《中国药典》版微生物基本知识精品PPT课件
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药典培训课件微生物34页PPT
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
药典培训课件微生物
41、俯仰终宇宙，不乐复何如。 42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。 43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。 44、欲言无予和，挥杯劝孤影。 45、盛年不重来，一日难再晨。及时 当勉励 ，岁月 不待人 。
பைடு நூலகம் 41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
药典培训课件微生物
41、俯仰终宇宙，不乐复何如。 42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。 43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。 44、欲言无予和，挥杯劝孤影。 45、盛年不重来，一日难再晨。及时 当勉励 ，岁月 不待人 。
பைடு நூலகம் 41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
药品微生物检验基础知识 ppt课件
险较小 · 保存期比较短， · 反复传代有引 · 比较容易掌握 起变异的可能；
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
ppt课件
17
2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
ppt课件 3
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
ppt课件 4
一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
ppt课件 25
二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
ppt课件 26
二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
ppt课件
45
四、微生物限度检查法
1、定义
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
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17
2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
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一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
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一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
ppt课件 25
二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
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二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
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四、微生物限度检查法
1、定义
药典培训课件微生物
药典对微生物检验的方法
01
02
03
04
培养法
通过培养微生物，观察其生长 情况，进行计数和鉴定。
显微镜检查法
通过显微镜观察微生物形态， 进行鉴定和计数。
染色法
通过染色技术，使微生物着色 ，以便更清楚地观察其形态和
结构。
其他方法
如化学方法、免疫学方法等， 可用于特定类型的微生物检测
。
药典对微生物检验的注意事项
03
微生物在药品生产中的 应用
药品生产中空气中存在的微生物可 能通过空气流通进入药 品生产环境，导致污染。
生产过程中使用的水如 果受到微生物污染，也 可能对药品造成影响。
人员污染
生产人员携带的微生物 可能通过手部或其他接 触方式传播到药品和生
产环境中。
物料污染
来自外部的物料可能携 带微生物，如包装材料、
环境监测
定期对生产环境进行微生物检测，确保洁净 度达标。
工艺用水检测
对用于药品生产的工艺用水进行微生物检测， 确保水质合格。
最终产品检测
在药品生产的最后阶段，对产品进行微生物 检测，确保无菌。
过程监控
通过在线监测系统实时监控生产过程中的微 生物情况，及时发现并处理问题。
04
微生物对药品质量的影 响
微生物污染可能引发药品的剂 量不准确，影响治疗效果和患 者的健康状况。
05
微生物检验技术及其应 用
微生物检验的基本技术
微生物形态观察
通过显微镜观察微生物的形态、大小、 染色反应等特征，以初步鉴别微生物 种类。
培养基制备与灭菌
根据微生物的生长需求，制备适合的 培养基，并进行灭菌处理，以保证微 生物纯种培养。
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中国药典微生物限度PPT课件
微生物限度检查法
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
1
整体概述
概况一
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概况二
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5
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
