无菌检查方法 验证方案
注射用重组人生长激素无菌检查法验证方案(修订版)
审批及颁发：会审：分发：一、目的以确认供试品在实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计，为重组人生长激素无菌检查法提供依据，特进行本产品的无菌检查方法学的验证。
二、范围注射用重组人生长激素无菌检查方法学验证方案三、职责验证组织及人员职责四、术语无五、内容1概述：注射用重组人生长激素是我公司的主打产品，其属于注射剂类里面的注射用无菌粉末。
根据《中国药典》2010年版的要求，本产品需对无菌检查方法学进行验证，以确认供试品在实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计，所采用的方法适合于本产品的无菌检查。
2验证项目3 验证时间安排3.1 2012年10月20日至 2012 年11月05日制订、审核及批准验证方案；3.2 2012年11月06日至 2012 年12月 10日实施验证3.3 2012年12月11日至 2012年12月 20日写出验证报告4 验证前提条件确认4.1 相关文件及人员培训确认4.1.1 相关文件确认结论: 检查人/日期：复核人/日期：4.1.2 验证人员确认结论: 检查人/日期：复核人/日期：4.2 验证用仪器仪表和物品有效性确认结论: 检查人/日期：复核人/日期：4.3培养基的适用性检查培养基的检查包括无菌检查和灵敏度检查，符合规定者方可用于供试品的无菌检查和无菌检查方法验证。
培养基的无菌检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行，但是，一旦所用培养基不符合无菌要求，供试品的无菌检查结果应视为无效。
培养基的灵敏度检查应对购进的每个批号的脱水培养基进行灵敏度检查，检查合格后方可使用，但当培养基的配制方法与灭菌程序发生变更时，应再次对培养基的灵敏度进行检查。
4.3.1 培养基的无菌检查该项目与同样品检验同时进行。
每批培养基随机取不少于5支，将灭菌后的培养基按规定的温度培养14天应无菌生长。
4.3.2 培养基灵敏度检查的操作及结果判定取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，每支接种菌量为1ml(含菌小于100cfu)，另一支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各2支，每支接种菌量为1ml(含菌小于100cfu)，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
无菌检验方法验证
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无菌检验阳性结果调查
实验室调查：一个合适的调查程序和记录是必要的
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无菌检验阳性结果调查
若产品不合格，必须通过该批生产过程回顾找出污染 原因和污染源 –人 – 物料 – 环境 – 设备 – 方法和工艺
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方法二：用实验确定是否具有抑菌性的方法 在规定量的供试液中加入实验用微生物10~100个，
如微生物生长良好，即说明供试品对该种微生物无抑 菌活性。如已用药典规定的各试验菌试验，结果均能 生长良好，说明供试品无抑菌性，可用常规方法检验 之。将这些试验记录在案——就是证明该供试品无抑 菌性的验证试验部分；如加入的微生物不生长或生长 缓慢，说明供试品有抑菌性，将这些试验记录在案— —就是证明该供试品有抑菌性的验证试验部分；如加 入的微生物中有某一种菌最不能生长或生长最缓慢， 这一种菌就是该样品的敏感菌。
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验证试验和对验证结果技术评价的判断为：如平行3 次的试验中，各管微生物均生长良好，说明供试品 已消除了抑菌活性。可以确定按该方法进行该品种 的无菌检查；如有供试品管的微生物生长微弱、缓 慢或不生长，说明供试品仍有抑菌活性，应考虑进 一步增加冲洗量或中和剂的用量以消除抑菌活性， 并重新验证，直至验证证明已充分消除或有效降低 抑菌活性。
条件 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行， 其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污 染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物 的检出。
无菌检验方法验证
无菌检验方法验证无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法！至于无菌检查具体有哪些验证方法呢？下面就随店铺一起来了解下吧！无菌检验方法验证无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。
前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。
如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。
再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。
通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。
前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。
供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。
(一)具体的验证方法如下：1. 菌种的选择无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003]代表霉菌。
