《中国药典》版微生物基本知识精品PPT课件
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不含中和剂及灭活剂的相应稀释液 替代供试液，按试验组操作。
中和剂 稀释剂对照组 对照组
▷ 活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。
控制菌项目变化
培养基体系 明显变化 无明显变化
2010版
大肠菌群 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
2015版
耐胆盐革兰阴性菌 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
《非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法》
(3)沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉。
微生物计数用培养基
20Fra Baidu bibliotek0版
2015版
1、营养琼脂用于细菌计数
2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数
3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵 母菌计数
4、菌液制备用稀释液：0.9％氯化钠 溶液
1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用于需氧 菌总数测定
2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定
(3) 前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面 活性剂的无毒性及与相容性。
(4) 方法选择：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。（平皿 法、薄膜过滤法和MPN法）
(5) 菌种管理：（9203）药品微生物实验室质量管理指导原则关于菌株管理 的要求。
(6) 阴性对照：微生物检查需进行阴性对照试验。如果对照有菌生长，应进 行偏差调查。
1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用
常用抗生素 2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与 四环素。
接种方法
抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。 促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。
白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不大于5天。与对照培养基 适用性检查 比较，恢复率在50%~200%之间。
简便、严谨
微生物检测环境变化
2010版
2015版
检测环境
应在洁净度10000级背景 下的局部100级单向流空
气区域内进行
应在受控洁净环境（不低于 D级洁净环境）下的局部洁 净度不低于B级单向流空气
区域内进行
·其他要求：
▷ 检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。
菌 杆菌
菌、黑曲霉
株
2、玫瑰红钠琼脂：白色念 珠菌
2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌
黑曲霉
3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲 霉
培养基适用性检查
2010版
2015版
检查范围
固体培养基
微生物计数用的成品培养基、由脱水培 养基或按处方配制的固体和液体培养基
加菌量
50~100CFU
液体培养基（与对照培养基管比较）： 生长良好
建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的 分离平板上，培养后呈现典型菌落
培养基适用性检查
培养基名称
沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用）
无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，用于20~25℃培养5~7天，应无菌落生长。
抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 试验用菌种 促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉
(4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基 ●不局限上述稀释液
2、接种和稀释
试验组
2010版
供试液和菌液同时 加入平皿中
供试品 供试液直接加入平 对照组 皿中
菌液对 直接加入菌液到平 照组 皿中
2015版
供试液，加入试验菌液，混匀，使 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量 不大于100cfu。
稀释也代替菌液同试验组操作。 （中国药典特殊规定的，协调案无 相关要求）
枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。
计数方法适用性试验
1、常用的供试液制备方法
(1)水溶性供试品 (2)水不溶性非油脂类供试品 (3)油脂类供试品
(4)需要特殊方法制备供试液的供试品：①膜剂、②肠溶及结肠溶制剂、③ 气雾剂喷雾剂、④贴剂。
2010版
2015版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
不大于100CFU
培养温度 营养琼脂：30~35℃ 胰酪大豆胨琼脂TSA：30~35℃培养
玫瑰红钠：23~28℃ 胰酪大豆胨肉汤TSB： 30~35℃培养
沙氏葡萄糖琼脂SDA：20~25℃培养
培养时间
细菌：48h 真菌：72h
细菌不超过72h，真菌不超过5天
可接受标 准
70%
固体培养基（与对照培养基）： 50%~200%（0.5~2）
通用要求要点：
(1) 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 本 检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法 等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指 导原则
(2) 环境洁净度应符合要求。定期检测：不低于B级的单向流空气区域、工作 台面、环境。参考USP〈1117〉实验室分区原则。
试验菌
2010版
2015版
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、
白色念珠菌、黑曲霉
白色念珠菌、黑曲霉
(1)胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 菌、白色念珠菌、黑曲霉。
(2)胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌。
(2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液
(3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 （用于结肠溶制剂）
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠
溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓 冲液（用于结肠溶制剂）
3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起 霉菌和酵母菌总数超标用
4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液
2010版
2015版
试 1、营养琼脂：大肠埃希菌、 1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、
验 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠
微生物检查体系的调整
分类依据 质控分类 检验体系
1
2
评价
2010版
按微生物类别分 细菌、真菌
选择培养、或者人为区分
细菌数 营养琼脂
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
2015版
按营养条件分
需气、厌气菌
直接与培养条件对应
需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂
（TSA） 霉菌及酵母菌总数
沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)
中和剂 稀释剂对照组 对照组
▷ 活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。
控制菌项目变化
培养基体系 明显变化 无明显变化
2010版
大肠菌群 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
2015版
耐胆盐革兰阴性菌 大肠埃希菌
沙门菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
《非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法》
(3)沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉。
微生物计数用培养基
20Fra Baidu bibliotek0版
2015版
1、营养琼脂用于细菌计数
2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数
3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵 母菌计数
4、菌液制备用稀释液：0.9％氯化钠 溶液
1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用于需氧 菌总数测定
2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定
(3) 前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面 活性剂的无毒性及与相容性。
(4) 方法选择：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。（平皿 法、薄膜过滤法和MPN法）
(5) 菌种管理：（9203）药品微生物实验室质量管理指导原则关于菌株管理 的要求。
(6) 阴性对照：微生物检查需进行阴性对照试验。如果对照有菌生长，应进 行偏差调查。
1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用
常用抗生素 2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与 四环素。
接种方法
抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。 促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。
白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不大于5天。与对照培养基 适用性检查 比较，恢复率在50%~200%之间。
简便、严谨
微生物检测环境变化
2010版
2015版
检测环境
应在洁净度10000级背景 下的局部100级单向流空
气区域内进行
应在受控洁净环境（不低于 D级洁净环境）下的局部洁 净度不低于B级单向流空气
区域内进行
·其他要求：
▷ 检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。
菌 杆菌
菌、黑曲霉
株
2、玫瑰红钠琼脂：白色念 珠菌
2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌
黑曲霉
3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲 霉
培养基适用性检查
2010版
2015版
检查范围
固体培养基
微生物计数用的成品培养基、由脱水培 养基或按处方配制的固体和液体培养基
加菌量
50~100CFU
液体培养基（与对照培养基管比较）： 生长良好
建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的 分离平板上，培养后呈现典型菌落
培养基适用性检查
培养基名称
沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用）
无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，用于20~25℃培养5~7天，应无菌落生长。
抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 试验用菌种 促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉
(4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基 ●不局限上述稀释液
2、接种和稀释
试验组
2010版
供试液和菌液同时 加入平皿中
供试品 供试液直接加入平 对照组 皿中
菌液对 直接加入菌液到平 照组 皿中
2015版
供试液，加入试验菌液，混匀，使 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量 不大于100cfu。
稀释也代替菌液同试验组操作。 （中国药典特殊规定的，协调案无 相关要求）
枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。
计数方法适用性试验
1、常用的供试液制备方法
(1)水溶性供试品 (2)水不溶性非油脂类供试品 (3)油脂类供试品
(4)需要特殊方法制备供试液的供试品：①膜剂、②肠溶及结肠溶制剂、③ 气雾剂喷雾剂、④贴剂。
2010版
2015版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
不大于100CFU
培养温度 营养琼脂：30~35℃ 胰酪大豆胨琼脂TSA：30~35℃培养
玫瑰红钠：23~28℃ 胰酪大豆胨肉汤TSB： 30~35℃培养
沙氏葡萄糖琼脂SDA：20~25℃培养
培养时间
细菌：48h 真菌：72h
细菌不超过72h，真菌不超过5天
可接受标 准
70%
固体培养基（与对照培养基）： 50%~200%（0.5~2）
通用要求要点：
(1) 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 本 检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法 等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指 导原则
(2) 环境洁净度应符合要求。定期检测：不低于B级的单向流空气区域、工作 台面、环境。参考USP〈1117〉实验室分区原则。
试验菌
2010版
2015版
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、
白色念珠菌、黑曲霉
白色念珠菌、黑曲霉
(1)胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 菌、白色念珠菌、黑曲霉。
(2)胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌。
(2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液
(3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 （用于结肠溶制剂）
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠
溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓 冲液（用于结肠溶制剂）
3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起 霉菌和酵母菌总数超标用
4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液
2010版
2015版
试 1、营养琼脂：大肠埃希菌、 1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、
验 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠
微生物检查体系的调整
分类依据 质控分类 检验体系
1
2
评价
2010版
按微生物类别分 细菌、真菌
选择培养、或者人为区分
细菌数 营养琼脂
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
2015版
按营养条件分
需气、厌气菌
直接与培养条件对应
需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂
（TSA） 霉菌及酵母菌总数
沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)