9
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
6
1.1 Байду номын сангаас则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
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整体概述
概况一
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概况二
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1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
9
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
6
1.1 Байду номын сангаас则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
《微生物基本知识》ppt课件
自然界中各类环境适应性分析
微生物在土壤中的分布与功能
包括氮循环、有机物分解等。
水体中的微生物生态
如淡水、海水中的微生物种类及其作用。
极端环境中的微生物
探讨高温、低温、高盐、低氧等极端条件下微生物的生存机制。
人体内外环境中共生关系探讨
01
人体正常菌群分布及其生理功能
如肠道菌群对消化、免疫的贡献。
02
在不同环境下，微生物的生理特性也会发生变化。例如，在缺氧条件下，一些微生物会进行厌氧呼吸，产 生乳酸或酒精等代谢产物；在高温条件下，一些微生物会产生耐热性酶和蛋白质，以适应高温环境。
04
微生物遗传与变异
遗传物质基础：DNA和RNA
1 2
DNA作为遗传物质 大多数微生物的遗传物质是双链DNA，它们携带 着微生物生命活动所必需的全部遗传信息。
转录过程
在转录过程中，DNA的遗传信息 被转录成mRNA，为后续的蛋白质 合成提供模板。
翻译过程
在翻译过程中，mRNA上的遗传信 息被翻译成蛋白质，这些蛋白质是 微生物生命活动的重要组成部分。
基因突变类型及影响因素
基因突变类型
基因突变包括点突变、插入突变、 缺失突变和倒位突变等，这些突 变都可能导致微生物的遗传特性
包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。与细菌相比，真菌的 细胞结构更为复杂，具有真正的细胞核。
真菌的繁殖方式
通过孢子进行繁殖，如芽殖、裂殖等。
病毒形态与结构
01
02
03
病毒的基本形态
球形、杆形、蝌蚪形等。 病毒是一种非细胞生物， 必须在活细胞内寄生并以 复制方式增殖。
病毒的结构
包括核酸（DNA或RNA） 和蛋白质外壳。部分病毒 还有包膜结构。
中国药典微生物检验培训课件
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2015版微生物检验
• 实现了三部药典标准的统一 • 形成了一个比较完备的药品微生物检验标
准体系，具有以下两个显著特征 • ①全面与国际标准接轨； • ②推动了药品微生物控制由终产品检验向
过程控制转变。
真核微生物形态
• 真核微生物：是细胞核具有核膜、核仁， 能进行有丝分裂，细胞质中存在线粒体或 同时存在叶绿体等多种细胞器的一类微生 物。
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酵母菌特性
①个体一般以单细胞状态存在 ②多数为出芽繁殖，也有裂殖； ③能发酵糖类产能； ④细胞壁常含甘露聚糖； ⑤喜在含糖量较高、偏酸性环境生长。
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2015版微生物检验
• 微生物基础知识 • 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数
法(通则1105)解析 • 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查
法(通则1106)解析 • 非无菌药品微生物限度标准(通则1107)解析 • 培养基的质量管理 • 工艺用水的检查 • 无菌检查法 (通则1101)解析
微生物的分类
• 原核微生物：细菌、放线菌、立克次氏体 支原体、衣原体、蓝细菌和古细菌
• 真核微生物：酵母菌、霉菌、粘菌、原生 动物和藻类
• 非细胞型生物：病毒、噬菌体、类病毒、 拟病毒和朊病毒
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微生物特点
检测环境变化
• 微生物计数试验环境要求
2015版微生物检验
• 实现了三部药典标准的统一 • 形成了一个比较完备的药品微生物检验标
准体系，具有以下两个显著特征 • ①全面与国际标准接轨； • ②推动了药品微生物控制由终产品检验向
过程控制转变。
真核微生物形态
• 真核微生物：是细胞核具有核膜、核仁， 能进行有丝分裂，细胞质中存在线粒体或 同时存在叶绿体等多种细胞器的一类微生 物。
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酵母菌特性
①个体一般以单细胞状态存在 ②多数为出芽繁殖，也有裂殖； ③能发酵糖类产能； ④细胞壁常含甘露聚糖； ⑤喜在含糖量较高、偏酸性环境生长。
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2015版微生物检验
• 微生物基础知识 • 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数
法(通则1105)解析 • 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查
法(通则1106)解析 • 非无菌药品微生物限度标准(通则1107)解析 • 培养基的质量管理 • 工艺用水的检查 • 无菌检查法 (通则1101)解析
微生物的分类
• 原核微生物：细菌、放线菌、立克次氏体 支原体、衣原体、蓝细菌和古细菌