2. 菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35 ℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23~28℃培养24~48h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
无菌检查方法验证报告
无菌检查方法验证报告目录1. 目的 (3)2. 适用范围 (3)3. 接受标准 (3)4. 抽样计划 (3)5. 设备、试剂和菌种信息 (3)6. 试验步骤 (4)7. 供试品检查 (6)8. 结论 (6)9. 再验证周期 (6)10. 附件清单 (6)1.目的支据中国药典2020版无菌检查法的要求，对产品的无菌检查法进行验证，以确定一种无菌检查的方法能有效的消除该产品对微生物的抑制作用，从而证实该方法的有效性和实用性。
2.适用范围适用于本司产品的无菌检查。
3.接受标准与阳性对照比较，含供试液各容器中的试验菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉）均生长良好，则可照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。
如含供试品的任一容器内的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，需进一步改进检验条件再进行方法验证试验。
4.抽样计划随机抽取灭菌后的样品24份。
具体信息见表一：表一样品信息确认人/日期：复核人/日期：5.设备、试剂和菌种信息5.1设备信息详见表二表二设备信息确认人/日期：复核人/日期：5.2试剂信息详见表三：表三试剂信息确认人/日期：复核人/日期：5.3菌种信息详见表四：表四菌种信息确认人/日期：复核人/日期：5.3.1菌液的制备用接种环取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的第三代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取生孢梭菌的第三代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取白色念珠菌的第四代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取黑曲霉的第三代培养物，向培养物中加入10mL0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，转移孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的孢子悬液。
以上操作均在微生物检验室阳性菌室的生物安全柜中进行。
无菌检验方法验证方案
浙江红雨医药用品有限公司无菌检验方法验证方案验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日1. 概述：无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2. 验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。
即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。
3. 验证范围：适用于创可贴无菌检查法的验证。
4.验证人员及职责5. 文件准备和培训检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
6. 验证条件6.1. 仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.2. 供试品：随机抽取浙江红雨医药有司生产的3个批次医用无菌创可贴6.3. 培养基及试剂：6.3.1. 试剂试液：0.9%氯化钠、氯化钠—蛋白胨缓冲液，配制记录见附件16.3.2. 培养基硫乙醇酸盐流体培养基生产厂家：杭州微生物试剂有限公司批号：20140221-00 改良马丁培养基生产厂家：杭州微生物试剂有限公司批号：20131118-00 营养琼脂培养基生产厂家：杭州微生物试剂有限公司批号：20150428-03 改良马丁琼脂培养基生产厂家：杭州微生物试剂有限公司批号：20140322-00 蛋白胨生产厂家：杭州微生物试剂有限公司批号：20140417-00 培养基配制记录见附件2。
无菌、微生物限度检查及方法验证
此法为实验室工作用菌种的最常用的保藏方法，仅能用于工作用菌种的短期保藏。
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琼脂斜面低温保藏法保藏法（厂家常用）
保藏芽胞液对
产芽胞的微生物宜制成芽胞菌悬液后再保藏， 无菌操作，取1ml孢子液接入茄形瓶或培养皿内，轻轻转动使菌液均匀分布于培养基表面。 将培养皿在适当的温度下培养。一般需要7天或更长时间 在层流台下，取3~5ml氯化钠磷酸盐缓冲液（pH7.0）加入培养皿内 用无菌玻璃L棒轻轻刮下菌苔，注意不要划破培养基。 用无菌注射器或无菌吸管吸取菌悬液，收集于试管中。 将收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加热15分钟，冷却。 做好标记，放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。 每次使用前用平皿法重新标定其浓度。
微生物实验室的质量管理
