该无菌检验方法能够准确判断医疗器械是否符合无菌要求。
三、验证内容1. 确定验证属性：根据实际需求，确定无菌检验方法的验证属性，例如检测灵敏度、特异性、准确性、重复性等。
2. 样品选择：选择符合验证属性需求的医疗器械样品，确保样本具有代表性。
3. 测试方案设计：根据所选验证属性，设计相应的测试方案。
包括实验组和对照组的划分、对照方法选择、实验参数设定等。
4. 实验组和对照组：按照测试方案进行实验组和对照组的划分。
实验组使用待验证的无菌检验方法，对照组使用已经验证过的或国际标准的无菌检验方法。
5. 检测过程：按照测试方案进行样品的无菌检验。
确保检测过程中的操作规范和环境条件符合要求。
6. 数据分析：将实验结果进行分析，包括验证属性的计算和对比分析等。
使用合适的统计分析方法，评估无菌检验方法的准确性和可靠性。
7. 结果评估：根据数据分析的结果，对无菌检验方法进行评估。
判断该方法是否符合验证属性的要求。
8. 结论和建议：根据评估结果，给出无菌检验方法的结论和改进建议。
如发现验证方法存在不足之处，建议进行进一步的优化和改进。
四、质量控制在验证过程中，需要进行严格的质量控制。
包括实验设备的校准、环境条件的监测、操作流程的标准化等。
同时，还需要使用合格的正、负对照进行比对，确保验证结果的准确性和可靠性。
五、参考文献[1] 国家药品监督管理局.医疗器械无菌检验方法验证指导原则[S].2015.[2] International Organization for Standardization. ISO 11137-1:2006, Sterilization of health care products - Radiation - Part 1: Requirements for development, validation and routine control of a sterilization process for medical devices[S].六、结语医疗器械无菌检验方法验证是确保医疗器械安全使用的重要环节。
无菌检验方法验证方案
无菌检验方法验证方案1.引言无菌检验是对物品或产品进行微生物污染检测的一种方法。
验证无菌检验方法的准确性和可靠性是确保检验结果准确的关键因素。
本方案旨在提供一种有效的无菌检验方法验证实施方案。
2.目的验证无菌检验方法的准确性和可靠性。
3.系统概述本方案包括以下主要步骤：-设计验证实验方案-准备验证试验样品和无菌试验介质-运行验证试验-分析结果并评估方法的准确性和可靠性-编写验证报告4.设计验证实验方案根据实际情况，设计验证实验方案，包括验证试验的样品数量、样品类型、试验方法和实验条件等。
根据实际情况，选择合适的无菌检验方法进行验证。
5.准备验证试验样品和无菌试验介质根据验证实验方案，准备验证试验所需的样品和无菌试验介质。
确保样品和介质的质量符合要求，并严格遵守洁净操作程序，防止试验过程中的污染。
6.运行验证试验按照验证实验方案，进行验证试验。
严格按照无菌检验方法的要求进行操作，确保试验过程的准确性和可靠性。
对样品和无菌试验介质进行适当的控制，以确保试验结果的可靠性。
7.分析结果并评估方法的准确性和可靠性根据验证试验的结果，进行数据分析。
对验证试验过程中的任何问题进行评估，并判断无菌检验方法的准确性和可靠性是否满足要求。
如果发现问题，需要进行适当的调整，并重新运行验证试验。
8.编写验证报告根据验证试验结果，编写验证报告。
报告应包括验证试验的目的、方法、结果和结论等。
报告应清晰、准确地描述验证试验过程和结果，并提出相应的建议。
9.结论通过验证实验方案的实施，可以评估无菌检验方法的准确性和可靠性。
如果验证结果表明方法可靠，可以继续使用该方法进行无菌检验。
如果验证结果不满足要求，需要对方法进行修订或选择其他合适的方法。
总之，无菌检验方法的验证是确保检验结果准确的重要步骤。
通过设计合理的验证实验方案、准备样品和无菌试验介质、运行验证试验、分析结果并评估方法的准确性和可靠性，可以有效地验证无菌检验方法的准确性和可靠性，并提供一份详尽的验证报告。
无菌微生物限度检查及方法验证
甘油冷冻管保藏法
• 将待保藏菌接种至平板或琼脂斜面，培养 • 用无菌接种环轻轻刮取菌台，用接种环使细菌充分扩散到预先装于