• 真核微生物：酵母菌、霉菌、粘菌、原生 动物和藻类
• 非细胞型生物：病毒、噬菌体、类病毒、 拟病毒和朊病毒
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微生物特点
检测环境变化
• 微生物计数试验环境要求
药典培训课件微生物
谢谢！
非无菌产品微生物限度检查： 1106控制菌检查法： 培养基适用性 培养基变化：如营养琼脂变为胰酪大豆胨，改良马丁变为沙氏等。 控制菌检查：耐胆盐革兰阴性菌替代大肠菌群 大肠埃希氏菌检查方法变化，TSB增菌，不用 MUG了
• 非无菌产品微生物限度检查： • 1107非无菌药品微生物限度标准
一、限度标准：更为清楚明了（共8项4个表） 1、制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅 料 应符合无菌检查法 2、用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂 应符合无菌检查法 3、非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原药粉的中药制 剂的微生物限度标准 注意需氧菌总数概念，10版为“菌落总数”
• 2、环境监测：
– 明确了监测方法和参考限度指标，要求制定完善的洁净室和隔离系统的 验证和环境监测标准操作规程，环境监测项目和监测频率及对超标结果 的处理应有书面程序。 – 消毒剂的使用 应有消毒剂使用操作规程；定期监测消毒效果
• 3、设备
– 微生物实验室设备除遵循实验室设备管理的要求外，还有特殊要求：特 种设备，高压锅和生物安全柜的人员资质要求；专用设备防止交叉污染 的使用要求，如培养箱、高压灭菌器； – 定期检定和校准
– 环境：
• 1、实验室的布局和运行
– 生物安全：活菌操作区应该配备生物安全柜，以避免危害性的生物因子对试验人 员和实验环境造成的危害；病原菌微生物的分离鉴定应在二级生物安全实验室进 行。 – 布局：明确规定无菌检查应在B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离器系统中 进行，微生物限度检查应在不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行。AB 区域的空气供给应通过终端高效空气过滤器 – 人员进场：对微生物实验室使用权限要求限于经授权的工作人员，实验室人员应 了解洁净区进出程序、更衣流程，该区域的限制要求等
《中国药典》微生物限度检查修订内容(PPT 54页)
微生物限度检查：粉雾剂、口服溶液剂、口服混悬剂 、 口服乳剂、搽剂、洗剂、局部用片剂、酊剂、栓剂、 糖浆剂、膜剂、贴剂 、灌肠剂 、糊剂 、涂剂、涂膜 剂。
原则性要求：丸剂、口服片剂、胶囊剂、颗粒剂。 12
2、2005版中药制剂通则项下的微生物限度要求 无菌检查：注射剂。
无菌检查及微生物限度检查：散剂、软膏剂、眼用制 剂、鼻用制剂、气雾剂、喷雾剂。
7
2.口服给药制剂
●不含药材原粉的制剂 ●含药材原粉的制剂 ●含豆豉、神曲等发酵成分的制剂
8
3. 局部给药制剂
⑴ 用于手术、烧伤及严重损伤的局部给药制剂（无菌） ⑵用于表皮或黏膜不完整的含药材原粉的局部给药制剂 ⑶用于表皮或黏膜完整的含药材原粉的局部给药制剂 ⑷眼部给药制剂（由100，不得检出→10，不得检出） ⑸耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂 ⑹阴道、尿道给药制剂（含生药原粉的深部用药，破伤风杆菌→梭菌） ⑺直肠给药制剂 ⑻其它局部给药制剂
● 操作环境 洁净度：微生物限度检查应在环境洁净度10000级
下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 洁净度定期检测:单向流空气区域、工作台面及环境 应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮 游菌、和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进 行洁净度验证。
18
●细菌培养温度:30～35℃。 ●霉菌、酵母菌培养温度:23（25）～
28℃。 控制菌培养温度:35～37℃ ●结果报告：以1g、1ml、10g、10ml 或
10cm2 为单位报告。
19
（2）检验量
● 抽样量 ：随机抽取不少于检验量（两个 以上最小包装单位）的3倍。
● 检验量：一次试验所用的供试品的量。 一般为10g或10ml；中药膜剂50 cm2， 化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包 装的药品酌减（不得少于3g）。
原则性要求：丸剂、口服片剂、胶囊剂、颗粒剂。 12
2、2005版中药制剂通则项下的微生物限度要求 无菌检查：注射剂。
无菌检查及微生物限度检查：散剂、软膏剂、眼用制 剂、鼻用制剂、气雾剂、喷雾剂。
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2.口服给药制剂
●不含药材原粉的制剂 ●含药材原粉的制剂 ●含豆豉、神曲等发酵成分的制剂
8
3. 局部给药制剂
⑴ 用于手术、烧伤及严重损伤的局部给药制剂（无菌） ⑵用于表皮或黏膜不完整的含药材原粉的局部给药制剂 ⑶用于表皮或黏膜完整的含药材原粉的局部给药制剂 ⑷眼部给药制剂（由100，不得检出→10，不得检出） ⑸耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂 ⑹阴道、尿道给药制剂（含生药原粉的深部用药，破伤风杆菌→梭菌） ⑺直肠给药制剂 ⑻其它局部给药制剂
● 操作环境 洁净度：微生物限度检查应在环境洁净度10000级
下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 洁净度定期检测:单向流空气区域、工作台面及环境 应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮 游菌、和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进 行洁净度验证。