设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。 设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。 实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、显微镜，及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。 建立主要设施、设备、仪器的明细记录，内容包括名称、型号、生产厂家、购买日期。 质量保证档案：购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程（SOP）、建立使用登记册，维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌室前，至少开启机房运转1小时以上。
实验室使用管理
微生物实验室的质量管理
平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，通向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。
枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63501] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 生孢梭菌 [CMCC（B）64941] 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10104] 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102] 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC（B）50094] 白色念珠菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（B）9 003]
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查的方法学验证方案注射液的无菌性是医疗领域中最为重要的质量指标之一。
为了确保注射液的无菌性，需要进行方法学验证方案。
本文将介绍一种常见的注射液无菌检查方法学验证方案，确保验证结果准确可靠。
一、验证目的本验证方案旨在验证注射液无菌性检查的方法学准确性和可靠性。
通过验证，可以确保注射液无菌性检查的结果符合预期，并为其他类似检查提供参考。
二、验证对象本验证方案适用于各类注射液无菌性检查方法，包括但不限于常规培养法、膜过滤法、试管法等。
三、验证步骤1. 制定验证计划：明确验证的目标、方法和时间安排等。
2. 准备样品和试剂：收集需要验证的样品和所需试剂，并确认其质量符合要求。
3. 合理布局实验室：确保实验室环境符合无菌实验要求，避免干扰因素的存在。
4. 实验操作：a) 样品准备：按照标准操作程序，制备样品，确保操作无菌。
b) 检测方法操作：按照所选的检测方法，依次进行实验，确保操作无误。
c) 平行实验：为了验证结果的可重复性，进行平行实验，确保结果一致。
5. 结果分析：根据实验结果进行数据统计和分析，得出结论。
6. 结果确认：将验证结果与预期目标进行比较，确认验证是否合格。
7. 编写验证报告：将整个验证过程、操作方法和结果总结编写成验证报告。
四、验证要求1. 严格遵守无菌技术操作规范。
2. 注射液样品的选择应具有代表性和典型性。
3. 实验室环境应符合无菌要求，避免外界干扰。
4. 检测方法的选择应根据实际情况和需求进行。
5. 实验操作过程要规范、准确，确保每个步骤符合方法要求。
6. 结果分析要科学、客观，数据统计要准确无误。
7. 结果确认应根据验证目标和标准进行判断。
8. 验证报告要详细、完整，包括验证目的、方法、结果和结论等。
五、验证结果分析根据实验结果的分析，可以判断注射液无菌性检查方法是否准确可靠。
如果验证结果符合要求并且与预期目标一致，则说明所选的检查方法具有可靠性和精准性。
如果验证结果与预期目标不一致，则需要进一步分析原因，寻找解决方案。
无菌试验方法验证方案
一次性使用无菌医疗器械无菌试验方法验证方案编制：日期：审核：日期：批准：日期：1.验证目的通过实验验证检测方法的适用性及培养基的适用性、无菌性、灵敏度。
2.样品信息3.实验设备及器材3.1使用仪器及器具：大试管、灭菌锅、洁净工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。
3.2使用材料及菌种：硫乙醇酸盐液体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌、枯草芽孢杆菌、生饱梭菌、白色念珠菌、大肠埃希菌。
4.验证组成员及职责姓名部门职责品质部组长：负责验证方案的审核、核准并负责验证报告的核准品质部负责验证方案、验证报告的起草并组织实施品质部负责验证过程中现场的监控及验证实施和试验过程的操作5.验证依据《中国药典》2015版和GB/14233.2-20056.验证步骤6.1检测设备计量有效性验证确认以下设备经过校量并在有效期内设备名称是否校验是否在有效期内备注灭菌锅洁净工作台生物安全柜电子天平电热恒温箱霉菌培养箱确认人/日期：审核/日期：6.2培养基适用性检查6.2.1无菌性检查：取每种每批培养基5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
检查结果见表1。
表16.2.2灵敏度检查6.2.2.1菌液制备方法描述接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或者胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生胞梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃-35℃培养18-24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或者沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20℃-25℃培养24-48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20℃-25℃培养5-7天，加入3-5ml含0.5%（ml/ml）聚山梨酯80无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2℃-8℃，可在24小时内使用。