试管中的无菌蒸馏水中 • 调整菌液浓度，使其等同于麦氏比浊管第10号管 • 向已制备好的菌悬液中加入等体积、浓度为20%的无菌甘油，得到
10%甘油菌悬液。 • 轻轻振摇小管，使内容物充分混合，分装于无菌小试管。 • 制好的甘油冷冻管最好在-30℃条件下贮存。
•建立无菌室使用登记册
•使用日期，时间，使用人，设备运转状况，温、湿度，洁净度状况 （沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数），报修原因，报修结果，清洁 工作（台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手），消毒液名称 等
微生物实验室的质量管理
实验室使用管理
1. 每天工作前用消毒液消毒工作台，开紫外灯（最少半小时）进行空气消 毒，每月定期做彻底清洁工作，适当时用消毒剂进行熏蒸。
• 将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即称为“一代”。
冷冻真空干燥保藏法
主要是将待保藏菌种混于有保护作用介质内制成菌液，分装在安 瓿中于冷冻条件下使其快速冻结，因冻结可使晶型细致，不致损伤活 菌细胞。然后用真空抽气减压，是安瓿内的冰晶液体升华，水气迅速 被真空抽走，冰晶型的菌液很快变成疏松的干燥固体物，最后在真空 状态下熔封管口，使干燥物在局部真空条件下封存，并置冷暗处，在 很长时间内菌种仍可维持活力不变。
•应定期更换消毒剂品种，按标准准确配制。
微生物实验室的质量管理
一、菌种的保存与管理
菌种名称：金黄色葡萄球菌
1. 菌种—特殊的标准品 应保持基生长特性和减少污染，是微生物实 验结果一致性的重要保证。
2. 制定菌种保藏管理制度
菌种系列号：[CMCC(B)26003]
注射用万古霉素无菌检查方法学验证
试验样品处理
试验步骤
按照无菌检查方法学的要求，对试验样品进行处理，包括稀释、加 药、培养等步骤。
操作规范
在处理试验样品的过程中，需要严格遵守无菌操作规范，避免样品 中的微生物污染实验环境。
数据记录
记录每个试验样品的无菌检查结果，包括微生物种类、数量等。
03
方法学验证实验
样品准备
取注射用பைடு நூலகம்古霉素样品，用无菌方法将样品分别装入无菌容器中。
注射用万古霉素无菌检查方 法学验证
汇报人：
日期:
• 引言 • 方法学验证方案 • 方法学验证实验 • 方法学验证结果分析 • 注射用万古霉素无菌检查方法学验
证总结
01
引言
目的和背景
目的
确保注射用万古霉素的无菌检查方法具有可靠性、准确性和可重复性，为产品质量控制提供有力支持 。
背景
注射用万古霉素是一种广泛应用于临床治疗的抗生素药物，其无菌质量对于保障患者安全具有重要意 义。因此，对无菌检查方法进行验证是保证药物安全性的关键环节。
参考标准
《中国药典》2020年版
规定了注射用万古霉素的无菌检查方法和要 求。
《无菌检查法》国家药品标 准
提供了无菌检查方法学的通用指导原则。
《微生物限度检查法》国 家药品标准
提供了微生物限度检查的方法学指导原则。
定义与术语
无菌检查
01
指对药物中是否含有微生物的检查方法，是确保药物
无菌的重要手段。
实验设计
根据无菌检查方法学验证指导原则，设计实验方案，包括实验组和对照组。
实验操作
按照实验设计方案，分别对实验组和对照组进行无菌检查实验。
培养与观察
将实验组和对照组的培养皿放入无菌培养箱中培养 ，每天观察并记录培养结果。
无菌检查法验证方案
XXX无菌检验方法学验证方案编号：VP.SV.039.00目录验证方案的审批验证小组名单验证实施进度技术性文件引言1．概述2．验证目的3．职责无菌检查方法学的确认再验证周期验证方案审批验证小组名单验证实施进度技术性文件引言1.概述1.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH规定，当建立药品的无菌检查方法时，需进行方法学的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的检测。
当药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检测方法应重新验证。