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●细菌培养温度:30～35℃。 ●霉菌、酵母菌培养温度:23（25）～
28℃。 控制菌培养温度:35～37℃ ●结果报告：以1g、1ml、10g、10ml 或
10cm2 为单位报告。
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（2）检验量
● 抽样量 ：随机抽取不少于检验量（两个 以上最小包装单位）的3倍。
● 检验量：一次试验所用的供试品的量。 一般为10g或10ml；中药膜剂50 cm2， 化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包 装的药品酌减（不得少于3g）。
微生物基础知识ppt课件
微生物基础知识ppt课件目录CONTENCT •微生物概述•微生物的形态与结构•微生物的生长与繁殖•微生物的遗传与变异•微生物的生态与环境•微生物的分类与鉴定01微生物概述定义微生物是一类形体微小、结构简单、必须借助显微镜才能观察到的低等生物体的总称。
分类根据形态和结构，微生物可分为细菌、真菌、病毒、原生动物和藻类等几大类。
特点微生物具有体积小、比表面积大、代谢旺盛、繁殖快、易变异等特点。
功能微生物在自然界中发挥着重要作用，如参与物质循环、促进生物地球化学循环、降解有机污染物等。
微生物的研究历史与现状研究历史微生物学的发展经历了漫长的过程，从列文虎克用显微镜发现微生物到巴斯德提出疾病的微生物理论，再到科赫建立纯培养技术，微生物学逐渐发展成为一门独立的学科。
研究现状随着生物技术的不断发展，微生物学的研究领域不断扩大，涉及到环境、医学、农业、工业等多个领域。
同时，微生物资源的开发和利用也受到了广泛关注，如利用微生物生产抗生素、酶制剂、有机酸等。
02微生物的形态与结构细菌的基本形态球菌、杆菌、螺旋菌细菌的结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质特殊结构荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢010203真菌的基本形态真菌的结构特殊结构酵母菌、霉菌、大型真菌菌丝、孢子、细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核菌丝体、菌核、子实体010203病毒的基本形态：球形、杆形、砖形、蝌蚪形等病毒的结构：核酸（DNA或RNA）、蛋白质外壳特殊结构：包膜、刺突03微生物的生长与繁殖80%80%100%提供微生物合成细胞物质和代谢产物的碳素来源。
主要用于合成蛋白质、核酸等含氮物质。
维持细胞渗透压、酸碱平衡及酶的活性等。
碳源氮源无机盐水分细胞的主要组成成分，参与代谢反应。
生长因子某些微生物生长所必需的微量有机物质。
温度影响微生物体内生化反应的速率和酶的活性。
pH值影响细胞膜的通透性和酶的活性。
氧气好氧微生物需要氧气进行呼吸作用，厌氧微生物则需要在无氧环境下生长。
(优质医学)《中国药典》微生物基本知识
21
供试品检查部分-耐胆盐革兰阴性菌
取供试品，用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂照“非无菌产品微生物限度 检查：微生物计数法”（通则1105）制成1:10供试液，混匀，在20~25 ℃ 培养，培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不繁殖（约2小时）。
取相当于1g或1供试品的上述预培养物接种至适宜体积（经方法适用性试验 确定）肠道菌增菌液体培养基中，30~35 ℃培养24~48小时后，划线接种 于紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上，30~35 ℃培养18~24小时。如果平板上无 菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。
101 : 可接受的最大菌数为20; 102 : 可接受的最大菌数为200; 103 : 可接受的最大菌数为2000:以此类推。 虽然扩大了限度的标准，但是对过程控制的要求有了很大的提高，培养 基的营养能力也有了很多的提高，未来将向参数放行方向发展。
29
1101 无菌检查法-培养基
硫乙醇盐酸流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基 用于真菌和需氧菌的培养。
表3 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准（新增） 表4 中药提取物及中药饮片的微生物限度标准（新增）
28
非无菌药品微生物限度标准
限度标准由“数量”向“数量级”转变 非无菌药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数照“非无菌产品微生物
限度检查：微生物计数法”（通则1105）检查；非无菌药品的控制菌照 “非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”（通则1106）检查。各 品种项下规定的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数标准解释如下：
37
1101 无菌检查法-供试品无菌检查-培养及 观察
38
1101 无菌检查法-结果判断
阳性对照管应生长良好，阴性随着管无菌生长。若供试品管均澄清，或 虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一 管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。
供试品检查部分-耐胆盐革兰阴性菌
取供试品，用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂照“非无菌产品微生物限度 检查：微生物计数法”（通则1105）制成1:10供试液，混匀，在20~25 ℃ 培养，培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不繁殖（约2小时）。