无菌检验验证方案
无菌检验验证方案(总6页)本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March类别：编号：部门：页码：无菌检验方法验证版次：□新订□替代:制定人: 年月日审批会签:批准人：年月日生效日期：年月日验证目的1.1确认所用的检查方法适用于一次性活检钳的无菌检查。
1.2确认检查结果的准确性、可靠性、重复性和可操作性及检查方法的完整性。
2.验证范围适用于我公司生产的一次性活检钳无菌检验。
3.检验依据《中国药典》2010版附录无菌检查法ISO11737-2:2009 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：确认灭菌过程的无菌试验GB/ 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法4.验证器材检验环境：无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部100级的单向流空气区域内进行操作。
设备：医用净化工作台、生物安全柜、无菌检查膜过滤器、电动吸引器、电热干燥箱、霉菌培养箱、数显生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、pH计、冰箱、恒温水浴锅、显微镜等。
培养基及稀释液：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、氯化钠-蛋白胨缓冲液、%蛋白胨水溶液、营养琼脂。
其他实验材料：微孔滤膜（孔径≤，直径约50mm）、无菌过滤杯、无菌剪刀、无菌镊子、无菌钳子、无菌手套、吸管（1ml和10ml）、酒精灯、三角烧瓶、接种环、培养皿。
5.验证方案原理：活检钳的形状为不溶物，为微生物转移更彻底，特选用无菌检查法中的薄膜过滤法。
设备器材：验证中所用器材、设备已通过国家计量单位鉴定合格并有鉴定证书。
培养基：验证中所用培养基以通过培养基灵敏度实验检测合格。
操作步骤：供试品的取样按照GB/T 相关规定进行逐批取样。
将所需物品，供试品表面消毒，通过传递窗，紫外线照射半小时.无菌室紫外线消毒半小时。
操作人员用洗手液、自来水清洗双手，关闭紫外灯，换拖鞋，脱外衣放入衣柜，穿洁净白大衣，进入缓冲间，再用洗手液、纯化水清洗双手，用75%乙醇对手进行消毒，穿戴无菌衣、帽、口罩、手套等。
4无菌检验方法验证
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无菌检验方法验证
1.ONE
开展验证的思路和程序
首先了解供试品是否具有抑菌性，抑什么菌
2.TWO
考虑和选择出适当的方法已消除或减低供试品的抑菌性
3.three 4.four
用实验证明你所用的方法已消除抑菌性——能使人工加 入的各种菌生长良好。
将所作实验记录在案——即为确认该供试品在该检验量
条件 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行， 其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污 染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物 的检出。
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无菌检验方法验证
方法验证试验 当建立产品的无菌检查方法时，应进行
六、验证结论。
七、【检查】项下【无菌】或【微生物限度】具体方法确定。
八、实验员签名、验证报告批准人签名。
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无菌检验阳性结果调查
无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法要求
回顾无菌测试过程，发现有可能引起微生物污染的 因素
阴性对照有菌生长
稀释：—— 验证降低供试品相对抑菌浓度的有效稀释 倍数。
离心：—— 验证所用转速、时间和微生物的分YO布UR情SIT况E H。ERE
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3、确定供试品是否有抑菌性、抑什么菌 方法一： 可通过查阅临床药物实验手册、文献资料 （特别是杂志“Drug”，每一种新药上市，都有专 门的综述）、申报资料中的药效学资料，关注其对不 同细菌的MIC情况、参考已经验证过的品种、抗菌 药物可根据抗菌谱确定其敏感菌、中成药如果抗菌谱 不清楚，至少需选择一株细菌和一株真菌来试验等方 法。也可直接通过验证实验确定之。
无菌检验方法适用性试验方案
无菌检验方法适用性试验方案无菌检验是一种用于确认样品是否含有微生物的技术方法，广泛应用于药品、医疗器械、食品等行业中。
为了确保无菌检验方法的可靠性和准确性，需要进行适用性试验。
本文将详细介绍无菌检验方法的适用性试验方案。
一、背景介绍二、试验目的1.验证培养基的适用性：验证所选培养基是否能够有效地促进微生物的生长，并区分不同的微生物种类。
2.验证培养条件的适用性：验证所选培养条件（如温度、湿度、压力等）对于无菌检验结果的影响。
3.验证无菌器材的适用性：验证所选无菌器材是否能够有效地防止微生物的污染。
三、试验内容1.培养基适用性试验（1）准备不同类型的培养基，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、选择性琼脂等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物（如大肠杆菌、枯草杆菌、白色念珠菌等）。