2.验证目的：2.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH无菌检查方法要求，通过试验，寻找合适的材料、条件和方法，最终确定氧氟沙星滴眼液的检验方法，并将其定为日常检测的正式方法。
3.职责3.1验证办3.1.1负责验证方案的审批。
3.1.2负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施。
3.1.3负责验证数据及结果的审核。
3.1.4负责验证报告的审核。
3.1.5负责再验证周期的确认。
3.2质量监控部3.2.1负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备。
3.2.2负责仪器、仪表、量具的校正。
3.2.3负责取样及样品检验。
3.2.4负责收集各项验证、试验记录，对结果进行分析，起草验证报告，报验证办。
3.2.5负责拟订验证方案。
3.2.6负责组织试验所需设备。
3.2.7负责按照验证方案里各项操作步骤进行操作。
3.2.8负责保证设备的正常运转。
无菌检查方法学的确认1.验证环境、设备及实验前准备：1.1无菌室内（无菌检查应在环境洁净度B级下的局部洁净度A级的单向流空气区域或隔离操作器内完成。
由QA人员定期按国家相关要求进行环境监控。
1.2仪器和设备：①GSP-9080MBE型隔水式电热恒温培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；②生化培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；③AL204型电子天（梅特勒—托利多仪器有限公司）；④GZX-9070MBE型电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；⑤YXQ-LS-50SI型高压蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；⑥HTY-2000A集菌仪、全封闭集菌培养器可重复使用集菌培养器（杭州高得·泰林医疗器械有限公司）；⑦超净工作台(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；。
无菌检验方法学验证方案研讨(一)
无菌检验方法学验证方案研讨(一)无菌检验是生物药品质量控制的重要环节，经常被应用于生物药品的生产流程中。
为保证其有效性及准确性，需要对其检验方法进行方法学验证。
为此，国内外许多药企和检验机构都对无菌检验方法学验证方案进行了研讨。
一、验证的必要性无菌检验的准确性及有效性对生物药品的质量控制及稳定性具有重要意义。
为保证生物药品的质量和安全性，需要对无菌检验方法进行验证，以保证其准确性及有效性，为生物药品生产提供科学依据。
无菌检验方法学验证是一个全面、系统、严密的及时性的过程，通过验证，可以减少误判和漏判，保证样品能够在加工过程中得到可靠的控制。
二、验证方案的内容在验证无菌检验方法时，需要考虑若干重要因素。
首先，验证的标准和验证方法需要根据实际生产中的使用情况而定，并且需要以国家相关规定和标准作为依据。
其次，还需要确定验证的目标及评价标准，以保证验证过程的可靠性和有效性。
最后，还需要进行实验和结果分析，在验证期间要保持正常生产的过程和质量控制。
三、验证方案的实施在执行验证方案时，需要遵循符合相关要求。
首先，必须在合适的时间内采集符合要求的样品，确保样本的准确性。
其次，需要控制操作力量，缩小可能存在的人为误差。
最后，验证过程中还需进行结果的分析和评价，并对验证所需的实验设备及环境条件进行检查，以保证结果的准确性及可靠性。
四、验证方案的结果在验证方案结束时，需要依据一定的标准对结果进行评价。
如果验证结果符合要求，则可以认可该方法。
如果无法通过验证，则需要对方法进行进一步的改进。
在验证结果中，还需要考虑实验条件的不同，以及其可能引发的影响，以保证验证的可靠性和有效性。
总之，无菌检验方法学验证方案具有重要意义。
对于保证生物药品的质量和可靠性尤为重要。
验证方案的执行需要耗费时间和精力，但通过验证，可以提升检验方法的准确性和有效性，为药品生产提供了可靠的保障。
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查的方法学验证方案注射液的无菌性是医疗领域中最为重要的质量指标之一。