取相当于1g或1供试品的上述预培养物接种至适宜体积（经方法适用性试验 确定）肠道菌增菌液体培养基中，30~35 ℃培养24~48小时后，划线接种 于紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上，30~35 ℃培养18~24小时。如果平板上无 菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。
101 : 可接受的最大菌数为20; 102 : 可接受的最大菌数为200; 103 : 可接受的最大菌数为2000:以此类推。 虽然扩大了限度的标准，但是对过程控制的要求有了很大的提高，培养 基的营养能力也有了很多的提高，未来将向参数放行方向发展。
29
1101 无菌检查法-培养基
硫乙醇盐酸流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基 用于真菌和需氧菌的培养。
表3 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准（新增） 表4 中药提取物及中药饮片的微生物限度标准（新增）
28
非无菌药品微生物限度标准
限度标准由“数量”向“数量级”转变 非无菌药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数照“非无菌产品微生物
限度检查：微生物计数法”（通则1105）检查；非无菌药品的控制菌照 “非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”（通则1106）检查。各 品种项下规定的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数标准解释如下：
37
1101 无菌检查法-供试品无菌检查-培养及 观察
38
1101 无菌检查法-结果判断
阳性对照管应生长良好，阴性随着管无菌生长。若供试品管均澄清，或 虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一 管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。
微生物基本知识精品PPT课件
水 2.环境条件：温湿度 酸碱度 氧气 等
培养基：培养微生物的营养物质。主要 分为固体培养基和液体培养基。
菌落（群体生长的表现）
• 菌落(colony)：生长在固体培养基上，来源于一个细胞，
肉眼可见的细胞群体。1个菌落记着1cfu。
微生物生长规律 （群体生长曲线）
微生物整个生长过程可以分为4个阶段：
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
★酵母菌：酵母菌是一些单细胞真菌，可在缺氧 环境中生存。用于酒类发酵
• ★霉菌：是丝状真菌的俗称。在潮湿温暖的地方，很多物
品上长出一些。肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落， 那就是霉菌。
• ★病毒：ห้องสมุดไป่ตู้一类不具细胞结构，具有遗传、复制
等生命特征的微生物
三、微生物的生长规律
微生物生长的条件 1.营养物质：能源 碳源 氮源 无机盐
微生物特点
★个体小：小于0.1mm，肉眼不可见。 ★分布广,种类多(10万多种) ：自然界中到
处都有，如水、空气、土壤等, 土壤中的 数量最多。 ★代谢强，转化快：例如：发酵乳糖的细菌 在1小时内可分解其自重1000～10000倍的 乳糖 ★生长繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度， 大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代
细胞组成
细胞主要由细胞核与细胞质构成，表 面有细胞膜。
细胞有运动、营养和繁殖等机能。
二、微生物的分类及形态
按其结构、化学组成及分化程度可分为: ★原核类微生物:无完整的细胞核的微生物。如细菌、
放线菌、蓝细菌、立克次氏体、支原体、衣原体
★真核类微生物:有完整的细胞核的微生物。如真菌 （酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类
培养基：培养微生物的营养物质。主要 分为固体培养基和液体培养基。
菌落（群体生长的表现）
• 菌落(colony)：生长在固体培养基上，来源于一个细胞，
肉眼可见的细胞群体。1个菌落记着1cfu。
微生物生长规律 （群体生长曲线）
微生物整个生长过程可以分为4个阶段：
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
★酵母菌：酵母菌是一些单细胞真菌，可在缺氧 环境中生存。用于酒类发酵
• ★霉菌：是丝状真菌的俗称。在潮湿温暖的地方，很多物
品上长出一些。肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落， 那就是霉菌。
• ★病毒：ห้องสมุดไป่ตู้一类不具细胞结构，具有遗传、复制
等生命特征的微生物
三、微生物的生长规律
微生物生长的条件 1.营养物质：能源 碳源 氮源 无机盐
微生物特点
★个体小：小于0.1mm，肉眼不可见。 ★分布广,种类多(10万多种) ：自然界中到
处都有，如水、空气、土壤等, 土壤中的 数量最多。 ★代谢强，转化快：例如：发酵乳糖的细菌 在1小时内可分解其自重1000～10000倍的 乳糖 ★生长繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度， 大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代
细胞组成
细胞主要由细胞核与细胞质构成，表 面有细胞膜。
细胞有运动、营养和繁殖等机能。
二、微生物的分类及形态
按其结构、化学组成及分化程度可分为: ★原核类微生物:无完整的细胞核的微生物。如细菌、