（3）分别在不同培养基上培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养基上的菌落计数结果，评估培养基的适用性。
2.培养条件适用性试验（1）选取不同的温度、湿度、压力等培养条件。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）在不同培养条件下培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养条件下的菌落计数结果，评估培养条件的适用性。
3.无菌器材适用性试验（1）准备不同类型的无菌器材，如培养皿、试管、注射器等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）使用无菌器材进行培养，并进行菌落计数。
（4）比较不同无菌器材上的菌落计数结果，评估无菌器材的适用性。
四、数据处理和结果分析根据试验结果进行数据统计和分析，并评估不同培养基、培养条件和无菌器材的适用性。
可以使用统计方法，如t检验、方差分析等，对数据进行处理和分析，以验证试验结果的可靠性。
五、质量控制1.试验过程中要严格遵循无菌操作规程，防止试验过程中的交叉污染。
2.试验中使用的培养基、培养条件和无菌器材应符合相关标准和规范，确保试验结果的可靠性。
六、结论根据试验结果，对所选的无菌检验方法进行适用性评估，判断其是否符合要求。
医疗器械无菌检验方法验证方案
**********有限公司无菌检验方法验证方案验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日1. 概述：无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2. 验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。
即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。
3. 验证范围：适用于医用纱布无菌检查法的验证。
4.验证人员及职责5. 文件准备和培训检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
6. 验证条件6.1. 仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.2. 供试品：随机抽取*******医药有司生产的3个批次医用无菌医用纱布6.3. 培养基及试剂：6.3.1. 试剂试液：0.9%氯化钠、氯化钠—蛋白胨缓冲液，配制记录见附件16.3.2. 培养基硫乙醇酸盐流体培养基生产厂家：批号：改良马丁培养基生产厂家：批号：营养琼脂培养基生产厂家：批号：改良马丁琼脂培养基生产厂家：批号：蛋白胨生产厂家：批号：培养基配制记录见附件2。
6.4. 验证用菌株：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】黑曲霉【CMCC（F）98003】标准菌株购自：浙江省食品药品检验研究中心各验证用菌种传代记录见附件3。
医疗器具无菌检查方法验证方案
医疗器具无菌检查方法验证方案1概述无菌检查法系用于检查药典要求的医疗器械产品是否无菌的一种方法，其应在1000级下的局部100级的单向流空气区域内进行的，其全过程应严格无菌操作，防止污染，以免供试品的检出误判定。
2验证目的通过验证，确认所采用的试验方法适用于本产品的无菌检查，以确认我公司的无菌检验的有效性，确保产品满足相关标准要求。
3 验证范围3.1 在每个月的同一生产批（灭菌批）中选取序列号排在最后的产品（为特制试验用，工艺与常规产品相同）（具体抽样量见表1）。
为了扩大样本量，每个月至少进行一次验证，连续不低于六个月，且根据产品特性，每月按规格大小分档选取样品。
表1 批出厂产品最少检验数量4 验证人员及职责管理者代表：XX，负责验证项目的确定及审批；质控部：XX，负责验证方案的起草及组织实施；质控部：XX，负责验证的操作执行。
质控部：XXX、XXX，负责检验的操作和复核。
5 文件准备和培训5.1 检查验证所需的各类文件及记录资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
5.2 组织参加验证人员需进行本方案的学习。
6 验证条件及验证时间安排6.1 验证条件6.1.1 质控部检测的公用系统良好；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.1.2 供试品至少6批6.1.3 培养基及试剂：①0.9%的氯化钠溶液②硫乙醇酸盐流体培养基③改良马丁培养基④改良马丁琼脂培养基⑤营养琼脂培养基⑥PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液⑦营养肉汤培养基6.1.4 验证用菌株：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]。
分析方法验证方案
品管部 验证人员 核对人员 姓 名 日 期
X X X X X X XX-XX-XX XXX XX-XX-XX
分析方法验证方案
（无菌检查法）
• 2. 目的 • 确保本产品的无菌检查结果的正确性（不是假 阴性）。 • 3. 验证准备 • 3.1 实验人员 • 能正确执行无菌操作，技术符合要求。 • 3.2 仪表量器 • 经过校验合格，且在有效期内。 • 3.3 仪器设备 • 符合3Q（IQ、OQ、PQ）要求。
分析方法验证方案
（无菌检查法）
分析方法验证方案
（无菌检查法）
• 华裕（无锡）制药有限公司 王光清
•1. 引言 •1.1 概述
•本公司产品“LFX注射液”的有效成分为抗菌剂，因此 在以薄膜过滤法进行“无菌检查”时，必须以足量的冲 洗液对薄膜进行冲洗，以除去滤膜上残存的抗菌剂，从 而避免“假阴性”的检查结果。本验证方案就是针对 “LFX注射液”检验项目中“无菌检查”进行方法验证。
分析方法验证方案
（无菌检查法）