为了确保注射液的无菌性，需要进行方法学验证方案。
本文将介绍一种常见的注射液无菌检查方法学验证方案，确保验证结果准确可靠。
一、验证目的本验证方案旨在验证注射液无菌性检查的方法学准确性和可靠性。
通过验证，可以确保注射液无菌性检查的结果符合预期，并为其他类似检查提供参考。
二、验证对象本验证方案适用于各类注射液无菌性检查方法，包括但不限于常规培养法、膜过滤法、试管法等。
三、验证步骤1. 制定验证计划：明确验证的目标、方法和时间安排等。
2. 准备样品和试剂：收集需要验证的样品和所需试剂，并确认其质量符合要求。
3. 合理布局实验室：确保实验室环境符合无菌实验要求，避免干扰因素的存在。
4. 实验操作：a) 样品准备：按照标准操作程序，制备样品，确保操作无菌。
b) 检测方法操作：按照所选的检测方法，依次进行实验，确保操作无误。
c) 平行实验：为了验证结果的可重复性，进行平行实验，确保结果一致。
5. 结果分析：根据实验结果进行数据统计和分析，得出结论。
6. 结果确认：将验证结果与预期目标进行比较，确认验证是否合格。
7. 编写验证报告：将整个验证过程、操作方法和结果总结编写成验证报告。
四、验证要求1. 严格遵守无菌技术操作规范。
2. 注射液样品的选择应具有代表性和典型性。
3. 实验室环境应符合无菌要求，避免外界干扰。
4. 检测方法的选择应根据实际情况和需求进行。
5. 实验操作过程要规范、准确，确保每个步骤符合方法要求。
6. 结果分析要科学、客观，数据统计要准确无误。
7. 结果确认应根据验证目标和标准进行判断。
8. 验证报告要详细、完整，包括验证目的、方法、结果和结论等。
五、验证结果分析根据实验结果的分析，可以判断注射液无菌性检查方法是否准确可靠。
如果验证结果符合要求并且与预期目标一致，则说明所选的检查方法具有可靠性和精准性。
如果验证结果与预期目标不一致，则需要进一步分析原因，寻找解决方案。
无菌试验方法验证方案
无菌试验方法验证方案一、方案目的二、方案方法1.文献调研：通过查阅相关文献，了解无菌试验方法的原理、步骤和要求，确保验证方案与国际标准和法规相符合。
2.试验设计：根据文献调研结果，设计验证试验，包括试验目标、样品选择、试验参数和试验步骤等。
3.实验操作：按照试验设计的要求，进行实验操作。
包括准备无菌工作区、取样品、进行稀释等。
4.正负对照：设立正负对照组，以比较验证试验的准确性和可靠性。
正对照组应为已知无菌品，而负对照组为已知含有微生物的样品。
5.数据分析：对试验结果进行统计和分析，验证试验方法的灵敏度、特异性和重复性等指标。
6.结果判读：根据数据分析的结果，对试验方法的有效性进行判读，判断试验方法是否合格，进而确定是否需要对试验方法进行进一步优化或修改。
三、方案步骤以下是无菌试验方法验证的具体步骤：1.确定试验方法：根据国际标准和法规，选择适用的试验方法。
例如，可以选择滴定法、过滤法、涂布法等。
2.设计验证试验：根据试验方法的原理和要求，设计合适的试验方案。
包括样品的选择、试验参数的确定，以及试验步骤的规定等。
3.准备验证样品：准备无菌产品及相关样品，包括正对照组和负对照组。
正对照组为已知无菌产品，负对照组为已知微生物污染的样品。
4.实验操作：按照试验方案的要求，进行实验操作。
包括取样品、进行稀释、进行培养等。
5.结果分析：对试验结果进行统计和分析。
比较正对照组和负对照组的结果，计算验证试验的灵敏度、特异度、准确性等指标。
6.结果判读：根据结果分析的结果，判读试验方法的有效性。
如果验证试验结果与预期结果一致，并且达到规定的标准，则认为试验方法合格。
7.结果报告：将验证试验的结果进行记录和总结，并撰写验证报告。
报告中应包括试验方法的详细描述、试验步骤、结果数据和分析等内容。
四、方案要点1.样品选择：选择适当的样品进行验证，确保验证结果能够准确地反映真实情况。
2.试验参数：准确地确定试验方法的参数，包括培养时间、培养条件、培养基成分等。
医疗器械无菌检验方法验证方案