放线菌、蓝细菌、立克次氏体、支原体、衣原体
★真核类微生物:有完整的细胞核的微生物。如真菌 （酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类
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液体培养基（与对照培养基管比较）： 生长良好
建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的 分离平板上，培养后呈现典型菌落
培养基适用性检查
培养基名称
沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用）
无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，用于20~25℃培养5~7天，应无菌落生长。
抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 试验用菌种 促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉
▷ 活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。
控制菌项目变化
培养基体系 明显变化 无明显变化
2010版
大肠菌群 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
2015版
耐胆盐革兰阴性菌 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
《非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法》
简便、严谨
微生物检测环境变化
பைடு நூலகம்
2010版
2015版
检测环境
应在洁净度10000级背景 下的局部100级单向流空
气区域内进行
应在受控洁净环境（不低于 D级洁净环境）下的局部洁 净度不低于B级单向流空气
区域内进行
·其他要求：
▷ 检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。
1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用
常用抗生素 2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与 四环素。
接种方法
抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。 促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。
白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不大于5天。与对照培养基 适用性检查 比较，恢复率在50%~200%之间。
通用要求要点：
(1) 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 本 检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法 等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指 导原则
(2) 环境洁净度应符合要求。定期检测：不低于B级的单向流空气区域、工作 台面、环境。参考USP〈1117〉实验室分区原则。
试验菌
2010版
2015版
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、
白色念珠菌、黑曲霉
白色念珠菌、黑曲霉
(1)胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 菌、白色念珠菌、黑曲霉。
(2)胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌。
菌 杆菌
菌、黑曲霉
株
2、玫瑰红钠琼脂：白色念 珠菌
2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌
黑曲霉
3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲 霉
培养基适用性检查
2010版
2015版
检查范围
固体培养基
微生物计数用的成品培养基、由脱水培 养基或按处方配制的固体和液体培养基
加菌量
50~100CFU
不含中和剂及灭活剂的相应稀释液 替代供试液，按试验组操作。
中和剂 稀释剂对照组 对照组
(3)沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉。
微生物计数用培养基
2010版
2015版
1、营养琼脂用于细菌计数
2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数
3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵 母菌计数
4、菌液制备用稀释液：0.9％氯化钠 溶液
1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用于需氧 菌总数测定
2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定
枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。
计数方法适用性试验
1、常用的供试液制备方法
(1)水溶性供试品 (2)水不溶性非油脂类供试品 (3)油脂类供试品
(4)需要特殊方法制备供试液的供试品：①膜剂、②肠溶及结肠溶制剂、③ 气雾剂喷雾剂、④贴剂。
2010版
2015版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
微生物检查体系的调整
分类依据 质控分类 检验体系
1
2
评价
2010版