• • • • • 3.6 试验样品 LFX注射液（规格：100ml：0.2g）， 批号：(1) 06062406 (2) xxxxxx (3) xxxxxx 。 3.7 实验环境 本试验在10,000级下的局部100级的单向流空气 区域进行。该洁净区域定期按《医药工业洁净 室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试办 法》的现行国家标准进行洁净度验证。
分析方法验证方案
（无菌检查法）
• • • • • • • • • 3.4.4.1 试验菌液的制备：见附表1。 3.4.4.2 培养基无菌性检查：见附表2。 3.4.4.3 培养基灵敏度检查：见附表3。 3.5 冲洗液 3.5.1 品名：pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 (1) 蛋白胨 批号： 060118 生产厂： (2) 氯化钠 批号：20021225 生产厂： (3) 磷酸二氢钾 批号：20060317 生产厂： (4) 磷酸氢二钠 批号： 060601 生产厂：
无菌检查方法验证方案
无菌检查方法验证方案无菌检查是用来验证产品的无菌性的方法。
无菌性是指产品中不存在可繁殖的微生物。
无菌检查的目的是确保产品的安全性和质量，避免由于微生物污染而引起的感染或降低产品的有效性。
1.检测方法的选择：根据产品的特性和要求，选择合适的无菌检测方法。
常用的无菌检测方法包括微生物限度试验、膜过滤法、直接刨片法和填充法等。
2.样品准备：根据产品的特性和要求，合理选择样品的采集方法和数量。
样品的采集应在无菌条件下进行，以避免外部微生物的污染。
样品的存储和运输也需要符合无菌条件。
3.控制样品：准备一批已知无菌的样品作为正对照，以验证无菌检测方法的准确性和灵敏度。
正对照的准备应在无菌条件下进行，并进行相关记录。
4.负对照：准备一批已知含有可繁殖的微生物的样品作为负对照，以验证无菌检测方法的特异性和无菌性。
5.实验操作：根据选定的无菌检测方法，进行实验操作。
实验操作应在无菌条件下进行，包括无菌操作台、无菌培养基和无菌器具的使用。
所有操作人员都应接受相关的培训和认证。
6.试验结果的解释和判定：根据实验结果，判断样品是否无菌，并根据相应的标准和规范进行判定。
试验结果的解释和判定应由经过培训和认证的人员进行。
7.系统的记录和存档：对于每一次无菌检测，应记录实验过程、实验结果和相关的数据。
实验记录应具备可追溯性，便于审核和查找。
所有记录和相关数据应进行适当的存档，以备将来参考。
8.系统的验证：根据无菌检测方法验证方案的内容和要求，对整个无菌检测系统进行验证，包括设备、物料和人员。
验证应由专业的第三方机构进行，确保验证结果的客观性和可靠性。
验证结果和报告应进行适当的存档，以供将来参考。
以上就是一个完整的无菌检查方法验证方案。
通过合理的无菌检查方法验证方案的制定和实施，可以确保无菌检测的准确性和可靠性，保证产品的质量和安全性。
无菌检查方法验证方案
产品无菌检查方法验证方案无菌检查方法验证1.概述无菌检查是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。
无菌检查工作量大、操作不规范、人员的知识匮乏、检查方法应用不当等都会导致试验失败，因此在对一个产品进行无菌检查之前应先对无菌检查方法进行验证。
2.验证目的2.1确认所用的无菌检查方法适用于“本公司所有无菌产品”的无菌检查。
2.2确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性以及检查方法的完整性。
2.3通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即无菌产品的生产全过程进行质量监控。
3.验证范围“本公司所有无菌产品”的无菌检查。
4.验证人员及职责验证委员会负责验证项目的确定；质控部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质控部参与验证的实施及监督。
验证小组成员：5.文件准备和培训5.1检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
5.2培训参加验证人员需进行本文件及下述内容的培训：微生物知识、无菌检查及微生物检验操作培训。
6.验证条件及验证时间安排6.1验证条件6.1.1检验公用系统验证及仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
6.1.2供试品3批①②③培养基及试剂：氯化钠：临用前配成0.9%浓度的溶液硫乙醇酸盐流体培养基批号：生产厂家：TSB 批号：生产厂家：6.1.3验证用菌株：微生物培养基质控品（来源：杭州微球科技有限公司）金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】菌种传代次数铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】6.1.4无菌检验仪器及相关设备压力蒸汽灭菌器型号：编号：生化培养箱型号：编号：霉菌培养箱型号：编号：超净工作台型号：编号：6.2验证时间验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动按下面时间安排完成。
无菌验证方案
1.对无菌操作人员进行定期培训，提高其操作技能和意识。
2.加强生产过程监控，确保无菌操作持续合规。
3.对验证过程中发现的问题，及时整改并跟踪验证效果。
九、方案审批
本方案经相关部门审核、批准后实施。十、附件1. Nhomakorabea菌验证计划
2.无菌试验操作规程
3.模拟试验操作规程
（注：本方案仅作为无菌验证的指导性文件，具体实施过程中需结合实际情况进行调整。）
十、附件
1.无菌验证计划
2.无菌试验操作规程
3.模拟试验操作规程
（注：本方案仅作为无菌验证的指导性文件，具体实施过程中需结合实际情况进行调整。）
第2篇
无菌验证方案
一、前言