**********有限公司无菌检验方法验证方案验证方案申请人:日期:年月日验证方案审核人:日期:年月日验证方案审批人:日期:年月日1.概述：无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2.验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。
即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。
3.验证范围：适用于医用纱布无菌检查法的验证。
4.验证人员及职责5.文件准备和培训检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
6.验证条件6.1.仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.2.供试品：随机抽取*******医药有司生产的3个批次医用无菌医用纱布6.3.培养基及试剂：6.3.1.试剂试液：0.9%氯化钠、氯化钠—蛋白胨缓冲液，配制记录见附件16.3.2.培养基硫乙醇酸盐流体培养基生产厂家：批号：改良马丁培养基生产厂家：批号：营养琼脂培养基生产厂家：批号：改良马丁琼脂培养基生产厂家：批号：蛋白胨生产厂家：批号：培养基配制记录见附件2。
6.4.验证用菌株：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】黑曲霉【CMCC（F）98003】标准菌株购自：浙江省食品药品检验研究中心各验证用菌种传代记录见附件3。
无菌检查方法学验证
2006年8月
无菌检查方法学验证
方法学验证资料试验结论
采用的方法：薄膜过滤法/直接接种法 关键实验点：如冲洗条件、中和、酶处
理等因素
2006年8月
无菌检查方法学验证
三、验证及资料中常见的问题
生孢梭菌 (Clostridium sporogenes) [CMCC(B) 64 941]
白色念珠菌 (Candida albicans) [CMCC(F) 98 001]
黑曲霉 (Asperglllus niger) [CMCC(F) 98 003]
2006年8月
无菌检查方法学验证
菌株选择的原则:代表性,普遍性,易存活、低或非致病 性,标准菌株(或该药品中常见的污染菌)。
国药典发[2005]98号
各药品检验所： 根据国食监注[2005]234号“关于颁布和执
行《中国药典》2005年版有关事宜的通知” 规定，《中国药典》7月1日起开始执行，各 药品检验所在执行“微生物限度检查法”和 “无菌检查法”过程中遇到了一些问题，为 保证《中国药典》2005年版的顺利实施，现 就有关问题说明如下：
2006年8月
无菌检查方法学验证
直接接种法
取符合直接接种法培养基用量要求的硫 乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于 100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管；取 符合直接接种法培养基用量要求的改良 马丁培养基4管，分别接入小于100cfu的 白色念珠茵、黑曲霉各2管。其中1管接 人规定量的供试品，另1管作为对照，按 规定的温度培养3～5天。
2006年8月
医疗器具无菌检查方法验证方案
医疗器具无菌检查方法验证方案1概述无菌检查法系用于检查药典要求的医疗器械产品是否无菌的一种方法，其应在1000级下的局部100级的单向流空气区域内进行的，其全过程应严格无菌操作，防止污染，以免供试品的检出误判定。
2验证目的通过验证，确认所采用的试验方法适用于本产品的无菌检查，以确认我公司的无菌检验的有效性，确保产品满足相关标准要求。
3 验证范围3.1 在每个月的同一生产批（灭菌批）中选取序列号排在最后的产品（为特制试验用，工艺与常规产品相同）（具体抽样量见表1）。
为了扩大样本量，每个月至少进行一次验证，连续不低于六个月，且根据产品特性，每月按规格大小分档选取样品。
表1 批出厂产品最少检验数量4 验证人员及职责管理者代表：XX，负责验证项目的确定及审批；质控部：XX，负责验证方案的起草及组织实施；质控部：XX，负责验证的操作执行。
质控部：XXX、XXX，负责检验的操作和复核。
5 文件准备和培训5.1 检查验证所需的各类文件及记录资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
5.2 组织参加验证人员需进行本方案的学习。