按微生物类别分 细菌、真菌
选择培养、或者人为区分
细菌数 营养琼脂
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
2015版
按营养条件分
需气、厌气菌
直接与培养条件对应
需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂
（TSA） 霉菌及酵母菌总数
沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)
(4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基 ●不局限上述稀释液
2、接种和稀释
试验组
2010版
供试液和菌液同时 加入平皿中
供试品 供试液直接加入平 对照组 皿中
菌液对 直接加入菌液到平 照组 皿中
2015版
供试液，加入试验菌液，混匀，使 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量 不大于100cfu。
稀释也代替菌液同试验组操作。 （中国药典特殊规定的，协调案无 相关要求）
不大于100CFU
培养温度 营养琼脂：30~35℃ 胰酪大豆胨琼脂TSA：30~35℃培养
玫瑰红钠：23~28℃ 胰酪大豆胨肉汤TSB： 30~35℃培养
沙氏葡萄糖琼脂SDA：20~25℃培养
培养时间
细菌：48h 真菌：72h
细菌不超过72h，真菌不超过5天
可接受标 准
70%
固体培养基（与对照培养基）： 50%~200%（0.5~2）
3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起 霉菌和酵母菌总数超标用
4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液
2010版
2015版
试 1、营养琼脂：大肠埃希菌、 1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、
验 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠
(2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液
(3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 （用于结肠溶制剂）
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠
溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓 冲液（用于结肠溶制剂）
(3) 前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面 活性剂的无毒性及与相容性。
(4) 方法选择：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。（平皿 法、薄膜过滤法和MPN法）
(5) 菌种管理：（9203）药品微生物实验室质量管理指导原则关于菌株管理 的要求。
(6) 阴性对照：微生物检查需进行阴性对照试验。如果对照有菌生长，应进 行偏差调查。
建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的 分离平板上，培养后呈现典型菌落
培养基适用性检查
培养基名称
沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用）
无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，用于20~25℃培养5~7天，应无菌落生长。
抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 试验用菌种 促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉
▷ 活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。
控制菌项目变化
培养基体系 明显变化 无明显变化
2010版
大肠菌群 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
2015版
耐胆盐革兰阴性菌 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
《非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法》
简便、严谨
微生物检测环境变化
பைடு நூலகம்
2010版
2015版
检测环境
应在洁净度10000级背景 下的局部100级单向流空
气区域内进行
应在受控洁净环境（不低于 D级洁净环境）下的局部洁 净度不低于B级单向流空气
区域内进行
·其他要求：
▷ 检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。
1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用
常用抗生素 2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与 四环素。
接种方法
抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。 促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。
白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不大于5天。与对照培养基 适用性检查 比较，恢复率在50%~200%之间。
通用要求要点：
(1) 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 本 检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法 等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指 导原则