为确保产品质量，满足无菌产品生产要求，依据《药品生产质量管理规范》（GMP）及相关法规，特制定本无菌验证方案。本方案旨在对无菌生产过程进行严格监控，确保产品在整个生产过程中达到无菌标准。
无菌验证方案
第1篇
无菌验证方案
一、项目背景
为确保产品在生产过程中达到无菌要求，保障产品质量和消费者安全，根据《药品生产质量管理规范》（GMP）及相关法律法规，特制定本无菌验证方案。
二、目标
1.确保生产过程符合无菌要求。
2.确保验证过程合规、有效。
3.提高产品质量，降低生产风险。
三、验证范围
1.验证产品：本次验证针对所有无菌产品。
2.现场检查：对无菌生产现场进行实地检查，评估无菌操作环节的风险。
3.无菌试验：对关键工艺环节进行无菌试验，以验证产品无菌性。
4.模拟试验：模拟无菌操作过程，验证操作规程的可行性。
五、验证流程
1.准备阶段：
a.成立无菌验证小组，明确各成员职责。
无菌检查的方法学验证
无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)起草人(Composer)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：批准人(Approved by)：日期(Date)：目录1. 验证目的2. 验证人员3. 验证依据及参考文件4. 仪器与设备5. 验证过程5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备5.3 方法验证试验6. 验证总结1. 验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。
即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。
2. 验证人员：验证小组组长：验证小组副组长：验证小组成员：3. 验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4. 仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5. 验证过程：5.1 培养基及稀释液5.1.1 培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1 培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
结果记录：结论：5.1.2.2 培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。
取每支装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天，逐日观察结果。
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无菌检查方法（薄膜过滤法）
验证方案
文件编号：QY·TS·05·007-00
无菌检查方法（薄膜过滤法）验证方案QY·TS·05·007-00 第11 页/共11页批准日期：年月日实施日期年月日
无菌检查方法（薄膜过滤法）验证方案QY·TS·05·007-00 第11 页/共11页
无菌检查方法（薄膜过滤法）验证方案
目录
1．验证目的
2. 验证频次
3. 验证操作内容与要求
3.1. 验证操作试验
3.2 试验菌要求
3.3.验证方法步骤
3.4. 验证准备
3.5验证试验操作
4．验证结果评价分析
5．附件
1．验证目的
确认所采用的方法适合于供试品的无菌检查。
即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
2. 验证频次
2.1. 建立药品的无菌检查法时
2.2. 修订检验方法时
2.3. 供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时
3. 验证操作内容与要求：
3.1. 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定要求进行验证操作试验：
3.1.1. 对每一试验菌应逐一进行验证。
3.1.2. 硫乙醇酸盐流体培养基—金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生
孢梭菌。
3.1.3. 改良马丁琼脂培养基—白色念珠菌、黑曲霉。
3.2 试验菌要求：
3.2.1验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保
证试验菌株的生物学特性。
3.2.2验证试验可在供试品的无菌检查之前或与供试品的无菌检查同时进行。
当同时进
行时，若验证试验失败，则供试品的无菌检查结果是不成立的
3.3.验证方法步骤：
3.3.1验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照无菌检查方法（薄膜过滤法）进行平行试验，通过计算回收率来判断无菌检查方法（薄膜过滤法）是否对产品有影响。
3.3.2试验结果可接受标准用无菌标准评价方法“0.9％氯化钠注射液(三层共挤膜袋)的无菌检查”对检品中无菌检查试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。
3.4. 验证准备：准备验证所需的供试品、培养基、试药试剂、仪器设备和菌种。
3.4.1. 培养基
硫乙醇酸盐流体培养基；改良马丁琼脂培养基；营养琼脂培养基；血琼脂培养基备注：
3.4.1.1 培养基应注明来源；如采用市售干粉培养基，应按说明配制。
3.4.1.2 配制后的培养基应按照中国药典附录“无菌检查法”中“培养基的适用性检查”项
下检验无菌性和灵敏度。
3.4.2 仪器设备
3.4.2.1. 净化工作台
3.4.2.2. 生物洁净安全柜
3.4.2.3. 集菌仪
3.4.2.4. 生化培养箱
3.4.2.5. 霉菌培养箱
3.4.2.6. 高温试验箱
3.4.2.7. 台式灭菌器
3.4.2.8. 医药品冷藏柜
3.4.2.9. 微波炉
3.4.2.10.器具无菌培养皿：（直径90mm）无菌移液管（5ml）等