6 验证条件及验证时间安排6.1 验证条件6.1.1 质控部检测的公用系统良好；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.1.2 供试品至少6批6.1.3 培养基及试剂：①0.9%的氯化钠溶液②硫乙醇酸盐流体培养基③改良马丁培养基④改良马丁琼脂培养基⑤营养琼脂培养基⑥PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液⑦营养肉汤培养基6.1.4 验证用菌株：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]。
无菌验证方案
无菌验证方案在生物医药行业中，无菌验证是非常重要且必不可少的步骤。
无菌验证方案旨在确保生产过程中的无菌条件的有效性，并验证最终产品的无菌状态。
本文将探讨无菌验证方案的重要性、实施方法以及相关挑战。
首先，让我们来看一下为什么无菌验证方案如此重要。
在生物医药工艺中，许多产品都需要在无菌条件下制造，例如注射剂、眼药水等。
这是因为这些产品会直接与人体接触，一旦受到微生物污染，就可能对患者的健康造成严重威胁。
因此，为了确保产品的安全性和有效性，无菌验证是必不可少的。
那么，如何实施无菌验证方案呢？首先，需要准备一批样品，这些样品是根据生产工艺中最常见的菌种进行选择的。
接下来，将这些样品分别接种到培养基上，并在适当的环境下培养。
在培养的过程中，需要细心观察并记录培养皿的情况，包括是否有菌落的形成。
如果在培养过程中没有发现任何菌落，那么表明无菌验证方案在这个特定的工艺条件下是有效的。
然而，实施无菌验证方案并不总是一帆风顺的。
需要注意的是，不同的产品在不同的生产条件下，可能会有不同的挑战。
例如，有些产品需要长时间的生产周期，而有些则需要在高温或高湿的条件下进行生产，这些都可能会对无菌验证产生影响。
在面对这些挑战时，厂商需要根据实际情况进行调整和优化验证方案，以确保产品的无菌状态。
除此之外，无菌验证方案的实施还需要依靠合适的设备和技术支持。
在现代生产过程中，自动化设备已经成为常态，这些设备可以有效地控制生产环境的洁净度。
例如，具有高效过滤装置的洁净室，可以帮助阻止空气中的微生物进入产品，从而实现无菌条件下的生产。
此外，还可以采用气流方向的控制、材料表面的消毒等措施，来进一步降低微生物的污染风险。
在本文的最后，我们还需要强调无菌验证方案的必要性和持续性。
无菌验证并不只是生产过程中的一项任务，而是一项持续的过程，需要不断地进行监测和改进。
只有通过定期的验证和检查，才能确保产品始终处于无菌状态，同时降低患者感染的风险。
综上所述，无菌验证方案在生物医药行业中扮演着至关重要的角色。
无菌检查方法验证方案
产品无菌检查方法验证方案无菌检查方法验证1.概述无菌检查是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。
无菌检查工作量大、操作不规范、人员的知识匮乏、检查方法应用不当等都会导致试验失败，因此在对一个产品进行无菌检查之前应先对无菌检查方法进行验证。
2.验证目的2.1确认所用的无菌检查方法适用于“本公司所有无菌产品”的无菌检查。
2.2确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性以及检查方法的完整性。
2.3通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即无菌产品的生产全过程进行质量监控。
3.验证范围“本公司所有无菌产品”的无菌检查。
4.验证人员及职责验证委员会负责验证项目的确定；质控部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质控部参与验证的实施及监督。
验证小组成员：5.文件准备和培训5.1检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
5.2培训参加验证人员需进行本文件及下述内容的培训：微生物知识、无菌检查及微生物检验操作培训。