(2) 环境洁净度应符合要求。定期检测：不低于B级的单向流空气区域、工作 台面、环境。参考USP〈1117〉实验室分区原则。
试验菌
2010版
2015版
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、
白色念珠菌、黑曲霉
白色念珠菌、黑曲霉
(1)胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 菌、白色念珠菌、黑曲霉。
(2)胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌。
菌 杆菌
菌、黑曲霉
株
2、玫瑰红钠琼脂：白色念 珠菌
2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌
黑曲霉
3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲 霉
培养基适用性检查
2010版
2015版
检查范围
固体培养基
微生物计数用的成品培养基、由脱水培 养基或按处方配制的固体和液体培养基
加菌量
50~100CFU
不含中和剂及灭活剂的相应稀释液 替代供试液，按试验组操作。
中和剂 稀释剂对照组 对照组
(3)沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉。
微生物计数用培养基
2010版
2015版
1、营养琼脂用于细菌计数
2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数
3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵 母菌计数
4、菌液制备用稀释液：0.9％氯化钠 溶液
1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用于需氧 菌总数测定
2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定
枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。
计数方法适用性试验
1、常用的供试液制备方法
(1)水溶性供试品 (2)水不溶性非油脂类供试品 (3)油脂类供试品
(4)需要特殊方法制备供试液的供试品：①膜剂、②肠溶及结肠溶制剂、③ 气雾剂喷雾剂、④贴剂。
2010版
2015版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
微生物检查体系的调整
分类依据 质控分类 检验体系
1
2
评价
2010版
按微生物类别分 细菌、真菌
选择培养、或者人为区分
细菌数 营养琼脂
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
2015版
按营养条件分
需气、厌气菌
直接与培养条件对应
需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂
（TSA） 霉菌及酵母菌总数
沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)
(4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基 ●不局限上述稀释液
2、接种和稀释
试验组
2010版
供试液和菌液同时 加入平皿中
供试品 供试液直接加入平 对照组 皿中
菌液对 直接加入菌液到平 照组 皿中
2015版
供试液，加入试验菌液，混匀，使 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量 不大于100cfu。
稀释也代替菌液同试验组操作。 （中国药典特殊规定的，协调案无 相关要求）
不大于100CFU
培养温度 营养琼脂：30~35℃ 胰酪大豆胨琼脂TSA：30~35℃培养
玫瑰红钠：23~28℃ 胰酪大豆胨肉汤TSB： 30~35℃培养
沙氏葡萄糖琼脂SDA：20~25℃培养
培养时间
细菌：48h 真菌：72h
细菌不超过72h，真菌不超过5天
可接受标 准
70%
固体培养基（与对照培养基）： 50%~200%（0.5~2）
3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起 霉菌和酵母菌总数超标用
4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液
2010版
2015版
试 1、营养琼脂：大肠埃希菌、 1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、
验 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠
(2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液
(3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 （用于结肠溶制剂）
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠
溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓 冲液（用于结肠溶制剂）
(3) 前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面 活性剂的无毒性及与相容性。
(4) 方法选择：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。（平皿 法、薄膜过滤法和MPN法）
(5) 菌种管理：（9203）药品微生物实验室质量管理指导原则关于菌株管理 的要求。
(6) 阴性对照：微生物检查需进行阴性对照试验。如果对照有菌生长，应进 行偏差调查。