备注：以上仪器设备需要确认与验证的均应已按要求验证。
3.4.3. 菌种
3.4.3.1. 金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕
3.4.3.2. 枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕
3.4.3.3. 白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕
3.4.3.4. 黑曲霉〔CMCC（F）98003〕
3.4.3.5. 铜绿假单胞菌〔CMCC（B）10104〕
3.4.3.6. 生孢梭菌〔CMCC（B）64941〕
3.4.4操作环境：
3.4.4.1操作间应该安装空气除菌过滤层流装置。
3.4.4.2环境洁净度不应低于C级，净化工作台洁净度为A级。
3.4.4.3操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于10pa。
3.4.5试验样品：0.9％氯化钠注射液(三层共挤膜袋)规格：250ml
①批号：生产日期：
②批号：生产日期：
③批号：生产日期：
3.4.6稀释液和试剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液无菌十四烷酸异丙酯3.4.7验证用微生物名称及其编号
3.4.7.1实验菌株的来源：
3.4.7.2编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成
3.4.8培养基
3.5验证试验操作：
3.5.1试验菌的制备和稀释：
3.5.1.1将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃
下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至良马丁流体培养基中，23～28℃下培养24～48小时。
3.5.1.2将黑曲霉接种至改良马丁琼脂培养基中，在23～28℃下培养5～7天小时。
3.5.1.3将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50～100cfu的
菌悬液。
3.5.2用不同类别的微生物考察供试液及检验程序的抑菌性，将试验分为4组
3.5.2.1样品试验组：
A准确取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。
B然后加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。
C 用移液管准确吸取1.0ml供试液至平皿中；并在每个平皿中接种50～100cfu试验
菌，立即倾注营养琼脂培养基，每个试验菌平行接种2个平皿，按照平皿法测定其菌数。
3.5.2.2菌液组：按中国药典附录“无菌检查法”中“灵敏度检查”项下的菌液制备
A 在平皿中注入1ml的菌液立即倾注营养琼脂培养基，以测定所加的菌数。
B供试品对照组取规定量的供试液，按菌落计数方法测定供试品的本底菌数。
C稀释剂对照组取相应稀释液1ml加入试验菌，使最终菌浓度为每ml供试液含50～100cfu试验菌，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌落数。
D 对于同一份培养物，采用相同的测定方法，不同的试验人员的测定结果可能有很大
的误差。
所以在操作过程中，应特别注意能造成误差的各个环节。
E 当采用固体培养基上的培养物制备菌悬液时，应尽量使菌苔成单个菌体分散于稀释
液中。
F为保证每次菌数测定能在预计的范围内，在对菌液做10倍系列稀释时，要求稀释每个浓度的菌液均应换灭菌吸管。
G液体培养物直接稀释法较比浊法造成误差小，基本保证每次菌数能控制在要求的范围内。
I 最终制得的菌悬液应为小于100CFU/ml。
J金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌采用营养琼脂培养基；生孢梭菌采用血琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉采用改良马丁琼脂培养基。
3.5.3培养将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～50℃下培养48小时将白色念珠菌、
黑曲霉在23～28℃下培养72小时，点计菌落数。
并将结果记录于附件1。
3.5.4试验结果
3.5.
4.1稀释剂对照组菌的回收率
表中：回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数×100%。
3.5.
4.2试验组的菌的回收率
表中：回收率=（试验组的平均菌落数－供试品对照组的平均菌落数的值）÷菌液组的平均菌落数×100%。
4．验证结果评价分析
4.1对验证结果的评审应包括：
（1）验证试验是否有遗漏？
（2）验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？
（3）验证记录是否完整？
（4）验证试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差的说明合理？是否需进一步补充试验？
4.5. 结果判断：?
4.5.1..供试品按无菌检查法进行检查，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，结果
判断验证无效，并重新进行方法验证。
4.5.2如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，可采用增加冲洗量，
增加培养基用量，使用中和剂或灭菌剂；更换滤膜品种等方法，并重新进行方法验证。
5．附件
附件1
产品试验组的微生物生长检查记录：
供试品对照组的微生物生长检查记录
稀释剂照组的微生物生长检查记录
菌液组
测试人/测试日期：复核人/复核日期：
附件2
附件3
附件4。