6.验证条件及验证时间安排6.1验证条件6.1.1检验公用系统验证及仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.1.2供试品3批①②③培养基及试剂：氯化钠：临用前配成0.9%浓度的溶液硫乙醇酸盐流体培养基批号：生产厂家：TSB 批号：生产厂家：6.1.3验证用菌株：微生物培养基质控品（来源：杭州微球科技有限公司）金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】菌种传代次数铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】6.1.4无菌检验仪器及相关设备压力蒸汽灭菌器型号：编号：生化培养箱型号：编号：霉菌培养箱型号：编号：超净工作台型号：编号：6.2验证时间验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动按下面时间安排完成。
无菌检查验证方案
目录1.验证目的及要求2.验证小组成员及职责3.验证所必须的文件4.验证方案具体实施5.验证总结1.验证目的及要求：1.1.目的：验证在进行无菌检查之前，需验证在实际检验条件下检验用物品及操作程序不得对可能存在的微生物的生长造成不良影响，旨在为进一步完善药品的质量标准，为该药品的无菌检查法的方法学进行验证而提供建议，本实验是关于对***注射液无菌检查方法的验证，结果应显示，***注射液的无菌检查方法符合验证要求。
1.2.要求：严格按照05版中国药典的无菌检验方法准备验证试验用的样品和材料并依照药典要求的操作步骤对样品进行过滤、淋洗和培养。
连续3批产品的验证试验结果均应表明，所有的试验菌株在样品实验组，蛋白胨对照组和阳性对照组中最初出现生长的时间均很相近，并且在14d内都明显见微生物生长，与阳性对照比较，如样品管的微生物生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下已经去除抑菌作用，如样品管的微生物生长微弱，缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，需消除。
可采取以下措施：1）增加冲洗量，但每片滤膜不能超过1000ml。
否则，需验证加大冲洗量对滤膜质量有无影响；2）更换滤膜品种，选择对样品吸附性较低的滤膜，并再以相应的方法重复以验证试验，确认采用无菌检查法的可行性。
2.验证小组成员及职责：公司各部门在验证工作中的职责详见验证主计划3.验证所必须的文件：文件存放地点均为公司档案室。
4.验证方案具体实施：4.1.验证产品名称****注射液4.2.验证数量：全封闭无菌检测系统：60支/批×3批4.3.冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液4.4.试验用菌株及培养基：4.5.菌液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养18～24小时；用0.9％无菌氯化钠溶液稀释至10-4～10-7制成30～100cfu/ml的菌液。
无菌试验方法验证方案
一次性使用无菌医疗器械无菌试验方法验证方案编制：日期：审核：日期：批准：日期：1.验证目的通过实验验证检测方法的适用性及培养基的适用性、无菌性、灵敏度。
2.样品信息3.实验设备及器材3.1使用仪器及器具：大试管、灭菌锅、洁净工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。
3.2使用材料及菌种：硫乙醇酸盐液体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌、枯草芽孢杆菌、生饱梭菌、白色念珠菌、大肠埃希菌。
4.验证组成员及职责姓名部门职责品质部组长：负责验证方案的审核、核准并负责验证报告的核准品质部负责验证方案、验证报告的起草并组织实施品质部负责验证过程中现场的监控及验证实施和试验过程的操作5.验证依据《中国药典》2015版和GB/14233.2-20056.验证步骤6.1检测设备计量有效性验证确认以下设备经过校量并在有效期内设备名称是否校验是否在有效期内备注灭菌锅洁净工作台生物安全柜电子天平电热恒温箱霉菌培养箱确认人/日期：审核/日期：6.2培养基适用性检查6.2.1无菌性检查：取每种每批培养基5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
检查结果见表1。
表16.2.2灵敏度检查6.2.2.1菌液制备方法描述接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或者胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生胞梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃-35℃培养18-24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或者沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20℃-25℃培养24-48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20℃-25℃培养5-7天，加入3-5ml含0.5%（ml/ml）聚山梨酯80无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2℃-8℃，可在24小时内使用。
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目录
1、验证对象、范围及时间
2、目的
3、实施验证的人员分工及职责
4、可接受标准
5、验证操作方法
6、验证结论
7、结果分析与评价
8、漏项与偏差表
9、再验证周期
10、最终批准
11、附录
1、验证对象及范围
本实验是关于产品无菌检查试验的验证。
参照《中国药典2005年版》二部附录无菌检查方法进行试验。
结果采用直接接种法对人工污染的六种菌株进行试验，产品对枯草芽孢杆菌、生孢梭菌有不同程度的抑菌作用。
采用薄膜过滤法用0.9%氯化钠100mL进行样品稀释，然后用500mL的pH7.0氯化钠缓冲液分几次冲洗，可消除其抑菌成分。
验证结果应显示对产品无菌试验方法。
2、目的
本方案的目的在于为分析评价无菌检验方法，以确认采用适宜的检验方法。
3、实施验证的人员分工及职责
表1无菌检验方法学验证小组职责分工
4、接受标准
已对生化检验人员进行专业培训。
5、验证操作方法
5、1概述
本产品为三类医疗器械无菌产品。
无菌检查法是对该产品质量控制的重要检查项目，《2005年版药典》要求建立产品的无菌检查法时要进行方法学的验证，来确认所采用的方法适用。
按照《中国药典2005年版》要求，以金葡球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌，黑曲霉菌作
为实验菌种，对甲磺酸罗哌卡因注射液无菌检查方法进行了验证实验。
5、2验证主要文件
5、3无菌服洗衣消毒灭菌程序
适量15分钟
纯化水浸泡加洗涤剂洗涤脱水
2分钟0.1新洁尔灭浸泡15分钟
纯化水漂洗消毒纯化水漂洗
5分钟3分钟
脱水晾干放入无菌袋灭菌
121℃，30min
放入传递窗缓冲区指定地点
5、4取样
将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在无菌服的门衣襟、袖上来回涂抹10次（往返为一次）采样面积为5cm×5cm，将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的试管中。
5、6检验方法
将已采集的样品在6h内送检，将每个采样管震打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度（取3个稀释度）分别取1ml放于灭菌平皿内，用普通琼脂培养基作倾注培养，每个样品平行接种两块平皿,置37℃恒温箱培养48h，计数平板上细菌菌落数，观察结果。
5、7检验项目
5、7、1外观检查目测法可接受标准：清洗后无菌服外观清洁，无可见的残留物或残留气味。
5、7、2微生物合格标准：细菌总数≤50CFU/标样（25cm2）
附：1.验证记录
2.检验报告单
6、验证结论
7、结果分析与评价
评定人：日期：
审核人：日期：
8、漏项与偏差值
9、再验证周期
9、1正常生产时，每年应进行一次再验证。
9、2 自动杀菌净手器大修或主要零部件更换时必须进行再验证。
10、最终批准
批准人：日期：
11、附录:
2010-8-5初稿。